專利名稱：實時熒光定量PCR檢測Vero細胞DNA殘留的試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及定性與定量檢測Vero細胞DNA (即非洲綠猴基因組DNA)的試劑盒，特別是涉 及以實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)技術快速、準確、定量檢測疫苗樣品中vero細胞殘留DNA 含量的試劑盒。
背景技術：
Vero細胞是一種非洲綠猴腎細胞系的傳代細胞，具有許多優(yōu)點與原代細胞相比，它不 含有任何外源污染因子；它可從一個凍存安瓶的細胞通過培養(yǎng)擴增至相當大的量，具有良好 的均一性；第三，原代細胞的獲得必須靠手工操作，不適合工業(yè)化生產。其次，與人二倍體 細胞相比，Vero細胞使用代次較高，培養(yǎng)更易，有利于大規(guī)模培養(yǎng)，所以，Vero細胞被認為 是一種理想的疫苗生產基質，WHO推薦發(fā)展中國家用Vero細胞生產疫苗滿足防疫需要。然而， 用傳代細胞株生產疫苗的一個重要問題是其安全性，表現(xiàn)為具潛在致瘤性的殘留細胞DNA
(Report of a WHO Study Group. WHO Technical R印ort Series. 1987， 747: 7-25; Griffiths J B. Continuous cell lines as substrates for biological [J]. Bulletin d， information newsletter (International Association of Biological Standardization) 1988， 73: 4-11)， 因此冊O對精制疫苗中殘留DNA有嚴格的限制，如WHO規(guī)定精制vero細胞狂犬病疫苗中殘余vero 細胞DNA含量不超過100pg/劑量(相當于100pg/ml)。殘余vero細胞DNA含量是基于vero細胞生 產的精制疫苗的主要質量控制指標之一，必須進行嚴格檢定并純化，使含量不能高于規(guī)定標 準。
由于DNA殘留含量的規(guī)定非常低，需采用較敏感的核酸雜交技術。而目前用于檢測疫苗殘 留DNA的方法主要是分子雜交法，如利用隨機引物方法，用地高辛(Dig)、酶、生物素或放 射性同位素標記Vero細胞DNA，并制備成DNA探針，以此探針與待測樣品總DNA以及已知濃度的 參比樣品DNA在硝酸纖維膜上進行點雜交，最后通過顯色信號強度來判斷樣品中DNA含量。使 用該方法，雖然靈敏度可以達到要求，但是操作周期長， 一般需要2—3個工作日；其次，采 用隨機引物標記DNA探針的方法，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較差；而且，通過雜交顯色的強度來判定DNA 含量的標準不客觀。目前，也有研究報道對傳統(tǒng)的隨機引物標記探針的方法進行了改進，即 直接用地高辛標記一段特異性的核酸片段制備成探針，但是還是存在周期長，判定DNA含量的標準不客觀等因素，因此，迫切需要研究一種快速、準確、敏感和易于操作的檢測試劑盒。 實吋熒光PCR技術是近年來發(fā)展迅速的一種核酸檢測技術，使用一種帶有核電偶聯(lián)裝置 (CCD)的PC時廣增儀，通過檢測熒光信號的動態(tài)變化實時反映PCR的每個循環(huán)的擴增水平。CCD 能夠按照一定的程序周期性地發(fā)出特定波長的激發(fā)光，收集檢測熒光信號，并通過軟件分析 匯總到工作站得到擴增曲線。TaqMan PCR技術是實時熒光PCR的一種(Mackay IM et a7. Real-time PCR in virology. Nucleic Acids Res. 2002 5;30(6):1292-1305; Lie, Y. S.， Petropoulos, C. J. ， Advances in quantitative PCR technology: 5， nuclease assays. Current Opinion in Biotechnology 1998. 9, 43 - 48.)。與傳統(tǒng)的PCR相對比，其在反應體 系中增加了一條兩端分別標記熒光報告基團和淬滅基團的探針。探針結構完整時，熒光報告 基團發(fā)出熒光的能量轉移給淬滅基團，呈現(xiàn)淬滅效應。如果擴增過程中有靶序列的存在，擴 增的過程中探針分子逐漸被水解切斷，熒光報告基團與淬滅基團相互解離，阻斷了二者間熒 光共振能量轉移效應，熒光報告基團發(fā)出熒光信號。隨著擴增的進行，熒光信號隨著目的片 段的擴增而呈現(xiàn)線性增強。
