專(zhuān)利名稱：因子7表達(dá)的調(diào)節(jié)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的發(fā)明實(shí)施方案所屬領(lǐng)域提供了動(dòng)物體內(nèi)減少因子7的mRNA和蛋白質(zhì)的 表達(dá)的方法、化合物以及組合物。所述方法、化合物和組合物有益于治療、預(yù)防或改善血栓 栓塞性并發(fā)癥、過(guò)度增生病癥和發(fā)炎癥狀。
背景技術(shù)：
循環(huán)系統(tǒng)需要防止血液流失，同時(shí)阻止不適當(dāng)?shù)难軆?nèi)梗塞的機(jī)制。一般來(lái)說(shuō)，凝 血包含終結(jié)于可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴豢扇苄岳w維蛋白凝膠的反應(yīng)級(jí)聯(lián)。所述級(jí)聯(lián)的步 驟包括了非活性酶原轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚悦?。然后，所述活性酶催化所述?jí)聯(lián)的后繼步驟。凝血級(jí)聯(lián)所述凝血級(jí)聯(lián)可以通過(guò)兩個(gè)支路而啟動(dòng)作為主要途徑的組織因子通路(即“外 源通路”)，和接觸活化通路(即“內(nèi)源通路”)。組織因子通路由細(xì)胞表面受體組織因子(tissue factor, TF，即因子III)啟動(dòng)， 該因子由血管外細(xì)胞(周細(xì)胞、心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞)組成性表達(dá)，并 在炎癥細(xì)胞因子或內(nèi)毒素誘導(dǎo)下由血管單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)(Drake et al. , Am J Pathol 1989,134:1087-1097)。TF是凝血因子Vila，一種絲氨酸蛋白酶的高親和性細(xì)胞 受體。在TF缺乏時(shí)，VIIa具有非常低的催化活性，并且與TF結(jié)合對(duì)通過(guò)一種變構(gòu)機(jī)制來(lái)使 VIIa具有功能是必需的。(Drake et al. ,Am J Pathol 1989，134 1087-1097)。該 TF-VIIa 復(fù)合物把因子X(jué)活化為)(a。)(a隨后結(jié)合其輔助因子因子Va以形成凝血酶原酶復(fù)合物并隨 后活化凝血酶原(即因子II或因子幻成為凝血酶(即因子Ila，或因子加)。凝血酶活化 血小板，轉(zhuǎn)變纖維蛋白原為纖維蛋白并促進(jìn)纖維蛋白與活化因子VDI交聯(lián)，從而在TF暴露于 血管外細(xì)胞的位置形成穩(wěn)定的栓塞。另外，凝血酶通過(guò)活化因子V和VDI來(lái)增強(qiáng)凝血級(jí)聯(lián)響 應(yīng)。接觸活化通路由因子ΧΠ活化為XIIa而觸發(fā)。因子X(jué)IIa轉(zhuǎn)變XI為XIa，然后XIa轉(zhuǎn) 變IX為IXa。1 聯(lián)合其輔助因子VIIIa并轉(zhuǎn)變X為fe。因子fe聯(lián)合因子Va以活化凝血 酶原(因子II )為凝血酶(因子IIa)，從而這兩條通路在這里匯合。凝血的抑制至少三種機(jī)制保持了凝血級(jí)聯(lián)在控制中，即活化的蛋白C、抗凝血酶和組織因子通 路抑制劑的作用?；罨牡鞍證是能夠降解輔助因子Va和VIIIa的絲氨酸蛋白酶。蛋白C 通過(guò)凝血酶與血栓調(diào)節(jié)蛋白而活化，并需要輔酶蛋白S以運(yùn)行?？鼓甘且环N絲氨酸蛋 白酶抑制劑(serpin)，能夠抑制絲氨酸蛋白酶凝血酶，Xa, XIIa, XIa和IXa。組織因子通 路抑制劑抑制了 Xa 和 TF-VIIa 復(fù)合物的作用。Gchwartz AL et al. ,Trends CardiovascMed. 1997 ；7 :234-239.)疾病血栓癥是血液凝塊的病理性發(fā)展，當(dāng)一個(gè)血液凝塊遷移到機(jī)體的另一部分并干擾 了器官功能的時(shí)候栓塞就發(fā)生了。血栓栓塞可能引起深靜脈血栓、肺血栓、心肌梗塞和中 風(fēng)。值得注意的是，血栓栓塞是每年影響超過(guò)兩百萬(wàn)美國(guó)人的病狀的主要原因。(Adcock et al. , American Journal of Clinical Pathology, 1997 ； 108 :434-49)。大多情況下血栓 癥是由于獲得性的外源問(wèn)題，例如外科手術(shù)、癌癥、不移動(dòng)，而有些情況是由于遺傳體質(zhì)，例 如抗磷脂綜合癥和常染色體顯性遺傳，因子V Leiden。(Bertina RM et al. Nature 1994 ； 369 :64-67.)治療最常用的抗凝血?jiǎng)瑲⑹箪`、肝素和低分子量肝素(low molecularweight heparin, LMWH)都有重大的缺陷。殺鼠靈通常用于治療心房纖維性顫動(dòng)。該藥物與誘導(dǎo)因子II、VIIa、IX和X的維生 素K依賴性凝血因子發(fā)生作用?？鼓?jiǎng)┑鞍證和S也被殺鼠靈所抑制。用殺鼠靈進(jìn)行藥 物治療法由于殺鼠靈與其它藥物包括用于治療心房纖維性顫動(dòng)的藥物例如胺碘酮發(fā)生作 用的事實(shí)而更加復(fù)雜。由于殺鼠靈的治療難以預(yù)測(cè)，必須小心監(jiān)控患者以檢測(cè)反常流血的 任何信號(hào)。肝素通過(guò)活化抑制凝血酶和因子X(jué)的抗凝血酶而發(fā)揮功能。(Bjork I, Lindahl U. MoI Cell Biochem. 198248 161-182)用肝素進(jìn)行治療可能引起免疫反應(yīng)，從而造成血小 板在血管內(nèi)聚集并能導(dǎo)致血栓。這一副作用被認(rèn)為是肝素誘導(dǎo)性血小板減少(heparin-ind ucedthrombocytopenia,HIT)，從而需要監(jiān)控患者。用肝素進(jìn)行長(zhǎng)期的治療可能導(dǎo)致骨質(zhì)疏 松癥。LMWH也能抑制因子2，但是相比普通肝素(unfractioned heparin, UFH)程度較低。 LMWH也牽涉于HIT的發(fā)展之內(nèi)。因此，現(xiàn)有的抗凝血?jiǎng)┤狈深A(yù)測(cè)性和特異性，并且，從而需要對(duì)患者的小心監(jiān)控 以防止副作用例如流血并發(fā)癥。目前尚沒(méi)有只靶向內(nèi)源或者外源通路的抗凝血?jiǎng)?。發(fā)明概述本發(fā)明提供用于治療和預(yù)防凝血病癥的反義化合物、組合物和方法。如本文所述的反義化合物可以包括由12-30個(gè)核苷組成的靶向因子7核 酸的寡核苷酸。在一種實(shí)施方式里，因子7核酸可以是GENBANK Accession No. NT_027140. 6 的核苷酸 1255000-1273000， GENBANK Accession No. NM_019616. 2 和 GENBANK AccessionNo. DB_184141. 1 所表示的序列的任意序 列。所述反義化合物可以是單鏈或者雙鏈寡核苷酸。所述反義化合物可以與因子7核 酸具有 100，95，90，85，80，75，或 70%的互補(bǔ)。所述反義寡核苷酸可以是被修飾的，其中至少一個(gè)核苷間連接是修飾的核苷間連 接。所述核苷間連接可以是硫代磷酸酯核苷間連接。所述反義寡核苷酸可以是被修飾的，其中至少一個(gè)核苷包含修飾的糖。所述修飾 的糖可以是二環(huán)糖。所述修飾的糖可以包含2’ -0-甲氧基乙基。所述反義寡核苷酸可以是被修飾的，其中至少一個(gè)核苷包含修飾的核堿基。所述
5修飾的核堿基可以是5-甲基胞嘧啶。稀釋劑。所述組合物可以是單鏈或雙鏈的寡核苷酸。如本文所述的方法可以包括給藥予動(dòng)物以包含由12-30個(gè)連接的核苷組成并靶 向因子7核酸的寡核苷酸的化合物。施用所述化合物可以延緩或阻止凝血。所述化合物可以與阿司匹林、氯吡格雷、雙 嘧達(dá)莫、肝素、來(lái)匹盧定、噻氯匹定和殺鼠靈中的任何聯(lián)合施用?？梢园殡S施用所述化合物 和一個(gè)第二藥物。所述化合物和/或所述第二藥物的施用可以通過(guò)腸胃外給藥。腸胃外給藥可以是 皮下或靜脈內(nèi)給藥的任何一種。在另一個(gè)實(shí)施方式中，如本文所述的方法也可以包括鑒別有血凝病癥的人并給藥 以治療有效量的包含由12-30個(gè)連接的核苷組成并靶向因子7核酸的寡核苷酸的化合物。還描述了包含由12-30個(gè)連接的核苷組成的反義寡核苷酸的化合物，其可以與 編碼因子 7 核酸的 SEQ ID NO 1 的第 1147-1227，9169-9278，10982-11058，11075-11117， 12084-12117，12387—13796，13847—13907，14017—14051，14093—14134，14172—14287， 14331-14402，14664-14746，15098-15570，15609-15819，15899-15905，或 15957-15982 位 核堿基范圍相結(jié)合。所述反義聚核苷酸可以與編碼因子7核酸的SEQ ID NO 1有90，95或100%互補(bǔ)。 所述反義寡核苷酸可以與SEQ ID NO :1完全互補(bǔ)。所述反義聚核苷酸可以專(zhuān)有地與編碼因子7核酸的SEQ ID NO :1的第1147-1227， 9169-9278,10982-11058,11075-11117,12084-12117,12387-13796, 13847-13907, 14017-14051，14093-14134，14172-14287，14331-14402，14664-14746，15098-15570， 15609-15819，15899-15905 或 15957-15982 位核堿基范圍相雜交。還描述了包含由12-30個(gè)相連核苷所組成的反義寡核苷酸的化合物，其結(jié)合編碼 因子7核酸的SEQ ID NO 2的第102-131或652-682位核堿基范圍。所述反義聚核苷酸可以與編碼因子7核酸的SEQ ID NO :2有90，95，或100%互 補(bǔ)。所述反義寡核苷酸可以與SEQ ID NO :2完全互補(bǔ)。所述反義聚核苷酸可以專(zhuān)有地與編碼因子7核酸的SEQ ID NO :2的第102-131或 652-682位核酸堿基范圍相結(jié)合。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了包含由包含堿基序列SEQ ID NO :4_159和168-611的至 少12個(gè)連續(xù)堿基的12-30個(gè)連接核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物。在某些實(shí)施方式中，所述堿基序列是SEQ ID NO :53。在某些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸的堿基序列與SEQ IDNO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :3、和SEQ ID NO :167的任何一個(gè)具有至少80%的互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸的堿基序列與SEQ IDNO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :3、和SEQ ID NO :167的任何一個(gè)具有至少90%的互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸的堿基序列與SEQ IDNO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :3、禾口 SEQ ID NO :167的任何一個(gè)具有100%的互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸包括
(i)由連接的脫氧核苷組成的間隙片段(gap segment)；(ii)由連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段(wing segment)；(iii)由連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中，所述間隙片段直接相鄰5’側(cè)翼片 段和3’側(cè)翼片段，并定位于5’側(cè)翼片段和3’側(cè)翼片段之間，并且其中每個(gè)側(cè)翼片段的每 個(gè)核苷包含修飾的糖。在某些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸包括(i)由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙片段；(ii)由5個(gè)連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；(iii)由5個(gè)連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中，所述間隙片段直接相鄰5’側(cè) 翼片段和3’側(cè)翼片段，并定位于5’側(cè)翼片段和3’側(cè)翼片段之間，其中每個(gè)側(cè)翼片段的每 個(gè)核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；并且其中每個(gè)核苷間連接都是硫代磷酸酯連接。在某些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸包括(i)由14個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙片段；(ii)由3個(gè)連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；(iii)由3個(gè)連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中所述間隙片段直接相鄰5’側(cè) 翼片段和3’側(cè)翼片段，并定位于5’側(cè)翼片段和3’側(cè)翼片段之間，其中每個(gè)側(cè)翼片段的每 個(gè)核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；并且其中每個(gè)核苷間連接都是硫代磷酸酯連接。在某些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸包括(i)由13個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙片段；(ii)由2個(gè)連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；(iii)由5個(gè)連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中所述間隙片段定位于5’側(cè)翼 片段和3’側(cè)翼片段之間，其中每個(gè)側(cè)翼片段的每個(gè)核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；并且其中 每個(gè)核苷間連接都是硫代磷酸酯連接。在某些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸包括(i)由12個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙片段；(ii)由2個(gè)連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；(iii)由2個(gè)連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中所述間隙片段定位于5’側(cè)翼 片段和3’側(cè)翼片段之間，其中每個(gè)側(cè)翼片段的每個(gè)核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；并且其中 每個(gè)核苷間連接都是硫代磷酸酯連接。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了包含由包含堿基序列SEQ ID NO :4_159和168-611的至 少12個(gè)連續(xù)堿基的12-30個(gè)連接核苷組成的修飾的寡核苷酸或其鹽以及藥學(xué)上可接受的 載體或稀釋劑的組合物。在一些實(shí)施方式中，所述堿基序列是SEQ ID NO :53。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了包括給藥予動(dòng)物以由包含堿基序列SEQ ID NO :4_159和 168-611的至少12個(gè)連續(xù)堿基的12-30個(gè)連接核苷組成的修飾的寡核苷酸的方法。在一些實(shí)施方式中，所述堿基序列是SEQ ID NO :53。在一些實(shí)施方式中，所述動(dòng)物是人。在一些實(shí)施方式中，所述給藥預(yù)防深靜脈血栓。在一些實(shí)施方式中，所述給藥預(yù)防肺栓塞。
