專利名稱：一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用真菌誘導(dǎo)子生 產(chǎn)高產(chǎn)量靈芝酸的液體發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
靈芝(GafW06fe^wa 為擔(dān)子菌綱、多孑L菌科、靈芝菌屬
真菌?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明靈芝具有抗腫瘤、抗衰老、防止動(dòng)脈硬化 等作用，而且對心腦血管疾病具有較高的藥理活性。靈芝中的多糖、 三萜類物質(zhì)(主要為靈芝酸)、生物堿、氨基酸多肽、微量元素等成 分是靈芝的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。其中靈芝酸是靈芝治療高血壓、高血脂、 失眠和多種呼吸系統(tǒng)疾病(如去痰、止咳、平喘)以及抗腫瘤等的物 質(zhì)基礎(chǔ)。在靈芝藥用價(jià)值被廣泛揭示的同時(shí)，靈芝的產(chǎn)量成為抑制靈 芝應(yīng)用的限制因素，因?yàn)樵谧匀唤缰幸吧`芝十分稀少，且其中靈芝 酸含量僅為1毫克/100毫克干重，遠(yuǎn)不能滿足人們的需要。同靈芝人 工栽培相比，發(fā)酵法生產(chǎn)靈芝有效成分由于生產(chǎn)周期短、勞動(dòng)力省以 及受外部環(huán)境影響小等優(yōu)點(diǎn)被認(rèn)為是一種有效的方法。
近年來，利用特定的真菌菌株的提取物作為誘導(dǎo)子來提高植物 細(xì)胞中某些次生代謝產(chǎn)物的積累量，在植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)中已獲得了 巨大成功。但是，將真菌誘導(dǎo)子用于食藥用真菌細(xì)胞培養(yǎng)的報(bào)道很少， 目前僅見關(guān)于用真菌誘導(dǎo)子提高蟲草菌素液體發(fā)酵生產(chǎn)的報(bào)道，而用 于靈芝發(fā)酵培養(yǎng)以提高靈芝酸產(chǎn)量等次生代謝產(chǎn)物的研究尚未見報(bào) 道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術(shù)的不足而提供一種工藝簡 單、成本低、效果顯著，靈芝酸含量高的利用真菌誘導(dǎo)子生產(chǎn)高產(chǎn)量 靈芝酸的液體發(fā)酵方法，本方法可用于靈芝酸的工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的可以通過如下措施來達(dá)到 一種利用真菌誘導(dǎo)子提 高靈芝酸含量的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于包括如下步(1)真菌誘導(dǎo)子的制備-
① 真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面 培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，25 3(TC培養(yǎng)3 5天， 取菌塊接種于裝有PDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于25 30°C、 100 180r/min搖床中培養(yǎng)5~7天后，過濾得到菌絲體備用；
② 真菌誘導(dǎo)子制備將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于60 7(TC下烘干，研 磨破碎，按重量體積比l: 2~1: 5的比例加入濃度為65 85%乙醇， 在室溫下浸泡10~15小時(shí)，減壓抽濾，收集濾渣，濾渣按重量體積
比l: 2~1: 5的比例加入氯仿和正丁醇的混合液，氯仿與正丁醇的體 積比為3: 1~5: 1，洗濾渣3 5次，然后濾渣按重量體積比l: 3~1: 5的比例用丙酮沖洗后，濾渣按重量體積比l: 3 1: 5的比例再用水 沖洗，自然風(fēng)干，干物質(zhì)按重量體積比l: 5~1: 7的比例加入濃度為
5~15%三氟乙酸，沸水浴酸解0.5 2小時(shí)，水解物過濾，取濾液，用 NaOH中和至pH為4~7，在3匸 8'C下靜置10 15小時(shí)，過濾除 菌，制成真菌誘導(dǎo)子，冷凍保存； (2)靈芝的液體發(fā)酵培養(yǎng)
將斜面保藏的靈芝菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進(jìn)行活化培 養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25 30'C，培養(yǎng)時(shí)間5 10天，然后取菌塊接種于裝有 液體發(fā)酵培養(yǎng)基的中三角瓶進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速100-180 r/min， 溫度25 30'C，時(shí)間5~8天；
液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖20 50g/L、酵母膏2 8g/L、蛋白 胨2~8 g/L、磷酸二氫鉀0.5~2.0g/L、硫酸鎂0.1 1.0 g/L、維生素B！ 0.01~0.10g/L，余量為蒸餾水；
(3)靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng):
在靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)第1~5天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子 濃度達(dá)到40~120pg/mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)2 7天，得到靈芝菌絲體。
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的真菌誘導(dǎo)子菌種為枝頂孢 屬真菌頂頭孢(爿cre附o"/wms^7'"wm)，菌種編號CGMCC No.3.2058; 或木霉屬真菌木素木霉(7Hc/2o&rma vzW&)，菌種編號為CGMCC No. 3.2196;或輪枝'菌屬真菌蘑燕輪枝孢(FeW/c/〃/"w/ ^//zbtoe)，菌種編 號為CGMCC No. 3.4423。
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的發(fā)酵用靈芝菌種為普通栽
培品種(Ga"oAmfl/Mc/由/w)，購自中國普通微生物菌種保藏中心， 編號為CGMCC No. 5.644。
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)步 驟中取直徑0.3~0.6cm的菌塊3~5塊，接種于PDA液體培養(yǎng)基中， 每500mL三角瓶裝PDA液體培養(yǎng)基100~200mL。
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的靈芝的液體發(fā)酵培養(yǎng)步驟 中取直徑0.3~0.6cm的菌塊3 5塊，接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，每 500mL三角瓶裝PDA液體培養(yǎng)基100~200mL。
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng) 步驟中真菌誘導(dǎo)子加入濃度為80pg/mL。
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng) 步驟中真菌誘導(dǎo)子于靈芝發(fā)酵培養(yǎng)的第1天加入，然后與靈芝共同培 養(yǎng)。
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng) 步驟中真菌誘導(dǎo)子于靈芝發(fā)酵培養(yǎng)的第3天加入，然后與靈芝共同培養(yǎng)。
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng) 步驟中真菌誘導(dǎo)子于靈芝發(fā)酵培養(yǎng)的第5天加入，然后與靈芝共同培 養(yǎng)。
本發(fā)明同已有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果本發(fā)明將真菌誘導(dǎo) 子用于靈芝酸的液體發(fā)酵生產(chǎn)，大幅度提高靈芝酸的含量(由 0.8mg/100mg菌絲提高到3.2mg/100mg菌絲)，該新方法操作工藝簡 單，成本低廉，具有很好的工業(yè)化應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式下面對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明
實(shí)施例h
菌種真菌誘導(dǎo)子菌種為枝頂孢屬真菌頂頭孢(JCM附om'WW
^n'"wm)，由中國普通微生物菌種保藏中心購買，菌種編號為CGMCC No. 3.2058。
靈芝菌種為普通栽培品種((7"w^fe^a/wc/^附)，購自中國普通 微生物菌種保藏中心，編號為CGMCC No. 5.644。
一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方 法，其特征在于包括如下步驟-
(1)真菌誘導(dǎo)子的制備
① 真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面 培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，25。C培養(yǎng)5天，用打 孔器在菌落邊緣打取直徑0.3cm的菌塊3塊，接種于PDA液體培養(yǎng) 基中，每500mL三角瓶裝PDA液體培養(yǎng)基lOOmL，于25°C 、 lOOr/min 搖床中培養(yǎng)7天后，過濾得到菌絲體備用；
② 真菌誘導(dǎo)子制備將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于60 。C下烘干，研磨 破碎，按重量體積比l: 2的比例加入濃度為65%乙醇，在室溫下浸 泡10小時(shí)，減壓抽濾，收集濾渣，濾渣按重量體積比l: 2的比例加 入氯仿和正丁醇的混合液，氯仿與正丁醇的體積比為3: 1,洗濾渣 3~5次，然后濾渣按重量體積比1: 3的比例用丙酮沖洗后，濾渣按
重量體積比l: 3的比例再用水沖洗，自然風(fēng)干，干物質(zhì)按重量體積
比1: 5的比例加入濃度為5 %三氟乙酸，沸水浴酸解0.5小時(shí)，水解 物過濾，取濾液，用NaOH中和至pH為5.8，在3'C下靜置10小 時(shí)，過濾除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，冷凍保存； (2)靈芝的液體發(fā)酵培養(yǎng)