與分子雜交方法相比，TaqMan PCR技術應用于定量檢測中具有如下優(yōu)點通過對擴增曲 線以及對數(shù)增長期的循環(huán)閾值(Ct)的分析，摒棄分子雜交法受多種因素干擾的終點分析方 法，能夠對待測樣品進行準確定量分析，從而有效監(jiān)測疫苗純化的效果；將DNA擴增與檢測 過程融合為一體，可以實時、動態(tài)監(jiān)測DNA擴增的全過程，省掉了分子雜交后處理過程，大 大縮短了結果分析時間，使得該方法更加快捷、方便；由于采取一種封閉的檢測模式，從而 減少了氣溶膠污染和由此造成的假陽性；由于在普通PCR基礎上增加了一條可與模板互補配 對的熒光探針，有效結合了 PCR和探針雜交的雙重特異性，進一步提高了檢測目標耙多核苷 酸的特異性。因此，該技術在靶多核苷酸樣品的檢測和定量分析中，已逐漸取代傳統(tǒng)的分子 雜交方法，在病原體的定量或定性檢測中得到十分廣泛的應用。
美國食品與藥品管理局(FDA)已經批準了一些定量檢測病原體的PCR診斷試劑盒，如用 于HIV、結核分枝桿菌、沙眼衣原體等的實時熒光PCR檢測的試劑盒。同樣，中國目前也已批 準了乙型肝炎、丙型肝炎、HIV和SARS等的實時熒光PCR檢測試劑盒的生產和臨床應用。雖然 已經有用實時熒光PCR技術(染料法)檢測CHO細胞殘留DNA的報道(Nissom PM. Specific detection of residual CH0 host cell ■ by real-time PCR. Biologicals. 2007, 35(3) :211-5.)，但在疫苗殘留DNA的檢測中，目前還沒有可供快速檢測用的熒光PCR檢測試劑 盒。因此，現(xiàn)在需要開發(fā)一種能夠快速檢測疫苗中殘留DNA含量的試劑盒，滿足疫苗生產與質 檢等工作的需要。
眾所周知，在使用已知的實時熒光定量PCR技術檢測和定量分析疫苗樣品中某特定靶核酸的實踐中，為了減少和避免檢測結果的假陰性或假陽性，提高定量分析的準確性， 一個關鍵 性的基本技術環(huán)節(jié)是如何基于已知的耙多核苷酸序列設計并制備適當?shù)囊锖凸押塑账崽?針。本發(fā)明人將實時熒光定量PCR技術開發(fā)了相應的試劑盒應用于非洲綠猴的所有巳知變異體 之基因組多核苷酸的檢測和定量分析，成功地完成了本發(fā)明。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種使用實時熒光PCR技術來定性與定量檢測vero細胞DNA的試劑 盒，特別是本試劑盒可用于檢測疫苗樣品中vero細胞殘留DNA，從而對疫苗生產過程中進行質
本試劑盒的基本原理是利用一對靶多核苷酸的特異性引物和一條靶多聚核苷酸的特異性 探針，在含有耐熱DNA聚合酶、高質量的脫氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)以及Mg"的PCR反應緩 沖液中，通過熒光PCR擴增儀實現(xiàn)靶多核苷酸的循環(huán)擴增，從而達到快速、定量檢測靶多核苷 酸的目的。
本發(fā)明所提供的檢測疫苗樣品中vero細胞殘留DNA的試劑盒包括(1)分別裝有DNA提取 液、PCR擴增反應液、陰性質控品、陽性質控品和定量參考品并加蓋密封的多個試劑瓶或管， 和(2)分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒。其特征在于PCR擴增反應液中用于耙多核 苷酸擴增的正向引物vero-F和反向引物vero-R的序列分別是5， - TTC TTT CCA GTT TTG AAC GGA AGA TAT TTC CTT -3， (SEQ ID NO: 1)和5' - TGT TCT TGT GGA ATT GGC AAA CGG ATA TT -3' (SEQ ID NO: 2)，其中正向引物vero-F可向5'和3'端方向各延伸5個堿基，反向引 物vero-R可向5'和3'端方向各延伸5個堿基。