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在一些實(shí)施方式中，所述給藥治療過(guò)度增生病癥。在一些實(shí)施方式中，所述給藥治療炎癥癥狀。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了包含鑒別動(dòng)物處于血栓栓塞并發(fā)癥危險(xiǎn)中和給藥予處 于危險(xiǎn)中的動(dòng)物以藥學(xué)有效量的包含由12-30個(gè)連接核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合 物的方法，其中所述修飾的寡核苷酸與因子7核酸互補(bǔ)。在一些實(shí)施方式中，所述血栓栓塞并發(fā)癥是深靜脈血栓、肺栓塞或其結(jié)合。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了包含由12-30個(gè)連接核苷組成并具有堿基序列的修飾 的寡核苷酸的化合物，其中所述堿基序列包含至少12個(gè)與SEQ ID NO 1的第15U8-15223 位核苷酸的同樣數(shù)目的堿基互補(bǔ)的連續(xù)堿基部分，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO 1具有至少80%的互補(bǔ)。在一些實(shí)施方式中，所述修飾的寡核苷酸具有SEQ ID NO 53的堿基序列。發(fā)明詳述應(yīng)當(dāng)理解，如上文的概括描述和如下的詳細(xì)描述都僅僅是示范性和解釋性的，而 不對(duì)本發(fā)明要求的范圍構(gòu)成限制。在本文中，所使用的單數(shù)也包括了復(fù)數(shù)，除非另外特別規(guī) 定。在本文中所用，使用“或”意味著“和/或”，除非另外規(guī)定。進(jìn)一步，使用術(shù)語(yǔ)“包括”及 其它形式，例如“包括”和“包括于”，沒(méi)有限制。同樣，術(shù)語(yǔ)例如“元素”或“組分”包括了包 含一個(gè)單元的元素和組分以及包含多于一個(gè)的子單元的元素和組分，除非另外特別規(guī)定。如本文所用的段落標(biāo)題僅僅是為了組織的目的，而不被解釋為限制所描述的技術(shù) 方案。本申請(qǐng)中所引用的所有文獻(xiàn)，或文獻(xiàn)段落，包括但不限于專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、論文、書(shū)籍 和協(xié)議，都以本文所述文獻(xiàn)的段落或者文獻(xiàn)整體在此明確地作為參考加以引用。定義除非提供了特別的定義，在本文所描述的用于與分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)學(xué) 以及藥物化學(xué)相聯(lián)系的、或其方法和技術(shù)的術(shù)語(yǔ)，都是在本領(lǐng)域眾所周知和廣泛使用的。標(biāo) 準(zhǔn)技術(shù)可被用于化學(xué)合成和化學(xué)分析。在允許的情況下，所有專(zhuān)利、申請(qǐng)、公開(kāi)的申請(qǐng)和其 它出版物、GENBANK登記號(hào)及通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)例如美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)所獲得的 相關(guān)序列信息以及其它相關(guān)數(shù)據(jù)，貫穿全文都以本文所述文獻(xiàn)的段落或者文獻(xiàn)整體在此作 為參考加以引用。除非另外說(shuō)明，下列術(shù)語(yǔ)具有如下的含義“2，-0-甲氧乙基，，(即 2，-MOE 和 2' -O(CH2)2-OCH3)指一個(gè)呋喃糖基(furosyl) 環(huán)的2’位置的0-甲氧基-乙基修飾。2’ -0-甲氧乙基修飾的糖是修飾的糖?！?’ -0-甲氧乙基核苷酸”是指含有2’ -0-甲氧乙基修飾的糖部分的核苷酸?！?-甲基胞嘧啶”是指胞嘧啶用甲基連接到其5’位置修飾。5-甲基胞嘧啶是修 飾的核堿基。“活性反義化合物”是指降低靶向核酸水平或蛋白質(zhì)水平的反義化合物。“伴隨給藥”是指以任何方式共同施用兩種藥劑，其中兩者的藥理學(xué)效果在患者中 同時(shí)出現(xiàn)。伴隨給藥不需要所施用的兩種藥劑在單一的藥物組合物內(nèi)，以同樣的劑量形式， 或者通過(guò)同樣的給藥途徑。兩種藥劑的效果不需要各自同時(shí)表現(xiàn)。所述效果只需要在一段 時(shí)間內(nèi)重疊，而不需要共同延續(xù)?！敖o藥”意思是給一個(gè)個(gè)體提供藥學(xué)試劑，并包括，但不限于醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)人員給藥或自我給藥?！案纳啤敝附档拖嚓P(guān)疾病、病癥或狀況的至少一個(gè)指標(biāo)、標(biāo)記或癥狀。所述指標(biāo)的嚴(yán) 重性可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的主觀或客觀測(cè)量方法來(lái)確定?！皠?dòng)物”指人或非人動(dòng)物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬和其它非人靈長(zhǎng) 類(lèi)，包括但不限于猴子和黑猩猩?！敖舛緞┗衔铩敝改軌蚪档腿魏畏戳x活性的強(qiáng)度或持續(xù)時(shí)間的化合物?！敖舛緞┕押塑账帷笔侵赴c反義化合物互補(bǔ)并能與之雜交的寡核苷酸的解毒 劑化合物?！敖舛緞┑鞍踪|(zhì)”是指包含肽的解毒劑化合物?！翱贵w”指表征為以某種方式特異性地與抗原反應(yīng)的分子，其中所述抗體與抗原相 互定義。抗體可以指完整的抗體分子或其任何片段或區(qū)域，例如其重鏈、輕鏈、Fab區(qū)和Fc 區(qū)?！胺戳x活性”是指反義化合物的歸因于與其靶向核酸雜交的任何可檢測(cè)或可測(cè)量 的活性。在一些實(shí)施例里，反義活性是指所述靶向核酸或由所述靶向核酸編碼的蛋白質(zhì)的 量或表達(dá)的降低?！胺戳x化合物”是指能夠通過(guò)氫鍵結(jié)合而與靶向核酸雜交的寡核苷酸化合物?！胺戳x抑制”是指相比于反義化合物不存在時(shí)的靶向核酸的水平或靶向蛋白質(zhì)的 水平，在與靶向核酸互補(bǔ)的反義化合物存在的情況下靶向核酸的水平和靶向蛋白質(zhì)的水平 的降低?！胺戳x寡核苷酸”是指具有允許與靶向核酸的相應(yīng)區(qū)域或片段雜交的堿基序列的 單鏈寡核苷酸?！岸h(huán)糖”是指呋喃糖環(huán)修飾以兩個(gè)非成對(duì)環(huán)原子之間的橋連。二環(huán)糖是修飾的糖。“二環(huán)核酸”或“BNA”或“二環(huán)核苷”或“二環(huán)核苷酸”指這樣的核苷或核苷酸，其 中所述核苷或核苷酸的呋喃糖部分包含連接呋喃糖環(huán)上的兩個(gè)碳原子的橋連，從而形成一 個(gè)二環(huán)系統(tǒng)。如本文所用，除非另外聲明，術(shù)語(yǔ)“亞甲氧基BNA”(methyleneoxy BNA)單獨(dú) 指3-0-亞甲氧基8嫩?！懊弊咏Y(jié)構(gòu)”或“端帽部分”是指是指與反義化合物的其中一個(gè)末端相結(jié)合的化學(xué) 修飾?！盎瘜W(xué)相異區(qū)域”是指這樣的反義化合物的區(qū)域，其在某些方面與同樣的反義化合 物的其它區(qū)域在化學(xué)上不同。例如，具有2’-0-甲氧乙基核苷酸的區(qū)域與具有沒(méi)有2’-0-甲 氧乙基修飾的核苷酸的區(qū)域是化學(xué)相異的。“嵌合反義化合物”是指具有至少兩個(gè)化學(xué)相異區(qū)域的反義化合物，其中每個(gè)位置 具有多個(gè)亞單元?！奥?lián)合給藥”是指給藥兩種或多種藥學(xué)試劑于一個(gè)個(gè)體。所述兩種或多種藥學(xué)試劑 可以在一個(gè)單獨(dú)的藥物組合物里，或在不同的藥物組合物里。所述兩種或多種藥學(xué)試劑的 每一種可以通過(guò)相同或不同的給藥途徑來(lái)給藥。聯(lián)合給藥包括平行或順序給藥?！澳蜃印笔侵秆耗碳?jí)聯(lián)中的因子ι、π、ιπ、ιν、ν、νπ、νπι、ιχ、χ、)α、)αι或 XIII。“凝血因子核酸”是指編碼凝血因子的任何核酸。例如，在某些實(shí)施方式里，凝血因子核酸包括，但不限于，編碼凝血因子的DNA序列(包括含內(nèi)含子和外顯子的基因組DNA)，由 編碼凝血因子的DNA所轉(zhuǎn)錄的RNA序列，以及編碼凝血因子的mRNA序列?！澳蜃觤RNA” 是指編碼凝血因子蛋白的mRNA。“互補(bǔ)性”是指第一核酸和第二核酸的堿基之間相配對(duì)的能力?！斑B續(xù)堿基”是指堿基相互之間直接相連。“稀釋劑”是指組合物里的成分，其不具有藥學(xué)活性，但是是藥學(xué)上需要的或希望 的。例如，在注射藥物里稀釋劑可以是液體，例如鹽溶液?！皠┝俊笔侵冈谝淮谓o藥中或特定的時(shí)間段內(nèi)提供的特定量的藥學(xué)試劑。在某些實(shí) 施方式中，一次劑量可以以一、二或多個(gè)藥丸、藥片或注射劑的形式給藥。例如，在某些事實(shí) 方式中希望皮下給藥，該希望的劑量難以通過(guò)單一的注射劑來(lái)提供，因此，可以使用兩支或 三支注射劑以達(dá)到所希望的劑量。在某些實(shí)施方式中，所述藥學(xué)試劑通過(guò)一段時(shí)間或持續(xù) 地注入來(lái)給藥。劑量可以規(guī)定為每小時(shí)、每天、每星期或每月的藥學(xué)試劑的量?！坝行浴笔侵冈斐伤Ｍ男Ч哪芰Α！坝行Я俊笔侵冈谛枰鲈噭┑膫€(gè)體 內(nèi)足夠完成所希望的生理學(xué)結(jié)果的活性藥學(xué)試劑的量。所述有效量在不同個(gè)體內(nèi)可能由于 所治療的個(gè)體的健康或生理狀況、所治療的個(gè)體的分類(lèi)、組合物的配方、個(gè)體的藥物狀況的 評(píng)定和其它相關(guān)因素而有所不同。“因子7核酸”或“因子ΥΠ核酸”是指編碼因子7的核酸。例如，在某些實(shí)施方式里， 因子7核酸包括，但不限于，編碼因子7的DNA序列，由編碼因子7的DNA序列所轉(zhuǎn)錄的RNA 序列(包括含內(nèi)含子和外顯子的基因組DNA)，和編碼因子7的mRNA序列?！耙蜃?mRNA”是 指編碼因子7蛋白的mRNA。“因子7特異性抑制劑”是指能夠在分子水平特異性抑制因子7mRNA和/或因子7 蛋白質(zhì)表達(dá)的任何試劑。例如，因子7特異性抑制劑包括核酸(包括反義化合物)、肽、抗 體、小分子和能夠抑制因子7mRNA和/或因子7蛋白表達(dá)的其它試劑。在某些實(shí)施方式里， 通過(guò)特異性調(diào)節(jié)因子7mRNA表達(dá)和/或因子蛋白表達(dá)，因子7特異性抑制劑可以影響凝血 級(jí)聯(lián)中的其它成分，包括下游成分。相似的，在某些實(shí)施方式里，因子7特異性抑制劑可以 影響動(dòng)物內(nèi)的其它分子過(guò)程。“因子7特異性抑制劑解毒劑”是指能夠降低因子7特異性抑制劑的效果的化合 物。在某些實(shí)施方式里，因子7特異性抑制劑解毒劑選自因子7肽；因子7解毒劑寡核苷酸； 包括互補(bǔ)于因子7反義化合物的因子7解毒劑化合物；以及影響內(nèi)源或外源凝血通路的任 何化合物或蛋白。“完全互補(bǔ)”或“100%互補(bǔ)”是指第一核酸的每個(gè)堿基都具有在第二核酸內(nèi)的互補(bǔ) 堿基。在某些實(shí)施方式里，第一核酸是反義化合物，而靶向核酸是第二核酸。在某些這樣的 實(shí)施方式里，反義寡核苷酸是第一核酸，而靶向核酸是第二核酸?！癎apmer”是指這樣的反義化合物，其中具有支持RNaseH裂解的多個(gè)核苷酸的中 間位置位于延伸區(qū)域之間，所述延伸區(qū)域具有與中間區(qū)域的核苷化學(xué)相異的一個(gè)或多個(gè)核 苷酸?！伴g隙片段”是指gapmer中構(gòu)成所述中間區(qū)域的多個(gè)核苷酸?！皞?cè)翼片段”是指gapmer 的延伸區(qū)域?！皵U(kuò)展間隙”是指具有位于含1-6個(gè)核苷的5’和3’側(cè)翼片段之間、并與之直接相 連的12個(gè)或更多連續(xù)2’ -脫氧核糖核苷的間隙片段的嵌合反義化合物。
“雜交”是指互補(bǔ)核酸分子的退火。在某些實(shí)施方式里，雜交核酸分子包括，但不限 于，反義化合物和靶向核酸。在某些這樣的實(shí)施方式里，互補(bǔ)核酸分子包括，但不限于，反義 寡核苷酸和核酸靶。“過(guò)度增生病癥”是指表征為細(xì)胞的不正常的或病態(tài)的增殖，例如癌癥、牛皮癬、增
