專利名稱：：抗mn抗體和使用它們的方法抗MN抗體和^f吏用它們的方法引用參考本申請要求2005年12月12日提交的美國臨時專利申請No.60/749,716的權(quán)利。前述申請，以及其中引用的所有文獻(xiàn)和其中引用或參考的所有文獻(xiàn)，以及本文引用或參考的所有文獻(xiàn)("本文引用的文獻(xiàn)")，以及在本文引用的文獻(xiàn)中所引用或參考的所有文獻(xiàn)，連同用于本文提到的或本文參考引入的任何文獻(xiàn)中提到的任何產(chǎn)品的任何廠商4吏用說明、說明書、產(chǎn)品說明書和產(chǎn)品插頁，都因此而引入本文作為參考，并且可以,皮用于實施本發(fā)明。
背景技術(shù)：
：1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及對MN蛋白有特異性的抗體和/或其片段。本發(fā)明進(jìn)一步涉及抗體和/或免疫綴合物組合物以及它們治療、預(yù)防和/或i貪斷MN相關(guān)病癥例如癌癥的用途。2.背景癌癥的發(fā)生最常見地是與衰老相關(guān)聯(lián)的，所有癌癥新病例的65%都是在年齡65歲及以上的患者中記錄到的。癌癥是美國第二大主要死亡原因，僅次于心臟病。實際上，美國癌癥學(xué)會已經(jīng)預(yù)計，，i定目前的死亡率保持恒定，美國四分之一的人將死于癌癥。僅僅在美國，2006年就預(yù)期有1,399,790個癌癥新發(fā)病例和564,830個癌癥死者。這些新發(fā)病例的大多數(shù)都可以預(yù)期是結(jié)腸癌(106,680)、肺癌(172,570)和乳A袈癌(214,640)。而且，預(yù)計癌癥的發(fā)病率和流行都將在未來十年增加大約15%,反映出1.4%的平均增長率(美國癌癥學(xué)會，2006)。MN是一種最近鑒別到的腫瘤相關(guān)抗原，它是細(xì)胞表面蛋白，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它在許多臨床癌中表達(dá)。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)MN在100%的腎細(xì)胞癌(Lmo,SY,CancerRes.,1997,57:2827-2831)、100%的食管癌(TurnerJR，Hum.Pathol.,199,28:740-744)、超過90%的宮頸癌(Liao,SY,CancerRes.:1997,57:2827-2831)、76%的惡性結(jié)腸癌(Saarmo,J.etal.,Am.J.Path.，161997,153:279-285)、80%的非小細(xì)胞肺癌(VermylenP.etal.,Eur.Respir.J.,1999,14:806-81l)和48Q/o的乳腺癌(ChiaSKetal.,J.Clin.Oncol.,200119:3660-3668)中異常表達(dá)。象其它肺瘤相關(guān)抗原一樣，MN蛋白也存在于少數(shù)正常組織細(xì)胞上，包括例如胃、膽管粘膜和位于小腸中的高度增歹直的正常細(xì)月包(SaarnioJ.etal.,J.Histochem.Cytochem.,1998,46:497-504)。已經(jīng)克隆并測序了人類MNcDNA(Pastorek,etal.,Oncogene,1994,9:2877-2888)。預(yù)測的蛋白由信號肽、蛋白聚糖相關(guān)序列、碳酸酐酶結(jié)構(gòu)域(碳酸酐酶IX或CAIX)、跨膜區(qū)段以及短的胞內(nèi)尾組成。碳酸酐酶IX結(jié)構(gòu)域催化二氧化碳可逆水合為碳酸。該活性可能在調(diào)節(jié)胂瘤環(huán)境的胞外部分的局部酸化方面具有作用，這可能因此而導(dǎo)致蛋白酶的激活以及最終的轉(zhuǎn)移。也已經(jīng)研究了MN表達(dá)的調(diào)節(jié)。一方面，例如，MN表達(dá)被缺氧所上調(diào)。被稱為缺氧誘導(dǎo)因子-l(HIF-1)的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物是MN表達(dá)的調(diào)節(jié)劑。因此，MN被稱為HIF-1應(yīng)答基因，它牽涉到對缺氧的肺瘤應(yīng)答的理解(WykoffCCetal.,CancerRes.，2000,60:7075-7083)。此外，MN表達(dá)與肺瘤缺氧水平相關(guān)，并且是宮頸癌的總體存活和無轉(zhuǎn)移存活的預(yù)后指示(Loncaster，JAetal.,CancerRes.,2000，60:7075-7083)。畫表達(dá)也與高的平均血管密度、晚期癌階,殳、頭頸部癌的壞死程度(BeasleyNJPetal.,CancerRes.,2001,61:5262-5267)、鼻咽癌的低存活(HuiEPetal.,Clin.CancerRes.,2002,8:2595-2604)、侵入性乳腺癌的腫瘤壞死、更高分級、陰性雌激素受體狀態(tài)、更高的復(fù)發(fā)率和低存活(ChiaSKetal.,J.Clin.Oncol,2001,19:3660-3668)相關(guān)。因此MN抗原的表達(dá)與j氐存活預(yù)后和更高分級的癌癥相關(guān)。用于這些迅速發(fā)展的癌癥的新的改進(jìn)治療方法，特別是耙向MN表達(dá)的那些方法，將是非常期望的，這將代表現(xiàn)有技術(shù)的進(jìn)步。同樣地，治療、預(yù)防和/或診斷方面是有用的。發(fā)明概述本發(fā)明涉及結(jié)合到細(xì)胞表面蛋白MN上并且可用于治療、預(yù)防和/或診斷癌癥的抗體，例如單克隆抗體，或者抗體片段。本發(fā)明的抗體可進(jìn)一17步被綴合到細(xì)胞毒性試劑例如單曱基金抑素-E(monomethylaunstatin-E)上，和/或與一種或多種另外的抗癌試劑共同給藥或配制。本發(fā)明的抗MN抗體和免疫綴合物可用于本發(fā)明的方法中來治療和/或診斷和/或監(jiān)測癌癥，例如實體瘤。一方面，本發(fā)明提供了抗體或抗體片段，或者包括抗體或抗體片段的組合物，其中抗體或抗體片段具有特異性針對MN蛋白的抗原結(jié)合位點?？乖Y(jié)合位點可包括至少一個CDR1、CDR2或CDR3，或者CDR1與CDR2或CDR3—起，或者CDR2與CDR1或CDR3—起，或者CDR3與CDR1或CDR2—起，或者它們的任意組合。CDR1可選自SEQIDNO:57,58,59,60,61,62,77,80,81,86,87,88,89,98,99,104,107和108。CDR2可選自SEQIDNO:63,64,65,66,67,68,69,78,82,83,90,91,92,93,100,101,105,109和110。CDR3可選自SEQIDNO:70,71,72,73,74,75,76,79,84,85,94,95,96,97,102,103,106,111和112。本發(fā)明這個方面的CDR序列也可包括與上面對每種CDRl、CDR2或CDR3所述序列的任一序列具有優(yōu)選高于大約80%序列同一性，更優(yōu)選高于大約85%的序列同一性，還更優(yōu)選高于大約90%的序列同一性，更加優(yōu)選大約95%或者甚至大約99%的序列同一性，甚至達(dá)到大約100%的序列同一性的氨基酸序列。另一方面，抗原結(jié)合位點可具有重鏈可變區(qū)CDR，其選自SEQIDNO:57-85以及與SEQIDNO:57-85的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列?？乖Y(jié)合位點可具有輕鏈可變區(qū)CDR,其選自SEQIDNO:86-112以及與SEQIDNO:86-112的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列?？乖Y(jié)合位點也可選自一組特定CDR序列，包括下面這些六種CDR的組(a)[3ee9]SEQIDNO:57,63,70,89,93和97;(b)[3ef2]SEQIDNO:58,64,71,107,109和111;(c)[le4]SEQIDNO:59,65,72,107,109和111;(d)[3a4]SEQIDNO:60,66,73,108,110和112;(e)[3ab4]SEQIDNO:61,67,74,87,91和95;(f)[3ahl0]SEQIDNO:61,68,75,88,92和96;(g)[3bb2]SEQIDNO:62,69,76,98,100和102;(h)[laal]SEQIDNO:77,78,79,86,90和94;(i)[5a6]SEQIDNO:80,82,84,99,101和103;以及(j)[5aa3]SEQIDNO:81,83，85,104,105和106?？乖Y(jié)合位點也可包括一組重鏈CDR序列，其選自(a)[3ee9]SEQIDNO:57,63和70;(b)[3ef2]SEQIDNO:58,64和71;(c)[le4]SEQIDNO:59,65和72;(d)[3a4]SEQIDNO:60,66和73;(e)[3ab4]SEQIDNO:61,67和74;(f)[3ahl0]SEQIDNO:61,68和75;(g)[3bb2]SEQIDNO:62,69和76;(h)[laal]SEQIDNO:77,78和79;(i)[5a6]SEQIDNO:80,82和84;以及(j)[5aa3]SEQIDNO:81,83和85?？乖Y(jié)合位點也可包括一組輕鏈CDR序列，其選自(a)[3ee9]SEQIDNO:89,93和97;(b)[3ef2]SEQIDNO:107，109和111;(c)[le4]SEQIDNO:107,109和111;(d)[3a4]SEQIDNO:108,IIO和112;(e)[3ab4]SEQIDNO:87,91和95;(f)[3ahl0]SEQIDNO:88,92和96;(g)[3bb2]SEQIDNO:98,100和102;(h)[laal]SEQIDNO:86,90和94;(i)[5a6]SEQIDNO:99,101和103;以及(j)[5aa3]SEQIDNO:104，105和106。還有另一方面，本發(fā)明提供了具有抗原結(jié)合位點的抗體或抗體片段，所述位點含有選自下組的一對重鏈可變區(qū)和輕《連可變區(qū)(a)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:133和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:134;(b)重《連可變區(qū)SEQIDNO:135和輕《連可變區(qū)SEQIDNO:136;(c)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:137和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:138;(d)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:139和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:140;(e)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:141和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:142;(f)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:143和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:144;(g)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:145和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:146;(h)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:147和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:148;(i)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:149和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:150;以及(j)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:151和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:152。本發(fā)明的抗體或抗體片段能夠以優(yōu)選大約0.15nM到大約50nM的離解常數(shù)結(jié)合到MN蛋白上。另一方面，本發(fā)明的抗體或片段是IgG抗體或IgG片段。抗體或片段也可以是IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgD、IgE、IgA或IgM抗體、Fab片段、F(ab')2片段、scFv片段、Fv片段、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體、生物特異性抗體、多特異性抗體或者嵌合抗體(例如包括稼接到人或非人抗體結(jié)合區(qū)的人抗體支架，或者稼接到人或非人抗體結(jié)合區(qū)的非人抗體支架)。嵌合抗體可包括，例如，來自非人來源的抗體支架區(qū)，諸如來自牛、小鼠、美洲駝、駱駝或兔子。關(guān)于抗體工程化的更多信息可在文獻(xiàn)中找到，例如Holliger和Hudson,NatureBiotechnology,(2005年9月)23:1126-1136,將其引入本文作為參考。上述片段可從免疫球蛋白獲得或者通過合適手段以片段形式產(chǎn)生，例如重組表達(dá)。本發(fā)明的抗體或抗體片段也可是人源化的，其中CDR序列或區(qū)域(例如CDR1、CDR2、CDR3)可以是非人的，例如鼠的。本發(fā)明的抗體或抗體片段、或者包括抗體或片段的組合物可包括綴合到抗體或片段上的細(xì)胞毒性試劑。一方面，細(xì)胞毒性試劑是單曱基金抑素-E(MMAE),然而，也提供了其它細(xì)胞毒性試劑，可包括例如MMAE的功能性類似物(例如單甲基金抑素-F)和其它細(xì)胞毒性試劑例如阿普立丁(aplidin)、氮雜尿苷、阿那曲唑、氮雜胞苷、博來霉素、硼替左米(bortezomib)、薯司他丁-1、白消安、刺孢霉素(calicheamycm)、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、卡氮芥、塞來西布、苯丁酸氮芥、順鉑、伊立替康(CPT-11)、SN-38、卡鉑、克拉屈濱、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、達(dá)卡巴。秦、多西他賽、放線菌素、葡糖苷酸柔紅霉素、正定霉素、地塞米松、己烯雌酚、阿霉素、葡糖苷酸阿霉素、葡糖苷酸表阿霉素、炔雌醇、雌氮芥、依托泊苷、葡糖苷酸依托泊苷、磷酸依托泊苷、氟尿苷(FUdR)、3',5'-〇-二油酰-FudR(FUdR-dO)、氟達(dá)拉濱、氟利坦、氟尿嘧啶、氟羥甲睪酮、吉西他濱、己酸羥孕酮、羥基脲、去曱柔毛霉素、異環(huán)磷酰胺、L-天冬酰胺酶、曱酰四氬葉酸、羅氮芥、氮芥、醋酸甲孕酮(medroprogesteroneacetate)、醋酸曱地孕酮、美法侖、巰基噤呤、6-巰基嘌呤、氨甲喋呤、米托恩醌、光神霉素、絲裂霉素、米托坦、丁酸苯酯、強(qiáng)的松、甲基千肼、紫杉醇、噴托他丁、PSI-341、司莫司汀、鏈脲霉素、他莫昔芬、紫杉烷(taxanes)、紫杉醇、丙酸睪酮、沙立度胺、巰基鳥嘌呤、塞替哌、替尼泊苷、拓樸替康、尿嘧啶氮芥、萬珂(velcade)、長春花堿、長春瑞賓、長春新堿、蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、核糖核酸酶、豹蛙酶(onconase)、rapLRl、DNA酶I、葡萄球菌腸毒素-A、美洲商陸抗病毒蛋白、多花白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素以及假單胞菌內(nèi)毒素或者它們的組合。任意細(xì)胞毒性試劑也可包括它們的功能性類似物。本發(fā)明的組合物除了抗體和片段(帶有或不帶上述綴合的細(xì)胞毒性試劑)之外，還可包括各種抗癌試劑，可包括例如博來霉素、多西他賽(肽帝索)、阿霉素、依達(dá)曲沙、厄洛替尼(erlotinib)(特羅凱(Tarceva))、依托泊普、非那雄胺(保列治)、氟利坦(氟他胺)、吉西他濱(健擇(Gemzar))、吉非替尼(gemtmib)(易瑞沙(Irresa))、醋酸性瑞林(諾雷德(Zoladex))、格雷西隆(凱特瑞(Kytril))、伊馬替尼(imatmib)(格列衛(wèi)(Gleevec))、伊立替康(開普拓/開普拓沙(Camptosar))、奧丹西隆(樞復(fù)寧)、紫杉醇(他克唑)、培加帕酶(培門冬酶)、鹽酸毛果蕓香堿(匹羅卡品)、卟吩姆鈉(光敏素)、白介素-2(普羅白精)、利妥希單抗(rituximab)(利妥?，?Rituxan))、拓樸替康(鹽酸拓樸替康)、司徒曼布(赫賽汀)、特立平(Triapine)、長春新^威和長春瑞賓(i若維本)，或者它們的治療性抗體或片段，或者抗血管生成試劑例如制管張素、貝伐單抗(bevacizumab)(阿瓦斯丁⑧(Avastm))、索拉非尼(sorafemb)(多吉美⑧(Nexavar))、桿抑素(baculostatin)、癌抑素(canstatm)、乳腺絲抑蛋白、抗VEGF抗體或肽、抗胎盤生長因子抗體或肽、抗Flk-l抗體、抗Flt-l抗體或肽、層粘連蛋白肽、纖連蛋白肽、纖溶酶原激活物抑制劑、組織金屬蛋白酶抑制劑、干擾素、白介素12、IP-IO、Gro-卩、血小板反應(yīng)蛋白、2-甲氧基雌二醇、增殖蛋白相關(guān)蛋白、酰胺基三唑21(carboxiamidotriazole)、CM101、馬馬司他、戊聚糖多碌^酸鹽、血管生成素2、干擾素-a、除莠霉素A、PNU145156E、16K促乳素片段、羅喹美克、沙立度胺、己酮可可堿、染料木素、TNP-470、內(nèi)皮抑制素、紫杉醇、阿卡丁(accutin)、西多福韋、長春新堿、博來霉素、AGM-1470、血小板第四因子或者米諾環(huán)素。另一方面，本發(fā)明進(jìn)一步提供了通過給予治療有效量的本發(fā)明的抗體和/或片段、或者包括本發(fā)明抗體和/或片段的本發(fā)明的組合物治療MN相關(guān)病癥的方法。MN相關(guān)病癥可包括例如癌癥，諸如實體瘤癌癥。實體瘤可以位于或源自乳腺、呼吸道、肺、腦、生殖器、消化道、結(jié)腸、泌尿道、腎、食道、子宮頸、眼、肝、皮膚、頭部、頸部、甲狀腺和甲狀旁腺。另一方面，本發(fā)明提供了診斷以異常MN水平為特征的MN相關(guān)病癥的方法，包括將疑似患病組織或細(xì)胞中的MN水平與相應(yīng)健康組織或細(xì)胞中的MN水平進(jìn)行比較，其中疑似患病組織或細(xì)胞中的異常MN水平表示存在MN相關(guān)病癥，所述比較步驟進(jìn)一步包括用本發(fā)明的抗體或抗體片段通過免疫分析檢測患病組織和健康組織中的MN水平。在特定方面，本發(fā)明提供了診斷MN相關(guān)病癥的方法，其中免疫分析包括步驟(a)檢測健康組織中的MN蛋白水平；(b)檢測疑似患病組織中的MN蛋白水平；以及(c)比較(a)和(b)的MN蛋白水平。與健康組織中的MN蛋白水平相比，^是似患病組織中的MN蛋白水平升高表示存在MN相關(guān)病癥。本發(fā)明也提供了試劑盒，包括本發(fā)明的抗體或抗體片段，或者備選地，包括本發(fā)明的組合物，以及治療MN相關(guān)病癥或用于診斷MN相關(guān)病癥的方法中使用試劑盒的一套說明書。這些和其它實施方案是下面的詳細(xì)說明所公開的，或者由此是顯而易見的并且是它所包括的。附圖簡述結(jié)合附圖可以最好地理解通過實施例方式給出的以下詳細(xì)說明，但是不打算將本發(fā)明僅僅限定到所描述的特定實施方案，其中圖1圖示了抗體互補決定區(qū)(CDR)的DNA序列；圖2圖示了抗體互補決定區(qū)(CDR)的蛋白序列；圖3圖示了特定抗體輕鏈和重鏈可變區(qū)的DNA序列，每一種都含有CDR和構(gòu)架區(qū)這兩者；圖4圖示了特定抗體輕鏈(VL)和重鏈(HL)可變區(qū)的蛋白序列，每一種都含有CDR和構(gòu)架區(qū)這兩者；圖5圖示了本發(fā)明的MN抗體的MN結(jié)合性質(zhì)；圖6圖示了通過用抗MN抗體溫育所產(chǎn)生的腫瘤細(xì)胞對MN包被平板的粘附的抑制；圖7圖示了在含有MaTu肺瘤的異種移植模型中的體內(nèi)抗腫瘤活性，這是通過用含有抗MN單克隆抗體1e4的免疫綴合物處理而產(chǎn)生的；圖8圖示了FACS測定抗MN抗體對PC3mm2細(xì)胞系的結(jié)合，該細(xì)胞系在其表面上表達(dá)MN蛋白；圖9示意性圖示了抗體綴合物(綴合到MMAE上的抗MN抗體)；圖10a顯示了FACS圖譜，圖示了3ee9/MMAE結(jié)合畫+(MaTu)細(xì)胞但不結(jié)合MN-(DLD)細(xì)胞；圖10b顯示了FACS圖譜，圖示了1E4免疫綴合物結(jié)合MN+(PC3mm2)細(xì)胞但不結(jié)合MN-(DLD)細(xì)胞；圖10c顯示了FACS圖譜，圖示了laal免疫綴合物結(jié)合MN+(PC3mm2)細(xì)胞但不結(jié)合MN-(DLD)細(xì)胞；圖lla顯示了免疫熒光照片，圖示了MN+細(xì)胞導(dǎo)致的3ee9/MMAE的內(nèi)化，而MN-細(xì)胞沒有導(dǎo)致內(nèi)化。內(nèi)化的3ee9/MMAE顯示為熒光；圖lib顯示了免疫熒光照片，圖示了MN+細(xì)胞導(dǎo)致的1E4免疫綴合物的內(nèi)化，而MN-細(xì)胞沒有導(dǎo)致內(nèi)化。內(nèi)化的1E4免疫綴合物顯示為熒光；圖12顯示了免疫印跡，圖示了MN抗體導(dǎo)致的生物素化細(xì)月包表面蛋白的特異性免疫沉淀；圖13a用圖表描述了3ee9/MMAE對MN+細(xì)胞而不對MN-細(xì)胞有細(xì)胞毒性；圖13b用圖表描述了1E4免疫綴合物對MN+細(xì)胞而不對MN-細(xì)胞有細(xì)i包毒性；圖13b用圖表描述了laal免疫綴合物對MN+細(xì)胞而不對MN-細(xì)胞有細(xì)胞毒性；圖14顯示了免疫熒光照片，圖示了通過微管蛋白抑制產(chǎn)生的3ee9/MMAE對正常紡錘體形成的抑制；圖15用圖表描述了3ee9/MMAE對MaTu異種移才直物的抗肺瘤功效；圖16用圖表描述了1E4免疫綴合物對已證實的MaTu乳腺腫瘤的抗月中瘤功戔支；圖17用圖表描述了laal免疫綴合物對MaTu異種移植物的抗腫瘤功效；圖18用圖表描述了3ee9/MMAE對MaTu異種移植物的治療指數(shù)(TI);圖19用圖表描述了3ee9/MMAE和沒有MMAE時對HT-29異種移才直物的抗腫瘤功效；圖20用圖表描述了4要照Q7Dx2方案，3ee9/MMAE對HT-29異種移植物的抗腫瘤功效；圖20用圖表描述了按照QlDxl方案，3ee9/MMAE對HT-29異種移植物的抗肺瘤功效；圖22用圖表描述了3ee9/MMAE對PC3mm2異種移才直物的抗肺瘤功效；圖23用圖表描述了3ee9/MMAE對Colo-205異種移才直物的抗肺瘤功效；圖24用圖表描述了3ee9/MMAE對HCT-15異種移才直物的抗肺瘤功效；圖25用圖表描述了3ee9/MMAE對MN-(左側(cè)圖)和MN+(右側(cè)圖)MIAPaca2異種移才直物的抗腫瘤功效；圖26a和26b用圖表描述了3ee9/MMAE聯(lián)合希羅達(dá)⑧在不同劑量下對Colo-205CRC異種移4直物的抗肺瘤功效；圖27顯示了免疫焚光照片，圖示了3ee9在huMN-MIAPaca2和MIAPaca2肺瘤中的體內(nèi)定位；以及圖28顯示了免疫焚光照片(組織樣品)，圖示了兩種劑量的3ee9/MMAE對HT-29CRC異種移植物中微管蛋白聚合的抑制。圖29顯示了哺乳動物表達(dá)載體3ee9H+LpCMVUCOE8(見實施例21)的插入?yún)^(qū)的全部核苷酸序列，該載體編碼人IgG抗MN抗體，該抗體包括分別為SEQIDNO:126和125的K和重鏈CDR可變區(qū)，該載體獲自載24體3ee9pMORPHx9(見實施例1-3)。SEQIDNO:153。發(fā)明詳述要明白的是，本文所述的本發(fā)明并不被限定到涉及本發(fā)明任意方面的本文提供的特定細(xì)節(jié)，包括所描述的抗MN抗體、免疫綴合物、治療方法、實-驗方案、細(xì)胞系、動物種或?qū)?、?gòu)建體以及試劑，同樣也可以變化。也要明白的是，本文使用的術(shù)語只是為了描述特定實施方案，并不打算限定本發(fā)明的范圍。定義除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員所通常理解的意義。然而，下面的參考文獻(xiàn)能夠提供本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員許多本發(fā)明中使用的術(shù)語的一般定義，只要這些定義與現(xiàn)有技術(shù)中所通常理解的意義一致，都能夠參考并使用。這些參考文獻(xiàn)包括但不限于Singleton"a/.,DictionaryofMicrobiologyandMolecularBiology(2ded.1994);TheCambridgeDictionaryofScienceandTechnology(Walkered.,1988》Hale&Marham,TheHarperCollinsDictionaryofBiology(1991);和Lackiea/.,TheDictionaryofCell&MolecularBiology(3ded.1999》和CellularandMolecularImmunology,Eds.Abbas,LichtmanandPober,2ndEdition,W.B.SaundersCompany?？梢詤⒖急绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員所能獲得的任何其它的技術(shù)資源，其中提供了具有本領(lǐng)域所通常理解意義的本文所使用術(shù)語的定義。對于本發(fā)明來說，進(jìn)一步定義以下術(shù)語。另外的術(shù)語在說明書的其它地方定義。如本文中以及所附權(quán)利要求書中所使用的，單數(shù)形式巧"一個，，、"一種"和"該"包#復(fù)數(shù)含義，除非上下文另外明確規(guī)j定了其它意思。這樣，例如，在談到"一個基因"時，就是指一個或多個基因，包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的它們的等價物，等等。本文所使用的術(shù)語"抗體"包括免疫球蛋白分子(例如任何類型包括IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY,和/或任意亞型包括IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2),它們是從天然分離的或者通過重組方式制備的?？贵w的含義也包括結(jié)合抗原的抗體片段，諸如Fab、(ab')2、cFv(單鏈Fv)、Fv、單4連抗體、雙抗體(diabodies)、二石克4建連接的Fv(sdFv)以及包含Vl或Vh結(jié)枸域的片段，它們是由完整免疫球蛋白制備的或者通過重組方式制備的。本發(fā)明的抗體和/或結(jié)合抗原的抗體片段可以是單特異性的(例如單克隆抗體)、雙特異性的、三特異性的或者更多特異性的。多特異性抗體可以是特異于抗原的不同表位或者可以是特異于多種抗原的表位。參見例如PCT7^開文本W(wǎng)O93/17715;WO92/08802;WO91/00360;WO92/05793;Tutt,etal.,1991,J.Immunol.147:6069;美國專利No.4,474,893;4,714,681;4,925，648;5,573,920;5,601,819;Kostelnyetal.,1992,J.Immunol.148:15471553,每一篇都引入本文作為參考。