根據本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，PCR擴增反應液中用于靶多核苷酸擴增和監(jiān)測體系的 寡核苷酸探針vero-P的序列是5， — CAT AGC CCT CTA TGG GCT TCC AAA TAT CCG TT -3， (SEQ ID NO: 3)，其中該寡核苷酸探針序列可向5'和3'端方向各延伸5個堿基。
根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，其中DNA提取液由chelex — 100、 NaOH、 EDTA組成。
根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，其中PCR擴增反應液由(a)耐熱DNA聚合酶、(b)脫 氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)、 (c)含鎂離子的緩沖液、(d)能夠與雙鏈靶多核苷酸的第一條 鏈結合的正向引物，(e)能夠與雙鏈靶多核苷酸的第二條鏈結合的反向引物，和(f)能夠與 靶多核苷酸結合并且兩末端分別結合有熒光發(fā)生基團和熒光淬滅基團的寡核苷酸探針組成。
根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，其中用于PCR擴增反應液中的最佳引物濃度為O. 30 0. 34 u mol/L、探針濃度為O. 20 0. 25 u mol/L;
根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，其中用于PCR擴增反應液中的最佳鎂離子濃度為1.9 2.2鵬ol/L、耐熱DNA聚合酶最佳用量為2U 4U/反應、脫氧核糖核苷三磷酸最佳濃度為 0. 18 0. 22mmol/L。
根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，其中用于PCR擴增的最佳反應溫度和時間為93'C預 變性2 3min;然后93。C 45s, 55°C lmin， IO個循環(huán)；最后93。C 30s， 55°C 45s， 30個循環(huán)。
根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，其中陽性質控品為vero細胞DNA，包括1.0xl0、g DNA/ml的強陽性質控品和1.0xl()ipgDNA/ml的臨界陽性質控品。
根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，其中定量參考品為vero細胞DNA，包括4個濃度梯度 1.0xl04pg DNA/ml、 1.0xl03pg DNA/ml、 1.0xl02pgDNA/ml、 1.0xl(VpgDNA/ml。
本發(fā)明提供的實時熒光定量PCR檢測試劑盒可以檢測出vero細胞DNA的最低濃度為 1.0xlOQpg DNA/ml，說明本試劑盒具有非常好的靈敏度。
本發(fā)明針對vero細胞基因組DNA的基因保守區(qū)設計特異引物和探針，可檢測出vero細胞基 因組DNA，但不能檢測出非vero細胞基因組DNA,說明本試劑盒具有很好的特異性。
本發(fā)明提供的實時熒光定量PCR檢測試劑盒可以檢測疫苗半成品、成品等樣品中vero細 胞殘留DNA的試劑盒；可為疫苗半成品、成品等生產環(huán)節(jié)提供等提供可靠的質控證據，為疫 苗安全生產與使用提供重要保障。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述試劑盒在疫苗檢測中的使用方法，具體見實施例2。


圖l顯示4個陽性參考品的檢測結果圖，4個陽性參考品的Ct值為18 29，擴增曲線有明 顯指數(shù)增長期，成S型，可明確判定為陽性
圖2顯示陰性參考品的檢測結果圖，7個陰性參考品的擴增曲線平直或斜向下且與基線無 交叉，沒有Ct值，可明確判定為陰性。7個陰性參考品包括中國倉鼠卵巢細胞CH0、冊K293細 胞、人基因組DNA、狂犬病毒cDNA、肺炎支原體、肺炎衣原體、金黃色葡萄球菌。