生等等?！拌b定動(dòng)物的血栓并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)”是指鑒定已經(jīng)被診斷為具有血栓并發(fā)癥的動(dòng)物， 或鑒定傾向于發(fā)展血栓并發(fā)癥的動(dòng)物。傾向于發(fā)展血栓并發(fā)癥的個(gè)體包括具有一個(gè)或多個(gè) 血栓并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)因子的個(gè)體，包括不移動(dòng)、外科手術(shù)(尤其是整形外科手術(shù))、惡性腫瘤、 懷孕、高齡、使用口服避孕藥以及遺傳或獲得性血栓形成性凝血病癥。這種檢定可以通過(guò)任 何方法完成，包括評(píng)估個(gè)體的藥物史和標(biāo)準(zhǔn)化臨床測(cè)試或評(píng)估?！爸苯舆B接”是指在直接連接元素之間沒(méi)有其它介入元素?！皞€(gè)體”是指選擇處理或治療的人或非人動(dòng)物?！坝行枰膫€(gè)體”是指選擇處理或治療的人或非人動(dòng)物，其需要進(jìn)行所述處理或治療?！鞍l(fā)炎癥狀”是指導(dǎo)致炎癥的疾病、疾病狀態(tài)、綜合癥或其它狀況。例如，風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎和肝纖維化是發(fā)炎癥狀。發(fā)炎癥狀其它實(shí)施例包括膿血癥、心肌缺血/再灌注傷害、成 人呼吸窘迫綜合癥、腎炎、移植排斥、腸炎疾病、多發(fā)性硬化、動(dòng)脈硬化和血管炎?！昂塑臻g連接”是指核苷之間的化學(xué)鍵?！跋噙B核苷”是指鍵合在一起的相連核苷。“不匹配”或“非互補(bǔ)堿基”是指第一核酸的不與第二或靶向核酸的對(duì)應(yīng)堿基相配 對(duì)的堿基。“修飾的核苷間連接”是指自然生成的核苷間鍵的取代和/或任何改變(例如硫代 磷酸酯核苷間鍵)?！靶揎椀膲A基”指除腺嘌呤、胞嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶之外的其它任何堿 基。“未修飾的堿基”是指嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥(niǎo)嘌呤(G)，以及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、 胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。“修飾的核苷酸”是指獨(dú)立地具有修飾的糖片段、修飾的核苷間連接或修飾的堿基 的核苷酸。“修飾的核苷”是指獨(dú)立地具有修飾的糖片段或修飾的堿基的核苷。“修飾的寡核苷酸”是指包含修飾的核苷間連接、修飾的糖和/或修飾的堿基的寡 核苷酸?！靶揎椀奶恰笔侵柑烊惶堑娜〈?或任何改變?！靶揎椀奶瞧巍笔侵竵?lái)自天然 糖片段并具有任何取代和/或改變的糖片段。“基序”是指在反義化合物中未修飾的或修飾的核苷的樣式，例如，在反義化合物 中化學(xué)相異區(qū)域的樣式?！疤烊淮嬖诘暮塑臻g連接”是指3’到5’磷酸二酯鍵連接?！疤烊惶瞧巍笔侵冈贒NA(2’ -H)或RNA(2’ -OH)中存在的糖。“核酸”是指由核苷酸單體組成分子。核算包括核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸 (DNA)、單鏈核酸、雙鏈核酸、小干擾核糖核酸(siRNA)和microRNA(miRNA)。“堿基”是指能與另一個(gè)核酸的堿基相配對(duì)的雜環(huán)片段。
“堿基序列”是指不依賴于任何糖、連接和/或堿基修飾的連續(xù)堿基的順序。“核苷”是指與糖連接的堿基?！昂塑账帷笔侵负塑站哂辛姿峄鶊F(tuán)共價(jià)連接于該核苷的糖部分?！肮丫刍衔铩被颉肮丫畚铩笔侵赣蛇B接的單體子單元組成的聚合物，其能夠與核酸 分子的至少一個(gè)區(qū)域雜交。“寡核苷酸”是指連接核苷的聚合物，其中每個(gè)所述核苷可以相互獨(dú)立地是修飾的 或未修飾的?！澳c胃外給藥”是指通過(guò)注射或輸液來(lái)給藥。腸胃外給藥包括，但不限于，皮下給 藥，靜脈內(nèi)給藥，肌肉內(nèi)給藥，動(dòng)脈內(nèi)給藥，腹腔給藥或顱內(nèi)給藥，例如鞘內(nèi)或腦室內(nèi)給藥。 “皮下給藥”是指僅在皮膚之下給藥。“靜脈內(nèi)給藥”是指向靜脈給藥?！半摹笔侵赣赏ㄟ^(guò)酰胺鍵連接至少兩個(gè)氨基酸形成的分子。肽也指多肽和蛋白質(zhì)?！八帉W(xué)試劑”是指施用于個(gè)體時(shí)提供治療利益的物質(zhì)。例如，在某些實(shí)施方式里，靶 向于因子7的反義寡核苷酸是藥學(xué)試劑?！盎钚运帉W(xué)試劑”是指藥物組合物里提供所希望的 效果的物質(zhì)?！八幬锝M合物”是指適合給藥于個(gè)體的物質(zhì)的混合物。例如，藥物組合物可以包含 一種或多種反義寡核苷酸和無(wú)菌水溶液?！八帉W(xué)上可接受的鹽”是指生理上和藥學(xué)上可接受的反義化合物的鹽，例如，保留 了寡核苷酸母體的所希望的生物活性并且不帶來(lái)不希望的毒物學(xué)效果的鹽?！傲虼姿狨ミB接”是指核苷間的磷酸二酯鍵經(jīng)過(guò)一個(gè)非橋連氧原子用硫原子取 代來(lái)修飾的連接。硫代磷酸酯連接時(shí)修飾的核苷間連接。“部分”是指核酸的確定數(shù)量的連續(xù)(也就是連接的)堿基。在某些實(shí)施方式里， 部分是靶向核酸的確定數(shù)量的連續(xù)堿基。在某些實(shí)施方式里，部分是反義化合物的確定數(shù) 量的連續(xù)堿基?！邦A(yù)防”是指延緩或阻止疾病、病癥或癥狀的發(fā)作或發(fā)展以從幾分鐘到不限期的一 段時(shí)間?！邦A(yù)防”也指降低疾病、病癥或癥狀發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)?！扒八帯笔侵敢苑腔钚孕问街苽涞闹委熢噭?，其在體內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)通過(guò)內(nèi)源性酶或其 它化學(xué)物質(zhì)或條件而轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚孕问?即，藥)?！案弊饔谩笔侵笟w因于治療的除所希望的效果之外的生理反應(yīng)。在某些實(shí)施方式 里，副作用包括，但不限于，注射位置反應(yīng)、肝功能測(cè)試異常、腎功能異常、肝臟毒性、腎臟毒 性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、肌病和不適感。例如，血清中轉(zhuǎn)氨酶水平升高可以指示肝毒性或肝 功能異常。例如，膽紅素增加可以指示肝毒性或肝功能異常。“單鏈寡核苷酸”是指不與互補(bǔ)鏈雜交的寡核苷酸?！靶揎椀膯捂湽押塑账帷笔侵?不與互補(bǔ)鏈雜交的修飾的寡核苷酸?！疤禺愋噪s交”是指反義化合物與靶向核酸雜交而誘導(dǎo)所希望的效果，同時(shí)對(duì)非靶 向核酸展示最小或沒(méi)有效果。例如，特異性雜交指在希望進(jìn)行特異性結(jié)合的條件下，例如在 體內(nèi)檢測(cè)和治療處理的生理?xiàng)l件下，反義化合物具有與靶向化合物完全程度的互補(bǔ)性以誘 導(dǎo)所希望的效果，同時(shí)對(duì)非靶向核酸展現(xiàn)最小或沒(méi)有效果。“嚴(yán)格雜交條件”是指在這樣的條件下核酸分子，例如反義化合物，將與靶向核酸 序列雜交，而與其它序列以最小數(shù)量雜交。嚴(yán)格條件是序列依賴性的并在不同環(huán)境中有所
12不同。在本發(fā)明的文本中，寡聚化合物與靶向序列雜交的嚴(yán)格條件通過(guò)寡聚化合物的組分 和本性以及它們用于研究的試驗(yàn)來(lái)確定?！鞍邢颉被颉鞍邢蛴?，，是指具有允許反義化合物特異性雜交靶向核酸以誘導(dǎo)所希望 的效果的堿基序列。在某些實(shí)施方式里，所希望的效果是減少靶向核酸。在某些實(shí)施方式 里，所希望的效果是降低因子7mRNA。“靶向”是指設(shè)計(jì)和選擇將特異性與靶向核酸雜交并誘導(dǎo)所希望的效果的反義化 合物。“靶向核酸”，“靶向RNA”，“靶向RNA轉(zhuǎn)錄物”和“核酸靶”都是指反義化合物能夠 靶向的核酸?！鞍邢蚱巍笔侵阜戳x化合物能夠靶向結(jié)合的靶向核酸的核苷酸序列。“5’靶向位 點(diǎn)”是指靶向片段的最5’端核苷酸，“3’靶向位點(diǎn)”是指靶向片段的最3’端核苷酸?！鞍邢騾^(qū)域”或“活性靶向區(qū)域”是指一個(gè)或多個(gè)反義化合物靶向的靶向核酸的部 分?！爸委熡行Я俊笔侵改芙o個(gè)體提供治療利益的藥學(xué)試劑的量?！把úl(fā)癥”是指包括由血栓引起的栓塞的任何疾病、病癥或癥狀。這樣的疾病、 病癥和癥狀包括血栓癥類(lèi)、栓塞和血栓栓塞。在某些實(shí)施方式里，這些疾病、病癥和癥狀包 括深靜脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞和中風(fēng)?！爸委煛笔侵附o藥以藥物組合物以影響疾病、病癥或癥狀的改變或改進(jìn)?！拔葱揎椀暮塑账帷笔侵赣商烊淮嬖诘膲A基、糖片段和核苷間連接組成的核苷酸。 在某些實(shí)施方式里，未修飾的核苷酸是RNA核苷酸(即β-D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即 β -D-脫氧核糖核苷)。特定實(shí)施方式本發(fā)明的實(shí)施方式提供了調(diào)節(jié)因子7mRNA和蛋白的表達(dá)的方法、化合物和組合 物。在某些實(shí)施方式里，因子7mRNA和蛋白的表達(dá)被降低。在某些實(shí)施方式里，因子7特異 性抑制劑調(diào)節(jié)因子7mRNA和蛋白的表達(dá)。在某些實(shí)施方式里，因子7特異性抑制劑是核酸、 蛋白或小分子。在某些實(shí)施方式里，調(diào)節(jié)可以發(fā)生在細(xì)胞或組織里。在某些實(shí)施方式里，所述細(xì)胞 和組織是在動(dòng)物里的。在某些實(shí)施方式里，所述動(dòng)物是人。在某些實(shí)施方式里，因子7mRNA 水平被降低。在某些實(shí)施方式里，因子7蛋白水平被降低。這種降低可以以時(shí)間依賴性方 式或劑量依賴性方式發(fā)生。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了對(duì)有需要的個(gè)體進(jìn)行治療、預(yù)防或改善與因子7相關(guān)聯(lián) 的疾病、病癥或癥狀的方法、化合物和組合物。在某些實(shí)施方式里，所述疾病、病癥和癥狀是 血栓并發(fā)癥。所述血栓并發(fā)癥包括血栓癥、栓塞和血栓栓塞等種類(lèi)。在某些實(shí)施方式里所 述血栓并發(fā)癥包括深靜脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞和中風(fēng)。這些疾病、病癥和癥狀可以具有一個(gè)或多個(gè)共有的風(fēng)險(xiǎn)因子、起因或結(jié)果。某些 血栓并發(fā)癥發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)因子和起因包括不移動(dòng)、外科手術(shù)、外科手術(shù)(尤其是整形外科手 術(shù))、惡性腫瘤、懷孕、高齡、使用口服避孕藥、心室纖維性顫動(dòng)、前述血栓并發(fā)癥、慢性發(fā)炎 疾病和遺傳或獲得性血栓形成性凝血病癥。某些與血栓并發(fā)癥的發(fā)展相關(guān)聯(lián)的結(jié)果包括 通過(guò)受影響的血管的血液流動(dòng)減少、組織死亡和個(gè)體死亡。過(guò)度增生病癥發(fā)展的某些風(fēng)險(xiǎn)因子和起因包括遺傳因子，例如可以或不可以遺傳的基因突變和染色體畸變；以及環(huán)境因 子，包括但不限于，暴露于已知的誘變劑，例如來(lái)自放射性元素的高能量輻射、X射線、伽馬 射線、微波和紫外線；某些工業(yè)化學(xué)物質(zhì)；污染物例如香煙的煙塵；某些殺蟲(chóng)劑；藥物；和病 毒。與過(guò)度增生病癥的發(fā)展相關(guān)聯(lián)的某些結(jié)果包括個(gè)體內(nèi)的非惡性腫瘤、前惡性腫瘤和惡 性組織。某些發(fā)炎病癥的風(fēng)險(xiǎn)因子和起因包括引起對(duì)潛在的病理性癥狀的細(xì)胞反應(yīng)的有害 刺激，包括但不限于細(xì)菌和病毒感染以及過(guò)敏原。炎癥通過(guò)由宿主巨噬細(xì)胞、T-淋巴細(xì)胞、 內(nèi)皮細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子介導(dǎo)。與發(fā)炎癥狀相關(guān)聯(lián)的某些結(jié)果包括感染區(qū)域的發(fā)紅、疼痛、 腫脹、個(gè)體失去功能、發(fā)病和死亡。在某些實(shí)施方式里，治療方法包括給藥因子7特異性抑制劑于所需要的個(gè)體。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明提供了制備用于治療、預(yù)防或改善與因子7相關(guān)的疾 病、病癥和癥狀的藥物的方法和化合物。因子7相關(guān)的疾病、病癥和癥狀包括血栓并發(fā)癥、 過(guò)度增生病癥和發(fā)炎癥狀。血栓并發(fā)癥包括血栓癥、栓塞、血栓栓塞、深靜脈血栓、肺栓塞、 心肌梗塞和中風(fēng)。過(guò)度增生病癥包括癌癥。發(fā)炎癥狀包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和纖維化。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了用于治療、預(yù)防或改善因子7相關(guān)疾病的因子7特異性 抑制劑。在某些實(shí)施方式里，因子7特異性抑制劑是核酸(包括反義化合物)、肽、抗體、小 分子和能夠抑制因子7mRNA和/或因子7蛋白的表達(dá)的其它試劑。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了因子7特異性抑制劑，如本文所述，用于治療、預(yù)防或改 善血栓并發(fā)癥例如血栓癥、栓塞、血栓栓塞、深靜脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞和中風(fēng)。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了因子7特異性抑制劑，如本文所述，用于治療、預(yù)防或改 善血栓并發(fā)癥，如本文所述，通過(guò)與另外的試劑或療法結(jié)合治療，如本文所述。試劑或療法 可以共同給藥或者伴隨給藥。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了因子7特異性抑制劑的應(yīng)用，如本文所述，用于制備治 療、預(yù)防或改善血栓并發(fā)癥的藥物，如本文所述，通過(guò)與另外的試劑或療法結(jié)合治療，如本 文所述。試劑或療法可以共同給藥或者伴隨給藥。本發(fā)明的實(shí)施例提供了因子7抑制劑的應(yīng)用，如本文所述，用于制備治療、預(yù)防或 改善血栓并發(fā)癥的藥物，如本文所述，用于患者并隨后給藥以另外的試劑或治療，如本文所 述。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了用于治療、預(yù)防或改善血栓并發(fā)癥的試劑盒，如本文所 述，其中所述試劑盒包括(i)如本文所述的因子7特異性抑制劑；和可選擇地(ii)如本文 所述的另外的試劑或療法。本發(fā)明的試劑盒可以進(jìn)一步包括使用所述試劑盒用于治療、預(yù)防或改善血栓并發(fā) 癥的說(shuō)明書(shū)，如本文所述，通過(guò)聯(lián)合治療，如本文所述。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了靶向于因子7核酸的反義化合物。在某些實(shí)施方式 里，所述人因子7核酸是下列序列的任意一個(gè)GENBANKAccession No. NT_027140. 6，截取 1255000-1273000(本文引用作為 SEQ ID NO 1) ,GENBANK Accession No. ΝΜ_019616· 2 (本 文引用作為 SEQ ID NO 2), GENBANK Accession No. DB184141. 1 (本文引用作為 SEQ ID N0:3)，和 GENBANK Accession No. NM_000131. 3 (本文引用作為 SEQ ID NO: 167)。在某些實(shí)施方式里，恒河猴因子7核酸是下列序列的任意一個(gè)GENBANK Accession NoNW_001104507. 1，截取核苷酸 69IOOO-7O6OOO (本文引用作為 SEQ IDNO 162)和GENBANK Accession No. 3360_061_B (本文引用作為 SEQ ID N0:163)。