的整體或部分鉸鏈區(qū)、CH1、CH2、CH3和CL結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明也包括這樣的抗原結(jié)合的抗體片段，即它們也包含可變區(qū)與鉸鏈區(qū)、CH1、CH2、CH3和CL結(jié)構(gòu)域的任意組合。優(yōu)選地，抗體或結(jié)合抗原的抗體片段是人的、人源化的、鼠的(例如小鼠和大鼠)、驢的、綿羊的、兔的、山羊的、豚鼠的、馬的或者雞的。本文使用的"人"抗體包括具有人免疫球蛋白氨基酸序列的抗體，以及包括分離自人免疫球蛋白文庫、人B細(xì)胞或者對于一種或多種人免疫球蛋白是轉(zhuǎn)基因的動物的抗體，如下文所述，例如在Kucherlapati等的美國專利No.5,939,598中。術(shù)語抗體也延伸到其它蛋白支架，它們能夠?qū)⒖贵wCDR插入物定位成天然抗體中所發(fā)現(xiàn)的同樣的活性結(jié)合構(gòu)象，以致于用這些嵌合蛋白所觀察到的耙抗原結(jié)合相對保持了這些CDR所來源的天然抗體的結(jié)合活性。本文使用的術(shù)語非人(例如鼠)抗體的"人源化"形式是含有源自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。人源化抗體大部分都是人免疫球蛋白(受體抗體)，其中受體的的超變區(qū)殘基(例如互補決定區(qū)"CDR")被非人物種的抗體(供體抗體)的超變區(qū)殘基(CDR)所替換，非人物種的抗體是來自諸如小鼠的、大鼠的、兔的或非人靈長類的具有期望的特異性、親和性和結(jié)合能力的抗體。在一些情況下，人免疫球蛋白的構(gòu)架區(qū)(FR)殘基可以被相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可以包含受體抗體或供體抗體中不存在的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改善抗體性能。一般而言，人源化抗體可以基本上包含至少一個或典型地兩個可變結(jié)構(gòu)域的全部，其中全部或基本上全部的超變區(qū)相應(yīng)于非人免疫球蛋26白的那些并且全部或基本上全部的FR都是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗體也可任選包含至少一部分的免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc),典型地是人免疫球蛋白的。綜述參見Jones,etal.,(Nature321:522-525,1986);Reichmann,etal.,(Nature332:323-329,1988);以及Presta,(Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596,1992)。人源化抗體的制備可在美國專利No.7,049,135、6,828,422、6,753,136、6,706,484、6，696,248、6,692,935、6,667,150、6,653,068、6,300,064、6,294，353和5,514,548中找到，每一篇都引入本文作為參考。本文使用的術(shù)語"單鏈Fv"或"sFv"抗體片段包含抗體的Vh和Vl結(jié)構(gòu)域，其中這些結(jié)構(gòu)域是以單鏈多肽存在的。通常，F(xiàn)v多肽還包含VH和vl結(jié)構(gòu)域之間的多肽接頭，它能夠讓sFv形成適合抗原結(jié)合的期望結(jié)構(gòu)。綜述參見Pluckthun(ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,Vol.113,RosenburgandMooreeds.Springer國Verlag,NewYork,pp.269-315,1994),將其完整引入本文作為參考。術(shù)語"雙抗體"是指帶有兩個抗原結(jié)合位點的小抗體片段，這些片段包含在同一多肽鏈(VH-V。中連接到輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VO上的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)。通過使用足夠短的而不會導(dǎo)致同一鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域之間配對的接頭，迫使結(jié)構(gòu)域與另一鏈上的互補結(jié)構(gòu)域配對，產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點。雙抗體更全面地描述在例如EP404,097;WO93/11161;以及Hollinger,etal.,(Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448,1993)中,每一篇都引入作為參考。術(shù)語"線性抗體"是指現(xiàn)有4支術(shù)例如Zapata,etal.,(ProteinEng.8(10):1057-1062,1995)中描述的抗體,將該文引入作為參考。簡要地說，這種抗體含有一對串聯(lián)Fd區(qū)段(Vh-Ch1-Vh-Ch1)，形成了一對抗原結(jié)合區(qū)。線性抗體可以是雙特異性的或單特異性的。本文使用的術(shù)語"單克隆抗體"是指從一群基本上均質(zhì)的抗體中獲得的抗體，也就是包含同一群體中的個體抗體，除了可以少量存在可能的天然突變。單克隆抗體是高度特異性的，也就是針對單一抗原位點。而且，與典型地包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的傳統(tǒng)(多克隆)抗體制劑不同的是，每個單克隆抗體只針對抗原上的單一決定簇。修飾語"單克隆"表示了從基本上均質(zhì)的抗體群中獲得的抗體的特征，不要理解為需要通過任何特定方法生產(chǎn)抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可以通過首先由Kohler,etal.,(Nature256:495,1975)描述的雜交瘤方法制備，或者可以通過重組DNA方法制備(參見例如美國專利No.4，816,567。單克隆抗體也可使用例如Clackson,etal.,(Nature352:624-628,1991)和Marks,etal.,(J.Mol.Biol.222:581-597,1991)中描述的技術(shù)從噬菌體抗體文庫中分離到。本文的單克隆抗體也包括"嵌合"抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與源自特定物種或者屬于特定抗體類型或亞型的抗體的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的其它部分與源自另一物種或者屬于另一抗體類型或亞型的抗體，以及這種抗體的片段的相應(yīng)序列相同或同源，只要它們顯示出期望的生物學(xué)活性(參見例如美國專利No.4,816,567;以及Morrison,etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855,1984,每一篇都引入作為參考)。本文使用的術(shù)語"生物樣品"或本文使用的"患者樣品"是指獲自生物或生物組分(例如細(xì)胞)的樣品。樣品可以是任何生物組織或流體。樣品可以是"臨床樣品"，它是源自患者的樣品。這些樣品包括但不限于痰、血液、血清、血漿、血細(xì)胞(例如白細(xì)胞)、組織樣品、活組織纟企測樣品、尿、腹膜液、以及胸膜液、唾液、精液、乳腺滲出液、腦脊液、淚液、粘液、、淋巴液、胞質(zhì)溶力交、腹水、羊水、膀胱沖洗液、以及支氣管肺泡灌洗液或其中的細(xì)月包，連同其它體液樣品?；颊邩悠房梢允切迈r的或冷凍的，可以用肝素、檸檬酸鹽或EDTA處理。生物樣品也可包括組織切片諸如用于組織學(xué)目的的冷凍切片。術(shù)語"癌"包括但不限于實體瘤，諸如乳腺癌、呼吸道癌、腦癌、生殖器癌、消化道癌、泌尿道癌、眼癌、肝癌、皮膚癌、頭頸部癌、曱狀腺癌、曱狀旁腺癌以及它們的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。該術(shù)語也包括肉瘤、淋巴瘤、白血病和漿細(xì)胞骨髓瘤。乳腺癌的例子包括但不限于侵入性導(dǎo)管癌、侵入性小葉癌、導(dǎo)管原位癌和小葉原位癌。呼吸道癌的例子包括但不限于小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，以及支氣管腺瘤和胸膜肺母細(xì)胞瘤。腦癌的例子包括但不限于腦干和下丘腦膠質(zhì)瘤，小腦和大腦星形細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，室管膜瘤，以及神經(jīng)外胚層和松果體肺瘤。雄性生殖器肺瘤包括但不限于前列腺和睪丸癌。雌性生殖器腫瘤包括但不限于子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、卯巢癌、陰道癌和外陰癌，以及子宮肉瘤。消化道腫瘤包括但不限于肛門癌、結(jié)28腸癌、結(jié)腸直腸癌、食道癌、膽嚢癌、胃癌、胰&，癌、直腸癌、小腸癌、以及唾液腺癌。泌尿道肺瘤包括但不限于膀胱癌、陰莖癌、腎癌、腎盂癌、輸尿管癌、以及尿道癌。眼癌包括但不限于眼內(nèi)黑色素瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。肝癌的例子包括但不限于肝細(xì)胞癌(帶有或不帶纖維層狀變異的肝細(xì)胞癌)，膽管癌(肝內(nèi)膽管癌)，以及混合型肝細(xì)胞膽管癌。皮膚癌包括但不限于鱗狀細(xì)胞癌，卡波西肉瘤，惡性黑素瘤，梅克爾細(xì)胞(Merkelcell)皮膚癌，以及非黑素瘤皮膚癌。頭頸部癌包括但不限于喉癌/下咽癌/鼻咽癌/口咽癌，以及唇癌和口腔癌。'淋巴瘤包括j旦不限于AIDS相關(guān)淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤，皮膚T細(xì)胞淋巴瘤，何杰金氏病，以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤。肉瘤包括但不限于軟組織肉瘤，骨肉瘤，惡性纖維性組織細(xì)月包瘤，、淋巴肉瘤，以及^黃紋月幾肉瘤。白血病包才舌{旦不限于急性髓細(xì)胞白血病，急性淋巴細(xì)胞白血病，慢性淋巴細(xì)胞白血病，慢性粒細(xì)胞白血病，以及毛細(xì)胞白血病。本發(fā)明中使用的術(shù)語"表位"意指抗原上的任何抗原決定簇，例如MN蛋白，抗體通過抗原結(jié)合位點結(jié)合到它上面。決定簇或抗原決定簇通常由諸如氨基酸或糖側(cè)鏈這些分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)所組成，通常具有特殊的三維結(jié)構(gòu)特征以及特殊的電荷特征。術(shù)語"特異性免疫反應(yīng)性"是指抗體和蛋白、化合物或抗原之間的結(jié)合反應(yīng)，所述蛋白、化合物或抗原具有由抗體的抗原結(jié)合位點所識別的表位。該結(jié)合反應(yīng)是在蛋白和其它生物物質(zhì)的混合群體的存在之中存在具有識別的表位的蛋白、抗原或表位的決定因素。在免疫分析情況下，特異性免疫反應(yīng)性抗體可結(jié)合具有識別的表位的蛋白，即使結(jié)合樣品中存在的沒有表位的蛋白，也是在可檢測的更低程度上結(jié)合。在體內(nèi)情況下，"特異性免疫反應(yīng)性"可指這樣的條件，在此條件下動物形成針對疫苗或抗原的免疫應(yīng)答，例如對抗原的體液應(yīng)答(針對免疫反應(yīng)性條件下所呈遞疫苗、蛋白、化合物或抗原的抗體的產(chǎn)生)或細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答(也蛋白、化合物或抗原的應(yīng)答)。本文使用的術(shù)語"免疫反應(yīng)性條件"是在免疫分析情況下或體外反應(yīng)中使用的，其中提供或調(diào)節(jié)了反應(yīng)的物理條件以便能夠?qū)㈥P(guān)聯(lián)抗體結(jié)合到抗原上，這些物理條件包括例如溫度、鹽濃度、pH、試劑及其濃度、以及抗原和對抗原有特異免疫反應(yīng)性的關(guān)聯(lián)抗體的濃度。免疫反應(yīng)性條件取決于抗體結(jié)合反應(yīng)的模式，典型地是免疫分析實驗方案中所利用的那些。參見HarlowandLane(1988)Antibodies:ALaboratoryMa腿l，ColdSpringHarborPublications,NewYork,對于免疫分析才莫式和條件的描述。本文使用的術(shù)語"患者"或"受試者"包括哺乳動物(例如人和動物)?？贵w本發(fā)明涉及結(jié)合MN的抗體。這些抗體對于各種治療和診斷目的可能是有用的。本領(lǐng)域技術(shù)人員一般都將理解的是，抗體選擇性和結(jié)合親和力的最關(guān)鍵決定因素是互補決定區(qū)(CDR)的序列和由此產(chǎn)生的構(gòu)象。大多數(shù)抗體含有六個CDR,重鏈可變區(qū)(VH)中三個，輕鏈可變區(qū)(VL)中三個。VH和VL中的CDR之間的間插序列是定l吏CDR定向的構(gòu)架區(qū)。CDR共同形成了抗體中的抗原結(jié)合位點。已經(jīng)在抗體人源化和抗體優(yōu)化方法中對這些CDR在決定抗體功能性質(zhì)方面的關(guān)鍵作用進(jìn)行了長期探索。在前一方法中，將來自單克隆抗體例如小鼠抗體的CDR轉(zhuǎn)移到相似構(gòu)架設(shè)計的人抗體中，從而產(chǎn)生具有同樣功能性質(zhì)的但是在人體中的免疫原性減弱的抗體。根據(jù)已經(jīng)成功商業(yè)化為人體治療劑的人源化抗體的數(shù)量，該方法的成功是明顯的，這些治療劑包^^赫賽汀⑧(司4走曼布，Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA)、Synagis(palivizumab,Medimmune,Inc.,Gaithersburg,MD)、Campath(alemtuzumab,GenzymeOncology,Cambridge,MA)、Zenapax(daclizumab,RochePharmaceuticlas,Nutley,NJ)、Xolair(omalizumab,Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA)、Raptiva(efalizumab,Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA)、阿瓦斯?、?貝4戈單^:,Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA)以及Mylotarg(gemtuzumabozogamicin,Wyeth-Ayerst,Madison,NJ)。其它例子已經(jīng)描述于Smger,etal.,(J.Immunol,150:2844-2857,1993);Luo,etal.,(J.ImmunolMeth.,275:31-40,2002);以及Kostelny,etal.,(Int.J.Cancer93;556-565,2001)中?？贵w優(yōu)化方法集中于通過CDR序列的特殊改變來改善抗體選#^生或結(jié)合親和力。在抗體開發(fā)領(lǐng)域中所公認(rèn)的是，CDR編碼治療和診斷用途所需的結(jié)合親和力和選擇性，也可使用這些CDR來將這些期望的功能性質(zhì)賦予給大范圍的各種備選抗體構(gòu)架，這可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行。也可能通過將抗體CDR架接到其它具有免疫球蛋白樣折疊的蛋白上以轉(zhuǎn)移抗體結(jié)合活性，所述蛋白諸如免疫球蛋白超家族中的其它蛋白以及具有與免疫球蛋白相似的折疊的非免疫球蛋白(Nicaise,etal.,ProteinScience13:1882-1891,2004)。本發(fā)明打算包括任何已知的或合適的用于制備本發(fā)明的抗體和結(jié)合抗原的抗體片段的技術(shù)。例如，噬菌體展示技術(shù)對于獲得本發(fā)明的高親和力抗MN抗體或結(jié)合抗原的抗體片段來說是有用的，它們用于診斷和/或治療MN相關(guān)病癥諸如MN相關(guān)癌癥的用途中。被稱為親和力成熟的技術(shù)采用誘變或者CDR步移和重選擇，其使用MN抗原來鑒別以比初始抗體或親本抗體更高的親和力結(jié)合抗原的抗體(參見例如Glaseretal.,1992,J.Immunology149:3903)。誘變整個密碼子而不是單個核苦酸產(chǎn)生了氨基酸突變的半隨機(jī)文庫?？蓸?gòu)建由一組變體克隆所組成的文庫，每一克隆都在單個CDR中相差單個氨基酸改變，并且這些克隆包含代表了每個CDR殘基的每個可能氨基酸取代的變體?？赏ㄟ^與含有標(biāo)記抗原的固定化突變體相接觸來篩選對抗原的結(jié)合親和力增加的突變體。可使用本領(lǐng)域已知的任何篩選方法來筌定對抗原的親和力增加的突變抗體(例如ELISA)(參見Wuetal.,1998,ProcNatl.Acad.Sci.USA95:6037;Yeltonetal.,1995,丄Immunology155:1994,引入作為參考)。也可使用CDR步移來隨機(jī)化輕鏈(參見Schieretal.,1996,J.Mol.Bio.263:551，引入作為參考)。在特定實施例中，MorphoSysAG(德國)提供了可用于產(chǎn)生全人抗體的噬菌體-抗體技術(shù)。MorphosysHuCALGOLD文庫提供了許多優(yōu)于該技術(shù)早期版本的改進(jìn)(Knappik,etal.,J.Mol.Biol.296:"-86,2000,引入作為參考)，包括Rauchenberger,etal.,(J.Biol.Chem.278:38194-38205，2003,引入作為參考)所描述的HuCAL-Fab1文庫。象早期版本一樣，HuCALGOLD加入了人抗體設(shè)計，其描述人共有構(gòu)架序列和模擬天然人序列多樣性的CDR可變性才莫式。然而，HuCALGOLD中的多樣性延伸到了包括六種抗體CDR。而且，通過CysDisplayTM特征增加了高親和力4元體的回4史(KretzschmarandvonRuden,Curr.Opin.Biotechnol.13:598-602,2002)。用該才支術(shù)產(chǎn)生的抗體顯示了免疫原性可能性的才及大降低。噬菌體展示技術(shù)，諸如可從Morphosys獲得的那些，是本領(lǐng)域已知的，可進(jìn)一步參考BoehnckeWHetal.，BrJDermatol.(2005),Nov;153(5):1092;SimonMoroneyetal.,ModernBiopharmaceuticals;編者J.KnaebleinWiley-VCHVerlag(2005);alfOstendorpetal.,抗體(Antibodies),第2巻:確斤才支術(shù)禾口治療用途(Noveltechnologiesandtherapeuticuse),p.13-52,(2004),KluwerAcademic/PlenumPublishers,NewYork;R.Rauchenbergeretal.,JBiolChem.,(2003),Oct3,278(40):38194-38205;T.Kretzschmaretal.，CurrOpinBiotechnol.,(2002),Dec,13(6):598-602;KrebsBetal,JImmunolMethods,(2001),Aug1,254(1-2);M.Margetetal.,TissueAntigens,(2000),56:1-9;A.Knappiketal.,J.MolBiol.,(2000),Feb11,296(1):57-86;以及A.Pltickthunetal.,Immunotechnology,(1997),Jun;3(2):83-105，每一篇都整體引入本文作為參考。作為例子，可以使用MorphoSys技術(shù)鑒別具有MN結(jié)合活性和細(xì)胞粘附中和活性的抗體?？蓪N蛋白包一支在農(nóng)i量滴定板上或者i茲珠上，與MorphoSysHuCAL-GOLDFab噬菌體文庫保溫?？蓪⒉唤Y(jié)合MN的噬菌體連接的Fab從平板上沖洗掉，只留下結(jié)合MN的噬菌體。可通過加入碌u醇還原試劑諸如二石危蘇糖醇(DTT)導(dǎo)致連接抗體與噬菌體的二碌J建裂解從而將結(jié)合的噬菌體洗脫下來?？梢杂帽磉_(dá)結(jié)合MN的抗體片段的噬菌體富集所回收的噬菌體群，可以通過感染大腸桿菌宿主進(jìn)行擴(kuò)增?？梢允褂酶患氖删w群重復(fù)該淘選過程以進(jìn)一步富集結(jié)合MN的噬菌體連接的抗體群。然后可使用標(biāo)準(zhǔn)克隆技術(shù)將編碼Fab的基因序列切下來，轉(zhuǎn)移到表達(dá)載體，諸如細(xì)菌(例如大腸桿菌)表達(dá)載體或者哺乳動物表達(dá)載體中，將載體用來轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞系，諸如CHO或大腸桿菌表達(dá)細(xì)胞系。然后就可以表達(dá)并純化來自富集的集合的Fab。備選地，可以使用MN表達(dá)細(xì)胞作為抗原進(jìn)行淘選。例如，可用生物素標(biāo)記轉(zhuǎn)染了MN抗原的細(xì)胞。然后可將這些轉(zhuǎn)染細(xì)胞與未標(biāo)記的、未轉(zhuǎn)染MN的細(xì)月包進(jìn)行混合，標(biāo)記的與未標(biāo)記的比例為1:10。將噬菌體文庫加入到細(xì)胞中，生物素化，用結(jié)合了鏈霉親和素的磁珠捕獲帶有MN的細(xì)胞，該磁珠被結(jié)合到磁鐵上。將非特異性的噬菌體沖洗掉，通過去除磁場將帶有MN的細(xì)胞特異性洗脫下來。然后可將這些特異性結(jié)合的噬菌體擴(kuò)增，進(jìn)行另外幾輪的細(xì)胞淘選，或者可用肽和/或蛋白淘選代替。方法是從B細(xì)胞中篩選DNA文庫，如Dower,etal.,(WO91/17271，引入作為參考)以及McCafferty,etal.,(WO92/01047)(每一篇都整體引入作為參考)所述。在這些方法中，產(chǎn)生了噬菌體文庫，其中的成員在其外表面上展示了不同抗體?？贵w通常展示為Fv或Fab片段。通過親和富集選擇噬菌體展示抗體，用于結(jié)合所選蛋白。在噬菌體展示方法的變型中，可生產(chǎn)具有所選鼠抗體結(jié)合特異性的人抗體(例如WO92/20791,引入作為參考)。在該方法中，可以使用所選鼠抗體(例如5C7.29)的重鏈或輕鏈可變區(qū)作為起始材料。例如如果選擇輕鏈可變區(qū)作為起始材料，就可構(gòu)建噬菌體文庫，其中的成員展示同樣的輕鏈可變區(qū)(也就是鼠起始材料)和不同的重鏈可變區(qū)。重鏈可變區(qū)可從重排的人重鏈可變區(qū)文庫中獲得。選擇對蛋白顯示出強(qiáng)烈特異性結(jié)合(例如至少10nM或至少InM)的噬菌體。然后將來自該噬菌體的人重鏈可變區(qū)用作構(gòu)建進(jìn)一步的噬菌體文庫的起始材料。在該文庫中，每個噬菌體都展示同樣的重鏈可變區(qū)(也就是從第一個展示文庫鑒定的區(qū)域)和不同的輕鏈可變區(qū)。輕鏈可變區(qū)可從重排的人輕鏈可變區(qū)文庫中獲得。再次選擇顯示出強(qiáng)烈特異性結(jié)合的噬菌體。作為另一個例子，也可4吏用三體瘤(trioma)方法生產(chǎn)抗體。基本方法和用于該方法中的例i正性細(xì)月包融合配偶體SPAZ-4已經(jīng)描述于Oestberg,etal.,(Hybridoma2:361-367,1983;美國專利No.4,634,664,每一篇都引入作為參考)；以及Engleman,etal.,(美國專利No.4,634,666,引入作為參考)。通過該方法獲得的產(chǎn)生抗體的細(xì)胞系被稱為三體瘤，因為它們來自三個細(xì)胞——兩個人細(xì)胞和一個小鼠細(xì)胞。最初，將小鼠骨髓瘤SPAZ-4細(xì)胞系。然后將異種細(xì)胞與免疫過的人B淋巴細(xì)胞融合以獲得產(chǎn)生抗體的三體瘤細(xì)胞系。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)三體瘤產(chǎn)生的抗體比由人細(xì)胞制備的普通雜交瘤更穩(wěn)定。從人供體的血液、脾、淋巴結(jié)或骨髓中獲得B淋巴細(xì)胞。通常不希望用蛋白對活的人體進(jìn)行體內(nèi)免疫，因為有引起有害應(yīng)答的風(fēng)險。因此，通常都是用蛋白(例如MN)或其抗原性片段或含有所述蛋白(如MN)的細(xì)胞在體外免疫B淋巴細(xì)胞。也可將基本上由結(jié)合例證性鼠抗體之一的氨基酸區(qū)段所組成的特定表位片段用于體外免疫。典型地將B淋巴細(xì)胞在培養(yǎng)基諸如補充10%人血清的RPMI-1640(參見美國專利No.4,634,666)中暴露給抗原7-14天。也可將免疫過的B淋巴細(xì)胞通過本領(lǐng)域已知的方法融合到異種雜交細(xì)胞諸如SPAZ-4上。例如，可用40-50%的分子量1,000-4,000的聚乙二醇在大約37。C處理細(xì)胞大約5-10分鐘。可從融合混合物中分離細(xì)胞，在選擇期望雜種(例如HAT或AH)的培養(yǎng)基中增殖?？赏ㄟ^分析三體瘤培養(yǎng)基對蛋白(例如MN)結(jié)合的能力來鑒別可分泌具有所需結(jié)合特異性的抗體的克隆，使用的是與上述用于非人抗體同樣的方法?？蓙喛寺∧軌虍a(chǎn)生具有期望特異性的人抗體的三體瘤，例如通過限制性稀釋技術(shù)和在培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)。盡管三體瘤是遺傳穩(wěn)定的，但是它們不可能產(chǎn)生極高水平的抗體。表達(dá)水平的增加可通過將抗體基因從三體瘤克隆到一種或多種表達(dá)載體中，并將載體轉(zhuǎn)化到細(xì)胞系中，諸如表達(dá)重組或人源化免疫球蛋白的細(xì)胞系。也可從非人轉(zhuǎn)基因哺乳動物中生產(chǎn)與蛋白(例如MN)具有交叉反應(yīng)性的人抗體，該轉(zhuǎn)基因哺乳動物具有編碼人免疫球蛋白基因座至少一個區(qū)段的轉(zhuǎn)基因。通常，這些轉(zhuǎn)基因哺乳動物的內(nèi)源免疫球蛋白基因座都是功能上滅活的。人免疫球蛋白基因座區(qū)段可包括重鏈和輕鏈組分的未重排序列。內(nèi)源免疫球蛋白基因的失活和外源免疫球蛋白基因的引入都可通過耙向的同源重組或通過引入YAC染色體來實現(xiàn)。由該方法產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因哺乳動物能夠功能性重排免疫球蛋白組分序列，表達(dá)由人免疫球蛋白基因編碼的各種同種型抗體的所有組成成分，不表達(dá)內(nèi)源免疫球蛋白基因。具有這些性質(zhì)的哺乳動物的生產(chǎn)和性質(zhì)詳細(xì)描述于例如Lonberg,etal.,(WO93/12227);以及Kucherlapati，(WO91/10741)(每一篇都整體引入作為參考)?？赏ㄟ^如上所述免疫轉(zhuǎn)基因非人哺乳動物獲得交叉反應(yīng)性MN人抗體。單克隆抗體的制備可通過例如使用常規(guī)的Kohler-Milstein技術(shù)將來自這些哺乳動物的B細(xì)胞融合到合適的骨髓瘤細(xì)胞系中(KohlerandMilstein,Nature256:495-497,1975，引入作為參考)?？墒褂酶鞣N免疫策略來獲得與蛋白(例如MN)具有交叉反應(yīng)性的小鼠或其它非人抗體。在一些策略中，可用MN抗原免疫非人動物(通常是非人哺乳動物諸如小鼠)。