圖3顯示線性與靈敏度標準品擴增結果的標準曲線。針對模板數(shù)為l. OX 105 1. 0X l(Tpg /mL的反應體系進行TaqMan PCR分析。當Vero細胞基因組DNA為l. OX 10°pg /mL時，檢測樣品 的Ct值在34左右，為明顯陽性，即檢測下限靈敏度可達到1.0X10"pg /mL。繪制得到的標準 曲線斜率為一3.77，在Y軸截距為21.94，相關系數(shù)(R2) =0.996。
圖4顯示同一份陽性標本10次重復性實驗的檢測曲線，可看出不同的擴增曲線均在同一 Ct值范圍，變異系數(shù)CV〈6W，說明試劑盒的重復性好。
圖5顯示10個疫苗半成品和成品樣本的擴增曲線。其中2個樣本無Ct值，可明確判定為陰
性；另外8個樣本的Ct值分別是23. 71， 27.10， 28.59， 29.22， 29.99， 31.37， 32.24， 33.33;
結合擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，均能夠判定為陽性。
具體實施例方式
下列實施例旨在舉例說明而不是限制本發(fā)明。 實施例l: vero細胞DNA檢測試劑的研制
1、 引物和探針的設計通過對Genbank數(shù)據庫己有的非洲綠猴全部核酸序列以及國內外 已發(fā)表文獻中報導的核酸序列進行序列比對分析，以與vero細胞有關的主要基因為擴增靶位 點，選擇無二級結構且高度保守的區(qū)段，根據引物探針設計的基本原則，利用軟件和人工設 計多對引物和探針。
2、 樣本的選擇根據疫苗生產各環(huán)節(jié)的需求，可以選擇疫苗半成品、成品等需要對Vero 細胞殘留DNA質控的樣本。
3、 疫苗樣品DNA提取試劑的選擇與優(yōu)化
分別采用TAKARA抽提試劑盒、項目組自主研發(fā)的DNA提取液提取疫苗樣品DNA，以及直接 取疫苗樣品液作為DNA模板，用此三種方法分別獲得巴斯德狂犬疫苗產品、遼寧成大公司狂犬 疫苗產品、廣州諾誠公司狂犬疫苗產品以及廣州諾誠公司狂犬疫苗半成品的DNA模板后，同時 做FQ-PCR分析，通過多次重復實驗，結果表明項目組自主研發(fā)的DNA提取液所提取的DNA損 失小，得率高，結果穩(wěn)定。通過進一步優(yōu)化chelex — 100、 NaOH、 EDTA等組分可以用于疫苗樣 品DMA的提取。
4、 反應體系的建立與優(yōu)化
樣品的準備以猴腎細胞系VERO E6 (IgRCD4)作為陽性參考品；以中國倉鼠卵巢細胞 CHO、 HEK293細胞、人外周血單核細胞、狂犬病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、金黃色葡萄 球菌作為陰性參考品。按照實施例2中的方法提取上述陽性參考品與陰性參考品的DNA待用。
引物探針的篩選以上述l中設計的多組引物探針分別檢測上述的陽性參考品與陰性參考 品的基因組DNA，經反復試驗，篩選出特異性、靈敏度和重復性好的最佳引物探針組合(如序 列表中SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3)。
引物探針濃度的優(yōu)化在反應體系中其他組分不變的情況下，分別使用從O. 15umol/L 至O. 5 u mol/L濃度梯度的引物和從0. 075 y mol/L至0. 5 ii mol/L濃度梯度的探針進行PCR反應， 經多次重復試驗，最終確定最佳的引物濃度為0.30 0.34umol/L、探針濃度為0.20 0. 25umol/L。
鎂離子濃度的優(yōu)化在反應體系中其他組分不變的情況下，分別使用從lmniol/L至 2.5mmol/L濃度梯度的鎂離子進行PCR反應，經多次重復試驗，最終確定最佳的鎂離子濃度為 1.9 2. 2mraol/L。酶用量的優(yōu)化在40UL反應體系中其他組分不變的情況下，分別使用從1U (酶單位)至 8U濃度梯度的酶用量/反應進行PCR反應，經多次重復試驗，最終確定最佳的酶用量為2U 4U/ 反應。
dNTPs濃度的優(yōu)化在反應體系中其他組分不變的情況下，分別使用從O. lmmol/L至 0.25mmol/L濃度梯度的dNTPs進行PCR反應，經多次重復試驗，最終確定最佳的dNTPs濃度為