將斜面保藏的靈芝菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進(jìn)行活化培 養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25"C，培養(yǎng)時(shí)間10天，然后用打孔器在菌落邊緣打取 直徑0.3cm的菌塊3塊，接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，每 500mL三角瓶裝培養(yǎng)基100mL，，搖床轉(zhuǎn)速100 r/min，溫度25°C, 時(shí)間8天；
液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖20 g/L、酵母膏2 g/L、蛋白胨2g/L、 磷酸二氫鉀0.5g/L、硫酸鎂0.1g/L、維生素B,0.01g/L，余量為蒸餾 水；
(3) 靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng)-在靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)第1天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子終
濃度達(dá)到40pg/mL,然后繼續(xù)培養(yǎng)7天，得到靈芝菌絲體。
(4) 靈芝酸的提取和檢測
將靈芝菌絲體烘干，取0.5g樣品(干重)研成粉末，加30mL 甲醇超聲提取2小時(shí)，過濾，上清蒸干，加甲醇定容至2mL，紫外 比色法測定靈芝酸含量為3.2mg/100mg菌絲(干重)。
實(shí)施例2: 菌種真菌誘導(dǎo)子菌種為木霉屬真菌木素木霉(7Hc/wcfew2a
vzW&)，由中國普通微生物菌種保藏中心購買，菌種編號為CGMCC No. 3.2196。
靈芝菌種為普通栽培品種(Ga"0&w7a/wcWwm)，購自中國普通 微生物菌種保藏中心，編號為CGMCC No. 5.644。
一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方 法，其特征在于包括如下步驟
(1)真菌誘導(dǎo)子的制備
① 真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面
培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，30'C培養(yǎng)3天，用打 孔器在菌落邊緣打取直徑0.6cm的菌塊5塊，接種于PDA液體培養(yǎng) 基中，每500rnL三角瓶裝PDA液體培養(yǎng)基200mL，于30°C 、 180r/min 搖床中培養(yǎng)5天后，過濾得到菌絲體備用；
② 真菌誘導(dǎo)子制備將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于70 。C下烘干，研磨
破碎，按重量體積比h 5的比例加入濃度為85%乙醇，在室溫下浸 泡15小時(shí)，減壓抽濾，收集濾渣，濾渣按重量體積比1: 5的比例 加入氯仿和正丁醇的混合液，氯仿與正丁醇的體積比為5: 1，洗濾 渣5次，然后濾渣按重量體積比l: 5的比例用丙酮沖洗后，濾渣按 重量體積比l: 5的比例再用水沖洗，自然風(fēng)干，干物質(zhì)按重量體積 比h 7的比例加入濃度為15%三氟乙酸，沸水浴酸解2小時(shí)，水解 物過濾，取濾液，用NaOH中和至pH為4，在8"C下靜置15小時(shí)， 過濾除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，冷凍保存； (2)靈芝的液體發(fā)酵培養(yǎng)
將斜面保藏的靈芝菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進(jìn)行活化培 養(yǎng)，培養(yǎng)溫度3(TC，培養(yǎng)時(shí)間5天，然后用打孔器在菌落邊緣打取 直徑0.6cm的菌塊5塊，接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，每 500mL三角瓶裝培養(yǎng)基200mL，，搖床轉(zhuǎn)速180 r/min，溫度30°C，
時(shí)間5天；
液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成:葡萄糖50 g/L、酵母膏8 g/L、蛋白胨8 g/L、 磷酸二氫鉀2.0g/L、硫酸鎂1.0g/L、維生素B^.10g/L，余量為蒸餾 水；
(3)靈芝與真菌誘導(dǎo).子共培養(yǎng)
在靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)第5天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子終 濃度達(dá)到120pg/mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)2天，得到靈芝菌絲體。 (4)靈芝酸的提取和檢測
將靈芝菌絲體烘干，取lg樣品(干重)研成粉末，加50mL甲 醇超聲提取5小時(shí)，過濾，上清蒸干，加甲醇定容至5mL，紫外比 色法測定靈芝酸含量為2.5mg/100mg菌絲(干重)。
實(shí)施例3:
菌種真菌誘導(dǎo)子菌種為輪枝菌屬真菌蘑菇輪枝孢(KW"7/^m 戸"〃/otoe)，由中國普通微生物菌種保藏中心購買，菌種編號為
CGMCC No. 3.4423。
靈芝菌種為普通栽培品種(Gawo6ferwfl /wc^ww)，購自中國普通 微生物菌種保藏中心，編號為CGMCCNo. 5.644。