免疫原可包括穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了MN并在其細(xì)胞表面表達(dá)MN的纟田月包，以及MN蛋白或含有能夠結(jié)合到例證性交叉反應(yīng)性抗體上的這些分子的區(qū)段的表位片段。獲自被免疫動物的產(chǎn)生抗體的細(xì)胞可被永生化，并選擇用于產(chǎn)生特異性結(jié)合MN的抗體(例如Harlow&Lane，Antibodies,ALaboratoryManual,C.S.H.P.,N.Y.，1988,引入作為參考)?？梢允褂美鐜в械诙?biāo)記的適當(dāng)二抗來檢測結(jié)合。然';:能力:；'、、、本發(fā)明也涉及與所選小鼠或其它非人抗體具有相似結(jié)合特異性和親和力的人源化抗體。人源化抗體的形成可通過重組DNA4支術(shù)將非人抗體的CDR區(qū)(例如CDR1、CDR2和CDR3)連接到人構(gòu)架區(qū)和恒定區(qū)(例如Queen,etal.,Proc.Natl.Acad,Sci.USA86:10029-10033,1989;WO卯/07861;每一篇都整體引入作為參考，也就是CDR稼接。這些人源化免疫球蛋白具有基本上來自人免疫球蛋白(稱為受體免疫球蛋白)的可變區(qū)構(gòu)架殘基和基本上來自小鼠免疫球蛋白(稱為供體免疫球蛋白)的互補決定區(qū)(CDR)。恒定區(qū)，如果有的話，也可基本上來自人免疫球蛋白。原則上，來自任何人抗體的構(gòu)架序列都可用作CDR稼接的模板。然而，已經(jīng)證明直接在這種構(gòu)架上進(jìn)行CDR替換經(jīng)常會導(dǎo)致對抗原的結(jié)合親和力的明顯喪失(Glaser，etal.,J.Immunol.149:2606,1992);Tempest,etal.,Biotechnology9:266,1992;Shalaby,etal.,J.Exp.Med.17:217,1992)。人抗體與最初鼠抗體的同源性越高，鼠CDR與人構(gòu)架的結(jié)合就越不可能在CDR中引入能夠降低親和力的畸變。因此，建議人源化抗體可變區(qū)構(gòu)架與供體抗體可變區(qū)構(gòu)架之間的同源性(即序列同一性百分比)優(yōu)選至少大約65%，更優(yōu)選至少大約75%,還更優(yōu)選至少大約85%,以及進(jìn)一步更優(yōu)選大約95%或大約99%。重鏈和輕鏈可變區(qū)構(gòu)架殘基可源自相同的或不同的人抗體序列。然而，選自相同人抗體的重鏈和輕鏈構(gòu)架序列降低了兩條鏈組裝不兼容的體的共有序列(例如WO92/22653,引入作為參考)。根據(jù)對CDR構(gòu)象和/或結(jié)合抗原的可能影響，可選擇人可變區(qū)構(gòu)架殘基的某些氨基酸進(jìn)行取代。這些可能影響的分析可通過模擬、檢驗特定位置的氨基酸性質(zhì)，或者對特定氨基酸的取代或誘變功效進(jìn)行經(jīng)驗性觀察來實現(xiàn)。例如，當(dāng)鼠可變區(qū)構(gòu)架殘基和所選人可變區(qū)構(gòu)架殘基之間的氨基酸35不同時，人構(gòu)架氨基酸就可被來自小鼠抗體的等效構(gòu)架氨基酸所取代，這時可合理地預(yù)期該氨基酸(1)直接接觸抗原，(2)在序列中與CDR區(qū)相鄰，或者(3)以其它方式與CDR區(qū)相互作用(例如在CDR區(qū)的4-6A之內(nèi))。其它取代候選物是例如在那個位置上對人免疫球蛋白來i兌是不常見的受體人構(gòu)架氨基酸。這些氨基酸可用來自供體抗體的等同位置的氨基酸或來自更典型人免疫球蛋白的等同位置的氨基酸進(jìn)行取代。人源化免疫球蛋白可變區(qū)構(gòu)架可顯示出與人可變區(qū)構(gòu)架序列或這些序列的共有序列例如至少優(yōu)選大約85%的序列同一性，更優(yōu)選至少大約90%的序列同一性，還更優(yōu)選至少大約95%的序列同一性，以及更優(yōu)選至少大約99%的序列同一性。本發(fā)明也涉及雙特異性或雙功能性抗體，它們具有特異性結(jié)合蛋白(例如MN)的一個結(jié)合位點以及特異性結(jié)合第二部分的第二結(jié)合位點。在雙特異性抗體中，一個重鏈和輕鏈對通常來自例如MN結(jié)合抗體，另一對來自針對另一表位而產(chǎn)生的抗體。這產(chǎn)生了多功能性價，也就是同時結(jié)合至少兩種不同表位的能力。結(jié)合分析描述本發(fā)明的抗體或抗體片段與本發(fā)明的抗原(MN蛋白)之間的結(jié)合強(qiáng)度(或親和力)的任何有用方法都可以使用。例如，可通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)動力學(xué)分析方法確定離解常數(shù)Kd(Kd=k2/kl=[抗體][抗原]/[抗體-抗原復(fù)合物])。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解的是，離解常數(shù)指示了抗體和抗原之間的結(jié)合強(qiáng)度，它是依據(jù)分開復(fù)合物的容易程度。如果需要高濃度的抗體和抗原來形成復(fù)合物，結(jié)合強(qiáng)度或結(jié)合親和力就低，產(chǎn)生較高的Kd。由此可見，Kd越小(表示為濃度單位，例如摩爾或納摩爾)，結(jié)合就越強(qiáng)。可通過各種已知技術(shù)和免疫分析法分析和/或測定親和力，包括例如酶聯(lián)免疫特異性分析(ELISA)、雙分子相互作用分析(BIA)(例如SjolanderandUrbaniczky,Anal.Chem.63:2338-2345,1991;Szabo,etal.,Curr.Opm.Struct.Biol.5:699-705，1995,每一篇都引入本文作為參考)以及用于定量抗體對表達(dá)MN的細(xì)胞的結(jié)合的熒光激活細(xì)胞分選(FACS)。BIA是用于實時分析生物特異性相互作用的技術(shù)，不標(biāo)記任何反應(yīng)物(例如BIAcoreTM)。BIAcore是基于確定生物分子之間，諸如本發(fā)明的抗體和MN蛋白抗原之間的實時反應(yīng)中的光學(xué)現(xiàn)象表面等離子共振(SPR)。關(guān)于BIAcore技術(shù)的參考文獻(xiàn)可進(jìn)一步在美國已公布申請No:2006/0223113、2006/0134800、2006/0094060、2006/0072115、2006/0019313、2006/0014232和2005/0199076中找到，每一篇都整體引入本文作為參考。特異性結(jié)合蛋白(例如MN)的本發(fā)明的抗體或結(jié)合抗原的抗體片段提供了檢測信號，例如，當(dāng)與免疫化學(xué)分析中使用的其它蛋白提供的檢測信號相比時，優(yōu)選至少大約高5倍、更優(yōu)選至少大約高10倍、以及還更優(yōu)選至少大約高20倍。同樣地，這些抗體也可用于從溶液中免疫沉淀蛋白(例如MN)?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的任何合適方法分析本發(fā)明的抗體和片段的免疫特異性結(jié)合(或者本文所定義的"特異性免疫反應(yīng)性"的結(jié)合)。涉及抗體和抗原的分析被稱為"免疫分析"，在本發(fā)明中可使用來表征本發(fā)明的抗體和抗原?？墒褂玫拿庖叻治?，包括但不限于竟?fàn)幮院头蔷範(fàn)幮苑治鱿到y(tǒng)，使用的技術(shù)僅舉幾個例子諸如蛋白印跡、放射免疫分析、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附分析)、"夾心"免疫分析、免疫沉淀分析、沉淀反應(yīng)、凝膠擴(kuò)散沉淀反應(yīng)、免疫擴(kuò)散分析、凝集分析、補體結(jié)合分析、免疫放射分析、熒光分析、蛋白A免疫分析。這些分析方法是本領(lǐng)域常規(guī)的禾口/>^口的(參見例》口Ausubeletal.,eds,1994,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.1,JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork,整體引入本文作為參考)，不需要過度實驗就可進(jìn)行。例證性的免疫分析在下文簡要描述(但是不打算用限定的方式)。免疫沉淀實驗方案通常包括在裂解緩沖液諸如補充了蛋白磷酸酶和/或蛋白酶抑制劑(例如EDTA、PMSF、抑酶肽、釩酸鈉)的RIPA緩沖液(1%NP-40或TritonX-IOO，1%脫氧膽酸鈉，0.1%SDS,0.15MNaCl,pH7.2的0.01M磷酸鈉，1%Trasylol)中裂解細(xì)胞群，將感興趣的抗體加入到細(xì)胞裂解物中，在4。C保溫一段時間(例如14小時)，將蛋白A和/或蛋白G瓊脂糖珠加入細(xì)胞裂解物中，在4。C保溫大約一小時或更久，在裂解緩沖液中漂洗珠，將珠重懸浮在SDS/樣品緩沖液中。感興趣的抗體免疫沉淀特定抗原的能力可通過例如蛋白印跡進(jìn)行分析。本領(lǐng)域技術(shù)人員將明白能夠修改以增加抗體對抗原的結(jié)合并降低背景的參數(shù)(例如預(yù)先清除帶有瓊脂糖珠的細(xì)胞裂解物)。關(guān)于免疫沉淀實驗方案的進(jìn)一步探討參見例如Ausubeletal.,eds,1994,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.1,JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork第10.16.1,引入本文作為參考。蛋白印跡分析通常包括制備蛋白樣品，在聚丙烯酰胺凝膠(例如8%、20%SDS-PAGE,根據(jù)抗原的分子量)中電泳蛋白樣品，將蛋白樣品從聚丙烯酰胺凝膠轉(zhuǎn)移到諸如硝酸纖維素、PVDF或尼龍的膜上，在封閉液(例如帶有3%BSA或脫脂奶的PBS)中封閉膜，在漂洗緩沖液(例如PBS-Tween20)中漂洗膜，用在封閉緩沖液中稀釋的一抗(感興趣的抗體)封閉膜，在漂洗緩沖液中漂洗膜；用在封閉緩沖液中稀釋的綴合到酶底物(例如辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)或放射性分子(例如32P或I25l)上的二抗(它識別一抗，例如抗人抗體)封閉膜，在漂洗緩沖液中漂洗膜，以及檢測抗原的存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員將明白能夠修改以增加檢測信號并降低背景噪聲的參數(shù)。關(guān)于蛋白印跡實驗方案的進(jìn)一步探討參見例如Ausubeletal.,eds,1994,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.1,JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork第10.8.1,引入本文作為參考。ELISA典型地包括制備抗原，用抗原包被96孔樣i量滴定一反的孔，將綴合到可檢測化合物諸如酶底物(例如辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)上的感興趣的抗體加入到孔中，保溫一段時間，以及沖企測抗原的存在。在ELISA中，感興趣的抗體不必綴合到可檢測化合物上；而是可將綴合到可檢測化合物上的二抗(它識別感興趣的抗體)加入到孔中。此外，不用抗原包被孔，而是可將抗體包被到孔中。在這種情況下，可在感興趣的抗原加入到包被的孔之后將綴合到可檢測化合物上的二抗加入。本領(lǐng)域技術(shù)人員將明白能夠修改以增加檢測信號的參數(shù)，以及將明白本領(lǐng)域已知的其它ELISA變型。關(guān)于ELISA的進(jìn)一步探討參見例如Ausubeletal.,eds,1994,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.1,JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork第11.2.1,引入本文作為參考。一方面，本發(fā)明包括許多具有MN結(jié)合特性的不同抗體，它們是通過篩選MorphoSysHuCALGOLDFab文庫而鑒別到的。在本發(fā)明的一方面，鑒別到了人抗體VH區(qū)三個CDR的氨基酸序列(SEQIDNO:57-85;圖2)。在本發(fā)明的另一實施方案中，鑒別了人MN抗體VL區(qū)的三個CDR的氨基酸序列(SEQIDNO:86-112，圖2)。本發(fā)明也涉及CDR、構(gòu)架和VH/VL對的組合。這些組合的例子示于圖3(SEQIDNO:113-132用于編碼核酸序列)和圖4(SEQIDNO:133-152用于蛋白序列)。具有MN結(jié)合性的抗體也示于圖4中。篩選方法的細(xì)節(jié)在本文所述的實施技術(shù)人員可預(yù)見的，并用于鑒別人MN抗體。本發(fā)明的抗體和/或結(jié)合抗原的抗體片段也可從表達(dá)抗體的任何細(xì)胞中純化得到，包括已經(jīng)轉(zhuǎn)染了編碼抗體的表達(dá)構(gòu)建體的宿主細(xì)胞?？蓪⑺拗骷?xì)胞培養(yǎng)在抗體可表達(dá)的條件下。可使用本領(lǐng)域公知的方法將純化的抗體和/或結(jié)合抗原的抗體片段與細(xì)胞中可能與抗體結(jié)合的其它細(xì)胞組分諸如某些蛋白、碳水化合物或脂分開。這些方法包括但不限于大小排阻層析、硫酸銨分級分離、離子交換層析、親和層析和制備凝膠電泳。制劑純度可通過本領(lǐng)域已知的任何手段進(jìn)行分析，諸如SDS-聚丙烯酰胺凝月交電泳。純化抗體的制劑可含有一種以上的抗體(例如具有MN結(jié)合和中和特性的抗體)。備選地，抗體的生產(chǎn)可使用化學(xué)方法來合成它的氨基酸序列或抗體序列的一部分(諸如CDR序列)，諸如通過使用固相技術(shù)指導(dǎo)肽合成(例如Merrifield,J.Am.Chem.Soc.85:2149-2154,1963;Roberge,etal.,Science269:202-204,1995,每一篇都引入本文作為參考)。蛋白合成可使用手動技術(shù)或通過自動化來進(jìn)4亍。自動合成可4吏用例如AppliedBiosystems431A肽合成儀(PerkinElmer)來實現(xiàn)。任選地，抗體片段可單一旦例如通過本文描述的任一方法，例如包括通過抗體生產(chǎn)(例如動物免疫方法)、單克隆生產(chǎn)的常規(guī)方法或者通過重組DNA手段鑒別到或獲得了根據(jù)本發(fā)明的抗體或片段，那么就可優(yōu)選進(jìn)行進(jìn)一步的步驟來表征和/或純化和/或修飾抗體。例如，制備免疫反應(yīng)性抗體片段或者制備所鑒別的期望抗體的純化的高滴度組合物，或者測試所鑒別抗體或其片段的免疫活性都是理想。本發(fā)明包括用于表征、純化或分析本發(fā)明抗體的任何已知的和合適的方法，可以預(yù)期的是，本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員將具有必需水平的技術(shù)知識和資源，例如技術(shù)手冊或論文，以實現(xiàn)對本發(fā)明抗體的任何進(jìn)一步的表征、純化和/或分析，而不需要過度實驗。在特定方面，本發(fā)明的抗體和/或抗體片段可從重組細(xì)胞培養(yǎng)物中回收并純化，其通過公知的方法包括但不限于蛋白A純化、碌iJ臾4妄或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陽離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水作用層析、親和層析、羥磷灰石層析以及凝集素層析。也可采用高效液相層析("HPLC")進(jìn)行純化。參見例如Colligan，CurrentProtocolsinImmunology或CurrentProtocolsinProteinScience,JohnWiley&Sons,NY,N.Y.,(19972001),例如第1、4、6、8、9、10章，每一篇都整體引入本文作為參考。在抗體情形下的術(shù)語"分離，，是指本領(lǐng)域純化抗體的任何已知方法。用于純化抗體的方法是本領(lǐng)域公知的，本發(fā)明包括技術(shù)人員已知的且不需要過度實驗的任何合適方法。例如層析法，諸如免疫-親和層析(固定化配體結(jié)合并捕獲感興趣的抗體)、親和層析、蛋白沉淀、離子交換層析、疏水相互作用層析、大小排阻層析，以及電泳，它們都可在技術(shù)文獻(xiàn)中找到描述，例如MethodsinEnzymology,第182巻，GuidetoProteinPurification,Eds.J.Abelson，M.Simon,AcademicPress,1stEdition,1990,將其引入本文作為參考。這樣，用于進(jìn)行這些純化步驟諸如層析步驟的合適材料都是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。這些方法都適合于純化根據(jù)如本文所述發(fā)明的任何抗體、抗原或其片段。某些實施方案可能需要從宿主細(xì)胞或其一部分中純化或分離所表達(dá)的蛋白或抗體或其片段。用于從轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞中分離重組蛋白的常規(guī)程序是本發(fā)明所打算包括的。這些方法包括例如分離感興趣的蛋白或片段，其通過首先從細(xì)胞沉淀或從細(xì)胞培養(yǎng)基中提取，接著通過鹽析，可使用一個或多個層析步驟，包括含水離子交換層析、大小排阻層析步驟，高效液相層析(HPLC),以及親和層析來分離重組蛋白或片段。用于蛋白純化的程序指南可在技術(shù)文獻(xiàn)中找到，包括例如MethodsinEnzymology,第182巻,GuidetoProteinPurification,Eds.J.Abelson,M.Simon，AcademicPress,1stEdition,1990,已經(jīng)引入作為參考?？赏ㄟ^制備性高效液相層析充分純化化學(xué)合成分子(參見例如Creighton,Proteins:StructuresandMolecularPrinciples,WHFreemanandCo.,NewYork,N.Y.,1983,引入本文作為參考)。合成多肽的組成可通過氨基酸分析或測序(例如^f吏用Edman降解)來確認(rèn)。多核苦酸另一方面，本發(fā)明涉及編碼本發(fā)明的抗體(例如4元MN的抗體)或結(jié)合抗原的抗體片段的多核苷酸。這些多核苷酸可用于例如生產(chǎn)大量抗體用于治療或診斷用途，或者生產(chǎn)抗體或片段的樣品用于本發(fā)明的免疫分析用途?？捎糜诰幋a例如抗體VH區(qū)中三種CDR每一種的多核苷酸由SEQIDNO:l-29所描述?？捎糜诰幋a例如抗體VL區(qū)中三種CDR每一種的多核苷酸由SEQIDNO:30-56所描述。編碼例如抗體的完整重鏈和輕鏈可變區(qū)的多核苷酸由SEDIDNO:l13-132所描述(圖3)。本發(fā)明的多核苷酸也可分離自宿主細(xì)胞，不存在根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中任何已知或合適方法的其它細(xì)胞組分諸如膜組分、蛋白和脂?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)核酸純化技術(shù)分離多核苷酸，或者使用擴(kuò)增技術(shù)諸如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)合成或通過使用自動合成儀合成多核苷酸。分離多核苷酸的方法是常規(guī)的，它們是本領(lǐng)域已知的?？梢允褂毛@得多核苷酸的任何這種技術(shù)來獲得編碼本發(fā)明抗體的分離的多核苷酸。例如，可使用限制酶和探針來分離編碼抗體的多核苦酸。可使用mRNA作為才莫板，以標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)制備編碼抗體的cDNA分子。然后，可以復(fù)制cDNA分子，使用的是本領(lǐng)域已知的和手冊諸如Sambrook,etal.,(MolecularCloning:ALaboratoryManual,(SecondEdition,ColdSpringHarborLaboratoryPress;ColdSpringHarbor,N.Y.;1989,Vol.1-3,引入本文作為參考)中披露的分子生物學(xué)技術(shù)?？梢允褂脭U(kuò)增技術(shù)諸如PCR來獲得多核苷酸的其它拷貝。備選地，可使用合成化學(xué)技術(shù)來合成編碼本發(fā)明抗體的多核苷酸。遺傳密碼的筒并性使得能夠合成備選核苷酸序列，它們將編碼具有例如VH-CDR1、VH-CDR2、VH隱CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3、完整VH或完整VL氨基酸序列(例如SEQIDNO:57-112和133-152)之一的抗體。為表達(dá)編碼抗體的多核苷酸，可將多核苷酸插入到含有轉(zhuǎn)錄和翻譯所插入編碼序列的必需元件的表達(dá)載體中?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法來構(gòu)建含有編碼抗體的序列以及合適的轉(zhuǎn)錄和翻譯控制元件的表達(dá)載體。這些方法包括體外重組DNA4支術(shù)、合成沖支術(shù)以及體內(nèi)遺傳重組。這些4支術(shù)描述于例如Sambrook,etal.(1989)和Ausubel,etal.,(CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,NewYork,41N.Y.,1995,引入本文作為參考)中。可利用各種表達(dá)載體/宿主系統(tǒng)來包含和表達(dá)編碼抗體的序列。它們包括但不限于微生物，諸如重組噬菌體、質(zhì)粒或粘粒DNA表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌；酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的酵母；感染了病毒表達(dá)載體(例如桿狀病毒)的昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)；病毒表達(dá)載體(例如花椰菜花葉病毒，CaMV;煙草花葉病毒，TMV);或者細(xì)菌表達(dá)載體(例如Ti或pBR322質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)，或者動物細(xì)胞系統(tǒng)?？刂圃蛘{(diào)節(jié)序列是載體的非翻譯區(qū)，即增強(qiáng)子、5'和3'非翻譯區(qū)，它們與宿主細(xì)胞蛋白相互作用以執(zhí)行轉(zhuǎn)錄和翻譯。這些元件在強(qiáng)度和特異性方面可以不同。根據(jù)所采用的載體系統(tǒng)和宿主，可以使用任何數(shù)量的合適轉(zhuǎn)錄和翻譯元件，包括組成型和誘導(dǎo)型啟動子。例如，當(dāng)在細(xì)菌系統(tǒng)中克隆時，可使用誘導(dǎo)型啟動子諸如BLUESCRIPT噬菌粒(Stratagene,LaJolla，Calif.)、pSPORTl質(zhì)粒(LifeTechnologies)的雜合lacZ啟動子等等。在昆蟲細(xì)胞中可使用桿狀病毒多角體蛋白?？蓪⒃醋灾参锛?xì)胞基因組(例如熱休克蛋白、RUBISCO和貯存蛋白基因)的啟動子或增強(qiáng)子或者源自植物病毒的啟動子或增強(qiáng)子(例如病毒啟動子或前導(dǎo)序列)克隆到載體中。在哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)中，可使用來自哺乳動物基因或哺乳動物病毒的啟動子，例如CMV啟動子。如果有必要產(chǎn)生包含編碼抗體的核苷酸序列的多個拷貝的細(xì)胞系，就可以使用帶有合適的選-棒標(biāo)記的基于SV40或EBV的載體。因此，本發(fā)明也涉及包括本發(fā)明分離核酸分子(例如SEQIDNO:113-132的重鏈和輕鏈可變區(qū))的重組載體，用重組載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，以及本發(fā)明重組抗體或其片段的生產(chǎn)和/或表達(dá)。表達(dá)構(gòu)建體可進(jìn)一步含有轉(zhuǎn)錄起始位點、終止位點以及位于轉(zhuǎn)錄區(qū)的用于翻譯的核糖體結(jié)合位點。由構(gòu)建體表達(dá)的成熟轉(zhuǎn)錄物的編碼部分可進(jìn)一步包括開頭的翻譯起始密碼子和恰當(dāng)?shù)匚挥诖gmRNA末端的終止密碼子(例如UAA、UGA或UAG),對于哺乳動物或真核細(xì)月包表達(dá)來說優(yōu)選UAA和UAG。表達(dá)載體也可包括至少一種選擇標(biāo)記。這些標(biāo)記包括但不限于哺乳動物細(xì)胞標(biāo)記，諸如氨甲喋呤(MTX)、二氫葉酸還原酶(DHFR)(參見例如美國專利No.4，399,216;4,634，665;4,656,134;4,956,288;5,149,636和5,179,017，每一篇都引入作為參考)、氨千青霉素、新霉素(G418)、霉酚酸或谷胺酰胺合成酶(GS)(參見例如美國專利No.5,122,464;5，770,359;5,827,739,每一篇都引入作為參考)，以及細(xì)菌細(xì)胞標(biāo)記，諸如四環(huán)素或氨千青霉素抗性基因。用于上述宿主細(xì)胞的合適培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件是本領(lǐng)域已知的。合適的載體對于技術(shù)人員來說將是顯而易見的。可以利用任何合適的已知方法來將本發(fā)明的DNA,例如含有SEQIDNO:l13-132的一種或多種抗體編碼序列的DNA載體引入到宿主細(xì)胞中。一些已知方法包括磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、陽離子脂介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)染或者其它已知方法。這些方法描述于現(xiàn)有才支術(shù)中，諸如Sambrook，etal.,(MolecularCloning:ALaboratoryManual,(SecondEdition,ColdSpringHarborLaboratoryPress;ColdSpringHarbor,N.Y.;1989)Vol.1-3,第14、16和18章)。分的核酸的多種表達(dá)系統(tǒng)方面是了如指掌的。物細(xì)胞。哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)經(jīng)常將是單層細(xì)胞的形式，盡管也可使用哺乳動物細(xì)胞懸浮液或生物反應(yīng)器?，F(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)發(fā)展了多種能夠表達(dá)完整糖基化蛋白的合適細(xì)胞系，包括CHO、CHO-S、COS-1(例如ATCCCRL1650)、COS-7(例如ATCCCRL-1651)、HEK293、BHK21(例如ATCCCRL-10)、CHO(例如ATCCCRL1610)和BSC-1(例如ATCCCRL-26)細(xì)胞系、Cos-7細(xì)胞、CHO纟田胞、hepG2細(xì)胞、P3X63Ag8.653、SP2/0-Agl4、293纟田胞、HeLa細(xì)胞等等，它們都很容易從例如美國典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。用于這些細(xì)胞的表達(dá)載體可包括一種或多種下列表達(dá)控制序列，例如4旦不限于復(fù)制起點；啟動子(例如晚期或早期SV40啟動子、CMV啟動子(例如美國專利No.5,168,062;5,385,839)、HSVtk啟動子、pgk(磷酸甘油激酶)啟動子、EF-1a啟動子(美國專利No.5,266,491)、免疫球蛋白啟動子；增強(qiáng)子，和/或加工信息位點諸如核糖體結(jié)合位點、RNA剪接位點、聚腺苷酸化位點(例如SV40大T抗原聚腺苷酸添加位點)，以及轉(zhuǎn)錄終止子序列。