在某些實(shí)施方 式里，小鼠因子7核酸是下列序列GENBANK Accession No. NT_039455. 6，截取核苷酸 10024000-10037000(本文引用作為 SEQ ID NO :160)。反義化合物寡聚化合物包含，但不限于，寡核苷酸，寡核苷，寡核苷酸類(lèi)似物，寡核苷酸模擬物 (mimetics)，反義化合物，反義寡核苷酸和siRNA。寡聚化合物可以與靶向核酸“反義”，意 思是它能夠通過(guò)氫鍵與靶向核酸雜交。在某些實(shí)施方式里，反義化合物具有這樣的堿基序列，當(dāng)其以5’到3’方向書(shū)寫(xiě)的 時(shí)候，包含其靶向的靶向核酸的靶向片段的反向互補(bǔ)物。在某些所述實(shí)施方式里，反義寡核 苷酸具有這樣的堿基序列，當(dāng)其以5’到3’方向書(shū)寫(xiě)的時(shí)候，包含其靶向的靶向核酸的靶向 片段的反向互補(bǔ)物。在某些實(shí)施方式里，靶向于因子7核酸的反義化合物是12-30亞單元長(zhǎng)度。也就 是說(shuō)，反義化合物是12-30個(gè)連接的亞單元。在其它實(shí)施方式里，所述反義化合物是8-80， 12-50，15-30，18-24，19-22，或20個(gè)連接的亞單元。在某些所述實(shí)施方式里，所述反義化合 物是 8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32， 33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57， 58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，或 80 個(gè)連接 的亞單元長(zhǎng)度，或由以上值的任意兩個(gè)所確定的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方式里所述反義化合 物是反義寡核苷酸，而所述連接的亞單元是核苷酸。在某些實(shí)施方式里，縮短的或截?cái)嗟陌邢蛞蜃?核酸的反義化合物具有從5’端刪 除的單一亞單元(5’截?cái)?，或可選地從3’端(3’截?cái)?。縮短的或截?cái)嗟陌邢蛞蜃?核 酸的反義化合物可以具有從5’端刪除的2個(gè)亞單元，或可選地可以具有從3’端刪除的2 個(gè)亞單元?？蛇x地，所述刪除的核苷可以通過(guò)散布貫穿所述反義化合物；例如，具有從5’端 刪除的一個(gè)核苷和從3’端刪除的一個(gè)核苷的反義化合物。當(dāng)單一的添加的亞單元出現(xiàn)在延長(zhǎng)的反義化合物中時(shí)，所述添加的亞單元可以位 于所述反義化合物的5’或3’末端。當(dāng)存在兩個(gè)或更多添加的亞單元時(shí)，所述添加的亞單 元可以彼此相臨；例如，在具有添加于5’端(5’添加)或可選地于3’端(3’添加)的2個(gè) 亞單元的反義化合物中?？蛇x地，所述添加的亞單元可以散布貫穿所述反義化合物，例如， 在具有一個(gè)添加到5’端的亞單元和一個(gè)添加到3’端的亞單元的反義化合物中?？梢栽黾踊驕p少反義化合物例如反義寡核苷酸的長(zhǎng)度和/或引入不匹配堿基而 不消除其活性。例如，在Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 :7305_7309，1992)中， 測(cè)試了一系列13-25個(gè)堿基長(zhǎng)度的反義寡核苷酸在卵母細(xì)胞注射模型中誘導(dǎo)靶向RNA斷裂 的能力。25個(gè)堿基長(zhǎng)度并在反義寡核苷酸末端具有8或11個(gè)不匹配堿基的反義寡核苷酸 能夠指導(dǎo)靶向mRNA的特異性斷裂，雖然是以相比不含有不匹配堿基的反義寡核苷酸較小 的程度。相似的，使用13個(gè)堿基并具有1或3個(gè)不匹配堿基的反義寡核苷酸也達(dá)到了靶向 特異性斷裂。Gautschi et al (J. Natl. Cancer Inst. 93 :463-471, March 2001)證明了具有與 bcl-2mRNA 100%互補(bǔ)性而與bcl_xL mRNA具有3個(gè)不匹配堿基的寡核苷酸能夠在體內(nèi)和 體外降低bcl-2和bcl-xL兩者的表達(dá)。進(jìn)一步，所述寡核苷酸證明了有效的體內(nèi)抗腫瘤活性。Maher and Dolnick(Nuc. Acid. Res. 16 :3341-3358,1988)分別測(cè)試了一系列串聯(lián) 14個(gè)堿基的反義寡核苷酸，以及由2或3個(gè)所述串聯(lián)寡核苷酸的序列組成的28和42個(gè)堿 基的反義寡核苷酸，測(cè)試了其在兔網(wǎng)狀細(xì)胞檢驗(yàn)中阻止人DHFR翻譯的能力。所述3個(gè)14 堿基的反義寡核苷酸的每個(gè)單獨(dú)都能夠抑制翻譯，雖然相比所述觀或42堿基的反義寡核 苷酸以更小的水平。反義化合物基序在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的反義化合物具有以某種模式或基序排列的 化學(xué)修飾的亞單元，以授予反義化合物的性質(zhì)，例如增強(qiáng)的抑制活性，增加的對(duì)靶向核酸的 結(jié)合親和力，或在體內(nèi)對(duì)核酸酶降解的抗性。嵌合反義化合物典型地含有至少一個(gè)修飾的區(qū)域以授予增加的對(duì)核酸酶降解的 抗性，增加的細(xì)胞吸收，增加的對(duì)靶向核酸的結(jié)合親和力，和/或增加的抑制活性。嵌合反 義化合物的第二區(qū)域可以任選地作為細(xì)胞的核酸內(nèi)切酶RNase H的底物，該RNase H切斷 RNA =DNA雙鏈體的RNA鏈。具有g(shù)apmer基序的反義化合物被認(rèn)為是嵌合反義化合物。在gapmer中，具有多 個(gè)核苷酸的中間區(qū)域支持RNaseH切斷，該區(qū)域位于具有與所述中間區(qū)域的核苷酸化學(xué)相 異的多個(gè)核苷酸的延長(zhǎng)區(qū)域之間。在這種具有g(shù)apmer基序的反義寡核苷酸中，間隙片段支 持靶核酸的切斷，而側(cè)翼片段包含修飾的核苷以增強(qiáng)穩(wěn)定性、親和力和核酸外切酶抗性。在 某些實(shí)施方式里，gapmer的各區(qū)域通過(guò)包含每個(gè)不同區(qū)域的糖片段來(lái)區(qū)分。在某些實(shí)施方 式里，用于區(qū)分gapmer的區(qū)域的糖基團(tuán)類(lèi)型可以包括β-D-核糖核苷、β-D-脫氧核糖核 苷、2’ -修飾的核苷(這種2’ -修飾的核苷可以包括2’ -Μ0Ε，和2’ -O-CH3，以及其它)和 二環(huán)糖修飾的核苷(這種二環(huán)糖修飾的核苷可以包括具有4’ -(CH2) η-0-2’橋連的核苷， 其中11 = 1或11 = 2)。優(yōu)選地，每個(gè)相異區(qū)域包含統(tǒng)一的糖片段。所述側(cè)翼-間隙-側(cè)翼 基序經(jīng)常被表示為“Χ-Υ-Ζ”，其中“X”代表5’側(cè)翼區(qū)域的長(zhǎng)度，“Y”代表間隙區(qū)域的長(zhǎng)度， “Ζ”代表3’側(cè)翼區(qū)域的長(zhǎng)度。如本文所用，表示為“Χ-Υ-Ζ”的gapmer具有這樣的結(jié)構(gòu)，其 中所述間隙片段位于與5’側(cè)翼片段和3’側(cè)翼片段的每一個(gè)直接相鄰。從而，在5’側(cè)翼片 段與間隙片段之間，或間隙片段與3’側(cè)翼片段之間，都不存在插入的核苷酸。本文所描述 的任何反義化合物都可以具有g(shù)apmer基序。在某些實(shí)施方式里，X和Z是相同的，而在其 它實(shí)施方式里他們是不同的。在優(yōu)選的實(shí)施方式里，Y是8-15的核苷酸。X、Y或Z可以是 1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，25，30 或更多核苷酸的任意。因 此，本發(fā)明的 gapmer 包括但不限于，例如，5-10-5，4-8-4，4-12-3，4-12-4，3-14-3，2-13-5， 2-16-2，1-18-1，3-10-3，2-10-2，1-10-1 或 2-8-2。在某些實(shí)施方式里，所述反義化合物具有“wingmer”基序，具有側(cè)翼-間隙或間 隙-側(cè)翼結(jié)構(gòu)，即X-Y或Y-Z結(jié)構(gòu)，如上所述，作為gapmer結(jié)構(gòu)。因此，本發(fā)明的wingmer 結(jié)構(gòu)包括但不限于，例如，5-10，8-4，4-12，12-4，3-14,16-2,18-1,10-3, 2-10,1-10,8-2, 2-13，或 5-13。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的反義化合物擁有5-10-5gapmer基序。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的反義化合物擁有3-14-3gapmer基序。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的反義化合物擁有2-13-5gapmer基序。
在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的反義化合物擁有2-12-2gapmer基序。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的反義化合物具有間隙擴(kuò)展(gap-widened) 的基序。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的間隙擴(kuò)展反義寡核苷酸具有14個(gè)2 ’ -脫氧 核糖核苷的間隙片段位于3個(gè)化學(xué)修飾的核苷的側(cè)翼片段之間并與之直接相鄰。在某些實(shí) 施方式里，所述化學(xué)修飾包括2’-糖修飾。在另一種實(shí)施方式里，所述化學(xué)修飾包括2’_M0E 糖修飾。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的間隙擴(kuò)展反義寡核苷酸具有13個(gè)2’ -脫 氧核糖核苷的間隙片段位于2個(gè)化學(xué)修飾的核苷的5’側(cè)翼片段和5個(gè)化學(xué)修飾的核苷的 3’側(cè)翼片段之間并與之直接相鄰。在某些實(shí)施方式里，所述化學(xué)修飾包括2’-糖修飾。在 另一種實(shí)施方式里，所述化學(xué)修飾包括2’ -MOE糖修飾。靶核酸、靶向區(qū)域和核苷酸序列編碼因子7基因序列的核苷酸序列包括，但不限于，下列GENBANK Accession No. NT_027140. 6，截取 1255000-1273000，由 GENBANK 于 2001 年 7 月 12 日首次保存，本文引用作為 SEQ ID NO 1 ；GENBANK Accession No. NM_019616. 2, 由GENBANK 于2000年10月3日首次保存，本文引用作為SEQ ID no :2 ； GENBANK Accession No. DB184141. 1，由 GENBANK 于 2005 年 12 月 11 日首次保存，本文引用作為 SEQ ID NO 3 ；GENBANK Accession No. NM_000131. 3，由 GENBANK 于1999年3月M日首次保存，本文引用作為SEQ ID NO :167 ；GENBANK Accession No. NT_039455. 6，截取 10024000-10037000，由 GENBANK 于 2003 年 2 月 24 曰首次保存，本文引用作為 SEQ ID NO :160 ；GENBANK Accession No. NW_00104507. 1，本 文引用作為 SEQ ID NO :162 ；以及GENBANKAccession No. 3360_061_B，本文引用作為 SEQ ID NO :163。應(yīng)當(dāng)理解，本文的實(shí)施例里所列的每個(gè)SEQ ID NO的序列都與糖片段、核苷間連接 或堿基的任何修飾無(wú)關(guān)。同樣的，由SEQ ID NO所定義的反義化合物可以獨(dú)立地包含一個(gè) 或多個(gè)糖片段、核苷間連接或堿基的修飾。以Isis號(hào)碼(Isis No.)標(biāo)記的反義化合物指 示了堿基序列和基序的結(jié)合。在某些實(shí)施方式里，靶向區(qū)域是靶向核酸的結(jié)構(gòu)性確定區(qū)域。例如，靶向區(qū)域可以 包含3’UTR、5’UTR、外顯子、內(nèi)含子、外顯子/內(nèi)含子接頭、編碼區(qū)域、翻譯起始區(qū)域、翻譯終 止區(qū)域或其它確定的核酸區(qū)域。因子7基因序列的結(jié)構(gòu)性確定區(qū)域可以通過(guò)序列數(shù)據(jù)庫(kù)例 如NCBI的登記號(hào)來(lái)獲得，這些信息本文引入作為參考。在某些實(shí)施方式里，靶向區(qū)域可以 包含從靶向區(qū)域內(nèi)的一個(gè)靶向片段的5’靶向位點(diǎn)到靶向區(qū)域內(nèi)的另一個(gè)靶向片段的3’靶 向位點(diǎn)的序列。靶向包括確定至少一個(gè)反義化合物雜交的靶向片段，從而產(chǎn)生所希望的效果。在 某些實(shí)施方式里，所述所希望的效果是降低mRNA靶核酸水平。在某些實(shí)施方式里，所述所 希望的效果是降低由所述靶向核酸編碼的蛋白的水平，或與靶向核酸相關(guān)聯(lián)的表型的改變。靶向區(qū)域可以包含一個(gè)或多個(gè)靶向片段。靶向區(qū)域內(nèi)的多個(gè)靶向片段可以是相互 重疊的?？蛇x地，它們可以是不重疊的。在某些實(shí)施方式里，靶向區(qū)域內(nèi)的靶向片段由不
17多于約300個(gè)核苷酸分開(kāi)。在某些實(shí)施方式里，靶向區(qū)域內(nèi)的靶向片段由所述靶向核酸的 一定數(shù)目的核苷酸分開(kāi)，所述的數(shù)目約為，或不多于，或不多于約250，200，150，100，90，80， 70，60，50，40，30，20，或10個(gè)核苷酸，或者上述數(shù)值的任意兩個(gè)所確定的范圍。在某些實(shí)施 方式里，靶向區(qū)域內(nèi)的靶向片段由靶向核酸的不多于，或不多于約，5個(gè)核苷酸分開(kāi)。在某些 實(shí)施方式里，靶向片段是相連的。預(yù)期的靶向區(qū)域由本文所列的任何5’靶向位點(diǎn)或3’靶 向位點(diǎn)為開(kāi)始核酸的范圍來(lái)確定?？梢詮?’ UTR、編碼區(qū)域、3’ UTR、內(nèi)含子、外顯子或內(nèi)含子/外顯子接頭內(nèi)找到合 適的靶向片段。包含起始密碼子或終止密碼子的靶向片段也是合適的靶向片段。合適的靶 向片段可以特異性包含某種結(jié)構(gòu)性確定區(qū)域，例如所述起始密碼子或終止密碼子。合適的靶向區(qū)域的確定可以包括靶向核酸序列與貫穿基因組的其它序列相比較。 例如，BLAST算法可以用于鑒別不同核酸之間的相似性區(qū)域。這種比較可以防止選擇與所 選擇的靶向核酸之外的序列(即非靶向或脫離靶向序列)以非特異的方式雜交的反義化合 物序列。在活性靶向區(qū)域內(nèi)的反義化合物可以具有多種活性(例如，通過(guò)靶向核酸水平的 降低百分比來(lái)確定)。在某些實(shí)施方式里，因子7mRNA水平的降低指示了因子7表達(dá)的抑 制。因子7蛋白水平的降低也指示了靶向mRNA表達(dá)的抑制。進(jìn)一步，表現(xiàn)型的改變也指示 了因子7表達(dá)的抑制。例如，延長(zhǎng)的PT時(shí)間可以指示因子7表達(dá)的抑制。在另一個(gè)實(shí)施 例里，延長(zhǎng)的aPTT時(shí)間同延長(zhǎng)的PT時(shí)間一起指示因子7表達(dá)的抑制。在另一個(gè)實(shí)施例里， 血小板因子4(PF-4)表達(dá)水平的降低指示因子7表達(dá)的抑制。在另一個(gè)實(shí)施例里，血栓形 成的減少或血栓形成時(shí)間的增加能夠指示因子7表達(dá)的抑制。雜交在某些實(shí)施方式里，雜交發(fā)生在本文所公開(kāi)的反義化合物與因子7核酸之間。 雜交最通常的機(jī)制涉及所述核酸分子的互補(bǔ)堿基之間的氫鍵(例如，Watson-Crick, Hoogsteen 或反 Hoogsteen 氧鍵)0雜交可以在多種條件下發(fā)生。嚴(yán)格條件是序列依賴性的并由用于雜交的核酸分子 的特征和組成決定。確定序列是否特異性雜交于靶向核酸的方法是本領(lǐng)域所熟知的。在某些實(shí)施方式 里，本文提供的反義化合物特異性雜交于因子7核酸?；パa(bǔ)性當(dāng)反義化合物的足夠數(shù)量的堿基能夠通過(guò)氫鍵與靶向核酸的對(duì)應(yīng)堿基相結(jié)合，從 而導(dǎo)致發(fā)生所希望的效果(例如，靶向核酸例如因子7核酸的反義抑制)的時(shí)候，反義化合 物與靶向核酸是相互互補(bǔ)的。假如所述反義化合物仍然能夠特異性雜交于靶向核酸的話，反義化合物與因子7 核酸之間的非互補(bǔ)堿基也是可以容忍的。進(jìn)一步，反義化合物可以雜交于因子7核酸的一 個(gè)或多個(gè)片段從而插入或相鄰片段不干涉雜交(例如，環(huán)結(jié)構(gòu)，不匹配或發(fā)夾結(jié)構(gòu))在某些實(shí)施方式里，本文提供的反義化合物，或其特定的部分，是，或者至少是， 70 %, 80 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98%，99%，或100%互補(bǔ)于因子7核酸，靶向區(qū)域，靶向片段，或其特定的部分。反義化合物 與靶向核酸的互補(bǔ)百分比可以用常規(guī)方法確定。