一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方 法，其特征在于包括如下步驟
(1)真菌誘導(dǎo)子的制備
① 真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面 培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，28。C培養(yǎng)4天，用打 孔器在菌落邊緣打取直徑0.4cm的菌塊4塊，接種于PDA液體培養(yǎng) 基中，每500mL三角瓶裝PDA液體培養(yǎng)基150mL，于28°C、 150r/min 搖床中培養(yǎng)6天后，過濾得到菌絲體備用；
② 真菌誘導(dǎo)子制備將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于65 。C下烘干，研磨 破碎，按重量體積比l: 3的比例加入濃度為75%乙醇，在室溫下浸 泡12小時(shí)，減壓抽濾，收集濾渣，濾渣按重量體積比l: 4的比例加 入氯仿和正丁醇的混合液，氯仿與正丁醇的體積比為4: 1，洗濾渣 4次，然后濾渣按重量體積比1: 4的比例用丙酮沖洗后，濾渣按重 量體積比l: 4的比例再用水沖洗，自然風(fēng)干，干物質(zhì)按重量體積比 1: 6的比例加入濃度為10 %三氟乙酸，沸水浴酸解1.5小時(shí)，水解
物過濾，取濾液，用NaOH中和至pH為7，在5'C下靜置12小時(shí)， 過濾除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，冷凍保存； (2)靈芝的液體發(fā)酵培養(yǎng)-
將斜面保藏的靈芝菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進(jìn)行活化培 養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28"C，培養(yǎng)時(shí)間8天，然后用打孔器在菌落邊緣打取
直徑0.4cm的菌塊4塊，接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，每 500mL三角瓶裝培養(yǎng)基150mL，，搖床轉(zhuǎn)速150 r/min，溫度28。C， 時(shí)間7天；
液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成:葡萄糖35 g/L、酵母膏5 g/L、蛋白胨5 g/L、 磷酸二氫鉀lg/L、硫酸鎂0.5 g/L、維生素B, 0.05 g/L，余量為蒸餾水;
(3) 靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng)-在靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)第3天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子終
濃度達(dá)到8(Hig/mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)5天，得到靈芝菌絲體。
(4) 靈芝酸的提取和檢測
將靈芝菌絲體烘干，取0.8g樣品(干重)研成粉末，加40mL 甲醇超聲提取3小時(shí)，過濾，上清蒸干，加甲醇定容至4mL，紫外比 色法測定靈芝酸含量為2.3mg/100mg菌絲(干重)。
本發(fā)明真菌誘導(dǎo)子菌種還可采用其他同類菌種，靈芝菌種也可采 用其他普通栽培品種。
權(quán)利要求
1、一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于包括如下步驟(1)真菌誘導(dǎo)子的制備①真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，25～30℃培養(yǎng)3～5天，取菌塊接種于裝有PDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于25～30℃、100～180r/min搖床中培養(yǎng)5～7天后，過濾得到菌絲體備用；②真菌誘導(dǎo)子制備將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于60～70℃下烘干，研磨破碎，按重量體積比1∶2～1∶5的比例加入濃度為65～85％乙醇，在室溫下浸泡10～15小時(shí)，減壓抽濾，收集濾渣，濾渣按重量體積比1∶2～1∶5的比例加入氯仿和正丁醇的混合液，氯仿與正丁醇的體積比為3∶1～5∶1，洗濾渣3～5次，然后濾渣按重量體積比1∶3～1∶5的比例用丙酮沖洗后，濾渣按重量體積比1∶3～1∶5的比例再用水沖洗，自然風(fēng)干，干物質(zhì)按重量體積比1∶5～1∶7的比例加入濃度為5～15％三氟乙酸，沸水浴酸解0.5～2小時(shí)，水解物過濾，取濾液，用NaOH中和至pH為4～7，在3℃～8℃下靜置10～15小時(shí)，過濾除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，冷凍保存；(2)靈芝的液體發(fā)酵培養(yǎng)將斜面保藏的靈芝菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進(jìn)行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25～30℃，培養(yǎng)時(shí)間5～10天，然后取菌塊接種于裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的中三角瓶