適用于生產(chǎn)本發(fā)明核酸或蛋白的其它細(xì)胞是已知的，和/或可從例如美國典型微生物保藏中心細(xì)胞系和雜交瘤目錄或者其它已知的或商業(yè)來源獲得。當(dāng)采用真核宿主細(xì)胞時，可將聚腺苷酸化序列或轉(zhuǎn)錄終止子序列引入載體中。終止子序列的例子是來自牛生長激素基因的聚腺苷酸化序列。也可包括用于轉(zhuǎn)錄物的精確剪接的序列。剪接序列的例子是來自SV40(Sprague,etal.,丄Virol.45:773781(1983))的VP1內(nèi)含子。此外，可將控制宿主細(xì)胞中的復(fù)制的基因序列？I入到載體中，如現(xiàn)有技術(shù)中已知的那樣。包括BergerandKimmel(GuidetoMolecularCloningTechniques,MethodsinEnzvmologv,Vol.152,AcademicPress,Inc.);Sambrook,etal.,(MolecularCloning:ALaboratoryManual,(SecondEdition,ColdSpringHarborLaboratoryPress;ColdSpringHarbor,N.Y.;1989)Vol.1-3);CurrentProtocolsinMolecularBiology,(F.M.Ausabeletal.[Eds.],CurrentProtocols,ajointventurebetweenGreenPublishingAssociates,Inc.andJohnWiley&Sons,Inc.(supplementedthrough2000》；Harlowetal.,(MonoclonalAntibodies:ALaboratoryManual-ColdSpringHarborLaboratoryPress(1988),Paul[Ed.]);FundamentalImmunologv、(LippincottWilliams&Wilkins(1998));以及Harlow,etal.,(UsingAntibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress(1998》，所有的都引入本文作為參考。在另一實施方案中，本發(fā)明也涉及用定量免疫分析測定患者樣品中的MN蛋白水平。為用在本發(fā)明的方法中，可對許多形式進(jìn)行適應(yīng)性改變。例如，患者樣品中MN蛋白的檢測和定量可通過酶聯(lián)免疫吸附分析、放射免疫分析、雙抗體夾心分析、凝集分析、熒光免疫分析、免疫電鏡和掃描顯樣i術(shù)進(jìn)行，以及本領(lǐng)域通常已知的其它分析法?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法對這些分析法中的MN蛋白定量進(jìn)行適應(yīng)性改變。在一個實施方案中，循環(huán)MN蛋白水平的連續(xù)變化可通過夾心分析法檢測和定量，其中使用常規(guī)技術(shù)將捕獲抗體固定在支持物表面上。合適的支持物包括例如合成的聚合物支持物，諸如聚丙烯、聚苯乙烯、取代的聚苯乙烯、聚丙烯酰胺(諸如聚酰胺和聚氯乙烯)，玻璃珠，瓊脂糖以及硝酸纖維素。可用在本發(fā)明方法中的ELISA夾心免疫分析法的例子是使用小鼠抗人MN單克隆抗體作為捕獲抗體，生物素化的山羊抗人MN多克隆抗44體作為檢測抗體。捕獲單克隆抗體被固定在微量滴定板的孔上。將稀釋的血清/血漿樣品或MN標(biāo)準(zhǔn)(重組野生型MN蛋白)在孔中保溫以4吏得MN抗原能夠被捕獲單克隆抗體結(jié)合。漂洗孔之后，將固定化的MN抗原暴露給生物素化的檢測抗體，之后再次漂洗孔。然后加入鏈霉親和素-辣根過氧化物酶綴合物。最后的漂洗之后，將TMB藍(lán)底物加入到孔中以檢測結(jié)合的過氧化物酶活性。通過加入2.5N碌^酸終止反應(yīng)，測定450nm的吸光度。樣品與MN標(biāo)準(zhǔn)的吸光度數(shù)值的關(guān)聯(lián)能夠確定血清或血漿中MN的以pg/ml為單位的定量值。適用于筌別MN蛋白的抗體可以以任何常規(guī)方式進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記的例子是辣根過氧化物酶，標(biāo)記抗體的方法的例子是通過使用生物素-鏈霉親和素復(fù)合物。適當(dāng)?shù)臅r候，本發(fā)明的免疫分析中使用的用作示蹤劑的抗體可以以任何方式進(jìn)行直接或間接標(biāo)記，從而產(chǎn)生可見的或能夠變得可見的信號?？蓹z測標(biāo)記物質(zhì)包括放射性核素，諸如3H、1251和mI;熒光劑，諸如異硫氰酸熒光素和其它熒光染料、藻膽蛋白、藻紅蛋白、稀土金屬螯合物、得克薩斯紅、丹磺酰和羅丹明；比色試劑(色原)；電子不透性材料，諸如膠體金；生物發(fā)光劑；化學(xué)發(fā)光劑；染料；酶，特別是諸如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖-6-磷酸脫氬酶、乙酰膽石咸酯酶、a-半乳糖苦酶、卩-半乳糖苦酶；輔酶；酶底物；酶輔因子；酶抑制劑；酶亞基；金屬離子；自由基；或者提供檢測或測定所形成免疫復(fù)合物之存在或量的手段的任何其它免疫活性物質(zhì)或惰性物質(zhì)。酶底物組合的例子是辣根過氧化物酶和四曱基聯(lián)苯胺(TMB),以及堿性磷酸酶和磷酸對硝基苯酯(pNPP)。根據(jù)本發(fā)明的其它檢測和定量系統(tǒng)產(chǎn)生發(fā)光信號，其是生物發(fā)光(BL)或化學(xué)發(fā)光(CL)。在化學(xué)發(fā)光(CL)或生物發(fā)光(BL)分析中，測定密度或總發(fā)光，將其與未知分析物的濃度進(jìn)行關(guān)聯(lián)。可使用光度計(光電倍增管作為檢測器)或電荷耦合器件定量測定光或者通過照相膠片或X-射線膠片定性測定光。使用這些分析法的主要優(yōu)點在于它們的簡單性和分析靈敏度，使得能夠檢測和/或定量極少量的分析物。例證性的發(fā)光標(biāo)記是吖啶鋪酯(acridmmmester)，丫啶鋪磺酰曱酰胺(acridiniumsulfonylcarboxamide),魯米i若，傘開j花內(nèi)酉旨(umbelliferone),異魯米諾書亍生物，發(fā)光蛋白諸如水母發(fā)光蛋白以及來自螢火蟲、海洋細(xì)菌、海熒屬和海鰓屬的熒光素酶。魯米諾可任選與增強(qiáng)劑分子一起使用，諸如4-碘苯酚或4-羥基肉桂酸。典型地，通過用氧化劑在堿性條件下處理來產(chǎn)生CL信號。另外的發(fā)光檢測系統(tǒng)是那些通過底物上的酶反應(yīng)產(chǎn)生信號(可檢測標(biāo)記)的系統(tǒng)。已經(jīng)發(fā)展了CL和BL檢測方案用于分析特別是堿性磷酸酶(AP)、葡萄糖氧化酶、葡萄糖-6-磷酸脫氳酶、辣根過氧化物酶(HRP)和黃噤吟氧化酶標(biāo)記。AP和HRP是兩種能夠通過一系列CL和BL反應(yīng)定量的酶標(biāo)記。例如，AP可與底物諸如金剛烷基-l,2-二氧雜環(huán)丁烷芳基石粦酸酯底物(例如AMPPD或CSPD;Kricka,L丄，"ChemiluminescenceandBioluminescence,Analysisby,"MolecularBiologyandBiotechnology:AComprehensiveDeskReference(ed.R.A.Meyers)(VCHPublishers;N.Y.,N.Y.;1995))—起使用；例如，4-甲氧基-4-(3-磷酸苯基)-螺-[1,2-二氧雜環(huán)丁乙烷-3,2，-金剛烷]的二鈉鹽，帶有或不帶增強(qiáng)劑分子諸如l-(三辛基轔甲基)-4-(三丁基轔曱基)-二氯苯。HRP可與底物諸如2，,3，，6，-三氟苯基-甲氧基-10-甲基9,10-二氬化吖啶-9-羧酸酯一起使用?？蛇m應(yīng)性修改CL和BL反應(yīng)，不但可用于分析酶，也可用于分析其它底物、輔因子、抑制劑、金屬離子等等。例如，魯米諾、螢火蟲熒光素酶和海洋細(xì)菌熒光素酶反應(yīng)是分別用于過氧^i物、ATP和NADPH的產(chǎn)生或消碑毛的指示劑反應(yīng)。它們可與涉及氧化酶、激酶和脫氬酶的其它反應(yīng)相偶聯(lián)，可用于測定偶聯(lián)反應(yīng)的任何組分(酶、底物、輔因子)。可檢測標(biāo)記可直接或間接地連接到本發(fā)明分析法中所使用的抗體上?？刹牌鬁y標(biāo)記的間接連4妻的例子是4吏用抗體和標(biāo)記之間的結(jié)合對或者使用信號放大系統(tǒng)?？捎糜趯⒖贵w連接到可檢測標(biāo)記上的結(jié)合對的例子是生物素/抗生物素蛋白，鏈霉親和素，或者抗生物素；親和素/抗親和素；曱狀腺素/結(jié)合曱狀腺素的球蛋白；抗原/抗體；抗體/抗抗體；碳水化合物/凝集素；半抗原/抗半抗原的抗體；染料和疏水分子/疏水蛋白結(jié)合位點；酶抑制劑，輔酶或輔因子/酶；多核酸/同源多核酸序列；焚光素/抗萸光素；二硝基苯酚/抗二硝基苯酚；維生素B12/內(nèi)因子；可的松，氫化可的松/氬化可的松結(jié)合蛋白；以及特定受體蛋白/膜結(jié)合的特定受體蛋白的配體。用于將標(biāo)記直接或間接連接到抗體的各種手段是現(xiàn)有技術(shù)中已知的。例如，標(biāo)記可共價或非共價結(jié)合。例證性的抗體綴合方法描述于46Avarmeas,etal.,Scan.J.Immunol.8(Suppl.7):7,1978);Bayer,etal.,Meth.Enzymol.62:308,1979;Chandler,etal.,J.Immunol.Meth.53:187,1982;EkekeandAbuknesha,J.SteroidBiochem.11:1579,1979;EngvallandPerlmann,J.Immunol.109:129,1972;Geoghegan,etal.,Immunol.Comm.7:1,1978;以及WilsonandNakane,ImmunofluorescenceandRelatedTechniques,Elsevier/NorthHollandBiomedicalPress;Amsterdam(1978),，每一篇都引入本文作為參考。根據(jù)標(biāo)記的性質(zhì)，可采用各種技術(shù)來檢測和定量標(biāo)記。對于熒光劑來說，大量熒光計是可獲得的。對于化學(xué)發(fā)光劑來說，光度計或膠片是可獲得的。對于酶來說，可以使用熒光計、光度計、分光光度計或者目測確定或測定焚光、化學(xué)發(fā)光或有色產(chǎn)物。具有吖啶鎩、苯并吖啶鎩或9,10-二氫化吖啶型雜環(huán)系統(tǒng)的各種類型的化學(xué)發(fā)光化合物是標(biāo)記的其它例子。吖啶鎩酯的例子包括具有雜環(huán)或環(huán)系統(tǒng)的那些化合物，其含有正氧化態(tài)的的雜原子包括諸如吖啶鎩、苯并[a]吖啶銻、苯并[b]吖啶f翁、苯并[c]吖啶鎩、苯并咪唑陽離子、喹啉爭翁、異喹啉鎩、喹嗪銻、環(huán)取代的喹啉銻、菲啶鎩以及喹喔啉鎩這樣的環(huán)系統(tǒng)。示蹤劑的制備可通過將吖啶銻或苯并吖啶鋪酯上存在的活性官能團(tuán)直接或間接連接到所選抗體上，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的那樣(參見例如Weeks,etal.,Clin.Chem.29(8):1474畫1479,1983)?；衔锏睦邮窃诜蓟h(huán)的對位或間位存在芳基環(huán)離去基團(tuán)和活性官能團(tuán)的吖啶鎩和苯并吖啶鎩酯(例如美國專利No.4,745,181和WO94/21823,引入本文作為參考)。使用方法術(shù)語"處理"包括任何的過程、作用、應(yīng)用、治療等等，其中受試者(或患者)，包括人，被給予了目的在于直接或間接改善患者狀況、或者減緩患者狀況或病癥進(jìn)展、或者改善所治療中的疾病或病癥的至少一種癥狀的醫(yī)學(xué)救助。術(shù)語"聯(lián)合治療"或"共治療"意指給予兩種或更多種治療劑來治療疾病、狀況和/或病癥。這種給藥包括以基本上同時的方式共同給予兩種或更多種治療劑，諸如具有固定比例活性組分的單個膠嚢或者用于每種抑制劑的多個分開的膠嚢。此外，這種給藥包括以連續(xù)方式使用每種類型的治療劑。兩種或更多種連續(xù)共同給予治療劑的給藥順序不受限制。用語"治療有效量"意指每種所給藥試劑的量將達(dá)到改善疾病、狀況和/或病癥的嚴(yán)重程度和/或其癥狀的目的，同時避免或最小化了與所給予治療性處理相關(guān)的不良副作用。術(shù)語"藥學(xué)可接受的"意指適合用于藥用產(chǎn)品中的對象物品。本發(fā)明的抗體預(yù)期作為治療劑是有價值的。因此，本發(fā)明的實施方案包括治療患者(包括哺乳動物)中各種狀況的方法，包括將含有治療目標(biāo)狀況有效量的本發(fā)明抗體給予所述患者。本發(fā)明的抗體可用于治療或預(yù)防與MN蛋白相關(guān)的疾病和/或行為。這些疾病和/或行為包4舌例如癌癥，諸如腎癌、食道癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌和肺癌。本發(fā)明也涉及改善病癥癥狀的方法，其中MN升高或者異常表達(dá)。這些病癥包括但不限于腎癌、食道癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌和肺癌(參見例如Liao,CancerRes.57:2827-2831,1997;Turner,Hum.Pathol.28:740-744,1997;Liao,etal.,Am.J.Pathol.145:598-609,1994;Saarnio,etal.,Am.J.Pathol.153:279-285,1998;Vermylen,etal.,Eur.Respir.J.14:806-811,1999。在發(fā)明的一個實施方案中，將治療有效劑量的本發(fā)明抗體給予具有MN升高的病癥的患者。本發(fā)明的抗體可單獨給藥或者與一種或多種另外的治療劑。聯(lián)合治療包括含有本發(fā)明抗體和一種或多種另外的治療劑的單個藥物劑量制劑的給藥，也包括本發(fā)明抗體與每種其本身為分開的藥物劑量制劑的另外的治療劑的給藥。例如，本發(fā)明抗體和治療劑可以以單個口服劑量組合物一起給予患者，或者每種試劑可以以分開的口服劑量制劑給藥。當(dāng)使用分開的劑量制劑時，本發(fā)明抗體和一種或多種另外的治療劑可以基本上同時給藥(例如同時給藥)或者分別在錯開的時間給藥(例如順序給藥)。試劑的給藥順序不被限制。例如，一方面，本發(fā)明的抗MN抗體或抗體片,殳與一種或多種抗癌劑一起共給藥以加強(qiáng)抗體/片段或抗癌劑二者之一或者兩者的效果，這可;波預(yù)期用于治療MN相關(guān)病癥諸如癌癥。也可使用這些聯(lián)合治療法來預(yù)防癌癥，防止癌癥復(fù)發(fā)，防止癌癥的傳播或轉(zhuǎn)移，或者減輕或改善癌癥相關(guān)癥狀。一種或多種抗癌劑可包括現(xiàn)有技術(shù)中任何已知的和適合的化合物，例如化學(xué)試劑，其它免疫治療劑，癌疫苗，抗血管生成試劑，細(xì)胞因子，激素治療，基因治療，以及放射治療?；瘜W(xué)試劑(或者"抗癌試劑"或"抗腫瘤試劑"或"癌治療劑")是指參與癌癥治療的任何分子或化合物。本發(fā)明化學(xué)試劑的例子包括但不限于阿糖胞苷，紫杉醇類(例如紫杉醇、多西他賽)，抗微管蛋白試劑(例如紫杉醇、多西他賽、埃博霉素B(epothiloneB)或其類似物)，大環(huán)內(nèi)酯(例如根霉素)，順鉑，卡鉑,P可審素，鬼臼p塞口分戒(tenoposide),米4乇蒽、酉昆，discodermolide,五力口苷(eleutherobine),2-氯脫氧腺苷，烷化劑(例如環(huán)磷酰胺，氮芥，噻替哌，苯丁酸氮芥，美法侖，卡氮芥(BSNU),羅氮芥(CCNU)，環(huán)磷酰胺，白消安，二溴甘露醇，鏈脲菌素，絲裂霉素C,順二氯二胺鉑(n)(DDP)順鉑，瘞替哌)，抗生素(例如更生霉素(以前的放線菌素)，博來霉素，光神霉素，氨茴霉素)，抗代謝物(例如氨甲喋呤，6-巰基噤呤，6-硫代鳥噤呤，阿糖胞苷，flav叩iridol,5-氟尿嘧啶，氟達(dá)拉濱，吉西他濱，達(dá)卡巴。秦，泰莫佐羅)，天冬酰胺酶，卡介苗(BacillusCalmetteandGuerin),白喉毒素，六甲蜜胺、羥基脲，LYSODREN.RTM.,核普類似物，植物堿(例如他克唑，紫杉醇，喜樹堿，拓樸替康，伊立替康(開普拓沙，CPT-ll),長春新堿，長春堿諸如長春花堿)，鬼臼毒素(包括衍生物諸如表鬼臼毒素、VP-16(依托泊苷)，VM-2^替尼泊苷))，細(xì)胞爭〉弛素B,秋水仙素，短桿菌肽D,溴化乙4走，吐根石咸(emetine),絲裂霉素，曱基芐肼(甲基芐肼)，氮芥，蒽環(huán)霉素(例如正定霉素(以前的道諾霉素)，阿霉素，阿霉素脂質(zhì)體)，二羥基蒽環(huán)二酮，米托恩醌，光神霉素，放線菌素D,普魯卡因，丁卡因，利多卡因，普萘洛爾，噤呤霉素，抗有絲分裂劑，相思豆毒蛋白，蓖麻毒蛋白A,假單胞菌外毒素，神經(jīng)生長因子，血小板衍生生長因子，組織纖溶酶原激活物，阿地白介素(aldesleukin),allutamine,阿那曲唾，比卡魯胺，biaomycin，白消安,卡i咅4也濱，卡4白,chlorabusil,克4立屈5賓,cylarabine,daclinomycin,站,莫司汀(estramusine)，floxuridhe,吉西^也濱，gosereine,去曱柔毛霉素，itosfamide,乙酸亮丙立得，左旋咪唑(levamisole),羅氮芥，氮芥，醋酸曱孕酮，巰基噤呤，巰乙磺酸鈉(美斯那(mesna)),mitolanc,培加帕酵,pentoslatin,picamycin,riuxlmab,campath隱l,straplozocin,石危鳥噤呤，維生素A酸(tretmoin)，長春瑞賓，或者它們的任意片段、家族成員或衍生物，包括它們的藥學(xué)可接受的鹽。包括一種或多種化學(xué)試劑(例如FLAG、CHOP)的組合物也是本發(fā)明所預(yù)期的。FLAG包括氟達(dá)拉濱，阿糖胞苷(Ara-C)和G-CSF。CHOP包括環(huán)磷酰胺，長春新堿，阿霉素和強(qiáng)的松?；瘜W(xué)試劑可以是抗血管生成劑，例如制管張素、貝伐單抗(阿瓦斯丁)、索拉非尼(多吉美⑧)、桿抑素、癌抑素、乳腺絲抑蛋白、抗VEGF抗體或肽、抗胎盤生長因子抗體或肽、抗Flk-l抗體、抗Flt-l抗體或肽、層粘連蛋白肽、纖連蛋白肽、纖溶酶原激活物抑制劑、組織金屬蛋白酶抑制劑、干擾素、白介素12、IP-IO、Gro-卩、血小板反應(yīng)蛋白、2-曱氧基雌二醇、增殖蛋白相關(guān)蛋白、酰胺基三唑、CM101、馬馬司他、戊聚糖多硫酸鹽、血管生成素2、干擾素-a、除莠霉素A、PNU145156E、16K促乳素片段、羅喹美克、沙立度胺、己酮可可堿、染料木素、TNP-470、內(nèi)皮抑制素、紫杉醇、阿卡丁、西多福韋、長春新堿、博來霉素、AGM-1470、血小板第四因子或者米諾環(huán)素。不受理論所束縛，抗血管生成劑的共給藥可有利地導(dǎo)致腫瘤中MN表達(dá)的增加，從而使得腫瘤對本發(fā)明的抗體和抗體綴合物更敏感。一方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍100到1000mg/m"周期的吉西他濱。一個實施方案中，所述化學(xué)試劑是劑量范圍200到4000mg/m"周期的達(dá)卡巴溱。另一方面，所述劑量范圍是700到1000mg/m"周期。還有另一方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍25到50mg/m"周期的氟達(dá)拉濱。另一方面，所述試劑是劑量范圍200到2000mg/m"周期的阿糖胞苷(Ara-C)。還有另一方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍1.5到7.5mg/kg/周期的多西他賽。另一方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍5到15mg/kg/周期的紫杉醇。進(jìn)一步的方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍5到20mg/kg/周期的順鉑。還有另一方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍5到20mg/kg/周期的5-氟尿嘧啶。另一方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍2到8mg/kg/周期的阿霉素。另一方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍40到160mg/kg/周期的表鬼臼毒素。另一方面，所述化學(xué)試劑是劑量范圍50到200mg/kg/周期的環(huán)磷酰胺。進(jìn)一步的方面，所述試劑是劑量范圍50到150mg/m"周期的伊立替康。進(jìn)一步的方面，所述試劑是劑量范圍3.7到18.5mg/m"周期的長春花堿。另一方面，所述試劑是劑量范圍0.7到2mg/m"周期的長春新堿。一方面，所述試劑是劑量范圍3.3到1000mg/m"周期的氨曱喋呤。另一方面，本發(fā)明的抗MN抗體和/或抗體片段是與一種或多種免疫治療劑組合給藥的，諸如抗體或免疫調(diào)節(jié)劑，包括但不限于赫賽?、?、50Retuxan⑧、OvaRex、Panorex、BEC2、IMC陽C225、Vitaxin、CampathI/H、SmartMI95、LymphoCide、SmartIDlO,以及Oncolym、利妥?，?、利妥希單抗、gemtuzumab或司徒曼布。本發(fā)明也包括給予本發(fā)明的抗MN抗體和/或抗體片段與一種或多種抗血管生成劑，包括^旦不限于血管抑素、沙立度胺、kringle5、內(nèi)皮抑制素、Serpin(絲氨酸蛋白酶抑制劑)、抗凝血酶、纖連蛋白的29kDaN末端蛋白水解片段和40kDaC末端蛋白水解片段、促乳素的16kDa蛋白水解片段、血小板第四因子的7.8kDa蛋白水解片段、相應(yīng)于血小板第四因子片段(Maioneetal.,1990,CancerRes.51:2077)的卩-氨基酸肽、相應(yīng)于膠原I片段(Tolmaetal.,1993,J.CellBiol.122:497)的14個氨基酸的肽、相應(yīng)于血小板反應(yīng)蛋白蛋白I片段(Tolsmaetal.,1993,J.CellBiol.122:497)的19個氨基酸的肽、相應(yīng)于SPARC片段(Sageetal.,1995,J.Cell.Biochem.57:1329-)的20個氨基酸的肽，或者它們的任意片l史、家族成員或衍生物，包括它們的藥學(xué)可接受的鹽。抑制血管生成并相應(yīng)于昆布氨酸、纖連蛋白、前膠原和EGF的片段的其它肽也已經(jīng)被描述(參見綜述Cao,1998,Prog.Mol.Subcell.Biol.20:161)。已經(jīng)證實阻斷能夠結(jié)合RGD蛋白(也就是具有肽基序Arg-Gly-Asp)的某些整聯(lián)蛋白的單克隆抗體和環(huán)五肽具有抗血管生成活性(Brooksetal.,1994,Science264:569;Hammesetal.,1996,NatureMedicine2:529)。此外，拮抗劑對尿激酶纖溶酶原激活物受體的抑制能夠抑制血管生成、胂瘤生長和轉(zhuǎn)移(Mmetal.,1996,CancerRes.56:2428-33;Crowleyetal.,1993,ProcNatlAcad.Sci.USA90:5021)。這些抗血管生成劑的用途也是本發(fā)明所預(yù)期的。另一方面，本發(fā)明的抗MN抗體和/或抗體片段是聯(lián)合放射治療方案來給藥的。本發(fā)明的抗MN抗體和/或抗體片段也可與一種或多種細(xì)胞因子聯(lián):合給藥，包括但不限于淋巴因子、腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子樣細(xì)胞因子、淋巴毒素-a、淋巴毒素-P、干擾素-|3、巨噬細(xì)胞炎性蛋白、粒細(xì)胞單核細(xì)胞集落刺激因子、白介素(包括但不限于白介素-1、白介素-2、白介素-6、白介素-12、白介素-15、白介素-18)、OX40、CD27、CD30、CD40或CD137配體、Fas-Pas配體、4-lBBL、內(nèi)皮單核細(xì)胞活化蛋白或者它們的任意片段、家族成員或衍生物，包括它們的藥學(xué)可接受的鹽。51本發(fā)明的抗MN抗體和/或抗體片段也可與癌疫苗聯(lián)合給藥，其例子包括但不限于自體細(xì)胞或組織、非自體細(xì)胞或組織、癌胚抗原、a-甲胎蛋白、人絨毛膜促性腺激素、BCG活疫苗、黑素細(xì)胞系蛋白(例如gp100、MART-l/MelanA、TRP-1(gp75)、酪氨酸酶、廣泛共有的肺瘤相關(guān)包括肺瘤特異性的抗原(例如BAGE、GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-3、N-乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶-V、p15)、腫瘤相關(guān)的突變抗原(P-聯(lián)蛋白、MUM-1、CDK4)、非黑素瘤抗原(例如HER-2/neu(乳腺和卵巢癌)、人乳頭狀瘤病毒-E6、E7(宮頸癌)、MUC-1(乳腺、卵巢和胰腺癌)。對于由T細(xì)月包所識別的人肺瘤抗原，通常參見RobbinsandKawakami,1996,Curr.Opin.Immunol.8:628。癌疫苗可以是純化的制劑或者可以不是純化的制劑。在另一實施方案中，本發(fā)明的抗MN抗體和/或抗體片段是與激素處理一起使用的。激素治療處理包括激素激動劑、激素拮抗劑(例如氟利坦、他莫昔芬、乙酸亮丙立得鹽(LUPRON)、LH-RH拮抗劑)、激素生物合成和加工的抑制劑、類固醇(例如地塞米松、類維生素A、倍他米松、氫化可的松、可的松、強(qiáng)的松、去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、鹽皮質(zhì)激素、雌激素、睪酮、孕酮)、抗孕激素物質(zhì)(例如米菲司酮、奧那斯酮)、和抗雄激素物質(zhì)(例如甲撐氯地孕酮)。本發(fā)明的抗MN抗體和/或片I殳可與抗MDR(多藥物抗性)表型試劑一起使用，例如共同給藥。許多人類癌癥都固有地表達(dá)或自發(fā)地發(fā)展出對幾種類型抗癌藥物同時產(chǎn)生的抗性，盡管每種藥物類型具有不同的結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制。這種現(xiàn)象可在培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞中進(jìn)行才莫擬，它通常被稱為多藥物抗性("MDR")或者多藥物抗性表型。MDR表型對病人癌癥的成功化學(xué)治療處理是明顯的障礙。惡性腫瘤對多種化學(xué)治療劑的抗性是治療失敗的主要原因(Wittesetal.,CancerTreat.Rep.70:105(1986);Bradley,G.etal.,Biochim.Biophys.Acta948:87(1988);Griswald,D.P.etal.,CancerTreat.Rep.65(S2):51(1981);Osteen,R.T.(ed.),CancerManual,(1990))。最初對細(xì)胞毒性藥物敏感的胂瘤經(jīng)常復(fù)發(fā)或者變得對多種化學(xué)治療試劑來i兌是難治的(Riordanetal.，Pharmacol.Ther.28:51(1985);Gottesmanetal.,TrendsPharmacol.Sci.9:54(1988);Moscowetal.,J.Natl.CancerInst.80:14(1988);Croop,J.M.etal.,J.Clm.Invest.81:1303(1988))。