例如，如果反義化合物的20個(gè)堿基中的18個(gè)與靶向區(qū)域互補(bǔ)并因此能夠特異性 雜交，則該反義化合物展現(xiàn)90%互補(bǔ)。在這個(gè)實(shí)例里，其余的非互補(bǔ)堿基可以是聚集的或 分散于互補(bǔ)核苷酸的并且不需要相互連續(xù)或與互補(bǔ)堿基連續(xù)。因此，18個(gè)核苷酸長(zhǎng)度并具 有側(cè)面與兩個(gè)與靶向核酸完全互補(bǔ)的區(qū)域相連接的4個(gè)非互補(bǔ)堿基的反義化合物總體上 與所述靶向核酸具有77. 8 %互補(bǔ)，并從而落入本發(fā)明的范圍。反義化合物與靶向核酸區(qū)域 的互補(bǔ)百分比可以用本領(lǐng)域公知的BLAST程序(基本局域線性搜索工具)和PowerBLAST 程序常規(guī)地確定(Altschul et al. , J. MoI. Biol. ,1990,215,403410 ；Zhang andMadden, Genome Res.，1997，7，649656)。同源百分比、序列同一性或互補(bǔ)性可以通過(guò)例如Gap程序 (Wisconsin Sequence AnalysisPackage,Version 8for Unix,Genetics Computer Group, UniversityResearch Park, Madison Wis.)確定，使用默認(rèn)設(shè)置，采用 Smith 和 Waterman 的 算法(Adv. App 1. Math.，1981，2，482489)。在某些實(shí)施方式里，本文提供的反義化合物，或其特定部分，與靶向核酸或其特定 部分完全互補(bǔ)(即100%互補(bǔ))。例如，反義化合物可以完全互補(bǔ)于因子7核酸，或靶向區(qū) 域，或其靶向片段或靶向序列。如本文所用，“完全互補(bǔ)”意思是反義化合物的每個(gè)堿基都 能夠與靶向核酸的對(duì)應(yīng)堿基精確配對(duì)。例如，20個(gè)堿基的反義化合物與400個(gè)堿基長(zhǎng)度的 靶向序列完全互補(bǔ)，只要靶向核酸中有與所述反義化合物完全互補(bǔ)的對(duì)應(yīng)的20個(gè)堿基部 分。完全互補(bǔ)也可以用于第一和/或第二核酸的特定部分。例如，30個(gè)堿基的反義化合物 的20個(gè)堿基部分可以與400個(gè)堿基長(zhǎng)度的靶向序列“完全互補(bǔ)”。如果靶向序列具有對(duì)應(yīng) 的20個(gè)堿基部分，其中每個(gè)堿基與所述反義化合物的20個(gè)堿基部分的每個(gè)堿基互補(bǔ)，則所 述30個(gè)堿基的寡核苷酸的20個(gè)堿基部分與所屬靶向序列完全互補(bǔ)。這時(shí)候，該整個(gè)30個(gè) 堿基的反義化合物可以或可以不與所述靶向序列完全互補(bǔ)，取決于所述反義化合物的其余 10個(gè)堿基是否也與靶向序列互補(bǔ)。非互補(bǔ)堿基的位置可以在反義化合物的5’端或3’端?？蛇x地，所述非互補(bǔ)堿基 可以在反義化合物的內(nèi)部位置。當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)非互補(bǔ)堿基存在時(shí)，它們可以是連續(xù)的(也 就是相連的)或不連續(xù)的。在一個(gè)實(shí)施方式里，非互補(bǔ)堿基位于gapmer反義寡核苷酸的 側(cè)翼片段。在某些實(shí)施方式里，具有或達(dá)到12，13，14，15，16，17，18，19，或20個(gè)堿基長(zhǎng)度的
反義化合物包含不多于4個(gè)，不多于3個(gè)，不多于2個(gè)，或不多于1個(gè)非互補(bǔ)堿基，相對(duì)于靶 向核酸，例如因子7核酸，或其特定部分。在某些實(shí)施方式里，具有或達(dá)到12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25， 沈，27，觀，29，或30個(gè)堿基長(zhǎng)度的反義化合物包含不多于6個(gè)，不多于5個(gè)，不多于4個(gè)，不 多于3個(gè)，不多于2個(gè)，或不多于1個(gè)非互補(bǔ)堿基，相對(duì)于靶向核酸，例如因子7核酸，或其 特定部分。本文提供的反義化合物也包括與靶向核酸的部分相互補(bǔ)的反義化合物。如本文所 用，“部分”是指靶向核酸的區(qū)域或片段內(nèi)的確定數(shù)目的連續(xù)(也就是連接的)堿基?！安?分”也可以指反義化合物的確定數(shù)目的連續(xù)堿基。在某些實(shí)施方式里，所述反義化合物與靶 向片段的至少8個(gè)堿基的部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式里，所述反義化合物與靶向片段的至 少12個(gè)堿基的部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式里，所述反義化合物與靶向片段的至少15個(gè)堿 基的部分互補(bǔ)。也預(yù)期了與靶向片段的至少9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，或更
19多，或由這些數(shù)值的任意兩個(gè)所確定的范圍的堿基的部分互補(bǔ)的反義化合物。同一性本文提供的反義化合物相對(duì)于特定核苷酸序列，SEQ ID N0，或由特定的Isis號(hào)表 示的化合物，或其部分也具有確定的同一性百分比。如本文所用，如果反義化合物具有相同 堿基配對(duì)能力，則該反義化合物與本文公開(kāi)的序列是同一的。例如，在公開(kāi)的DNA序列里的 胸腺嘧啶用尿嘧啶取代所得到的RNA，被認(rèn)為與所述DNA序列是同一的，因?yàn)槟蜞奏ず托叵?嘧啶都與腺嘌呤配對(duì)。也預(yù)期了本發(fā)明所描述的反義化合物的縮短或延長(zhǎng)的形式，以及具 有非同一堿基的與本文提供的反義化合物相關(guān)的化合物。所述非同一堿基可以相互相鄰 或分散于反義化合物中。反義化合物的同一性百分比根據(jù)具有與對(duì)比序列同一的堿基配對(duì) 的堿基數(shù)目來(lái)確定。在某些實(shí)施方式里，所述反義化合物，或其部分，與一個(gè)或多個(gè)本文描述的反義化 合物或SEQ ID NO或其部分相比具有至少70%，75%，80%，85%，90%，95%，96%，97%， 98%，99% 或 100% 的同一性。修飾核苷是堿基-糖結(jié)合物。核苷的核堿基(即堿基)部分通常是雜環(huán)堿基片段。核 苷酸是進(jìn)一步包含共價(jià)連接于核苷的糖部分上的磷酸基團(tuán)的核苷。對(duì)含有戊呋喃糖基糖 (pentofuranosyl sugar)的核苷，所述磷酸基團(tuán)可以連接于糖的2’、3’或5’羥基片段上。 寡核苷酸是通過(guò)相鄰核苷之間的共價(jià)連接而形成的線性聚合寡核苷酸。在寡核苷酸結(jié)構(gòu) 內(nèi)，所述磷酸基團(tuán)通常用于形成寡核苷酸的核苷間連接。反義化合物的修飾包含核苷間連接、糖片段或堿基的取代或改變。修飾的反義化 合物通常優(yōu)選天然形式，這是為了所希望的性質(zhì)，例如，增強(qiáng)的細(xì)胞吸收，增強(qiáng)的核酸目標(biāo) 親和力，在核酸酶存在下增加的穩(wěn)定性，或增加的抑制活性?；瘜W(xué)修飾的核苷也可以用于增加縮短的或截取的反義寡核苷酸與其靶向核酸的 結(jié)合親和力。從而，可以經(jīng)常從具有這些化學(xué)修飾的核苷的縮短的反義化合物中獲得比較結(jié)果。修飾的核苷間連接自然存在的RNAse和DNA的核苷間連接時(shí)3’到5’磷酸二酯鍵連接。經(jīng)常通過(guò) 具有天然存在的核苷間連接的反義化合物來(lái)選擇具有一或多個(gè)修飾的，也就是非天然存在 的，核苷間連接的反義化合物，這是為了其所希望的特性，例如，增強(qiáng)的細(xì)胞吸收，增強(qiáng)的靶 向核酸親和力，在核酸酶存在下增加的穩(wěn)定性。具有修飾的核苷間連接的寡核苷酸包括保留了磷原子和核苷間連接和沒(méi)有磷原 子的核苷間連接。典型的含磷核苷間連接包括，但不限于，磷酸二酯，磷酸三酯，磷酸甲酯， 磷酸酯酰胺，和硫代磷酸酯。制備含磷和不含磷連接的方法是公知的。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的反義化合物包含一或多個(gè)修飾的核苷間連 接。在某些實(shí)施方式里，所述修飾的核苷間連接是硫代磷酸酯連接。在某些實(shí)施方式里，反 義化合物的每個(gè)核苷間連接都是硫代磷酸酯核酸間連接。修飾的糖片段本發(fā)明的反義化合物可以典型地包含糖基團(tuán)被修飾的一或多個(gè)核苷。這種糖修飾 的核苷可以給予反義化合物以增強(qiáng)的核酸酶穩(wěn)定性，增強(qiáng)的結(jié)合親和力或某些其它有益的生物學(xué)性質(zhì)。在某些實(shí)施方式里，核苷包含化學(xué)修飾的呋喃核糖環(huán)片段?；瘜W(xué)修飾的呋喃核 糖環(huán)的實(shí)例包括，但不限于，增加取代基團(tuán)(包括5’和2’取代基團(tuán))，非成對(duì)環(huán)原子之間的 橋連以形成二環(huán)核酸(BNA)，核糖基環(huán)的氧原子用S、N(R)或C(Rl) (R) 2 (R = H，C1-C12烷基 或保護(hù)基團(tuán))及其結(jié)合所替換。化學(xué)修飾的糖的實(shí)例包括2’ -F-5’ -甲基取代的核苷(見(jiàn) PCT國(guó)際申請(qǐng)W02008/101157，2008年8月21日公開(kāi)，公開(kāi)了 5，，2，-雙取代核苷)或核糖 基環(huán)的氧原子用“S”代替并進(jìn)一步在2’ -位置有取代(見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US2005-0130923， 公開(kāi)于2005年6月16日)或可選地BNA的5，-取代(見(jiàn)PCT國(guó)際申請(qǐng)W02007/i;34181， 公開(kāi)于2007年11月22日，其中LNA用例如5’ -甲基或5’ -乙烯基取代)。具有修飾的糖片段的核苷的實(shí)例包括，但不限于，包含5’-乙烯基、5’-甲基(R或 S)、4’ -S、2’ -F、2’ -OCH3和2’ -0 (CH2) 20CH3取代基團(tuán)的核苷。該2，位置的取代也可以選自烯 丙基、氨基、疊氮基、硫代基、0-烯丙基、0-C1-C10 烷基、0CF3、0 (CH2) 2SCH3、0 (CH2) 2-0-N(Rm) (Rn)和O-CH2-C ( = 0) -N(Rm) (Rn)，其中Rm和foi分別獨(dú)立地是H或取代或未取代的Cl-ClO 焼基。二環(huán)核酸(BNA)的實(shí)施例包括，但不限于，包含4’和2’核糖基環(huán)原子之間的橋連 的核苷。在某些實(shí)施方式里，本文提供的反義化合物包括一個(gè)或多個(gè)BNA核苷，其中所述 橋連包含下式之一 4' -(CH2)-0-2' (LNA) ；4' -(CH2)-S-2' ；4' -(CH2)-0-2' (LNA)； 4 ‘ - (CH2) 2-0-2 ‘ (ENA) ；4 ‘ -C (CH3) 2~0~2 ‘(參見(jiàn) PCT/US2008/068922)； 4' -CH(CH3) -0-2'和 4' -C-H(CH2OCH3)-0-2'(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利 7，399，845，公告于 2008 年 7 月 15 日)；4' -CH2-N(OCH3)-2'(參見(jiàn) PCT/US2008/064591) ;4' -CH2-O-N(CH3)-2‘(參 見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US2004-0171570，公開(kāi)于2004年9月2日)；4' -CH2-N(R)-0-2‘(參見(jiàn) 美國(guó)專(zhuān)利 7，427，672，公告于 2008 年 9 月 23 日)；4' -CH2-C(CH3)-2‘禾口 4‘ -CH2-C-(= CH2) -2'(參見(jiàn)PCT/US2008/066154)；其中R獨(dú)立地是H、C1_C12烷基或保護(hù)集團(tuán)。前述每 一個(gè)BNA都包含多種立體化學(xué)糖構(gòu)象，包括，例如，α -L-呋喃核糖和β -D-呋喃核糖(參 見(jiàn) PCT 國(guó)際申請(qǐng) PCT/DK98/00393，于 1999 年 3 月 25 日以 WO 99/14226 公開(kāi))。在某些實(shí)施方式里，核苷通過(guò)核糖基環(huán)以糖替代物取代來(lái)修飾。這種修飾包括，但 不限于，所述核糖基環(huán)用替代環(huán)系(有時(shí)指DNA類(lèi)似物)取代，例如嗎啉環(huán)，環(huán)己烯基環(huán)，環(huán) 己基環(huán)或四氫吡喃環(huán)，每一種具有下列化學(xué)式之一很多其它二環(huán)和三環(huán)糖替代環(huán)系統(tǒng)也為本領(lǐng)域所公知能用于修飾核苷以整合并 入反義化合物(例如參見(jiàn)綜述文章=Leumarm, ChristianJ.)。這種環(huán)系統(tǒng)可以經(jīng)過(guò)多種另 外的取代來(lái)增強(qiáng)活性。制備修飾的糖的方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的。在具有修飾的糖片段的核苷酸中，保留了堿基片段(天然的、修飾的或其結(jié)合)以 與適當(dāng)?shù)暮怂岚邢嚯s交。