0. 18 0. 22mmol/L。
反應溫度的優(yōu)化根據酶的活性和靶多核苷酸的長度，主要對退火溫度和延伸時間進行 了優(yōu)化，經多次重復試驗，最終確定最佳的反應溫度和時間為93。C預變性2 3min;然后93 。C 45s， 53。C lmin， 10個循環(huán)；最后93。C 30s， 53 °C 45s， 30個循環(huán)。
5、 靈敏度實驗提取陽性參考品vero細胞的DNA，經紫外分光光度計測定0D260與0D280 數(shù)值，計算出原液濃度為7.4Xl()7pg/mL，稀釋成濃度為1.0X106pg/mL，然后10倍梯度稀釋成
1. 0X105pg/mL 、 1. 0X104pg/mL 、 1. OX 103pg/mL 、 1. OX 102pg/mL 、 1. 0X 10'pg/mL 、 1.0X10°pg/mL、 1.0X10—'pg/mL作為陽性靈敏度參考品，檢測結果表明，本試劑盒的檢測下 限靈敏度為1.0X10。pg/mL。
6、 疫苗樣本檢測；以疫苗半成品、成品作為待檢標本，分別用DNA提取液煮沸法提取標 本的基因組DNA后，經上述優(yōu)化建立的核酸擴增體系檢測，結果表明本試劑盒可以很靈敏的檢 測出疫苗樣品中的Ver o細胞殘留DNA 。
實施例2: vero細胞殘留DNA檢測試劑盒及其使用
1、 制備包括下列組成成分的試劑盒DNA提取液(500w 1 /管)2管、PCR擴增反應液(40u 1 /管)20管、陰性質控品(100u 1/管)l管、陽性質控品(50u 1/管)l管、定量參考品(50 p 1 /管)4管。
2、 標本采集、運送和保存
(1) 標本采集包括各種用Vero細胞作為培養(yǎng)基質生產的疫苗半成品、成品等，按照國 家生物制品檢定所取樣要求進行操作，密閉送檢。
(2) 標本保存和運送標本可立即用于測試，也可保存于-2(TC待測，保存期為6個月。 標本運送時應保存在0°C 8°C。
3、檢測步驟 (1)樣品處理與DNA提取
疫苗凍干粉末先用生理鹽水或成品包裝盒自帶的溶解液進行適當稀釋溶解成疫苗液體
8樣品，混勻備用；
疫苗液體樣品直接混勻后備用。
取疫苗液體樣品50 u 1，加入50 u 1 DNA提取液充分混勻，IO(TC恒溫處理10± 1分鐘， 12,000 rpm離心5分鐘，備用。 (2) PCR反應與結果分析
分別取陰性質控品、標本、陽性質控品、定量參考品品各5ii1，加入PCR反應管中進行PCR 擴增。PCR循環(huán)條件是93。C預變性3 min;然后93。C 45s， 53°C lrain， IO個循環(huán)；最后93 。C 30s， 53 。C 45s， 30個循環(huán)。
反應結束后保存檢測數(shù)據文件。根據PCR擴增結果所得到的曲線圖調節(jié)分析參數(shù)，使標準 曲線(Std curve )窗口下的標準曲線達到最佳(即相關性數(shù)值絕對值〉0. 97)(參見附圖3 所示)。由附圖l可以看出，陽性樣品的熒光曲線與設定的閾值線有一交點，由交點所在位置 得出Ct值分別為18.26， 22.60， 26.04， 28.85;在附圖2中，由于陰性標本的熒光曲線低于閾 值，故沒有Ct值。最后由儀器自動分析裝置計算出未知標本的測定數(shù)值(Qty) ， S卩4個樣品 中Vero細胞殘留DNA的濃度分別為4.87x104、 2.46場3、 2. 31x102、 3. 35xlO'pg腿/ml。。
實施例3:應用Vero細胞DNA檢測試劑盒定量檢測疫苗樣品
疫苗樣品來自巴斯德狂犬疫苗產品(凍干粉末)、遼寧成大公司狂犬疫苗產品(凍干粉末)、 廣州諾誠公司狂犬疫苗產品(凍干粉末)以及廣州諾誠公司狂犬疫苗半成品(液體樣品)，樣 品處理與DNA提取、PCR反應與結果分析參照實施例2進行。