從腫瘤獲得的并且在選擇性細(xì)胞毒性藥物存在下培養(yǎng)的細(xì)胞或組織可能對那種類型的其它藥物以及其它類型的藥物，包括但不限于蒽環(huán)類、長春堿和表鬼臼毒素產(chǎn)生交叉耐藥性(Riordanetal.,Pharmacol.Ther.28:51(1985);Gottesmanetal.,J.Biol.Chem.263:12163(1988))。這樣，對單個藥物的獲得性抗性就同時產(chǎn)生了對結(jié)構(gòu)上和功能上均不相關(guān)的不同組藥物的抗性。這種抗性對于實體形式肺瘤和液體形式腫瘤(例如基于血液或淋巴的癌癥)來說都可能是問題。哺乳動物細(xì)胞中多藥物抗性的一個主要機(jī)制涉及170kDa質(zhì)膜糖蛋白泵系統(tǒng)表達(dá)的增加(Jurankaetal.,FASEBJ3:2583(1989);Bradley,G.etal.，Blochem.Biophys.Acta948:87(1988》。該泵系統(tǒng)有時也被稱為多藥物轉(zhuǎn)運蛋白，編碼該泵系統(tǒng)的基因已經(jīng)從培養(yǎng)的人細(xì)胞中克隆到了，通常稱為m^/。該基因在幾種類型的正常組織中表達(dá)，但是還沒有鑒別到轉(zhuǎn)運用于在這些組織中的mdrl基因產(chǎn)物的生理底物。MDR1產(chǎn)物是ABC轉(zhuǎn)運蛋白超家族的成員，這是一組具有能量依賴的輸出功能的蛋白。mdrl基因的蛋白產(chǎn)物通常稱為P-糖蛋白("P-170","P-gp"),是170kDa的跨質(zhì)膜蛋白，構(gòu)成上述能量依賴的外排泵。P-gp在細(xì)胞表面的表達(dá)足以使細(xì)胞抗多種細(xì)胞毒性藥物，包括許多抗癌試劑。P-gp介導(dǎo)的MDR似乎是不同類型胂瘤的肺瘤抗性的重要臨床組分，mdW基因表達(dá)與不同類型癌癥對一化療的抗性相關(guān)聯(lián)。基因的核苦酸序列(Gros,P.etal.,Cell47:371(1986);Chen,C.etal.,Cell47:381(1986))表明它編碼與P-糖蛋白相似或相同的多肽，它們是相似于細(xì)菌轉(zhuǎn)運蛋白的高度保守類型膜蛋白的成員，參與正常的生理轉(zhuǎn)運過程。/m/r/基因的序列分析表明Pgp由分布在兩個同源性(43%同一性)部分之間的1280個氨基酸組成。分子的每一半具有六個疏水跨膜結(jié)構(gòu)域，每一個都在大胞質(zhì)環(huán)中具有ATP結(jié)合位點。分子僅有大約8%是在胞外，碳水化合物部分(大約30kDa)結(jié)合到該胞外區(qū)的位點上。因此，將會理解的是，具有"多藥物抗性"或"抗多藥物"表型的哺乳動物細(xì)胞是通過它將許多細(xì)胞毒性物質(zhì)(例如化療藥物)從胞內(nèi)環(huán)境掩蔽、輸出或排出的能力來表征的。細(xì)胞獲得這種表型可能是作為選擇壓力的結(jié)果，該選擇壓力是通過暴露給單個化療藥物(選擇毒素)而被施53加的。備選地，細(xì)胞可能在毒素暴露之前就顯示出表型，因為毒性物質(zhì)的輸出可能涉及與細(xì)胞分泌產(chǎn)物、代謝物等等的正常輸出相同的機(jī)制。多藥物抗性不同于對選擇毒素的簡單獲得性抗性，因為細(xì)胞獲得了輸出另外的細(xì)胞毒素(其它化療藥物)的能力，這些另外的細(xì)胞毒素是以前并未暴露給細(xì)胞的。例如，Mirskietal.(1987),47CancerRes.2594-2598描述了多藥物抗性細(xì)胞群的分離，其通過培養(yǎng)源自人小細(xì)胞肺癌的H69細(xì)胞系，存在阿霉素(羥基正定霉素)作為選擇毒素。發(fā)現(xiàn)存活細(xì)胞抵抗了蒽環(huán)類似物(例如道諾霉素、表阿霉素、美洛格瑞和米托恩醌)、異哺唑醋酸、依托泊普、短桿菌肽D、秋水仙素和長春花來源的生物堿(長春新堿和長春花堿)以及阿霉素的細(xì)胞毒性功效?？蓱?yīng)用類似的選擇培養(yǎng)技術(shù)來產(chǎn)生另外的多藥物抗性細(xì)胞群。因此，本發(fā)明的藥物組合物可另外包括作用是抑制MDR表型和/或MDR表型相關(guān)狀況的化合物。這些組合物可包括任何現(xiàn)有技術(shù)中已知的MDR抑制劑化合物，諸如特異于MDR組分的抗體(例如抗MDR轉(zhuǎn)運蛋白的抗體)或者M(jìn)DR轉(zhuǎn)運蛋白的小分子抑制劑，特別地包括他莫昔芬、維拉帕米和環(huán)孢菌素A,它們是已知的逆轉(zhuǎn)或抑制多藥物抗性的試劑(Lavieetal.J.Biol.Chem.271:19530-10536,1996,引入本文作為參考)。這些化合物可在美國專利No.5,773,280、6,225,325和5,403,574中找到，每一篇都引入本文作為參考。這些MDR抑制劑化合物可與本發(fā)明的抗MN抗體和/或片段共同給藥，用于各種目的，包括在檢測到MDR表型后逆轉(zhuǎn)MDR表型以輔助或增強(qiáng)化療處理。MDR抑制劑，例如他莫昔芬、維拉帕米或環(huán)孢菌素A,可以與本發(fā)明的化合物一起使用以輔助檢測MDR表型。根據(jù)這個方面，MDR抑制劑能夠增強(qiáng)本發(fā)明化合物在MDR癌細(xì)胞中的攝取和累積，因為MDR轉(zhuǎn)運系統(tǒng)轉(zhuǎn)運或者"泵出"與底物結(jié)構(gòu)域相像的化合物的能力在MDR抑制劑存在時將被降低。在另一個實施方案中，本發(fā)明的抗MN抗體和/或抗體片,殳在癌癥治療中與基因治療程序一起使用。用分泌白介素-2的重組細(xì)胞進(jìn)行的基因治療可以與本發(fā)明的抗體一起給藥以預(yù)防或治療癌癥，特別是乳腺癌(參見例如Deshmukhetal.,2001,J.Neurosurg.94:287)。為評估特定抗體的治療學(xué)上有用的治療癌癥的能力，作為例子，抗體可以在小鼠異種移植腫瘤模型中進(jìn)行體內(nèi)測試。如果需要，可在治療性評估之前將MN抗體轉(zhuǎn)變成IgGl抗體。這種轉(zhuǎn)變描述于實施例5中，治療才莫型的例子詳細(xì)描述于實施例9中。也可4吏用抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)月包毒性分析法來測試抗體活性，如實施例12中所述的。本發(fā)明也提供了診斷方法，用這些方法就可在患者樣品或生物樣品中才全測到MN。這些診斷方法可用于例如診斷其中的MN升高的那些病癥。這些病癥包括但不限于腎癌、食道癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌和肺癌。當(dāng)用于診斷時，；險測到來自患者樣品的抗體-MN復(fù)合物的量比正常樣品的復(fù)合物的量更大時，就確定患者可能患有病癥。在實施例11中描述了用于檢測癌癥組織中的MN的免疫組織化學(xué)方法。在本發(fā)明的另一方面，提供了用于檢測和/或觀察MN相關(guān)癌癥的方法，所述癌癥具有異常表達(dá)量的MN蛋白。這些方法可包括，將MN相關(guān)癌細(xì)胞與本發(fā)明的抗MN抗體或片段接觸，使用醫(yī)學(xué)成像設(shè)備成像，其中抗MN抗體或片段包括能夠被醫(yī)學(xué)成像設(shè)備檢測到的標(biāo)記結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明的片企測方法可在體外進(jìn)4亍。癌細(xì)胞或組織可以來自任何合適來源，例如活組織4企測或者細(xì)胞或組織培養(yǎng)物。用于獲得活組織檢測物以及維持和/或增殖所取下組織和/或細(xì)胞的方法將是技術(shù)人員所公知的。多藥物抗性的體外檢測可以具有各種應(yīng)用，例如在治療之前、期間或之后確定特定患者的癌癥是否已經(jīng)發(fā)展出多藥物抗性。用于檢測本發(fā)明化合物的成像形式的類型將取決于本發(fā)明化合物中所使用的特定標(biāo)記結(jié)構(gòu)域。例如，如果標(biāo)記結(jié)構(gòu)域包括釓螫合物，那么典型地可以使用MRI來檢測本發(fā)明的成像劑。如果使用放射性核素螯合物作為標(biāo)"^己結(jié)構(gòu)域，就可以4吏用核成^^方法(例如PET)。如果4吏用基于熒光的標(biāo)記結(jié)構(gòu)域，可以使用光學(xué)成像系統(tǒng)，例如FACS系統(tǒng)或熒光顯微鏡或萸光自動平板讀數(shù)儀。選擇用于本發(fā)明體外檢測方法的合適成像設(shè)備完全在技術(shù)人員的知識范圍之內(nèi)。此外，用于本發(fā)明體外檢測方法中的成像劑的量將由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來確定，可依賴于MDR表型的存在程度，例如MDR轉(zhuǎn)運系統(tǒng)(例如P-糖蛋白)的表達(dá)水平。技術(shù)人員不需要過度實驗就能夠確定多大量的新顯象化合物對于檢測到MDR表型來說才是足夠的，也就是可檢測的足夠的量。所使用成像形式的類型不限于任何特定類型，可包括例如MRI、核成像(例如PET或SPECT)、光學(xué)成像、聲波發(fā)光成像或光聲成像(超聲)。技術(shù)人員將明白，本發(fā)明成像化合物的特定標(biāo)記結(jié)構(gòu)域應(yīng)該與所使用的特定成像設(shè)備相兼容。在優(yōu)選實施方案中，檢測方法利用了抗MN抗體或其片段以及能夠被MRI檢測到的合適標(biāo)記。例如，本發(fā)明的抗體或片段可包括作為MR造影劑的標(biāo)記結(jié)構(gòu)域，例如順磁性金屬螯合物或螯合物或任何的本文所描述的那些試劑。成像劑也可包括能被核成像形式諸如正電子發(fā)射成像(PET)或單光子發(fā)射計算機(jī)成像(SPECT)成像或檢測的放射性核素標(biāo)記結(jié)構(gòu)域，例如放射性核素，諸如，Au、72As、141Ce、67Cu、6GCu、52Fe、67Ga、68Ga、51Gr、mIn、177Lu、51Mn、2°3Pb、188Re、97Ru、47Sc、177mSn、94mTc、167Tm和9QY。放射性核素可通過合適的螯合劑或通過多種螯合劑諸如HYNIC、DRPA、EDTA、DOTA、TETA、DTPA和BAT進(jìn)行螯合。螯合劑與金屬配位的條件描述于例如Gansowetal.,美國專利No.4,831,175、4,454,106和4,472,509,每一篇都引入本文作為參考。9^Tc(锝-99m)對于治療和診斷應(yīng)用來說是特別有吸引力的，因為它是核醫(yī)學(xué)部門一般都可得到的，它也不貴，給予患者的是最低放射劑量，并且具有理想的核成像性質(zhì)?？蓪⒒颊邩悠放c本發(fā)明的抗體接觸，然后可分析患者樣品中抗體-MN復(fù)合物的存在。如上所述，抗體可包括可檢測標(biāo)記，諸如熒光、放射性核素、化學(xué)發(fā)光或酶標(biāo)記，諸如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶或熒光素酶。、任選地，可將抗體結(jié)合到固相支持物上，它可以使得分析能夠適應(yīng)自動化。合適的固相支持物包括但不限于玻璃或塑料片、組織培養(yǎng)板、微量滴定孔、管子、硅片或者微粒諸如小珠(包括但不限于膠乳、聚苯乙烯或玻璃珠)。可以使用本領(lǐng)域已知的任何方法將抗體結(jié)合到固相支持物上，包括使用共價和非共價鍵、被動吸附或者結(jié)合到抗體和固相支持物上的結(jié)合對?？梢栽谶m于包含反應(yīng)物的任何容器中完成MN和抗體的結(jié)合。這些容器的例子包括微量滴定板、試管和微量離心管。藥物纟且合物和劑量可以以包括藥學(xué)可接受載體的藥物組合物的形式提供本文所述的抗體。藥學(xué)可接受的載體可以是不致熱的。組合物可以單獨給藥或者與至少一種其它試劑一起給藥，諸如穩(wěn)定化合物，可以以任何無菌的、生物相容的藥學(xué)載體的形式給藥，包括但不限于鹽水、緩沖鹽水、右旋糖和水?？梢允褂枚喾N水性載體，包括但不限于鹽水、甘氨酸等等。這些溶液是無菌的，通常不含顆粒物質(zhì)。這些溶液可通過常規(guī)的公知滅菌技術(shù)(例如過濾)進(jìn)行滅菌。通常，用語"藥學(xué)可接受的載體"是本領(lǐng)域所公認(rèn)的，包括藥學(xué)可接受的材料、組合物或運載體，適合將本發(fā)明的化合物給予哺乳動物。載體包括液態(tài)或固態(tài)填料、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料，參與將測試試劑從一種器官或身體部分?jǐn)y帶或運送到另一器官或身體部分。每種載體都必須是"可接受的"，意思是與制劑的其它成分相容，對患者無害。能夠用作藥學(xué)可接受載體的材料的一些例子包括糖，諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，諸如羧曱基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；粉狀黃芪膠；麥芽；明膠；滑石粉；賦形劑，諸如可可脂和栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄^覽油、玉米油和大豆油；#唐醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，諸如氪氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無熱原的水；等滲鹽水；林格液；乙醇；磷酸鹽緩沖液；以及藥學(xué)制劑中所使用的其它無毒的相容性物質(zhì)。本發(fā)明的抗體組合物中也可存在潤濕劑、乳化劑和潤滑劑，諸如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、脫才莫劑、涂布劑、甜味劑、調(diào)，朱劑和加香劑、防腐劑和抗氧^fc劑。藥學(xué)可接受的抗氧化劑的例子包括水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氬鈉、亞硫酸鈉等等；油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BTH)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、a-生育酚等等；以及金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等等。組合物可含有接近生理條件所需的藥學(xué)可接受的輔料，諸如pH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑等等。根據(jù)所選擇的特定給藥模式，這種藥物制劑中的本發(fā)明抗體的濃度可以大范圍地變化，主要可基于流體體積、粘度、等進(jìn)行選擇。如果希望，可以在藥物組合物中包括多于一種類型的抗體(例如具有不同Kd的抗體用于MN結(jié)合)。組合物可單獨給予患者，或者與其它試劑、藥物或激素一起給藥。57除了活性成分之外，這些藥物組合物可包含合適的藥學(xué)可接受載體，包括賦形劑和輔料，它們幫助將活性化合物，加工為可在藥學(xué)上使用的制劑。本發(fā)明的藥物組合物可通過任何數(shù)量的途徑進(jìn)行給藥，包括但不限于口服、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、腦室內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、腸外、局部、舌下或直腸方式。本發(fā)明的組合物另外包括合適的免疫載體，諸如蛋白、多肽或肽，諸如白蛋白、血藍(lán)蛋白、甲狀腺球蛋白及其衍生物，特別是牛血清白蛋白(BSA)和鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH),多糖，碳水化合物，聚合物和固相。其它蛋白衍生的或非蛋白衍生的物質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。在涉及疫苗，例如帶有本發(fā)明抗體的癌疫苗的方面，本發(fā)明的組合物可與或不與佐劑一起給藥?？稍跊]有佐劑時進(jìn)行給藥以避免任何佐劑誘導(dǎo)的毒性。本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員，例如專攻癌癥的醫(yī)師，將理解并明白如何確定應(yīng)不應(yīng)該^吏用佐劑，這可能取決于患者的病史、家族數(shù)據(jù)、毒性數(shù)據(jù)、變態(tài)反應(yīng)相關(guān)的測試結(jié)果等等。在使用佐劑的實施方案中，有利的是，佐劑促進(jìn)了保護(hù)性抗體，諸如保護(hù)性IgG抗體的形成。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何合適佐劑都一皮本發(fā)明所包括，4艮容易使其適用于本發(fā)明。用于免疫動物用途的合適佐劑包括但不限于氫氧化鋁、氫氧化鋁、皂苷及其純化成分QmtA、完全弗氏佐劑(CFA)和不完全弗氏佐劑(IFA)。已經(jīng)證明硫酸葡聚糖是抗葡萄球菌細(xì)胞表面抗原的IgG2抗體的有效刺激物，也適合作為佐劑。技術(shù)人員將理解的是，一些佐劑可能更優(yōu)選用于獸醫(yī)應(yīng)用，而其它佐劑將優(yōu)選用于人體，在將化合物給予人體之前，技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)考慮佐劑毒性。適用于腸胃外的、皮下的、靜脈內(nèi)的、肌肉內(nèi)的制劑等等；合適的藥學(xué)載體；以及用于制劑和給藥的技術(shù)可通過本領(lǐng)域公知的任何方法制備(參見例如Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCo.,Easton,Pa.,20thedition,2000)。用于口服的本發(fā)明組合物的液體劑型包括藥學(xué)可接受的乳劑、微乳劑、溶液、懸浮液、糖漿以及酏劑。除了活性成分，液體劑型可包含本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑，溶解試劑和乳化劑，如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯曱酸千酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特別是棉籽油、花生油、玉米油、種子油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氪吹喃醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯，以及它們的混合物。本文所使用的用語"腸胃外的給藥"或"腸胃外給予"意指除了腸內(nèi)和局部給藥的給藥模式，通常通過注射，包括但不限于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、嚢內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、嚢下、蟲朱網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)和胸骨內(nèi)注射和注入。治療有效劑量的確定完全是在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)的。治療有效劑量是指可用于有效治療疾病(例如癌癥)的抗體的量，與沒有治療有效劑量的療效相比是明顯的。治療有效劑量最初可在動物模型(例如大鼠、小鼠、兔、狗或豬)中進(jìn)行評估。動物模型也可用于確定合適的濃度范圍和給藥途徑。然后可使用這些信息來確定用于人體給藥的有用劑量和途徑?？贵w的療效和毒性(例如ED5()——在50%群體中治療有效的劑量和LD5。——對50%群體致死的劑量)可在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游镏型ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)程序來確定。毒性與療效的劑量比就是治療指數(shù)，它可表示為LD5o/ED5o比。從動物研究獲得的數(shù)據(jù)可用于制定用于人體使用的劑量范圍。這些組合物中包含的劑量可以在循環(huán)濃度范圍之內(nèi)，其包括幾乎沒有毒性或沒有毒性的ED50。劑量在這個范圍之內(nèi)變化，取決于所使用的劑型、患者的敏感性以及給藥途徑。確切的劑量可由專業(yè)人員根據(jù)需要治療的患者相關(guān)的因素來確定。可調(diào)整劑量和給藥以提供足夠水平的抗體或保持期望的功效。可被考慮的因素包括病狀的嚴(yán)重性，患者的一般健康，患者的年齡、體重和性別，飲食，給藥時間和頻率，聯(lián)合用藥，反應(yīng)敏感性以及對治療的耐受/應(yīng)答?？蓸?gòu)建編碼本發(fā)明抗體的多核苷酸，使用公知技術(shù)將其離體或體內(nèi)引入到細(xì)胞中，這些技術(shù)包括但不限于轉(zhuǎn)鐵蛋白聚陽離子介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)移，用棵的或包裹的核酸進(jìn)行的轉(zhuǎn)染，脂質(zhì)體介導(dǎo)的細(xì)胞融合，DNA包被的膠乳珠進(jìn)行的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運，原生質(zhì)體融合，病毒感染，電穿孔，"基因槍"以及DEAE或磷酸釣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。抗體有效的體內(nèi)劑量在大約5iug到大約500lug/kg體重的范圍。對于編碼抗體的多核苷酸的給藥來說，有效的體內(nèi)劑量在大約100ng到大約500)LigDNA的范圍。含有抗體的本發(fā)明的藥物組合物的給藥模式可以是將抗體傳遞給宿主的任何合適途徑。舉例來說，本發(fā)明的藥物組合物對于腸胃外給藥(例如皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或鼻內(nèi)給藥)來說可能是有用的。本公開內(nèi)容中引用的所有專利和專利申請都特別地S1入本文作為參考。上述公開內(nèi)容一般性地描述了本發(fā)明。更完整的理解可以通過參考下面的特定實施例來獲得，所提供的實施例僅僅是為了例證性說明，并不打算限制發(fā)明的范圍。實施例本文所述的結(jié)構(gòu)、材料、組合物和方法是本發(fā)明的代表性例子，本發(fā)明的范圍不受實施例范圍的限制，這是能夠明白的。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，本發(fā)明的實施可以在所公開的結(jié)構(gòu)、材料、組合物和方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行變化，這些變化^:認(rèn)為在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實施例1:人組合Fab文庫(HuCALGold)的構(gòu)建HuCALGOLD是基于HuCAL⑧技術(shù)(人組合抗體文庫；MorphoSysAG,Martinsried/Planegg,Germany)的抗體文庫。這個文庫組合了Fab才各式的合成的全人抗體文庫，特征在于具有六個不同的CDR區(qū)，用展示4支術(shù)選"^高親和力抗體CysDisplay(MorphoSysAG,Martinsried/Planegg,Germany)。CysDisplay是基于通過二硫鍵的表型-基因型連接的單價噬菌體展示技術(shù)，它能夠以高親和力回收特定抗體。噬菌體展示載體pMORPH23是能夠容許Fab片段的單價CysDisplay的噬菌粒載體。它編碼全長glllp、Fd鏈(VjrCHl)和輕鏈(VL-C0,它們都具有不同的分泌信號序列，引導(dǎo)相應(yīng)蛋白鏈到大腸桿菌的周質(zhì)中。利用了ompA和phoA信號序列兩者來轉(zhuǎn)運重鏈和輕鏈到周質(zhì)，其中產(chǎn)生了由非共價相互作用引起的鏈組裝。該展示載體攜帶有可誘導(dǎo)的lac啟動子/操縱子區(qū)域。用于阻遏表達(dá)的laqia基因產(chǎn)物是由大腸桿菌宿主菌抹TG1提供的。Cys-gIIIp和Fab表達(dá)的誘導(dǎo)是通過加入IPTG(異丙基-P-D-硫代吡喃半乳糖苷)來實現(xiàn)的。使用限制酶Xbal和EcoRI將富集的Fab集合從pMORPH23亞克隆到Fab表達(dá)載體pMORPH⑧x9上。通過該步驟，除去了Fd鏈的C末端的半胱氨酸和接頭-His6部分，切下了glllp。表達(dá)載體pMORPH⑧x9—Fab_FH才是供了兩個C末端標(biāo)志FLAG和6xHis,這樣有助于Fab蛋白的檢測和純化。遵#在^炎/75f霧謬,乂f在補充了34|ug/ml氯霉素和1%葡萄糖的2xTY培養(yǎng)基中擴(kuò)增TG1細(xì)胞中的HuCALGOLDFab噬菌粒。在輔助噬菌體于37。C感染(VCSM1360約2-6xl0"pfu/ml)30分鐘后，通過離心濃縮TG1細(xì)胞。通過將感染的TG1細(xì)胞在含有34)ug/ml氯霉素、50lag/m卡那霉素和0.25mMIPTG的2xTY培養(yǎng)基中于22。C培養(yǎng)過夜，擴(kuò)增噬菌粒。使用含有噬菌體的上清液進(jìn)行p蓋菌體淘選。實施例2:固相淘選固相淘選是通過用PBS中的人MN蛋白包被MaxiSorpTM平板(NalgeneNuncInternational,Rochester,NY)或DynabeadsTM(Invitrogen,Carlsbad,CA)來進(jìn)行的(liug/孔或1|ug/lmg珠)。MN蛋白代表了帶有用于純化的C末端his標(biāo)志的蛋白的整個胞外結(jié)構(gòu)域。MN蛋白是在哺乳動物細(xì)胞系HKB-11中表達(dá)的，通過Ni-NTA層析進(jìn)行純化，使用的是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)方法。用PBS中的5%奶對含有已結(jié)合的MN蛋白的孔進(jìn)行封閉，在PBS中漂洗，然后用一等份預(yù)封閉的含有l(wèi)xlO12個HuCALGOLDFab噬菌體的HuCALGOLD噬菌體文庫于室溫保溫2小時。漂洗已結(jié)合的噬菌體，然后用10mMTris緩沖液pH8.0中的20mMDTT進(jìn)行洗脫。進(jìn)行三輪淘選，每輪淘選之間都進(jìn)行如上所述的噬菌體擴(kuò)增。每輪淘選之間都增加漂洗嚴(yán)謹(jǐn)度以減少非特異性結(jié)合。實施例3:亞克隆所選擇的Fab片段用于大腸桿菌中的表達(dá)將所選擇的Fab從pMORPH23展示載體克隆到pMORPH⑧x9_Fab—FH表達(dá)載體上以促進(jìn)用于ELISA篩選的可溶性Fab的快速表達(dá)。用EcoRI和Xbal消化pMORPH23載體的DNA制備物，這樣就切下了整個Fab編碼片段(ompA-VL-VL和phoA-Fd)。在接著的純化之后，將片段連接到所制備的pMORPHx9一Fab—FH載體上(也用EcoRI/Xbal消化并純化)。通過電穿孔將含有Fab插入片段的載體轉(zhuǎn)染到感受態(tài)大腸桿菌TGIF細(xì)胞中。將轉(zhuǎn)化的大腸桿菌細(xì)胞于37。C下培養(yǎng)在含有34|ug/ml氯霉素和1%葡萄糖的LB平板上。挑選菌落，置于含有34pg/ml氯霉素和1%葡萄糖的培養(yǎng)基中。加入甘油到20%，將這些儲備起始培養(yǎng)物保存在-80。C下直到需要用于ELISA。為獲得純化的Fab,將攜帶該載體的大腸桿菌轉(zhuǎn)化體典型地培養(yǎng)在多個1L的搖瓶培養(yǎng)物中，收獲，使用Ni-NTA親和層析進(jìn)行純化，使用的是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法。