進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速100～180r/min，溫度25～30℃，時(shí)間5～8天；液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖20～50g/L、酵母膏2～8g/L、蛋白胨2～8g/L、磷酸二氫鉀0.5～2.0g/L、硫酸鎂0.1～1.0g/L、維生素B10.01～0.10g/L，余量為蒸餾水；(3)靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng)在靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)第1～5天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子濃度達(dá)到40～120μg/mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)2～7天，得到靈芝菌絲體。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量 的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于所述的真菌誘導(dǎo)子菌種為枝 頂孢屬真菌頂頭孢(Are附om'wm s/n'c^/w)，菌種編號CGMCC No.3.2058;或木霉屬真菌木素木霉(7h'c/2ocferw" v/nVfe)，菌種編號 為CGMCC No. 3.2196;或輪枝菌屬真菌蘑燕輪枝孢(Kr//c////ww 戸a〃/otoe)，菌種編號為CGMCC No. 3.4423 。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量 的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于所述的發(fā)酵用靈芝菌種為普 通栽培品種(G^^fem7"/wc/^m)，購自中國普通微生物菌種保藏中 心，編號為CGMCC No. 5.644。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量 的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于所述的真菌誘導(dǎo)子菌株的培 養(yǎng)步驟中取直徑0.3~0.6cm的菌塊3~5塊，接種于PDA液體培養(yǎng)基 中，每500mL三角瓶裝PDA液體培養(yǎng)基100~200mL。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量 的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于所述的靈芝的液體發(fā)酵培養(yǎng) 步驟中取直徑0.3 0.6cm的菌塊3~5塊，接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中， 每500mL三角瓶裝PDA液體培養(yǎng)基100~200mL。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量 的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于所述的靈芝與真菌誘導(dǎo)子共 培養(yǎng)步驟中真菌誘導(dǎo)子加入濃度為8(Vg/mL。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量 的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于所述的靈芝與真菌誘導(dǎo)子共 培養(yǎng)步驟中真菌誘導(dǎo)子于靈芝發(fā)酵培養(yǎng)的第1天加入，然后與靈芝共 同培養(yǎng)。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量 的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于所述的靈芝與真菌誘導(dǎo)子共 培養(yǎng)步驟中真菌誘導(dǎo)子于靈芝發(fā)酵培養(yǎng)的第3天加入，然后與靈芝共 同培養(yǎng)。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量 的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于所述的靈芝與真菌誘導(dǎo)子共 培養(yǎng)步驟中真菌誘導(dǎo)子于靈芝發(fā)酵培養(yǎng)的第5天加入，然后與靈芝共 同培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種利用真菌誘導(dǎo)子提高靈芝酸含量的靈芝菌絲體液體發(fā)酵方法，其包括真菌誘導(dǎo)子的制備，靈芝的液體發(fā)酵培養(yǎng)，靈芝與真菌誘導(dǎo)子共培養(yǎng)步驟，本方法工藝簡單、成本低、效果顯著，靈芝酸含量高，是一種極具工業(yè)化前景的生產(chǎn)方法。
文檔編號C12R1/645GK101353676SQ20081013857
公開日2009年1月28日 申請日期2008年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月21日
發(fā)明者劉林德, 張秋勝, 楊潤亞, 玥 王, 凱 韓, 高興喜 申請人:魯東大學(xué)