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的反義化合物包含一或多個(gè)具有修飾的糖 片段的核苷酸。在某些實(shí)施方式里，所述修飾的糖片段是2’-Μ0Ε。在某些實(shí)施方式里，所 述2’ -MOE修飾的核苷酸排列于gapmer基序內(nèi)。修飾的堿基堿基修飾或取代在結(jié)構(gòu)上區(qū)別于、但是功能上可互換于自然存在或人工合成的未 修飾的堿基。天然的和修飾的堿基都能參與氫鍵結(jié)合。這種堿基修飾可以給反義化合物帶來(lái)核酸酶穩(wěn)定性、結(jié)合親和力或其它有益的生物學(xué)性質(zhì)。修飾的堿基包括合成的或天然 的堿基，例如，5-甲基胞嘧啶(5-me-C)。某些堿基取代，包括5-甲基胞嘧啶取代，對(duì)增加反 義化合物與靶向核酸的結(jié)合親和力尤其有用。例如，5-甲基胞嘧啶取代顯示出增加了核酸 雙鏈體穩(wěn)定性 0. 6-1. 20C (Sanghvi, Y. S.，Crooke, S. T. and Lebleu, B.，eds.，Antisense Research andApplications, CRC Press, Boca Raton,1993, pp.276-278)。其它未修飾的堿基包括5-羥基甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、 6-甲基和其它烷基取代的腺嘌呤和鳥(niǎo)嘌呤、2-丙基和其它烷基取代的鳥(niǎo)氨酸、2-硫代尿嘧 啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-鹵代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基(-C ε C-CH3) 尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶堿基的其它炔烴基衍生物、6-氮雜尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、 5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4_硫代尿嘧啶、8-鹵代、8-氨基、8-硫代、8-硫烷基、8-羥基和其 它8-取代的腺嘌呤和鳥(niǎo)嘌呤、5-鹵代尤其是5-溴代、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶 和胞嘧啶、7-甲基鳥(niǎo)嘌呤和7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-氨基腺嘌呤、8-氮雜鳥(niǎo)嘌呤和 8-氮雜腺嘌呤、7-去氮鳥(niǎo)嘌呤和7-去氮腺嘌呤、以及3-去氮鳥(niǎo)嘌呤和3-去氮腺嘌呤。雜環(huán)堿基片段也可以包括嘌呤或嘧啶堿基用其它雜環(huán)取代的堿基，例如7-去氮 腺嘌呤、7-去氮鳥(niǎo)嘌呤核苷、2-氨基吡啶和2-吡啶酮。對(duì)增加反義化合物的結(jié)合親和力尤 其有用的堿基包括5-取代的嘧啶、6-氮雜嘧啶和N-2，N-6和0-6取代的嘌呤，包括2-氨 基丙基腺嘌呤、5-丙炔基鳥(niǎo)嘌呤和5-丙炔基胞嘧啶。在某些實(shí)施方式里，靶向因子7的反義化合物包含一或多個(gè)修飾的堿基。在某些 實(shí)施方式里，靶向因子7核酸的間隙擴(kuò)展的反義寡核苷酸包含一或多個(gè)修飾的堿基。在某 些實(shí)施方式里，所述修飾的堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方式里，每個(gè)胞嘧啶都是 5-甲基胞嘧啶。配制藥物組合物的組合物和方法反義寡核苷酸可以與藥學(xué)上可接受的活性或惰性物質(zhì)混合以制備藥物組合物或 配方。配制藥物組合物的組合物和方法依賴于很多條件，包括，但不限于，給藥途徑、疾病范 圍或給藥劑量。靶向因子7核酸的反義化合物可以通過(guò)與合適的藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體 聯(lián)合而用于藥物組合物。藥學(xué)上可接受的稀釋劑包括磷酸鹽緩沖液(PBS)。PBS是適用于 腸胃給藥的組合物的稀釋劑。從而，本文描述的方法的一個(gè)實(shí)施方式是包含靶向因子7核 酸的反義化合物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑的藥物組合物。在某些實(shí)施方式里，所述藥學(xué)上 可接受的稀釋劑是PBS。在某些實(shí)施方式里，所述反義化合物是反義寡核苷酸。包含反義化合物的藥物組合物含有任何藥學(xué)上可接受的鹽，酯或所述酯的鹽，或 在給藥于動(dòng)物包括人之后能夠提供(直接或間接地)生物活性代謝物或殘余物的其它任何 寡核苷酸。因此，例如，也公開(kāi)了反義化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，前藥，前藥的藥學(xué)上可接 受的鹽，和其它生物等價(jià)物。合適的藥學(xué)上可接受的鹽包括，但不限于，鈉鹽和鉀鹽。前藥包括反義化合物的一端或兩端合并了另外的核苷，其在體內(nèi)被內(nèi)源核酸酶切 斷，以形成活性反義化合物。結(jié)合反義化合物反義化合物可以共價(jià)連接于一或多個(gè)片段或結(jié)合物，后者增強(qiáng)所形成的反義寡核 苷酸的活性、細(xì)胞分布或細(xì)胞吸收。典型的結(jié)合集團(tuán)包括膽固醇片段和脂片段。其它的結(jié)合集團(tuán)包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、葉酸、菲唆、蒽醌、吖唆、熒光素、羅丹明、香豆 素和染料。反義化合物也可以被修飾以具有一或多個(gè)穩(wěn)定基團(tuán)，它們通常結(jié)合于反義化合物 的一端或兩端以增強(qiáng)例如核酸酶穩(wěn)定性等性質(zhì)。穩(wěn)定基團(tuán)包括帽子結(jié)構(gòu)。這些末端修飾 能保護(hù)具有末端核酸的反義化合物以防止核酸外切酶降解，并能幫助細(xì)胞內(nèi)遞送和/或定 位。所述帽子可以出現(xiàn)在5’ -末端(5’ -帽)或3’ -末端(3’ -帽)，或者出現(xiàn)于兩個(gè)末 端。帽子結(jié)構(gòu)是本領(lǐng)域公知的，包括例如反向脫氧無(wú)堿基帽子。進(jìn)一步可用做反義化合物 的一端或兩端的帽子的3’和5’ -穩(wěn)定基團(tuán)能夠給予核酸酶穩(wěn)定性，包括如公開(kāi)于2003年 1月16日的W003/004602所公開(kāi)的內(nèi)容。細(xì)胞培養(yǎng)和反義化合物處理反義化合物對(duì)因子7核酸的水平、活性或表達(dá)的效果可以用多種細(xì)胞類(lèi)型在體 外檢測(cè)。用于這些分析的細(xì)胞類(lèi)型可以來(lái)自商業(yè)廠家(例如American Type Culture Collection, Manassus, VA ；Zen—Bio, Inc. , Research Triangle Park, NC ；Clonetics Corporation, ffalkersville, MD)，細(xì)胞根據(jù)廠家的說(shuō)明書(shū)使用商業(yè)上可獲得的試劑(例如 Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)來(lái)培養(yǎng)。示例性的細(xì)胞類(lèi)型包括 IfepG2 細(xì) 胞、H印B3細(xì)胞和原代肝細(xì)胞。反義寡核苷酸的體內(nèi)測(cè)試本文描述了用反義寡核苷酸處理細(xì)胞的方法，可以合理的修飾以用其它反義化合 物進(jìn)行處理?？傮w來(lái)說(shuō)，當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)基中達(dá)到約60-80%融合的時(shí)候用反義寡核苷酸處理。通常用于介導(dǎo)反義寡核苷酸進(jìn)入培養(yǎng)的細(xì)胞的一種試劑包括陽(yáng)離子脂 轉(zhuǎn)染試劑 LIPOFECTIN (Invitrogen，Carlsbad, CA)。反義寡核苷酸與 LIPOFECTIN 在 OPTI- MEM ianvitr0gen，CarlSl3ad，CA)中混合以達(dá)到所希 望的反義寡核苷酸終濃度和LIPOFECTIN 濃度，代表性的在2-12ug/mL每IOOnM反 義寡核苷酸的范圍。用于介導(dǎo)反義寡核苷酸進(jìn)入培養(yǎng)的細(xì)胞的其它試劑包括 LIPOFECTAMINE (Invitrogen，Carlsbad, CA)。反義寡核苷酸與 LIPOFECTAMINE 在 ΟΡΤΙ- MEM ι 減少的血清培養(yǎng)基(Invitrogen， Carlsbad,CA)中混合以達(dá)到所希望的反義寡核苷酸終濃度和UPOFECTAMINE 濃度，代表性的在2-12ug/mL每IOOnM反義寡核苷酸的范圍。用于介導(dǎo)反義寡核苷酸進(jìn)入培養(yǎng)的細(xì)胞的另一種技術(shù)包括電穿孔。以通用方法用反義寡核苷酸處理細(xì)胞。細(xì)胞代表性地在反義寡核苷酸處理16- 小時(shí)之后收獲，這時(shí)候靶核酸的RNA或蛋白水平通過(guò)本領(lǐng)域公知的和本文描述的方法測(cè) 量。通常來(lái)說(shuō)，當(dāng)進(jìn)行多次重復(fù)處理時(shí)，數(shù)據(jù)用重復(fù)處理的平均值來(lái)表示。反義寡核苷酸的濃度對(duì)不同的細(xì)胞系有所不同。確定對(duì)特定細(xì)胞系的最佳反義 寡核苷酸濃度的方法是本領(lǐng)域熟知的。當(dāng)用LIPOFECTIN 轉(zhuǎn)染的時(shí)候，反義寡 核苷酸典型地使用從InM到300nM的濃度范圍。用電穿孔轉(zhuǎn)染的時(shí)候反義寡核苷酸使用 625-20, OOOnM范圍的更高濃度。RNA 分離
RNA分析可以通過(guò)總細(xì)胞RNA或poly (A) +mRNA來(lái)進(jìn)行。RNA分離的方法是本領(lǐng)域 熟知的。RNA通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法來(lái)制備，例如，使用TRIZOL 試劑(Invitrogen， Carlsbad, CA)，根據(jù)生產(chǎn)商推薦的步驟。靶水平或表達(dá)的抑制的分析因子7核酸的水平或表達(dá)的抑制可以以本領(lǐng)域所熟知的多種途徑來(lái)分析。例 如，靶向核酸水平可以可以通過(guò)例如Northern雜交分析、競(jìng)爭(zhēng)性反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (RT-PCR)或定量實(shí)時(shí)RT-PCR來(lái)定量測(cè)量。RNA分析可以通過(guò)總細(xì)胞RNA或poly (A) +mRNA進(jìn) 行。RNA分離的方法是本領(lǐng)域熟知的。Northern雜交分析也是本領(lǐng)域通用的。實(shí)時(shí)RT-PCR 可以用商業(yè)上允許的ABI PRISM 7600，7700，或7900序列探測(cè)系統(tǒng)來(lái)方便地完成，所 述序列探測(cè)系統(tǒng)可以來(lái)自PE-Applied Biosystems,Foster City，CA，并根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明 書(shū)來(lái)使用。靶向RNA水平的定量實(shí)時(shí)RT-PCR分析靶向RNA水平的定量可以通過(guò)定量實(shí)時(shí)RT-PCR來(lái)進(jìn)行，使用ABI PRISM 7600，7700，或 7900 序列探測(cè)系統(tǒng)(PE-AppliedBiosystems, Foster City, CA)根據(jù)生產(chǎn)商 的說(shuō)明書(shū)來(lái)進(jìn)行。實(shí)時(shí)RT-PCR的方法是本領(lǐng)域所熟知的。在實(shí)時(shí)PCR之前，分離的RNA用于反轉(zhuǎn)錄酶(RT)反應(yīng)，產(chǎn)生互補(bǔ)DNA (cDNA)，之后 其被用作實(shí)時(shí)PCR放大的底物。所述RT和實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)在同一個(gè)樣品孔內(nèi)順序進(jìn)行。RT 和實(shí)時(shí)PCR試劑從hvitroger^Carlskid，CA)獲得，實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟 知的方法來(lái)完成。由實(shí)施RT-PCR獲得的基因(或RNA)靶的量用表達(dá)量是常數(shù)的基因例如親環(huán)素 A(cyclophilin Α)的表達(dá)水平來(lái)標(biāo)準(zhǔn)化，或通過(guò)使用RIBOGREEN (Invitrogen， Inc. Carlsbad, CA)定量化總RNA。親環(huán)素A的表達(dá)用實(shí)時(shí)RT-PCR來(lái)定量，與目標(biāo)混合 起來(lái)或分開(kāi)同時(shí)進(jìn)行。總RNA用RIBOGREEN RNA定量化試劑(Invitrogen， Inc. Eugene, OR)。用 RIBOGREEN 定量化 RNA 的方法由 Jones，L. J.等人教導(dǎo) (Analytical Biochemistry, 1998，265, 368-374)。 CYTOFLUOR 4000 設(shè)備(ΡΕ Applied Biosystems)用于測(cè)量 RIBOGREEN 熒光。設(shè)計(jì)了與因子7核酸雜交的探針和引物。設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)RT-PCR探針和引物的方法 是本領(lǐng)域熟知的，并且可以包括使用軟件例如I3RIMER EXPRESS Software (Applied Biosystems, Foster City, CA)。蛋白質(zhì)水平分析因子7核酸的反義抑制可以通過(guò)測(cè)量因子7蛋白水平來(lái)評(píng)估。因子7的蛋白水平 可以用本領(lǐng)域熟知的多種途徑來(lái)評(píng)價(jià)和定量，例如免疫沉淀反應(yīng)、Western雜交分析(免疫 雜交)、酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)、定量蛋白質(zhì)分析、蛋白質(zhì)活性分析(例如，半胱氨酸蛋 白酶活性分析)、免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)或熒光激活細(xì)胞分類(lèi)(FACS)。定向于目標(biāo)的 抗體可以通過(guò)多種途徑來(lái)獲得，例如抗體的MSRS目錄(Aerie Corporation, Birmingham, MI)，或者可以通過(guò)本領(lǐng)域所熟知的常規(guī)的單克隆或多克隆抗體制備方法來(lái)制備。用于探測(cè) 人或小鼠的因子7的抗體也是商業(yè)上可獲得的。反義化合物的體內(nèi)測(cè)試反義化合物，例如，反義寡核苷酸，用于動(dòng)物內(nèi)測(cè)試以評(píng)估其抑制因子7表達(dá)和產(chǎn)生表現(xiàn)型改變的能力，例如，延長(zhǎng)的PT，延長(zhǎng)的aPTT時(shí)間，血小板因子4 (PF-4)數(shù)量的減少， 血栓形成的減少或血栓形成時(shí)間的增加，以及細(xì)胞增殖的減少。