實施例4:通過ELISA鑒別結(jié)合MN的Fab片段用PBS中的濃度為5|ag/ml的已純化人MN蛋白溶液以100idl/孔包被Maxisorp96孔ELISA平板。使用培養(yǎng)在來自起始儲備培養(yǎng)物的含有34|ug/ml氯霉素的2xTY培養(yǎng)基中的大腸桿菌轉(zhuǎn)化體表達(dá)Fab。收獲前十二(12)小時，加入IPTG(終濃度0.5mM)誘導(dǎo)Fab表達(dá)。裂解細(xì)胞，將100|Lil裂解物于室溫下保溫在預(yù)包^f皮了MN并用奶封閉的Maxisorp平板的孔中2小時。然后在TBS和含有吐溫的TBS中漂洗平板以去除非特異性結(jié)合。用綴合到堿性磷酸酶上的山羊抗人(Fab，)2抗體(PierceChemical，Rockford,IL)檢測結(jié)合的Fab。按照廠商說明書的指導(dǎo)4吏用底物AttoPhos(RocheDiagnostics,Alameda,CA)，在430nm;敫發(fā)，在535nm讀出發(fā)射。大量的大腸桿菌轉(zhuǎn)化體表達(dá)Fab,其顯示的ELISA中的信噪比大于10。對超過50個的獨特MN結(jié)合Fab鑒別了VH和VL區(qū)的DNA測序。根據(jù)它們的功能性，十個抗體的完整VH和VL的DNA和蛋白序列分別示于圖3和4中。通過ELISA將這十個公開的抗體每一個都結(jié)合到分離自哺乳動物表達(dá)細(xì)胞系HKB-11的純化MN蛋白上(圖5)。所;險測的抗體也與分離自sf9昆蟲細(xì)I包的純化MN反應(yīng)，這些昆蟲細(xì)月包已經(jīng);故編碼MN胞外結(jié)構(gòu)域的桿狀病毒感染過，(圖5)這證明ELISA反應(yīng)對于MN蛋白是特異性的，而不是蛋白制劑中的任何痕量污染物。在BIAcoreTM分析中，本發(fā)明的抗體特異性結(jié)合人MN,Kd范圍在lnM(lx10—9M)到大約50nM(5.0x10—8nM)(圖5)。實施例5:結(jié)合MN的Fab和IgG的鑒別使用表面等離子共振技術(shù)在BIAcore3000儀器(BIAcore,Uppsala,瑞典)上分析MN蛋白與本發(fā)明抗體之間的結(jié)合相互作用。對于全長IgG(le4、laal和3ee9)的結(jié)合來i兌，4吏用標(biāo)準(zhǔn)胺偶聯(lián)試劑盒(BIAcore,Uppsala:瑞典)將山羊抗人IgGFc高密度地共價偶聯(lián)到CM5生物傳感器上。然后使用捕獲分析法將這些IgG結(jié)合到固定了抗人IgGFc的表面上，目標(biāo)是3000個應(yīng)答單位的BIAcore信號。在25。C下操作BIAcore,流速是10jul/min流動緩沖液，其中含有PBS/0.05Q/。吐溫20或含有10mMNa-HEPES:pH7.5/150mMNaCl/3mMEDTA/0.005。/。吐溫20。配體結(jié)合之后，然后將流速增加到25jal/mm，讓各種濃度的MN分析物(例如50nM到1nM的范圍)流過表面10分鐘以便能夠監(jiān)測締合階段。然后進(jìn)行離解35分鐘，接著用100pl的10mM磷酸以100pl/mm再生固定了抗人IgGFc的表面。使用1:1Langmmr結(jié)合模型擬合傳感曲線以計算速率常數(shù)。類62200680052716.X似地確定Fab與MN的結(jié)合，不同之處是將抗人Fab的IgG固定在芯片上并在MN結(jié)合評估之前用來捕獲Fab。圖5顯示了對于所公開抗體與純化MN蛋白之間的結(jié)合來說得到的結(jié)合常數(shù)。每個結(jié)合MN的抗體都顯示出了0.15到50nM范圍的Kd值。實施例6:構(gòu)建HuCAL免疫球蛋白表達(dá)載體用于在293F細(xì)胞中瞬時表達(dá)抗體,遂《迷戎傳。去除pcDNA3.1+(Invitrogen,Carlsbad,CA)的多克隆位點(Nhel/Apal),插入與用于HuCAL的限制性位點相容的位點，進(jìn)行前導(dǎo)序歹ll(Nhel/EcoRI)、VH結(jié)構(gòu)域(EcoRI/BlpI)和免疫球蛋白恒定區(qū)(Blpl/Apal)的連接。前導(dǎo)序列(EMBLM83133)具有Kozak序列(Kozak,NucleicAcidRes.15:8125-8148,1987)。將人IgGl(PIRJ00228)、IgG4(EMBLK01316)和血清IgAl(EMBLJ00220)的恒定區(qū)切成大約70個堿基長度的重疊寡核苷酸。引入沉默突變以去除與HuCAL設(shè)計不相容的限制性位點。通過重疊延伸PCR剪接寡核苷酸。鞋^產(chǎn)這裁'沐。用兩個不同位點取代pcDNA3.1/Zeo+(Invitrogen,Carlsbad,CA)的多克隆位點。k-位點提供了用于k-前導(dǎo)序列(Nhel/EcoRV)、HuCAL-scFvVk-結(jié)構(gòu)域(EcoRV/BsiWI)和k-鏈恒定區(qū)(BsiWI/Apal)插入的限制性位點。人-位點中的相應(yīng)限制性位點是Nhel/EcoRV(l-前導(dǎo)序列)、EcoRV/Hpal(Vl-結(jié)構(gòu)域)和Hpal/Apal(X-鏈恒定區(qū))。k-前導(dǎo)序列(EMBLZ00022)以及入-前導(dǎo)序列(EMBLL27692)都具有Kozak序列。人k-鏈(EMBLJ00241)和X-鏈(EMBLM18645)的恒定區(qū)通過上述重疊延伸PCR進(jìn)行組裝。,^F"6^全長/gG^,^。通過用Mfel/Blpl酶切，將包含在大腸桿菌表達(dá)載體pMORPHx9一Fab—FH中的Fab重鏈序列切下，連接到上述已經(jīng)被EcoRI/BlpI酶切過的重鏈表達(dá)載體中。用EcoRV/BsiWI將包含在pMORPHx9—Fab—FH中的Fabk輕《連序列切下，連接到也已經(jīng)^CEcoRV/BsiWI酶切過的k輕鏈表達(dá)載體中。用EcoRV/Hpal將包含在pMORPHx9一Fab—FH中的FabX輕鏈序列切下，連接到上述入表達(dá)載體中。全長/gG的義效^f錄〃^^迷。將Cellbag20L/0(WaveBiotechLLC,Somerset,NJ)以0.25x106個293F細(xì)胞/ml(Invitrogen)接種到9.3L的Freestyle293表達(dá)培養(yǎng)基(Invitrogen)中。將細(xì)胞培養(yǎng)到1xl()6/ml的密度，通過將編碼全長抗體的5mg的每種輕鏈表達(dá)載體和重鏈表達(dá)載體加入到含有293fectin試劑(Invitrogen)的350mlOptimem(Invitrogen)中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在37。C發(fā)酵96小時后，通過離心收獲細(xì)胞培養(yǎng)物上清液，無菌過濾，通過切向流過濾進(jìn)行濃縮，將pH調(diào)節(jié)到7.6,然后進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)蛋白A柱層析(AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway，NJ)。實施例7:細(xì)胞貼壁分析將五十(50)jliL的1ng/mL的PBS中的純化MN溶液吸附到未處理的96孔板上，4。C過夜。除去溶液，用PBS沖洗孔3次。用RPMI1640培養(yǎng)基中的200pL50%FBS封閉孔1小時。然后用含有1%BSA的PBS中的100jigle4抗MN抗體、含有1%BSA的PBS中的對照IgG或者含有1%BSA的PBS進(jìn)行處理。用PBS漂洗之后，向孔中加入5000個MaTu細(xì)胞(MN+細(xì)胞)，在37。C和5%C〇2下過夜溫育平板。用PBS漂洗之后，分析抗MN抗體阻斷MaTu細(xì)胞貼壁到MN包被孔上的能力。該實-驗的例子示于圖6中，其中100jug的抗MN抗體le4顯示出了細(xì)月包貼壁，而對照IgG或緩沖液賦形劑則不顯示細(xì)胞貼壁。實施例8:帶有免疫綴合物的皮下異種移植癌癥模型^f吏用本領(lǐng)域已知的方案(例如Liu,etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.93:8618-8623,1996.)將抗MN抗體綴合到細(xì)胞毒性小分子上。將人乳腺異種移植物MaTu細(xì)胞作為貼壁培養(yǎng)物培養(yǎng)在補充了10。/。FBS的RPMI中。用O.lmU々80%matrigel/20%HBSS中的5x106個細(xì)胞皮下接種在Ncr棵鼠(8-12周齡)的右脅腹。當(dāng)腫瘤達(dá)到約180mg的平均大小時(6天)，開始進(jìn)行處理。將綴合到細(xì)胞毒性小分子上的單克隆抗體靜脈注射給藥，以10mg/kg的劑量每四天給藥一次(Q4Dx3)。對照小鼠用PBS或未綴合的單克隆抗體進(jìn)行處理。對每只動物的健康狀況每天進(jìn)行檢測。每個實驗組由10只小鼠組成，劑量體積是O.lmL/10g體重。通過使用電子卡尺每周測量2-3次每個腫瘤的長度和寬度，根據(jù)公式[長度(mm)x寬度(mm)"/2計算腫瘤重量(mg)。記錄整個研究過程中獲得的所有數(shù)據(jù)包括每日觀察結(jié)果。腫瘤生長抑制(TGI)計算為1-T/Cx100,其中T==來自處理組的最終肺瘤重量，C=來自對照組的最終腫瘤重量。圖7顯示了綴合到細(xì)胞毒性藥物上的單克隆IgGlle4在30mg/kg免疫綴合物時產(chǎn)生了顯著的抗胂瘤功效，而未綴合的抗體沒有效果。這些數(shù)據(jù)證明了針對MN蛋白的抗體作為載體用于將細(xì)胞毒性藥物輸送到腫瘤的治療用造。實施例9:熒光激活細(xì)胞分選分析(FACS分析)64可分析細(xì)胞的MN表達(dá)來作為診斷工具。用PBS溶液中的1:10胰蛋白酶/Versene處理5到10分鐘，將貼壁的表達(dá)MN的PC-3mm2細(xì)胞和不表達(dá)MN的DLD1細(xì)胞從它們的瓶中分離下來。將細(xì)胞進(jìn)行旋轉(zhuǎn)(1000rpm,5分鐘)，用水冷的RPMI10%FBS漂洗一次，以6xl()6個細(xì)胞/ml重懸浮在水冷的染色緩沖液(不含Ca+Mg+的PBS,2%BSA,0.05%疊氮化鈉)中。將25|ug/mL的一抗，即人抗MNIgGl或者對照的人IgGl抗體與6x105個細(xì)胞在水上保溫1小時。用冰冷的染色緩沖液將未結(jié)合的抗體從細(xì)胞上漂洗下去。用PBS中的2%曱醛固定細(xì)胞10分鐘，然后用染色緩沖液漂洗兩次。將細(xì)胞沉淀重懸浮在100pl的水冷染色緩沖液中，其中含有抗人Alexafluor488二抗(終濃度1:200,MolecularProbes/Invitrogen,Carlsbad,CA),在水上保溫1小時。用流動緩沖液(含2%BSA的PBS)漂洗兩次將未結(jié)合的抗體從細(xì)胞上漂洗下來，將細(xì)胞重懸浮在1mL的流動緩沖液中。在BeckmanFACSCaliber設(shè)備上進(jìn)行重懸浮細(xì)胞的FACS分析。圖8顯示，根據(jù)FACS分析，PC-3mm2人前列腺癌細(xì)胞表達(dá)了MN,而DLD-1細(xì)胞不表達(dá)。實施例10:抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性分析(ADCC分析)抗MNIgG的抗胂瘤活性可能是通過ADCC活性介導(dǎo)的。將表達(dá)MN的PC-3mm2細(xì)胞和不表達(dá)MN的HCT-116細(xì)胞與250ng/mL、1000ng/mL或2000ng/mL的人抗MNIgGl或者對照的人IgGl抗地高辛抗體一起保溫。將人PBMC加入到這些細(xì)胞中，效應(yīng)物:耙的比例為50:1、25:1和5:1。進(jìn)行鉻-51釋放分析來確定靶細(xì)胞裂解的水平。在存在DLD和PC-3mm2細(xì)胞時用對照抗體或者沒有抗體保溫時，觀察到了少量裂解。這種自發(fā)裂解水平對于50:1、25:1和5:1的革巴:效應(yīng)物比來說分別是10-15%、5-10%或2-3%。類似地，不表達(dá)MN的DLD細(xì)胞在與抗MN抗體保溫時，它的裂解在0-10%的范圍。然而，當(dāng)PC-3mm2細(xì)胞與人抗MNIgG保溫時，它的裂解比對照明顯更高。當(dāng)以50:l靶:效應(yīng)物比使用250ng/mL、1000ng/mL和2000ng/mL時，觀察到了40、50和60%的裂解。類似地，在25:1的比時》見察到了30、33和38%的裂解，最后，在5:1的耙:效應(yīng)物比時^L察到了8、10和15%的裂解。這些實驗顯示，人抗MN抗體介導(dǎo)了抗腫瘤的ADCC活性，可用于癌癥治療。實施例11:免疫綴合物#務(wù)使用編碼多種人Fab的噬菌體展示文庫(Morphosys)來產(chǎn)生針對MN細(xì)胞表面抗原的人抗體。將該抗體綴合到單曱基金抑素E(MMAE)(Fransiscoetal.,Blood,2003,102:1458-1465)上(圖9)。斜法'妙遂賴通過針對包含1()W個人Fab片段(Fab是抗體的抗原結(jié)合部分)的MorphoSys噬菌體文庫進(jìn)行人MN的純化細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的體夕卜"淘選，，，鑒別到了3ee9/MMAE的抗體部分(3ee9)。進(jìn)一步檢測活性Fab在加入到MN陽性細(xì)胞上時的選擇性結(jié)合并進(jìn)行內(nèi)化的能力。然后將所得到的活性Fab轉(zhuǎn)變成全長人IgGl抗體，在CHO細(xì)胞中表達(dá)、純化，然后綴合到毒性簇MMAE(Liuetal,ProcNatlAcadSd,1996,93:8618畫8623)上。然后測試綴合抗體殺死表達(dá)MN的細(xì)胞的能力。在所測試的一組七個全長抗體中，根據(jù)其體外和體內(nèi)分析中的結(jié)合性質(zhì)、選擇性和效力，選擇到了3ee9/MMAE。4面爭/ff^^「Aaco^)為W，和才法在BIAcore3000設(shè)備(Acore,Uppsala,瑞典)上使用表面等離子技術(shù)分析表達(dá)人MN蛋白的HKB11和人全長抗MNMab之間的結(jié)合相互作用。對于芯片制備來說，使用標(biāo)準(zhǔn)胺偶聯(lián)試劑盒(BIAcore,Uppsala,瑞典)將山羊抗人IgGFc共價偶聯(lián)到CM5生物傳感器芯片上。然后使用捕獲分析將感興趣的抗體結(jié)合到固定了抗人IgGFc的表面上，目標(biāo)是300個應(yīng)答單位的BIAcore信號。在25。C下操作BIAcore,流速是10|ul/mm流動緩沖液，其中含有10mMNa-HEPES,pH7.5A50mMNaCl/3mMEDTA/0.005。/o吐溫20。配體結(jié)合之后，將流速增加到25pl/min,讓MN分析物(50nM到1nM)流過表面10分鐘以便能夠監(jiān)測締合階l殳。然后進(jìn)行離解35分鐘，接著用10mM磷酸以100lul/min再生固定了抗人IgGFc的表面。使用1:1Langmmr結(jié)合模型擬合傳感曲線以計算速率常數(shù)(表1,如下)。表1通過表面等離子共振(Biacore)確定的來自淘選的抗體對可溶性MN的親和力<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>的kD,與未綴合抗體3ee9的親和力相同。對MN(CAIX)的結(jié)合似乎是特異性的，因為對13種其它碳酸酐酶沒有可檢測的結(jié)合。觀察到了對線粒體相關(guān)的CA5的結(jié)合，但是該同工酶將難于接觸到體內(nèi)抗體。通過FACS分析，證明3ee9/MMAE結(jié)合表達(dá)MN的MaTu細(xì)胞，但是不結(jié)合MN陰性的DLD細(xì)胞(圖10a)。在整個體外研究中使用MN抗體G250，即一種人源化IgGl抗體(Wilex)作為參照。它以5.3nM的Kd結(jié)合MN,顯示了與3ee9/MMAE相似的結(jié)合MN+和MN-細(xì)胞系的結(jié)合曲線。對于抗體1E4和laal免疫綴合物獲得了相似結(jié)果(分別見圖10b和10c),顯示了與MN+細(xì)胞的結(jié)合，但是不與MN-細(xì)胞結(jié)合。3ee9/MMAE被表達(dá)MN的細(xì)胞(PC3mm2)選擇性內(nèi)化，但是不被MN陰性的細(xì)胞內(nèi)化，這是Cellomics所測得的(圖lla)。類似地，發(fā)現(xiàn)了1E4免疫綴合物被MN+細(xì)胞(PC3mm2)內(nèi)化，但是不被MN-(DLD1)細(xì)胞內(nèi)化(圖lib)。為進(jìn)一步研究特異性，將包括3ee9/MMAE抗體部分(3ee9)和參照抗體GMO在內(nèi)的各種候選抗體與MN+(P。mm"和MN-(DLD-1)細(xì)胞系的細(xì)胞裂解物保溫，這些細(xì)胞系已用生物素選4奪性標(biāo)記。將抗體和細(xì)胞蛋白之間的復(fù)合物免疫沉淀，使用酶聯(lián)鏈霉親和素顯色的免疫印跡來觀察共沉淀的抗原。G250和3ee9/MMAE的3ee9抗體都與來自MN+細(xì)胞的同樣大小的MN單一條帶選擇性結(jié)合并共免疫沉淀(圖12)。特異性4交差的抗體諸如3ef2、5aa3和5A6除了與MN共免疫沉淀之外，還與幾種其它蛋白共免疫沉淀。進(jìn)行體外細(xì)胞毒性分析。發(fā)現(xiàn)3ee9/MMAE對表達(dá)MN的PC3mm2細(xì)胞是高毒性的(EC50=50nM)，但是對MN陰性的MIAPaca2細(xì)胞是無毒的(圖13a)。甚至在高達(dá)luM的劑量時也只發(fā)現(xiàn)少于10。/。的MN陰性細(xì)胞的殺傷。在體外細(xì)胞毒性分析中也發(fā)現(xiàn)1A4免疫綴合物對于MN+細(xì)胞(PC3mm2和MaTu)是選擇性細(xì)胞毒性的，但是對于MN-細(xì)胞(MIAPaca2和DLD1)是無毒的(圖13b)。此外，在體外細(xì)胞毒性分析中發(fā)現(xiàn)laal免疫綴合物對于MN+細(xì)胞(PC3mm2)是選擇性細(xì)胞毒性的，但是對于MN-細(xì)胞(MIAPaca2)是無毒的(圖13c)。通過3ee9/MMAE輸送的細(xì)胞毒性藥物是微管蛋白抑制劑，它抑制細(xì)胞有絲分裂期間的紡錘體形成，導(dǎo)致停滯G2/M。用3ee9/MMAE處理表達(dá)MN的細(xì)胞(Pc3mm2)和不表達(dá)MN的細(xì)胞(H460)的效果顯示于圖14中。用熒光標(biāo)記抗體染色微管蛋白。未處理細(xì)胞顯示正常的紡錘體形成，而處理過的表達(dá)MN的細(xì)胞顯示了片段化的纖維，這是微管蛋白與MMAE結(jié)合產(chǎn)生的，抑制了正常的紡錘體形成。在不表達(dá)MN的細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)活性。這些研究證實抗體藥物綴合物3ee9/MMAE通過靶向的微管蛋白破壞而殺死了細(xì)月包。實施例12:免疫綴合物的體內(nèi)活性3ee9/A/A^4E#,,^T7"移孩W入7f^移控;^^婁^謬力^埋夢當(dāng)通過l爭脈途徑以間隔的方案給藥時，3ee9/MMAE顯示了對于無胸腺小鼠中多種人異種移植腫瘤模型的生長具有顯著的且一致性的抗胂瘤功效。在6個不同的人異種移植腫瘤模型中檢測了3ee9/MMAE的體內(nèi)抗腫瘤功效。這些模型是通過將人腫瘤細(xì)胞皮下移植到雌性無胸腺NCr(冊/"w)小鼠(Taconic,NY)中而建立的。所評估的人腫瘤異種移植才莫型包括MaTu人乳腺癌模型、HT-29和Colo-205人結(jié)直腸癌(CRC)模型、PC3MM2前列腺癌模型、HCT-15多藥物抗性(P-gp)CRC模型以及MiaPaCa2人胰腺癌模型。將PBS用作賦形劑，每天新鮮制備劑量溶液。劑量體積是0.1mL/10g(10mL/kg)。使用電子卡尺每周測量2-3次每個腫瘤的長度和寬度，根據(jù)公式[長度(mm)x寬度(mm)2]/2計算腫瘤重量(mg)。在抗腫瘤數(shù)據(jù)牟集系統(tǒng)(ADAS)中記錄整個研究過程中獲得的所有數(shù)據(jù)包括日常觀察結(jié)果。最大耐受劑量(MTD)定義為不產(chǎn)生超過20%死亡率和/或20%凈體重減輕的最高劑量。腫瘤生長抑制(TGI)計算為l-T/Cx100,其中T:來自最后劑量之后的處理組的最終肺瘤重量，C=來自最后劑量之后的對照組的最終腫瘤重量。此外，作為應(yīng)答發(fā)生率測定了抗腫瘤功效(或者是應(yīng)答者或者是消退)，其定義為S50%原始大小的腫瘤。最少需要7天的持續(xù)時間來進(jìn)行應(yīng)答才一皮認(rèn)為是持久的。Afo『w^3ee9/MM4五W^妓將人乳腺異種移植物MaTu細(xì)胞作為貼壁培養(yǎng)物培養(yǎng)在補充了10%FBS的RPMI中。用0.1mL的80%matrigel/20%HBSS中的5x106個細(xì)胞皮下接種在Ncr棵鼠(8-12周齡)的右脅腹。當(dāng)腫瘤達(dá)到約180mg的平均大小時(6天)，開始進(jìn)4亍處理。4爭力永注射給藥BAY79-4620(3ee9-IC)，以1、3和10mg/kg的劑量每四天給藥一次(Q4Dx3)。對照小鼠用PBS或未綴合的單克隆抗體以10mg/kg劑量進(jìn)行處理。對每只動物的健康狀況每天進(jìn)行檢測。每個實驗組由10只小鼠組成，劑量體積是O.lmL/10g體重。通過使用電子卡尺每周測量2-3次每個腫瘤的長度和寬度，根據(jù)公式[長度(mm)x寬度(mm)"A計算腫瘤重量(mg)。記錄整個研究過程中獲得的所有數(shù)據(jù)包括日常觀察結(jié)果。腫瘤生長抑制(TGI)計算為l-T/Cx100,其中丁=來自處理組的最終腫瘤重量，C=來自對照組的最終腫瘤重量。3ee9/MMAE在所4企測的所有劑量下都是良好耐受的，所有的處理動物都沒有顯示出顯著的重量減輕。3ee9/MMAE在MaTu肺瘤才莫型中的典型效果說明在圖15中。來自未處理組和賦形劑處理的對照組的腫瘤在所有動物中都逐漸在生長。對照組和賦形劑組動物的平均倍增時間是11.2天。在用藥劑量結(jié)束時，3ee9/MMAE在所有檢測劑量下都顯示了強(qiáng)的抗肺瘤功效。更特別地，BAY79-4620(3ee9-IC)在1、3和10mg/kg時分別產(chǎn)生了67、72和78。/。的TGI。相比之下，未綴合的3ee9mAb在抑制該乳腺異種移植腫瘤的生長方面沒有明顯功效。在預(yù)定劑量方案(Q4Dx3)完成之后，確定3ee9/MMAE對腫瘤生長延緩和消退的影響。如圖15所示，3ee9/MMAE的處理產(chǎn)生了顯著的腫瘤生長延緩和消退。在所檢測的最低劑量(lmg/kg)時，終止處理之后，肺瘤穩(wěn)定保持了大約2周，其后就開始重新生長?？偟膩碚f，30%的腫瘤對lmg/kg的這種處理是有應(yīng)答的。相比之下，當(dāng)用3和10mg/kg進(jìn)4亍攻擊時，100%的動物都應(yīng)答。值得注意的是，即使在終止處理之后大約3個月后，在3和10mg/kg組也分別只有3個和1個胂瘤顯示了重新生長的跡象，這表明即^f吏在終止處理之后大約90天后，70%和90%的動物仍然是沒有腫瘤的。當(dāng)綴合到細(xì)月包毒性藥物上時，單克隆的IgGl1E4在以30mg/kg免疫綴合物給藥時產(chǎn)生了對于人乳腺異種移植物MaTu的顯著抗肺瘤功69效，而未綴合的抗體沒有效果(圖16)。使用同樣方案但是替換成抗體laal(圖17)、3ee9和5aa3的綴合形式的進(jìn)一步實驗得到了相似結(jié)果。此外，當(dāng)使用3ee9的綴合形式時，在源自各種組織類型的其它人異種移植模型，包括HT-29和Colo-205人結(jié)直腸癌異種移植模型以及人前列腺異種移植模型PC3-mm2中發(fā)現(xiàn)了抗腫瘤功效。這些數(shù)據(jù)證明了針對MN蛋白的抗體，作為載體用于將細(xì)胞毒性藥物輸送到腫瘤的治療用途。實施例13:確定MaTu異種移植模型中3ee9/MMAE的治療指數(shù)使用帶有MaTu異種移植腫瘤的小鼠來確定3ee9/MMAE的最大耐受劑量(MTD)、最小有效劑量(MED)和治療指數(shù)(TI)。TI定義為MTD除以MED的比值。每4天一次靜脈內(nèi)》會藥3ee9/MMAE，總共3次注射(Q4Dx3)。3ee9/MMAE的給藥劑量水平是0.625、1.25、2.5、5.0、10、30和60mg/kg。對照小鼠用PBS或未綴合的單克隆抗體以60mg/kg劑量進(jìn)行處理。60mg/kg劑量的3ee9/MMAE似乎是MTD,因為反應(yīng)于這種處理，有10%的死亡率和約20%的體重減輕。所有的其它處理組都是良好耐受的。3ee9/MMAE的抗肺瘤活性呈現(xiàn)在圖18中。在用藥劑量結(jié)束時，0.625和1.25mg/kg劑量的3ee9/MMAE分別產(chǎn)生了62%和81%的抑制。2.5、5、10、30和60mg/kg的劑量產(chǎn)生了更大程度的肺瘤生長抑制(約90%),大多數(shù)腫瘤都開始顯示出消退。#^居觀察到的數(shù)據(jù)，3ee9/MMAE的MED是0.625mg/kg。在預(yù)定劑量方案(Q4Dx3)完成之后，確定3ee9/MMAE對肺瘤生長延緩和消退的影響。0.625mg/kg的劑量沒有發(fā)現(xiàn)腫瘤消退。相比之下，80%的動物都顯示了對1.25mg/kg進(jìn)行應(yīng)答的腫瘤消退。而且，2.5mg/kg以及更高的劑量時，100%的動物都對處理有應(yīng)答。3ee9/MMAE的治療指數(shù)纟皮確定為約96。實施例14:3ee9/MMAE在HT-29異種移植模型中的功效用0.1mLHBSS中的5x106個細(xì)胞將人CRC異種移植物HT-29細(xì)胞皮下接種在右脅腹。當(dāng)肺瘤達(dá)到約120mg的平均大小(5天)時，開始進(jìn)行處理。每四天靜脈內(nèi)給藥3ee9/MMAE—次(Q4Dx3),劑量是0.625、1.25、2.5、5.0、10mg/kg。對照小鼠用PBS或未綴合的單克隆抗體以10mg/kg的劑量進(jìn)行處理。此外還評估了作為游離藥物的MMAE,劑量為0.1、0.2和lmg/kg。0.1和0.2mg/Kg的MMAE分別代表了與5和10mg/Kg3ee9/MMAE相當(dāng)量的這種藥物。3ee9/MMAE在所有檢測劑量下都是良好耐受的，所有處理動物都未顯示出顯著的重量減輕。類似地，較^氐劑量即0.1和0.2mg/kg的MMAE也是良好耐受的，表現(xiàn)出不顯著的、最低程度的重量減輕。然而，在lmg/kg的最高劑量,觀察到了50%的死亡率，剩下的動物也都顯示出了嚴(yán)重的重量減輕，因而被認(rèn)為是有毒的。3ee9/MMAE和游離MMAE在HT-29肺瘤才莫型中的典型功步支示于圖19中。來自未處理組和賦形劑處理的對照組的腫瘤在所有動物中都逐漸在生長。對照組和賦形劑組動物的平均倍增時間是6.4天。在用藥劑量結(jié)束時，3ee9/MMAE在所有4全測劑量下都顯示了強(qiáng)的抗腫瘤功效。更特別地，0.625、1.25、2.5、5和10mg/kg劑量的3ee9/MMAE分別產(chǎn)生了54、72、97、100和100%TGI。相比之下，0.2mg/kg的游離MMAE產(chǎn)生了60。/。的顯著TGI，而O.lmg/kg在抑制該異種移植才莫型的生長方面沒有顯著效果。在腫瘤應(yīng)答方面，1.25mg/kg劑量的3ee9/MMAE導(dǎo)致20%的動物顯示出了消退。在更高劑量，腫瘤應(yīng)答更強(qiáng)，2.5mg/kg顯示了90%的消退，5和10mg/kg誘導(dǎo)了100%的應(yīng)答。相比之下，游離MMAE沒有誘導(dǎo)如上所述的任何腫瘤應(yīng)答。也分析了不同方案的3ee9/MMAE的抗腫瘤效應(yīng)，也就是每周給藥一劑總共給藥兩劑(Q7Dx2,圖20)以及在進(jìn)程中給藥單劑(QlDxl，圖21)。在兩種方案中，3ee9/MMAE的劑量是0.625、1.25、2.5、5和10mg/kg。不管是哪種方案，3ee9/MMAE在該CRC異種移才直才莫型中抑制生長方面是高度有效的。下面的表2總結(jié)了3ee9/MMAE的抗肺瘤功效。