PCR反應結束后，根據擴增曲線先調節(jié)分析參數(shù)，使標準曲線(Std curve )窗口下的標 準曲線達到最佳(即相關性數(shù)值絕對值〉0.97)，然后分析疫苗樣品。IO個疫苗樣品的檢測結 果如附圖5所示其中2個樣本無Ct值，可明確判定為陰性；另外8個樣本的Ct值分別是23.71， 27.10， 28.59， 29.22， 29.99， 31.37， 32.24， 33.33，結合擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，均 能夠判定為陽性。參照同一次試驗中線性定量參考品的標準曲線圖(如附圖3所示)可以判定 8個陽性疫苗標本中Vero細胞殘留DNA的濃度分別為:2 . 53X103 、 2 . 42X 102 、 8. 62X10'、 5.60 X10'、 3.28X101、 1.27X101、 6.92X10°、 3,27X10°pgDNA/ml。序列表
<110>中山大學達安基因股份有限公司
<120>實時熒光定量PCR檢測vero細胞殘留DNA的試劑盒
〈140>
<141>
〈歸3
<210> 1 <211> 33 <212〉 DNA <213>人工序列 〈220〉
<223>根據特定核苷酸序列設計，以用作PC財廣增的引物。 <400〉 1 ttctttccagttttgaacggaagatatttcctt
<210> 2 〈211> 29 〈212〉薩 <213>人工序列 〈220>
<223>根據特定核苷酸序列設計，以用作PCR擴增的引物。 <400> 2
tgttcttgtggaattggcaaacggfitatt
<210〉 3 <211> 32 <212〉腿 <213〉人丁序列 <220>〈223〉根據特定核苷酸序列設計，以用作PCR擴增的探針。 <400> 3
catagccctctatgggcttccaaatatccgtt
權利要求
1、一種檢測疫苗樣品中vero細胞殘留DNA含量的試劑盒，該試劑盒包括(1)分別裝有DNA提取液、PCR擴增反應液、陰性質控品、陽性質控品和定量參考品并加蓋密封的多個試劑瓶或管，和(2)分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒，其中PCR擴增反應液由耐熱DNA聚合酶、脫氧核糖核苷三磷酸、含鎂離子的緩沖液、正向引物、反向引物、寡核苷酸探針組成，其特征在于用于靶多核苷酸擴增的正向引物和反向引物的序列分別為5’-TTC TTT CCAGTT TTG AAC GGA AGA TAT TTC CTT-3’和5’-TGT TCT TGT GGA ATT GGC AAA CGG ATA TT-3’，其中正向引物可向5’和3’端方向各延伸5個堿基，反向引物可向5’和3’端方向各延伸5個堿基。
2、 根據權利要求l的試劑盒，其特征還在于PCR擴增反應液中所使用的寡核苷酸探針的序 列為5， — CAT AGC CCT CTA TGG GCT TCC AAA TAT CCG TT -3，，該寡核苷酸探針序列可向5' 和3'端方向各延伸5個堿基。
3、 根據權利要求l的試劑盒，其特征還在于PCR擴增反應液中正向引物濃度為0.30 0. 34 u mol/L，反向引物濃度為O. 30 0. 34 u mol/L，寡核苷酸探針濃度為O. 20 0. 25 u mol/L。
4、 根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于PCR擴增反應液中耐熱DNA聚合酶的濃度為2U 4U/反應。
5、 根據權利要求l的試劑盒，其特征還在于PCR擴增反應液中脫氧核糖核苷三磷酸的濃度 為0. 18 0. 22畫1/L。
6、 根據權利要求l的試劑盒，其特征還在于PCR擴增反應液中鎂離子濃度為1.9 2. 2畫1/L。
7、 根據權利要求l的試劑盒，其特征還在于待檢樣品可選自基于vero細胞基質培育制 備的所有類型的疫苗半成品、疫苗成品。
8、 根據權利要求l的試劑盒，其特征還在于待檢樣品中殘留DNA來自但不僅限于vero細胞、非洲綠猴。
全文摘要
本發(fā)明涉及檢測疫苗半成品、疫苗成品等樣品中宿主DNA殘留量的試劑盒，特別是涉及以實時熒光定量聚合酶鏈反應技術快速、定量檢測疫苗半成品、疫苗成品樣品中vero細胞殘留DNA的試劑盒。
文檔編號C12Q1/68GK101565741SQ200810027668
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月25日 優(yōu)先權日2008年4月25日
發(fā)明者何蘊韶, 徐偉杰, 明 李, 鋼 程, 胡守旺, 鄧中平 申請人:中山大學達安基因股份有限公司