測(cè)試可以在常規(guī)動(dòng)物或?qū)?驗(yàn)性疾病模型動(dòng)物內(nèi)進(jìn)行。為了給藥于動(dòng)物，反義寡核苷酸以藥學(xué)上可接受的稀釋劑例如 磷酸鹽緩沖液配制。給藥包括腸胃外給藥途徑，例如腹腔、靜脈內(nèi)和皮下。反義寡核苷酸的 劑量和劑量頻率的計(jì)算在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)，并依賴于例如給藥途徑和動(dòng)物體重 等因素。反義寡核苷酸處理一段時(shí)間之后，從肝臟組織分離RNA，測(cè)量因子7核酸表達(dá)的改 變。因子7蛋白水平的改變也用血栓生成分析來(lái)測(cè)量。另外，凝結(jié)時(shí)間的效果，例如PT和 aPTT，用所處理的動(dòng)物的血漿來(lái)測(cè)定。一些指標(biāo)在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明提供了包括給藥以一種或多種本發(fā)明的藥物組合物以 治療個(gè)體的方法。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè)體患有血栓并發(fā)癥。在某些實(shí)施方式里，所述 個(gè)體處于血液凝集癥狀的風(fēng)險(xiǎn)之中，包括，但不限于，梗死形成、血栓癥、栓塞、血栓栓塞，例 如深靜脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞和中風(fēng)。也包括患有導(dǎo)致血栓風(fēng)險(xiǎn)的獲得性問(wèn)題、疾病或 病癥的個(gè)體，例如，外科手術(shù)、癌癥、不移動(dòng)、敗血癥、動(dòng)脈硬化癥、心室纖維性顫動(dòng)，以及遺 傳性因素，例如，抗磷脂綜合癥和常染色體顯性遺傳，因子V Leiden。在某些實(shí)施方式里，所 述個(gè)體被鑒定為需要抗血凝治療。這樣的個(gè)體的實(shí)例包括，但不限于，正在進(jìn)行重要的整形 外科手術(shù)(例如，臀部/膝蓋替換或臀部骨折治療)的患者和需要慢性治療的患者例如正 在遭受心室纖維性顫動(dòng)以阻止中風(fēng)的患者。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明提供了在個(gè)體內(nèi)預(yù) 防性地減少因子7表達(dá)的方法。某些實(shí)施方式包括對(duì)有需要的個(gè)體通過(guò)給藥以治療有效量 的靶向因子7核酸的反義化合物來(lái)治療。在某些實(shí)施方式里，包含靶向因子7的反義化合物的藥物組合物被用于制備治療 正遭受或易患血栓并發(fā)癥的患者的藥物。在某些實(shí)施方式里，因子7與組織因子的結(jié)合以形成組織因子-因子7a復(fù)合物可 以導(dǎo)致發(fā)炎癥狀，例如肝纖維化、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè)體患有導(dǎo)致纖維化并發(fā)癥的發(fā)炎癥狀。在某些實(shí)施 方式里，所述個(gè)體處于過(guò)分的膠原沉積和纖維化病癥的風(fēng)險(xiǎn)中，包括，但不限于，肝纖維 化、動(dòng)脈硬化、慢性腎小球性腎炎、皮膚瘢痕疙瘩形成、進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥(PSQ、肝纖維 化、肺栓塞、囊性纖維化、慢性移植性抗宿主病、硬皮病(局部的或系統(tǒng)性的)、派羅尼病 (Peyronie' s disease)、陰莖纖維化、膀胱內(nèi)部檢驗(yàn)鏡之后的尿道狹窄、治療后的內(nèi)增長(zhǎng)、 骨髓纖維化、先天性腹膜后纖維化。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè)體被鑒定需要抗纖維化治 療。這包括具有導(dǎo)致纖維化風(fēng)險(xiǎn)的遺傳的或獲得性問(wèn)題、疾病或病癥的個(gè)體，例如，α -抗 胰蛋白酶缺乏癥、銅累計(jì)病(威爾遜病，Welson’ s disease)、果糖血癥、半乳糖血癥、糖原 貯積癥(例如，II、IV、VI、IX和X型)、鐵過(guò)量綜合癥(例如，血色素沉著病)、脂質(zhì)異常癥 (例如，高雪氏病Gaucher’ s disease)、過(guò)氧化物病癥(例如，Zellweger綜合癥)、酪氨酸 血癥、先天性肝纖維化、細(xì)菌感染(例如，布氏菌病)、寄生蟲(chóng)感染(例如，包蟲(chóng)病)、病毒感 染(例如，慢性肝炎B、C)、影響肝臟血液流動(dòng)的病癥(例如，布-加氏綜合癥Budd Chiari綜 合癥、心力衰竭、肝小靜脈閉塞癥和門(mén)靜脈血栓)、乙醇和藥物(例如乙胺碘呋酮、氯丙嗪、 異煙胼、甲氨蝶呤、甲基多巴、酚丁和甲苯磺丁脲)。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè)體被確定需 要抗纖維化治療。在這些實(shí)施方式里，確定了組織因子-因子7a (TF/F7a)復(fù)合物在纖維化
25中具有主要的促血凝活性。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明提供了在個(gè)體內(nèi)預(yù)防性地減少因子 7表達(dá)的方法。某些實(shí)施方式包括對(duì)需要的個(gè)體給藥以治療有效量的靶向因子7核酸的反 義化合物以治療。在某些實(shí)施方式里，含有靶向因子7的反義化合物的藥物組合物用于制備治療正 遭受或易感纖維化并發(fā)癥的患者的藥物。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè)體患有發(fā)炎性的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎并發(fā)癥。在某些實(shí)施方 式里，所述個(gè)體處于關(guān)節(jié)部位發(fā)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的風(fēng)險(xiǎn)中。在這些實(shí)施方式里，所述個(gè)體 遭受疼痛、關(guān)節(jié)腫脹和壓痛、疲勞、食欲不振、低度發(fā)燒、肌肉疼痛和僵硬。在某些實(shí)施方式 里，所述個(gè)體被確定需要抗炎癥治療。這包括遭受風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、Reiter綜 合癥、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊椎炎和伴隨腸炎疾病的關(guān)節(jié)炎。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè) 體被確定需要抗炎癥治療。在這些實(shí)施方式里，確定了所述組織因子-因子7a(TF/F7a)復(fù) 合物在誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎時(shí)具有主要的促凝血活性。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明提供了在個(gè)體內(nèi) 預(yù)防性地減少因子7表達(dá)的方法。某些實(shí)施方式包括對(duì)需要的個(gè)體給藥以治療有效量的靶 向因子7核酸的反義化合物以治療。在某些實(shí)施方式里，含有靶向因子7的反義化合物的藥物組合物用于制備治療正 遭受或易感炎癥并發(fā)癥的患者的藥物。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè)體患有惡性并發(fā)癥。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè)體處于 腫瘤生長(zhǎng)、血管生成和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)中。在這些實(shí)施方式里，遭受止血異常，例如擴(kuò)散性血管 內(nèi)血凝固和靜脈血栓的個(gè)體，可能遭受其它并發(fā)癥，例如原始的和轉(zhuǎn)移的腫瘤生長(zhǎng)。在這些 實(shí)施方式里，腫瘤轉(zhuǎn)移的定位是血凝依賴性過(guò)程。在這些實(shí)施方式里，確定了所述組織因 子-因子7a(TF/F7a)復(fù)合物在癌癥中具有主要的促凝血活性。在某些實(shí)施方式里，所述個(gè) 體被確定需要抗TF/F7a治療。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明提供了在個(gè)體內(nèi)預(yù)防性地減少因 子7表達(dá)的方法。某些實(shí)施方式包括對(duì)需要的個(gè)體給藥以治療有效量的靶向因子7核酸的 反義化合物以治療。在某些實(shí)施方式里，含有靶向因子7的反義化合物的藥物組合物用于制備治療正 遭受或易感惡性并發(fā)癥的患者的藥物。在某些實(shí)施方式里，對(duì)個(gè)體給藥以治療有效量的靶向因子7核酸的反義化合物伴 隨著監(jiān)控其血清內(nèi)因子7的水平，以確定個(gè)體對(duì)給藥反義化合物的反應(yīng)。個(gè)體對(duì)給藥反義 化合物的反應(yīng)由醫(yī)師用于確定治療性干涉的用量和持續(xù)時(shí)間。在某些實(shí)施方式里，給藥以靶向因子7核酸的反義化合物導(dǎo)致了因子7表達(dá)減少 至少 15，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95 或 99%，或由這些值的任 意兩個(gè)所確定的范圍。在某些實(shí)施方式里，給藥以靶向因子7核酸的反義化合物導(dǎo)致了血 液凝集的測(cè)量的改變，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量，例如，但不限于，活性部分血凝固時(shí)間(aPTT)測(cè) 試和凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè)試，凝血酶時(shí)間(TCT)，出血時(shí)間，或D-二聚物。在某些實(shí)施方 式里，給藥以因子7反義化合物增加了所述測(cè)量以至少15，20，25，30，35，40，45，50，55，60， 65，70，75，80，85，90，95或99 %，或由這些值的任意兩個(gè)所確定的范圍。在某些實(shí)施方式 里，給藥以因子7反義化合物降低了所述測(cè)量的至少15，20，25，30，35，40，45，50，55，60， 65，70，75，80，85，90，95或99%，或由這些值的任意兩個(gè)所確定的范圍。在某些實(shí)施方式里，包含靶向因子7的反義化合物的藥物組合物用于制備治療遭受或易感血凝固并發(fā)癥的患者的藥物。特定聯(lián)合治療在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明的一種或多種藥物組合物與一種或多種其它藥物試劑 聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式里，這些一種或多種其它藥物試劑是用于治療與本發(fā)明的一種 或多種藥物組合物相同的疾病、病癥或癥狀。在某些實(shí)施方式里，這些一種或多種其它藥物 試劑是用于治療與本發(fā)明的一種或多種藥物組合物不同的疾病、病癥或癥狀。在某些實(shí)施 方式里，這些一種或多種其它藥物試劑是用于治療由本發(fā)明的一種或多種藥物組合物引起 的不希望的副所用。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明的一種或多種藥物組合物與另一種藥物試 劑聯(lián)合給藥以治療其它藥物試劑引起的不希望的效果。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明的一種 或多種藥物組合物與另一種藥物試劑聯(lián)合給藥以產(chǎn)生聯(lián)合效果。在某些實(shí)施方式里，本發(fā) 明的一種或多種藥物組合物與另一種藥物試劑聯(lián)合給藥以產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明的一種或多種藥物組合物和一種或多種其它藥物試劑 同時(shí)給藥。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明的一種或多種藥物組合物和一種或多種其它藥物試 劑在不同時(shí)間給藥。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明的一種或多種藥物組合物和一種或多種其 它藥物試劑配制在同一個(gè)配方里。在某些實(shí)施方式里，本發(fā)明的一種或多種藥物組合物和 一種或多種其它藥物試劑分開(kāi)配制。在某些實(shí)施方式里，可以與本發(fā)明的藥物組合物聯(lián)合給藥的藥物試劑包括抗凝血 劑或抗血小板試劑。在某些實(shí)施方式里，可以與本發(fā)明的藥物組合物聯(lián)合給藥的藥物試劑 包括，但不限于阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達(dá)莫、噻氯匹定、殺鼠靈(和相關(guān)的香豆素)、肝 素、直接的凝血酶抑制劑(例如來(lái)匹盧定、比伐盧定)、阿哌沙班、依諾肝素以及直接干擾特 定凝血因子的酶活性的小分子化合物(例如利伐沙班，其干擾因子敘)。在某些實(shí)施方式 里，所述抗凝血酶或抗血小板試劑在給藥本發(fā)明的藥物組合物之前給藥。在某些實(shí)施方式 里，所述抗凝血酶或抗血小板試劑在給藥本發(fā)明的藥物組合物之后給藥。在某些實(shí)施方式 里，所述抗凝血酶或抗血小板試劑與本發(fā)明的藥物組合物同時(shí)給藥。在某些實(shí)施方式里，聯(lián) 合給藥的抗凝血?jiǎng)┗蚩寡“逶噭┑膭┝颗c所述抗凝血?jiǎng)┗蚩寡“逶噭﹩为?dú)給藥時(shí)的 劑量相同。在某些實(shí)施方式里，聯(lián)合給藥的抗凝血?jiǎng)┗蚩寡“逶噭┑膭┝康陀谒隹鼓?血?jiǎng)┗蚩寡“逶噭﹩为?dú)給藥時(shí)的劑量。在某些實(shí)施方式里，聯(lián)合給藥的抗凝血?jiǎng)┗蚩寡?小板試劑的劑量高于所述抗凝血?jiǎng)┗蚩寡“逶噭﹩为?dú)給藥時(shí)的劑量。在某些實(shí)施方式里，第二化合物的聯(lián)合給藥增強(qiáng)了第一化合物的抗凝血?jiǎng)┬Ч?從而所述化合物的聯(lián)合給藥導(dǎo)致抗凝血效果比單獨(dú)給藥第一化合物時(shí)的效果更好。在其它 實(shí)施方式里，所述聯(lián)合給藥導(dǎo)致了單獨(dú)給藥所述化合物的效果的附加抗凝血效果。在某些 實(shí)施方式里，所述聯(lián)合給藥導(dǎo)致了單獨(dú)給藥所述化合物的效果的上述附加抗凝血效果。在 某些實(shí)施方式里，所述第一化合物是反義化合物。在某些實(shí)施方式里，所述第二化合物是反 義化合物。在某些實(shí)施方式里，解毒劑在因子7特異性抑制劑給藥任意時(shí)間之后給藥。在某 些實(shí)施方式里，解毒劑在靶向因子7的反義化合物給藥任意時(shí)間之后給藥。在某些實(shí)施方 式里，解毒劑在靶向因子7的反義化合物給藥幾分鐘、幾小時(shí)、幾天、幾星期或幾個(gè)月之后 給藥。在某些實(shí)施方式里，所述解毒劑是與靶向因子7的反義化合物互補(bǔ)的(例如正義鏈)。 