抗胂瘤功效與3ee9/MMAE的Q4Dx3方案中所觀察到的非常相似，這表明在所沖企測的方案中，3ee9/MMAE的抗腫瘤功效似乎是依賴于方案的。3ee9/MMAE的抗胂瘤功效化合物劑量(mg/kg)處理的方案%抑制(1國T/D)"00(第18天)消退百分比對照N/A■N/A0PBS0Q4Dx3-1703ee9Ab10Q4Dx3-1103EE9IC0.625Q4Dx35403EE9IC1.25Q4Dx37223EE9IC2.5Q4Dx39793EE9ICQ4Dx3100103EE9IC10Q4Dx3100103EE9IC0.625Q7Dx24803EE9IC1.25Q7Dx27103EE9IC2.5Q7Dx29243EE9IC5Q7Dx29673EE9IC10Q7Dx2100103EE9IC0.625QlDx14203EE9IC1.25QlDx14803EE9IC2.5QlDx1933EE9ICQlDx19883EE9IC10QlDx110010MMAE1Q4Dx3丁oxicN/AMMAE0.1Q4Dx3270MMAE0.2Q4Dx3600實施例15:3ee9/MMAE在PC3mm2和Colo-205異種移植才莫型中的功效72接下來評估3ee9/MMAE對人前列腺(PC-3mm2)和CRC(Colo-205)腫瘤異種移植物的抗腫瘤功效。用5x106個PC3mm2或Colo-205細(xì)胞皮下(s.c.)植入雌性NCr"w/"w小鼠。當(dāng)肺瘤平均大小在大約120-150mg時開始進(jìn)行處理。每天監(jiān)測并記錄小鼠的一般健康。從處理第一天開始每周記錄兩次胂瘤尺寸和體重。在PC3mm2和Colo-205研究中，每4天靜脈內(nèi)(i.v.)給藥一次3ee9/MMAE,總共注射3次(Q4Dx3)，劑量分別為1、3、10和30mg/kg以及1.25、2.5、5和10mg/kg。象其它研究中一樣，在所有評估的劑量時3ee9/MMAE都是良好耐受的。當(dāng)以10和30mg/kg的劑量給藥時，3ee9/MMAE抑制了已產(chǎn)生的PC3MM2前列腺肺瘤的生長，100%的動物顯示出應(yīng)答(圖22)。在1和3mg/kg的較低劑量，只發(fā)現(xiàn)了中等的效應(yīng)，因為在劑量給藥結(jié)束時觀察到了45到50%的TGI。然而，3mg/kg組的20%的動物確實顯示了應(yīng)答。類似地，在Colo-205CRC異種移才直才莫型中，3ee9/MMAE在抑制肺瘤生長方面是高度有效的(圖23)。在劑量給藥結(jié)束時，對于5和10mg/kg的劑量觀察到了〉90%的TGI,在應(yīng)答2.5mg/kg劑量中發(fā)現(xiàn)了>70%的TGI。3ee9/MMAE的1mg/kg的最低劑量對該CRC才莫型是相對無效的。在消退方面，5和1Omg/kg劑量的3ee9/MMAE分別產(chǎn)生了40%和80%的應(yīng)答。實施例16:3ee9/MMAE在HCT-15異種移植模型中的功效為才企測3ee9/MMAE在多藥物抗性才莫型中的效果，用5x106個HCT-15細(xì)胞皮下(s.c.)植入雌性NCr鼎/薦小鼠。HCT-15是過表達(dá)P-糖蛋白(P-gp)的多藥物抗性(MDR)細(xì)胞系。因而，該細(xì)胞系顯示了多藥物抗性表型，對他克唑@、阿霉素和依托泊苷是有抗性的。當(dāng)小鼠產(chǎn)生了平均重量約150mg的胂瘤時，就給予3ee9/MMAE、他克唑和吉西他濱。吉西他濱是一種非P-gp底物的嘧。定類似物，它一皮用作陽性對照。如所預(yù)期的，吉西他濱(120mg/kg,i.p.,QDxlO)在該MDR模型中是高度活性的(圖24)。相比之下，3ee9/MMAE(MMAE是P-gp的已知底物)和他克唑不能產(chǎn)生任何顯著抗肺瘤效應(yīng)。實施例17:3ee9/MMAE在huMN-MIAPaca2和MIAPaca2異種移植模型中的功效為更好理解MN表達(dá)和抗肺瘤功效之間的關(guān)系，使用低MN表達(dá)的胰腺模型MIAPaCa2和高M(jìn)N表達(dá)的huMN-MIAPaCa2模型來進(jìn)行異種移植功效研究。后一種細(xì)胞系是通過工程化MIAPaCa2細(xì)胞系以穩(wěn)定表達(dá)MN而得到的。3ee9/MMAE在抑制該低MN表達(dá)的MIAPaCa2細(xì)胞系的生長方面具有最低效果(圖25)。10mg/kg劑量的3ee9/MMAE僅產(chǎn)生了50%的TGI。相比之下，發(fā)現(xiàn)了3ee9/MMAE對huMN-MIAPaCa2模型的顯著抗肺瘤活性，其中在劑量給藥結(jié)束時，2.5、5和10mg/kg的劑量分別產(chǎn)生了63、82和94。/。的TGI。而且，10mg/kg的劑量誘導(dǎo)了100%的應(yīng)答，這表明通過在肺瘤中過表達(dá)MN水平產(chǎn)生了敏感性的極大改變。實施例18:在Colo-205異種移植模型中與希羅達(dá)⑧的組合研究了3ee9/MMAE與其它癌癥化療劑一起使用的可行性。希羅達(dá)⑧被用作患有轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的患者的一線治療。評估了使用3ee9/MMAE和希羅達(dá)@的聯(lián)合療法的活性和耐受性。根據(jù)Q4Dx3方案靜脈內(nèi)給藥3ee9/MMAE,劑量水平是1.25、2.5和10mg/kg。希羅達(dá)⑧每天口服一次給藥9天，劑量水平是250和500mg/kg。單獨以2.5和10mg/kg給藥3ee9/MMAE產(chǎn)生了強(qiáng)的腫瘤生長抑制(分別是73%和96%的TGI)(圖26a)。然而1.25mg/kg組的3ee9/MMAE是相對無效的，僅產(chǎn)生31%的TGI。以250和500mg/kg劑量水平單獨給藥希羅達(dá)⑧也產(chǎn)生了加強(qiáng)的TGI,分別是78%和86%。在應(yīng)答方面，10mg/kg組的3ee9/MMAE誘導(dǎo)了80%的應(yīng)答率，而希羅達(dá)兩個劑量組的動物都沒有顯示任何消退。所有的聯(lián)合處理組都是良好耐受的，產(chǎn)生了顯著的腫瘤生長抑制以及應(yīng)答率。這兩種試劑的組合產(chǎn)生的TGI和肺瘤應(yīng)答詳細(xì)定量數(shù)據(jù)顯示在圖26a和26b以及下面的表3中。在所檢測的劑量中，3ee9/MMAE與希羅達(dá)⑧組合的抗肺瘤活性遠(yuǎn)優(yōu)于作為單一試劑給藥的3669/]\1]^八6或希羅達(dá)@。最后，關(guān)于耐受性，這些治療劑的給藥是相當(dāng)耐受的，沒副反應(yīng)。表3BAY79-4620(3ee9-IC)與希羅達(dá)⑧組合的抗肺瘤活性處理<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table>實施例19:抗雙側(cè)移植的人異種移植癌模型的3ee9mAb的體內(nèi)分布/腫瘤定位為確定3ee9/MMAE的mAb組分的體內(nèi)分布和腫瘤定位，使用CRIMaestroTM在小鼠中進(jìn)行了非侵入性的體內(nèi)成像研究，所述小鼠接受了顯示出高的和低的MN表達(dá)的胂瘤的雙側(cè)移植。設(shè)計了帶有多重譜采集和分析的MaestroTM體內(nèi)成像系統(tǒng)(CRI,Woburn,MA)來消除自身熒光背景。根據(jù)廠商說明書用AlexaFluor750(InvitrogenCat#A20011)綴合BAY79-4620的Mab3ee9、M75(識別MN的小鼠單克隆)和對照的人IgG。蛋白/AF750(mol/mol)的比對于3ee9是1/5.9,對于人IgG是8.9,對于M75是6.0。在注射每種焚光標(biāo)記抗體之前12天，用MIAPaCa-2(低MN表達(dá)的；50%Matrigel中的7.5x106個細(xì)胞)皮下接種在右脅腹、用hu畫-MIAPaCa2(轉(zhuǎn)染了畫的穩(wěn)定細(xì)J包系；50%Matrigel中的5xl06個細(xì)胞)皮下接種在左脅腹進(jìn)行HarlanBalb/C棵鼠的移植。在第0天(移植后第12天)注射4pg的綴合抗體給每只動物。在第4天、第5天和第10天進(jìn)行成像。使用被麻醉的動物(腹膜內(nèi)注射100mg/kg氯胺酮/10mg/kg甲苯噻嗪)并置于成像系統(tǒng)內(nèi)采集數(shù)據(jù)。用680到950nm光譜范圍內(nèi)每10nm間隔的圖象獲得多重光譜成像立方體(系列圖象)，其覆蓋了近紅外區(qū)(NIR)范圍。每個圖象曝光5秒。使用Maestro軟件從光語立方體合成假彩色圖象，使用ImageProPlus6.0調(diào)整到可見亮度。將所有圖象調(diào)整一致，最亮的圖象稍微低于飽和水平。大多數(shù)焚光標(biāo)記的抗體都傾向于定位在肝和膀胱。4到5天后，然后來自肝和膀胱的大多數(shù)信號都降低了，在肺瘤中的信號穩(wěn)定了。在第5天拍攝的圖象產(chǎn)生了最高的信號與背景的比(圖27)。五天之后，注射hlgG的動物幾乎不產(chǎn)生信號了，這表明hlgG不能定位到腫瘤組織中。相比之下，M75和3ee9都特異性定位到高M(jìn)N表達(dá)的(huMN-MIAPaCa2)肺瘤中。在同一動物中沒有發(fā)現(xiàn)低MN表達(dá)的MIAPaCa2肺瘤的定位。實施例20:作用的體內(nèi)機(jī)制為探索3ee9/MMAE的體內(nèi)作用沖幾制，用5乂106個HT-29細(xì)胞皮下接種小鼠的右脅腹進(jìn)行肺瘤移植。八天后，用賦形劑或者用1.25和5mg/kg的3ee9/MMAE(QlDxl)處理帶有HT-29腫瘤的無胸腺小鼠。在給藥3ee9/MMAEl、3和5小時之后，采集肺瘤，在甲醛中固定4小時。然后將樣品包埋在石蠟中，切片成5(Lim，去除石蠟，使用用于人組織的熒光免疫組化的標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行染色，使用的是小鼠抗體抗a/(34敖管蛋白、抗磷酸組蛋白H3和DNA。然后在熒光顯微鏡下觀察玻片，通過三個獨立的彩色通道獲取典型圖象。3ee9/MMAE在4hr樣品中對于影響細(xì)胞機(jī)制來說幾乎沒有效果。然而，到第1天，就有更多細(xì)胞停留在G2/M,并清楚地發(fā)現(xiàn)了多極紡4垂體。此外，可以觀察到微管蛋白染色水平的降低。然后這些效果在第3天樣品和第5天樣品中一皮極大放大了。實際上，在第5天的3ee9/MMAE的5mg/kg劑量組中的幾乎所有細(xì)胞都被處理所嚴(yán)重影響(圖28)。這些數(shù)據(jù)清楚表明，3ee9/MMAE影響癌細(xì)胞生長是通過抑制微管蛋白，導(dǎo)致G2/M停滯和凋亡。下面的表4總結(jié)了3ee9/MMAE的性能譜。表43ee9/MMAE鐠分析3ee9/MMAE的結(jié)果親和力(Kd)3.6nM細(xì)月包結(jié)合(FACS):MN+/MN-+++/-內(nèi)化畫+/畫-+++/-細(xì)月包毒性MN+/MN-(ec50)50nM/,M免疫沉淀特異性IHC特異性體內(nèi)分布正常體內(nèi)活性MED1mg/kg體內(nèi)活性；MTD60mg/kg實施例21:使用穩(wěn)定CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行的基于3ee9輕鏈和重鏈CDR可變區(qū)的抗MNIgG的表達(dá)載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)染、表達(dá)和純化表達(dá)載體3ee9H+TpCMVTTmP.8的構(gòu)建將來自載體3ee9pMORPHx9(根據(jù)實施例1-3獲得)的K和重鏈CDR可變區(qū)(分別是SEQIDNO:126和125)如下所述插入到載體H+LpattB77(MLLaboratories)中。將來自3ee9pMORPHx9(根據(jù)前述實施例例如實施例1-3制備)的大約350個堿基對的EcoRV-BsiWI限制酶片段插入到H+LpattB的EcoRV譜BsiWI限制酶位點中以產(chǎn)生載體3ee9kappapAttB。接下來，將來自3ee9pMORPHx9的大約350個堿基對的Mfel-Bllpl限制酶片段插入到3ee9kappapAttB的EcoRI-Blpl限制酶位點中以產(chǎn)生3ee9H+LpattB。然后^f吏用GatewayBPClonaseII酶混合物(InvitrogenCat.#11789-100)將3ee9重鏈和輕鏈編碼序列(分別是SEQIDNO:126和125)與pDONR221(InvitrogenCat.#12536-017)重組以產(chǎn)生載體3ee9H+LpENTR。使用GatewayLRClonaseII酶混合物(InvitrogenCat.#11791-100)經(jīng)3ee9H+LpENTR和pCMV—UCOE8—DEST之間的重組而產(chǎn)生了載體3ee9h+l.pCMVUCOE8。如下所述構(gòu)建pCMV—UCOE8—DEST。將Gateway載體轉(zhuǎn)變盒(Invitrogen;cat#11828-029)插入到pCET906的Smal位點中以產(chǎn)生載體pCET906—gw。從MLLaboratories獲得載體pCET906,它凈皮充分描述于Williamset.al.,BMCBiotechnology,(2005),5:17,將其引入本文作為參考。然后將來自pCET906一gw的大約2900個堿基對的Agel限制酶片段克隆到pCET1015的Agel位點中以產(chǎn)生pCMV—UCOE8—DEST。也從MLLaboratories獲得載體pCET1015,它描述于Williamsetal.中，同上。在抗ccdB毒素基因的大腸桿菌菌抹(諸如作為"一次命中ccdB存活T細(xì)胞,，("OneShotccdBSurvivalTlcells，，)進(jìn)行銷售的來自Invitrogen(cat#:C7510-03)的那些)中增殖載體pCMV—UCOE8—DEST。3ee9H+LpCMVUCOE8插入片段的完整核苷酸序列示于圖29中，也就是從載體3ee9pMORPHx9獲得的編碼人IgG抗MN抗體的完整核苷酸序列，該抗體包括分別為SEQIDNO:126和125的k和重《逸CDR可變區(qū)。細(xì)胞克隆3ee9.25的分離為了用載體3ee9h+l.pCMVUCOE8轉(zhuǎn)染CHO-S細(xì)月包，將60嗎的DNA稀釋到2mL的CDCHO完全培養(yǎng)基(mvitrogeirfl0743-029)中，其含有8mML-谷胺酰胺和HT(invitrogen)且不含PenStrep。接下來將2ml的CDCHO完全培養(yǎng)基加入到250ml錐形瓶中。然后將150的DMRIE-C(Invitrogenca估10459-014)加入到瓶中，室溫保溫10分鐘。然后將稀釋的DNA與稀釋的DMRIE-C混合，用5%C02吹掃，室溫保溫30分鐘。保溫期間，在CDCHO完全培養(yǎng)基(沒有P/S)中制備4ml密度為5xl06c/mL(總共2xl0個細(xì)胞)的CHO-S細(xì)胞。保溫之后，將細(xì)胞加入到帶有DNA-DMRIE-C復(fù)合物的瓶中，然后輕輕渦旋進(jìn)行混合。然后用5%C02吹掃，37。C下125rpm振蕩4小時。接下來，將32ml的不含PenStrep的CDCHO完全培養(yǎng)基加入到瓶中，用5%C02吹掃，然后回到振蕩器(37°C)中過夜。24小時后，計數(shù)細(xì)胞，旋轉(zhuǎn)，以適當(dāng)細(xì)胞密度重懸浮在添加了5.5mL/LPenStrep的帶有20%條件培養(yǎng)基和抗生素(12.5pg/ml嘌呤霉素)的CDCHO完全培養(yǎng)基中進(jìn)行鋪板。將細(xì)胞以100、300、900和2700個細(xì)胞/孔鋪在96孔平板中。然后將平玲反保溫在5%032培養(yǎng)箱中大約3周。小心不要干擾板。從這樣的平板擴(kuò)增個體克隆，該平板具有的孔中少于20%的孔中含有單個菌落。將細(xì)胞擴(kuò)增到每孔帶有1ml選擇培養(yǎng)基的非組織處理的24孔平板上。將細(xì)胞保溫大約l周，如果需要的話，其間可加入500jaL新鮮培養(yǎng)基。在單個稀釋物中測試抗體表達(dá)以排除不表達(dá)的克隆。<吏用1:5稀釋物(5uL上清液加入95uLTBS/吐溫)一式兩份經(jīng)ELISA測試克隆。排除所得OD(光密度)低于0.1的克隆。將陽性克隆擴(kuò)增到非組織處理的6孔平板上。接下來以4xl(^個細(xì)胞/mL的密度用5mL細(xì)胞進(jìn)行接種。保溫4天后，經(jīng)ELISA確定蛋白表達(dá)。使用1:50、1:100、1:200和1:400稀釋物測試克隆。克隆3ee9.25顯示了最高的分泌抗體濃度。將3ee9.25細(xì)胞轉(zhuǎn)移到125mL錐形瓶中，以2xl05個細(xì)胞/mL進(jìn)行接種以適合細(xì)胞懸浮生長?？筂NIgG的表達(dá)將轉(zhuǎn)染的CHO-S細(xì)胞以500,000個細(xì)胞/ml接種到Wave10升生物反應(yīng)器(WaveBiotech,300FranklinSquareDrive,Somerset,NewJersey,08873，USA)中。細(xì)胞在50%CD-CHO培養(yǎng)基(Invitrogen10743)、50%SigmaCHO培養(yǎng)基第5號(Sigma0363)、1%FCS、lxHT添加物(Invitrogen11067-030)、青霉素/鏈霉素(Invitrogen15140-122)、8mML隱谷胺酰胺(Invitrogen25030-081)和12.5貼/ml噤呤霉素(BD631305)中培養(yǎng)七天，生物反應(yīng)器在5。/oC02下于37。C以25rpm進(jìn)行振蕩。發(fā)酵周期結(jié)束之后，通過離心收集消耗的培養(yǎng)基，在IgG純化之前進(jìn)行無菌過濾(0.2闊?？筂NIgG的純化使用Prep-ScaleTFF-230kDCartridge(Millipore)將10到20L含IgG的細(xì)胞培養(yǎng)基典型地濃縮2到5倍。向濃縮培養(yǎng)基中加入lMTris-Cl緩沖液pH7.5到終濃度50mM。然后加入5.0MNaCl到終濃度150mM。典型地將濃縮培養(yǎng)基加樣到用PBS,pH7.4平衡過的30mL蛋白瓊脂糖柱中。用含有0.1%吐溫20和lmMEDTA的PBSpH7.4漂洗柱子。然后用PBS漂洗柱子，用100mM甘氨酸緩沖液pH3.0洗脫。一收集，就用1MTris-ClpH7.8將級分中和到pH7.5。經(jīng)透析將純化的IgG轉(zhuǎn)移到PBS中，通過過濾(0.2pM)滅菌。將最終純化的抗體制劑調(diào)整到1和5mg/mL之間，通過用考馬斯亮藍(lán)染色的SDSPAGE凝膠確定，它顯示出>95%的純度，其中蛋白作為兩條帶進(jìn)行遷移，相應(yīng)于Mr二50kDa的重鏈和Mr25kDa的輕鏈，通過SECHPLC確定，它具有小于lEU/mg蛋白的內(nèi)毒素水平以及小于10%的蛋白聚集。也通過表面等離子共振對制劑的MN抗原結(jié)合進(jìn)行功能性Q.C.,通過FACS測定了對表達(dá)MN的細(xì)胞的結(jié)合，通過自動成像(Cellomics)確定了它內(nèi)化到表達(dá)MN的細(xì)胞中。20L混合發(fā)酵物典型地產(chǎn)生1克純化蛋白，總回收率在50到75%。使用ABIProcise494HT測序儀對純化的全長3ee9抗體的255pmol最終制劑進(jìn)行N端測序，產(chǎn)生了368pmo1的如下預(yù)期序列的成熟k輕鏈3ee9的成熟Vk1輕鏈(SEQIDNO:146)的相應(yīng)N端序列是相同的。未通過Edman測序檢測到重鏈，這表明它的序列被封閉了。承*承如此詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，但要明白的是，由上述段落定義的發(fā)明并不打算被限定到上述說明書中提供的特定細(xì)節(jié)，因為它的許多顯而易見的改變都是可能的，只要不背離本發(fā)明的精神或范圍。權(quán)利要求1.具有特異性針對MN蛋白的抗原結(jié)合位點的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括至少一個CDR1、CDR2或CDR3(a)所述CDR1選自SEQIDNO57，58，59，60，61，62，77，80，81，86，87，88，89，98，99，104，107，108，以及與SEQIDNO57，58，59，60，61，62，77，80，81，86，87，88，89，98，99，104，107或108的任一序列具有高于大約80％序列同一性的氨基酸序列；(b)所述CDR2選自SEQIDNO63，64，65，66，67，68，69，78，82，83，90，91，92，93，100，101，105，109，110，以及與SEQIDNO63，64，65，66，67，68，69，78，82，83，90，91，92，93，100，101，105，109或110的任一序列具有高于大約80％序列同一性的氨基酸序列；并且(c)所述CDR3選自SEQIDNO70，71，72，73，74，75，76，79，84，85，94，95，96，97，102，103，106，111，112，以及與SEQIDNO70，71，72，73，74，75，76，79，84，85，94，95，96，97，102，103，106，111或112的任一序列具有高于大約80％序列同一性的氨基酸序列。2.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括重鏈可變區(qū)CDR,其選自SEQIDNO:57-85以及與SEQIDNO:57-85的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。3.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括輕4連可變區(qū)CDR,其選自SEQIDNO:86-112以及與SEQIDNO:86-112的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。4.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括一組CDR序列，其選自(a)[3ee9〗SEQIDNOS:57,63，70，89,93和97;(b)[3ef2]SEQIDNOS:58,64,71,107,109和111;(c)[le4]SEQIDNOS:59,65,72,107,109和111;(d)[3a4]SEQIDNOS:60,66,73,108,110和112;(e)[3ab4]SEQIDNOS:61,67,74,87,91和95;(f)[3ahl0]SEQIDNOS:61，68,75,88,92和96;(g)[3bb2]SEQIDNOS:62,69,76,98,100和102;(h)[laal]SEQIDNOS:77,78,79,86,90和94;(i)[5a6]SEQIDNOS:80,82,84,99,101和103;以及(j)[5aa3]SEQIDNOS:81,83,85,104,105和106。5.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括一組重鏈CDR序列，其選自(a)[3ee9]SEQIDNOS:57,63和70;(b)[3ef2]SEQIDNOS:58,64和71;(c)[le4]SEQIDNOS:59,65和72;(d)[3a4]SEQIDNOS:60,66和73;(e)[3ab4]SEQIDNOS:61,67和74;(f)[3ahl0]SEQIDNOS:61,68和75;(g)[3bb2]SEQIDNOS:62,69和76;(h)[laal]SEQIDNOS:77,78和79;(i)[5a6]SEQIDNOS:80,82和84;以及①[5aa3]SEQIDNOS:81，83和85。6.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括一組輕鏈CDR序列，其選自(a)[3ee9]SEQIDNOS:89,93和97;(b)[3ef2]SEQIDNOS:107,109和111;(c)[le4]SEQIDNOS:107,109和111;(d)[3a4]SEQIDNOS:108,110和112;(e)[3ab4]SEQIDNOS:87,91和95;(f)[3ahl0]SEQIDNOS:88,92和96;Cg)[3bb2]SEQIDNOS:98,100和102;(h)[laal]SEQIDNOS:86,90和94;(i)[5a6]SEQIDNOS:99,101和103;以及(0[5aa3]SEQIDNOS:104,105和106。7.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段以大約0.15nM到大約50nM的離解常數(shù)結(jié)合到MN蛋白上。8.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中抗體是IgG。9.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中抗體是IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgD、IgE、IgA、IgMFab片段、F(ab，)2片段、scFv片段、Fv片段、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體、生物特異性抗體、嵌合抗體或者多特異性抗體。10.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中抗體或抗體片段是人源化的。11.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中CDR1、CDR2和CDR3是非人的。12.組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或其抗體片段以及一種或多種藥學(xué)輔助性物質(zhì)。13.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中序列同一性高于大約85%。14.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中序列同一性高于大約90%。15.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中序列同一性高于大約95%。16.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中序列同一性高于大約99%。17.對MN蛋白具有反應(yīng)性的組合物，其包括綴合到細(xì)胞毒性試劑上的、具有特異性針對MN蛋白的抗原結(jié)合位點的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括至少一個CDR1、CDR2或CDR3:(a)所述CDR1選自SEQIDNO:57,58,59,60,61,62,77,80，81,86,87,88,89,98,99,104,107,108，以及與SEQIDNO:57,58,59,60,6162,77,80,81,86,87,88,89,98,99,104,107或108的4壬一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列；(b)所述CDR2選自SEQIDNO:63,64,65,66,67,68，69,78,82,83,90,91,92,93,100,101,105,109,110,以及與SEQIDNO:63,64,65,66,67,68,69,78,82,83,90,91,92,93,100,101,105,109或110的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列；并且(c)所述CDR3選自SEQIDNO:70,71,72,73,74,75,76,79,84,85,94,95,96,97,102,103,106,111,112,以及與SEQIDNO:70,71,72,73,74,75,76,79,84,85,94,95,96,97,102,103,106,111或112的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。