在某些實(shí)施方式里，所述解毒劑是因子7或因子7a蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方式里，所述因子7或因子7a蛋白質(zhì)是人因子7或人因子7a蛋白質(zhì)。 實(shí)施例非限制性聲明及參考引用當(dāng)本文所述的某些化合物、組合物和方法依照某些實(shí)施方式特別地描述的時(shí)候， 下列的實(shí)施例僅用于舉例說(shuō)明本文所述的化合物而并不有意對(duì)其進(jìn)行限制。在本申請(qǐng)中 引用的每個(gè)參考文獻(xiàn)都在本文中以整體引用作為參考。實(shí)施例1 :!fepB3細(xì)胞內(nèi)人因子7mRNA的反義抑制測(cè)試了靶向于因子7核酸的反義寡核苷酸在體外對(duì)因子7mRNA的影響。培養(yǎng)好的 密度為每孔4，000細(xì)胞的HepB3細(xì)胞用含50nM的反義寡核苷酸的脂質(zhì)體試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在 處理大約M小時(shí)后，從細(xì)胞分離RNA，用實(shí)時(shí)RT-PCR測(cè)量因子7mRNA的水平，如本文所述。 因子7mRNA的水平根據(jù)由RIBOGREEN 測(cè)量的總RNA含量進(jìn)行調(diào)整。結(jié)果以相對(duì) 于未處理的對(duì)照細(xì)胞的因子7的抑制百分比的形式表示。表1中的嵌合反義寡核苷酸設(shè)計(jì)為5-10-5M0E gapmer。所述gapmer為20核苷酸 長(zhǎng)度，其中中間的間隙片段由10個(gè)2’ -脫氧核苷酸組成并在兩側(cè)(在5’和3’方向)與 分別由5個(gè)核苷酸組成的側(cè)翼片段相連。5’側(cè)翼片段的每個(gè)核苷酸和3’側(cè)翼片段的每個(gè) 核苷酸都具有2’ -MOE修飾。貫穿每個(gè)gapmer的核苷間連接都是硫代磷酸酯(P = S)連 接。貫穿每個(gè)gapmer的所有胞嘧啶核苷殘基都是5-甲基胞嘧啶核苷。表1中所列的每 個(gè) gapmer 都靴向于人基因序列 SEQ ID NO 1 (GENBANK Accession No. ΝΤ_027140· 6 的第 1255000-1273000 位核苷酸)、SEQ ID NO 2 (GENBANK Accession No. NM_019616. 2)或 SEQ ID NO 3 (GENBANK Accession No. DB184141. 1)?！叭税衅鹗嘉稽c(diǎn)”表示所指定的人基因序 列中所述gapmer靶向的最5’端位置?！叭税薪K止位點(diǎn)”表示所指定的人基因序列中所述 gapmer靶向的最3’端位置。表 1通過(guò)具有5-10-5M0E側(cè)翼片段和脫氧間隙片段、靶向于SEQ ID NO :1，SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3的嵌合反義寡核苷酸來(lái)抑制 人因子^iRNA水平
寡核苷酸ID靶序列ID號(hào)靶起始位點(diǎn)靶終止位點(diǎn)序列(5'至3')% 抑制序列ID號(hào)40309011401714036AGTCCTGGGTCATCAGCCGG69440309311423114250GAGACCCTGGTGTACACCCC755407594112081227CCTGCAGCCAGGCAGCCCTG876407595121692188TCCTGAGGCCTTAGCGACCC717407596122062225GAGGCCCCGGCTTCCACGGC618407597111141133TGTTGACATTCCCCATGGGA399407598111471166CCATGATGAAATCTCTGCAG7210407599111561175CCTGGGAGACCATGATGAAA7311407600111901209TGAAGCCCAAGCAGAAGGCA6112407601111961215CAGCCCTGAAGCCCAAGCAG5213407602112071226CTGCAGCCAGGCAGCCCTGA8114407603190739092TAAGAAATCCAGAACAGCTT5415407605191699188TTGAGGCACACTGGTCCCCA5816407606192049223CTGGTCCTTGCAGGAGCCCC8917407607192099228TGGAGCTGGTCCTTGCAGGA7618407608192179236TATAGGACTGGAGCTGGTCC1319407609192269245AGAAGCAGATATAGGACTGG3520407610192349253AGGGAGGCAGAAGCAGATAT3121407611192599278TCTCACAGTTCCGGCCCTCG822權(quán)利要求
1.包含由12-30個(gè)連接的堿基組成的修飾的寡核苷酸并具有堿基序列的化合物，其 中，所述堿基序列包含至少12個(gè)連續(xù)堿基部分互補(bǔ)于SEQ ID NO 1的15U8-15233位核苷 酸的同等數(shù)目的堿基，其中所述修飾的寡核苷酸至少80%互補(bǔ)于SEQ ID NO :1。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其由修飾的單鏈寡核苷酸組成。
3.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸具有SEQID N0:53的堿基 序列。
4.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸的堿基序列至少80%互補(bǔ) 于 SEQ ID NO =USEQ ID N0:2、SEQ ID NO :3、或 SEQ ID NO :167 中任意一個(gè)的堿基序列。
5.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸的堿基序列至少90%互補(bǔ) 于 SEQ ID NO =USEQ ID N0:2、SEQ ID NO :3、或 SEQ ID NO :167 中任意一個(gè)的堿基序列。
6.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸的堿基序列100%互補(bǔ)于 SEQ ID NO =USEQ ID N0:2、SEQ ID NO :3、或 SEQ ID NO :167 中任意一個(gè)的堿基序列。
7.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中，至少一個(gè)核苷間連接是修飾的核苷間連接。
8.如權(quán)利要求7所述的化合物，其中，每個(gè)核苷間連接都是硫代磷酸酯核苷間連接。
9.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中，至少一個(gè)核苷含有修飾的糖。
10.如權(quán)利要求9所述的化合物，其中，至少一個(gè)修飾的糖是二環(huán)糖。
11.如權(quán)利要求9所述的化合物，其中，至少一個(gè)修飾的糖含有2’-0-甲氧乙基。
12.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中，至少一個(gè)核苷包含修飾的堿基。
13.如權(quán)利要求12所述的化合物，其中，所述修飾的堿基是5-甲基胞嘧啶。
14.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸包含由連接的脫氧核苷組成的間隙片段；由連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；由連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中，所述間隙片段與所述5’側(cè)翼片段和所述3’側(cè)翼片段直接相連，并位于所述5’ 側(cè)翼片段和所述3’側(cè)翼片段之間；并且每個(gè)側(cè)翼片段的每個(gè)核苷包含修飾的糖。
15.如權(quán)利要求14所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸包含由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙片段；由5個(gè)連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；由5個(gè)連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中，所述間隙片段與所述5’側(cè)翼片段和所述3’側(cè)翼片段直接相連，并位于所述5’ 側(cè)翼片段和所述3’側(cè)翼片段之間；每個(gè)側(cè)翼片段的每個(gè)核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；并且 每個(gè)核苷間連接是硫代磷酸酯連接。
16.如權(quán)利要求14所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸包含由14個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙片段；由3個(gè)連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；由3個(gè)連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中，所述間隙片段與所述5’側(cè)翼片段和所述3’側(cè)翼片段直接相連，并位于所述5’ 側(cè)翼片段和所述3’側(cè)翼片段之間；每個(gè)側(cè)翼片段的每個(gè)核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；并且 每個(gè)核苷間連接是硫代磷酸酯連接。
17.如權(quán)利要求14所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸包含由13個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙片段；由2個(gè)連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；由5個(gè)連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中，所述間隙片段位于所述5’側(cè)翼片段和所述3’側(cè)翼片段之間；每個(gè)側(cè)翼片段的每 個(gè)核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；并且每個(gè)核苷間連接是硫代磷酸酯連接。
18.如權(quán)利要求13所述的化合物，其中，所述修飾的寡核苷酸包含由12個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙片段；由2個(gè)連接的核苷組成的5’側(cè)翼片段；由2個(gè)連接的核苷組成的3’側(cè)翼片段；其中，所述間隙片段位于所述5’側(cè)翼片段和所述3’側(cè)翼片段之間；每個(gè)側(cè)翼片段的每 個(gè)核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；并且每個(gè)核苷間連接是硫代磷酸酯連接。
19.組合物，包含修飾的寡核苷酸或其鹽以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，其中，所 述修飾的寡核苷酸由12-30個(gè)連接核苷組成，所述12-30個(gè)連接核苷包含堿基序列，該堿基 序列包含SEQ ID NO 53的堿基序列的至少12個(gè)連續(xù)堿基。
20.如權(quán)利要求19所述的組合物，其中，所述修飾的寡核苷酸由單鏈的修飾的寡核苷 酸組成。
21.如權(quán)利要求19所述的組合物，其中，所述修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。
22.—種方法，包含以修飾的寡核苷酸給藥于動(dòng)物，所述的修飾的寡核苷酸由12-30個(gè) 連續(xù)核苷組成，該12-30個(gè)連續(xù)核苷包含堿基序列，該堿基序列包含SEQ ID NO 53的堿基 序列的至少12個(gè)連續(xù)堿基。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述動(dòng)物是人。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中，給藥預(yù)防深靜脈血栓。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中，給藥預(yù)防肺栓塞。
26.如權(quán)利要求23所述的方法，其中，給藥治療過(guò)度增生病癥。
27.如權(quán)利要求23所述的方法，其中，給藥治療發(fā)炎癥狀。
28.如權(quán)利要求23所述的方法，包含聯(lián)合給藥以所述化合物和選自下列的任意化合 物阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達(dá)莫、肝素、來(lái)匹盧定、噻氯匹定、殺鼠靈、阿哌沙班、利伐沙 班、和依諾肝素。
29.如權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述化合物和選自下列的任意化合物阿司匹 林、氯吡格雷、雙嘧達(dá)莫、肝素、來(lái)匹盧定、噻氯匹定、殺鼠靈、阿哌沙班、利伐沙班、和依諾肝 素是伴隨給藥的。
30.如權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述給藥是腸胃外給藥。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中，所述腸胃外給藥是皮下或靜脈內(nèi)給藥的任意一種。
32.—種方法，包含鑒定動(dòng)物發(fā)生血栓并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)；以及以治療有效量的化合物給藥于具有所述風(fēng)險(xiǎn)的動(dòng)物，所述化合物包含由12-30個(gè)連接 核苷組成的修飾的寡核苷酸，其中，所述修飾的寡核苷酸與因子9核酸互補(bǔ)。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中，所述血栓并發(fā)癥是深靜脈血栓、肺栓塞、或其結(jié)合。
全文摘要
本文公開(kāi)了用于對(duì)有需要的個(gè)體減少因子7和治療或預(yù)防血栓并發(fā)癥、過(guò)度增生病癥或發(fā)炎癥狀的反義化合物和方法?？梢酝ㄟ^(guò)給藥以靶向因子7的反義化合物來(lái)改善的疾病癥狀包括血栓癥、栓塞和血栓栓塞，例如，深靜脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞、中風(fēng)、癌癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和纖維化。
文檔編號(hào)C12N15/113GK102076852SQ200880124444
公開(kāi)日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2008年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月9日
發(fā)明者布雷特·P·莫尼亞, 張宏, 杰弗里·R·克羅斯比, 蘇珊·M·弗賴爾, 趙晨光 申請(qǐng)人:Isis藥物公司