18.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中抗原結(jié)合位點包括重鏈可變區(qū)CDR，其選自SEQIDNO:57-85以及與SEQIDNO:57-85的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。19.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中抗原結(jié)合位點包括輕鏈可變區(qū)CDR,其選自SEQIDNO:86-112以及與SEQIDNO:86-112的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。20.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中抗原結(jié)合位點包括一組CDR序列，其選自(a)[3ee9]SEQIDNOS:57,63,70,89,93和97;(b)[3ef2]SEQIDNOS:58,64,71,107,109和111;(c)[le4]SEQIDNOS:59,65,72,107,109和111;(d)[3a4]SEQIDNOS:60,66,73,108,110和112;(e)[3ab4]SEQIDNOS:61，67,74,87,91和95;(f)[3ahl0〗SEQIDNOS:61,68,75,88,92和96;(g)[3bb2]SEQIDNOS:62,69,76,98,100和102;(h)[laal]SEQIDNOS:77,78,79,86,90和94;(i)[5a6]SEQIDNOS:99,101和103;以及(j)[5aa3]SEQIDNOS:104,105和106。21.根據(jù)權(quán)利要求17的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括一組重鏈CDR序列，其選自a)[3ee9]SEQIDNOS:57,63和70;b)[3ef2]SEQIDNOS:58,64和71;c)[le4]SEQIDNOS:59,65和72;d)[3a4]SEQIDNOS:60,66和73;e)[3ab4]SEQIDNOS:61,67和74;f)[3ahl0]SEQIDNOS:61,68和75;g)[3bb2]SEQIDNOS:62,69和76;h)[laal]SEQIDNOS:77,78和79;i)[5a6]SEQIDNOS:80,82和84;以及j)[5aa3]SEQIDNOS:81,83和85。22.根據(jù)權(quán)利要求17的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括一組輕鏈CDR序列，其選自a)[3ee9]SEQIDNOS:89,93和97;b)[3ef2]SEQIDNOS:107,109和111;c)[le4]SEQIDNOS:107,109和111;d)[3a4]SEQIDNOS:108,110和112;e)[3ab4〗SEQIDNOS:87,91和95;f)[3ahl0]SEQIDNOS:88,92和96;g)[3bb2]SEQIDNOS:98,100和102;h)[laal〗SEQIDNOS:86,90和94;i)[5a6]SEQIDNOS:99,101和103;以及j)[5aa3〗SEQIDNOS:104,105和106。23.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中細(xì)胞毒性試劑選自單甲基金抑素-E或其功能性類似物、單甲基金抑素-F或其功能性類似物、阿普立丁、氮雜尿苷、阿那曲唑、氮雜胞苷、博來霉素、硼替左米、薯司他丁-1、白消安、刺孢霉素、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、卡氮芥、塞來西布、苯丁酸氮芥、順鉑、伊立替康(CPT-l1)、SN-38、卡鉑、克拉屈濱、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、達(dá)卡巴嗪、多西他賽、放線菌素、葡糖苷酸柔紅霉素、正定霉素、地塞米+>、己烯雌酚、阿霉素、葡糖苷酸阿霉素、葡糖苷酸表阿霉素、炔雌醇、雌氮芥、依托泊苷、葡糖苷醵依托泊苷、磷酸依托泊苦、氟尿苷(FUdR)、3',5'-0-二油酰-FudR(FUdR-dO)、氟達(dá)^立濱、氟利坦、氟尿嘧啶、氟羥甲睪酮、吉西他濱、己酸羥孕酮、羥基脲、去甲柔毛霉素、異環(huán)磷酰胺、L-天冬酰胺酶、甲酰四氬葉酸、羅氮芥、氮芥、醋酸甲孕酮、醋酸甲地孕酮、美法侖、巰基噤呤、6-巰基嘌呤、氨甲喋呤、米托恩醌、光神霉素、絲裂霉素、米托坦、丁酸苯酯、強(qiáng)的松、曱基節(jié)肼、紫杉醇、噴托他丁、PSI-341、司莫司汀、鏈脲霉素、他莫昔芬、紫杉烷、紫杉醇、丙酸睪酮、沙立度胺、巰基鳥嘌呤、塞替哌、替尼泊普、拓樸替康、尿嘧啶氮芥、萬珂、長春花堿、長春瑞賓、長春新堿、蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、核糖核酸酶、豹蛙酶、rapLRl、DNA酶I、葡萄球菌腸毒素-A、美洲商陸抗病毒蛋白、多花白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素、假單胞菌內(nèi)毒素以及它們的組合。24.權(quán)利要求17的組合物，其中細(xì)胞毒性試劑是單甲基金抑素-E或其功能性類似物。25.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中抗體或抗體片段以大約0.15nM到大約50nM的離解常數(shù)結(jié)合到MN蛋白上。26.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中抗體是IgG。27.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中抗體或抗體片段是IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgD、IgE、IgA、或IgM同種型、Fab片,爻、F(ab，)2片段、scFv片段、Fv片段、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體、生物特異性抗體、嵌合抗體或者多特異性抗體。28.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中抗體或抗體片段是人源化的。29.根據(jù)權(quán)利要求17的抗體或抗體片段，其中CDR1、CDR2和CDR3是非人的。30.用于治療患有MN相關(guān)癌癥的受試者的組合物，其包括抗癌試劑以及綴合到細(xì)胞毒性試劑上的、具有特異性針對MN蛋白的抗原結(jié)合位點的抗體或其抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括至少一個CDR1、CDR2或CDR3:a)所述CDR1選自SEQIDNO:57,58,59,60,61,62,77,80,81,86，87,88,89,98,99,104,107,108,以及與SEQIDNO:57,58,59,60,6162,77,80,81,86,87,88,89,98,99,104,107或108的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列；b)所述CDR2選自SEQIDNO:63,64,65,66,67,68,69,78，82,83,90，91,92,93,100,101,105,109,110，以及與SEQIDNO:63,64,65,66,67，68,69,78,82,83,90,91,92,93，100,101,105,109或110的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列；并且c)所述CDR3選自SEQIDNO:70,71,72,73,74,75,76，79，84，85,94,95,96,97,102,103,106,111,112,以及與SEQIDNO:70,71,72,73,74,75,76,79,84,85,94,95,96,97,102,103,106,111或112的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。31.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗原結(jié)合位點包括重鏈可變區(qū)CDR,其選自SEQIDNO:57-85以及與SEQIDNO:57-85的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。32.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗原結(jié)合位點包括輕鏈可變區(qū)CDR,其選自SEQIDNO:86-112以及與SEQIDNO:86-112的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。33.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗原結(jié)合位點包括一組CDR序列，其選自a)[3ee9]SEQIDNOS:57，63,70,89,93和97;b)[3ef2]SEQIDNOS:58,64,71,107,109和111;c)[le4]SEQIDNOS:59,65,72，107,109和111;d)[3a4]SEQIDNOS:60,66,73,108,110和112;e)[3ab4]SEQIDNOS:61,67,74,87,91和95;f)[3ahl0〗SEQIDNOS:61,68,75,88,92和96;g)[3bb2]SEQIDNOS:62,69,76,98,100和102;h)[laal]SEQIDNOS:77,78,79,86,90和94;i)[5a6]SEQIDNOS:80,82,84,99,101和103;以及j)[5aa3]SEQIDNOS:81,83,85,104,105和106。34.才艮據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗原結(jié)合位點包括一組重鏈CDR序列，其選自a)[3ee9]SEQIDNOS:57,63和70;b)〖3ef2]SEQIDNOS:58,64和71;c)[le4]SEQIDNOS:59,65和72;d)[3a4]SEQIDNOS:60,66和73;e)[3ab4]SEQIDNOS:61,67和74;f)[3ahl0〗SEQIDNOS:61,68和75;g)[3bb2]SEQIDNOS:62,69和76;h)[laal〗SEQIDNOS:77,78和79;i)[5a6]SEQIDNOS:80,82和84;以及j)[5aa3]SEQIDNOS:81,83和85。35.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗原結(jié)合位點包括一組輕鏈CDR序列，其選自a)[3ee9]SEQIDNOS:89,93和97;b)[3ef2]SEQIDNOS:107,109和111;c)[le4]SEQIDNOS:107,109和111;d)[3a4]SEQIDNOS:108,110和112;e)[3ab4]SEQIDNOS:87，91和95;f)[3ahl0]SEQIDNOS:88，92和96;g)[3bb2]SEQIDNOS:98,100和102;h)[laal]SEQIDNOS:86,90和94;i)[5a6]SEQIDNOS:99,101和103;以及j)[5aa3]SEQIDNOS:104,105和106。36.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗癌試劑選自博來霉素、多西他賽(肽帝索)、阿霉素、依達(dá)曲沙、厄洛替尼(特羅凱)、依托泊苷、非那雄胺(保列治)、氟利坦(氟他胺)、吉西他濱(健擇)、吉非替尼(易瑞沙)、醋酸性瑞林(諾雷德)、格雷西隆(凱特瑞)、伊馬替尼(格列衛(wèi))、伊立替康(開普拓/開普拓沙)、奧丹西隆(樞復(fù)寧)、紫杉醇(他克唑)、培加帕酶(培門冬酶)、鹽酸毛果蕓香堿(匹羅卡品)、卟吩姆鈉(光lt文素)、白介素-2(普羅白精)、利妥希單抗(利妥?，?、拓樸替康(鹽酸拓樸替康)、司徒曼布(赫賽汀)、特立平、長春新堿、長春瑞賓(諾維本)，以及它們的治療性抗體或片段。37.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗癌試劑是抗血管生成試劑，選自制管張素、貝伐單抗(阿瓦斯丁⑧)、索拉非尼(多吉美⑧)、桿抑素、癌抑素、乳腺絲抑蛋白、抗VEGF抗體或肽、抗胎盤生長因子抗體或肽、抗Flk-l抗體、抗Flt-l抗體或肽、層粘連蛋白肽、纖連蛋白肽、纖溶酶原激活物抑制劑、組織金屬蛋白酶抑制劑、干擾素、白介素12、IP-IO、Gro-P、血小板反應(yīng)蛋白、2-曱氧基雌二醇、增殖蛋白相關(guān)蛋白、酰胺基三唑、CM101、馬馬司他、戊聚糖多v5危酸鹽、血管生成素2、干擾素-a、除莠霉素A、PNU145156E、16K促乳素片段、羅喹美克、沙立度胺、己酮可可》咸、染4+木素、TNP-470、內(nèi)皮抑制素、紫杉醇、阿卡丁、西多福韋、長春新堿、博來霉素、AGM-1470、血小板第四因子和米諾環(huán)素。38.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗癌試劑是阻斷或抑制多藥物抗性表型的試劑，選自他莫昔芬、維拉帕米和環(huán)孢菌素A。39.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中細(xì)胞毒性試劑是單曱基金抑素-E或其功能性類似物。40.根據(jù)權(quán)利要求31的組合物，其中細(xì)胞毒性試劑是單甲基金抑素-E或其功能性類似物。41.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗體或抗體片段以大約0.15nM到大約50nM的離解常數(shù)結(jié)合到MN蛋白上。42.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗體是IgG。43.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗體或抗體片段是IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgD、IgE、IgA、或IgM同種型、Fab片段、F(ab')2片段、scFv片段、Fv片段、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體、生物特異性抗體、嵌合抗體或者多特異性抗體。44.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中抗體或抗體片段是人源化的。45.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中CDR1、CDR2和CDR3是非人的。46.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中序列同一性高于大約85%。47.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中序列同一性高于大約90%。48.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中序列同一性高于大約95%。49.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中序列同一性高于大約99%。50.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其中癌癥是實體瘤的形式。51.根據(jù)權(quán)利要求50的組合物，其中實體瘤位于或源自乳腺、呼吸道、肺、腦、生殖器、消化道、結(jié)腸、泌尿道、腎、食道、子宮頸、眼、肝、皮膚、頭部、頸部、甲狀腺和曱狀旁腺。52.診斷以異常MN水平為特征的MN相關(guān)病癥的方法，包括將疑似患病組織或細(xì)胞中的MN水平與相應(yīng)健康組織或細(xì)胞中的MN水平進(jìn)行比較，其中疑似患病組織或細(xì)胞中的異常MN水平是MN相關(guān)病癥的征兆，所述比較步驟進(jìn)一步包括用根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段才全測患病組織和^:康組織中的MN水平。53.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中與MN有關(guān)的紊亂是癌癥。54.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中癌癥是實體瘤的形式。55.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中實體瘤位于或源自乳腺、呼吸道、肺、腦、生殖器、消化道、結(jié)腸、泌尿道、腎、食道、子宮頸、目艮、肝、皮膚、頭部、頸部、曱狀腺和甲狀旁腺。56.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中比較步驟進(jìn)一步包括以下步驟a);險測it康組織中的MN蛋白水平；b)檢測疑似患病組織中的MN蛋白水平；以及c)比4交(a)和(b)的MN蛋白水平，其中當(dāng)與健康組織中的MN蛋白水平相比，1€似患病組織中的MN蛋白水平升高表示存在MN相關(guān)病癥。57.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中檢測步驟是通過核成像形式實現(xiàn)的。58.根據(jù)權(quán)利要求57的方法，其中核成像形式是SPECT或PET。59.試劑盒，其包括根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片^a以及在治療MN相關(guān)病癥的方法中4吏用試劑盒的一套il明書。60.試劑盒，其包括根據(jù)權(quán)利要求17的組合物以及在治療MN相關(guān)病癥的方法中使用試劑盒的一套說明書。61.試劑盒，其包括根據(jù)權(quán)利要求30的組合物以及在治療MN相關(guān)病癥的方法中使用試劑盒的一套說明書。62.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中序列同一性高于大約85%。63.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中序列同一性高于大約90%。64.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中序列同一性高于大約95%。65.根據(jù)權(quán)利要求15的組合物，其中序列同一性高于大約99%。66.治療以受試者中的異常MN水平為特征的MN相關(guān)病癥的方法，包括給予治療有效量的具有特異性針對MN蛋白的抗原結(jié)合位點的抗體或抗體片l殳，其中抗原結(jié)合位點包括至少一個CDR1、CDR2或CDR3:a)所述CDR1選自SEQIDNO:57,58,59，60,61,62,77,80,81,86,87,88,89,98,99,104,107,108,以及與SEQIDNO:57,58,59,60,6162,77,80,81,86,87,88,89,98,99,104,107或108的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列；b)所述CDR2選自SEQIDNO:63,64,65,66,67,68,69,78,82,83,90,91,92,93,100,101,105,109,110,以及與SEQIDNO:63,64,65,66,67,68，69,78,82,83,90,91,92,93,100,101,105,109或110的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列；并且c)所述CDR3選自SEQIDNO:70,71,72,73,74,75,76,79,84,85,94,95,96,97,102,103,106,111,112,以及與SEQIDNO:70,71,72,73,74,75,76,79,84,85,94,95,96,97,102,103,106,111或112的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。67.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中抗原結(jié)合位點包括重鏈可變區(qū)CDR,其選自SEQIDNO:57-85以及與SEQIDNO:57-85的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。68.才艮據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中抗原結(jié)合位點包括輕鏈可變區(qū)CDR,其選自SEQIDNO:86-112以及與SEQIDNO:86-112的任一序列具有高于大約80%序列同一性的氨基酸序列。69.才艮據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中抗原結(jié)合位點包括一組CDR序列，其選自a)[3ee9]SEQIDNOS:57,63,70,89,93和97;b)[3ef2]SEQIDNOS:58,64,71,107,109和111;c)[le4]SEQIDNOS:59，65,72,107，109和111;d)[3a4]SEQIDNOS:60,66,73,108,110和112;e)[3ab4]SEQIDNOS:61,67,74,87，91和95;f)[3ahl0]SEQIDNOS:61,68,75,88,92和96;g)[3bb2]SEQIDNOS:62,69,76,98，100和102;h)[laal]SEQIDNOS:77,78,79,86,90和94;i)[5a6]SEQIDNOS:80,82,84，99,101和103;以及j)[5aa3]SEQIDNOS:81,83,85,104,105和106。70.根據(jù)權(quán)利要求66的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括一組重鏈CDR序列，其選自b)[3ee9]SEQIDNOS:57，63和70;c)[3ef2]SEQIDNOS:58,64和71;d)[le4]SEQIDNOS:59,65和72;e)[3a4]SEQIDNOS:60,66和73;f)[3ab4]SEQIDNOS:61,67和74;g)[3ahl0]SEQIDNOS:61,68和75;h)[3bb2]SEQIDNOS:62,69和76;i)[laal]SEQIDNOS:77,78和79;j)[5a6]SEQIDNOS:80,82和84;以及k)[5aa3]SEQIDNOS:81,83和85。71.根據(jù)權(quán)利要求66的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括一組輕《連CDR序列，其選自a)[3ee9]SEQIDNOS:89,93和97;b)[3ef2]SEQIDNOS:107，09和111;c)[le4]SEQIDNOS:107,109和111;d)[3a4]SEQIDNOS:108,110和112;e)[3ab4]SEQIDNOS:87,91和95;f)[3ahl0]SEQIDNOS:88,92和96;g)[3bb2]SEQIDNOS:98,100和102;h)[laal]SEQIDNOS:86,90和94;i)[5a6]SEQIDNOS:99,101和103;以及j)[5aa3〗SEQIDNOS:104,105和106。72.才艮據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中抗體或抗體片l更以大約0.15nM到大約50nM的離解常數(shù)結(jié)合到MN蛋白上。73.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中抗體是IgG。74.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中抗體或抗體片段是IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgD、IgE、IgA、或IgM、Fab片段、F(ab，》片段、scFv片段、Fv片段、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體、生物特異性抗體、嵌合抗體或者多特異性抗體。75.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，76.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，的。77.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，78.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，79.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，80.根據(jù)權(quán)利要求66的方法,81.根據(jù)權(quán)利要求66的方法性試劑上。82.4艮據(jù)權(quán)利要求81的方法，其中細(xì)胞毒性試劑選自單曱基金抑其中抗體或抗體片段是人源化的。其中CDR1、CDR2和CDR3是非人其中序列同一性高于大約85%。其中序列同一性高于大約90%。其中序列同一性高于大約95%。其中序列同一性高于大約99%。其中抗體或抗體片段綴合到細(xì)胞毒素-E或其功能性類似物、單甲基金抑素-F或其功能性類似物、阿普立丁、氮雜尿苷、阿那曲唑、氮雜胞苷、博來霉素、硼替左米、薯司他丁-1、白消安、刺孢霉素、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、卡氮芥、塞來西布、苯丁酸氮芥、順鉑、伊立替康(CPT-11)、SN-38、卡鉑、克拉屈濱、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、達(dá)卡巴。秦、多西他賽、放線菌素、葡糖苷酸柔紅霉素、正定霉素、地塞米松、己烯雌酚、阿霉素、葡糖苷酸阿霉素、葡糖苷酸表阿霉素、炔雌醇、雌氮芥、依托泊苦、葡糖苷酸依托泊苦、磷酸依托泊苷、氟尿苷(FUdR)、3',5'-0-二油酰-FudR(FUdR-dO)、氟達(dá)拉濱、氟利坦、氟尿嘧啶、氟羥曱睪酮、吉西他濱、己酸羥孕酮、羥基脲、去甲柔毛霉素、異環(huán)磷酰胺、L-天冬酰胺酶、甲酰四氫葉酸、羅氮芥、氮芥、醋酸甲孕酮、醋酸甲地孕酮、美法侖、巰基。票呤、6-巰基嘌呤、氨甲喋呤、米托恩醌、光神霉素、絲裂霉素、米托坦、丁酸苯酯、強(qiáng)的松、甲基芐肼、紫杉醇、噴托他丁、PSI-341、司莫司汀、鏈脲霉素、他莫昔芬、紫杉烷、紫杉醇、丙酸睪酮、沙立度胺、巰基鳥嘌呤、塞替哌、替尼泊苷、拓樸替康、尿嘧啶氮芥、萬珂、長春花堿、長春瑞賓、長春新堿、蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、核糖核酸酶、豹蛙酶、rapLRl、DNA酶I、葡萄球菌腸毒素-A、美洲商陸抗病毒蛋白、多花白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素、假單胞菌內(nèi)毒素以及它們的組合。83.權(quán)利要求82的方法，其中細(xì)胞毒性試劑是單甲基金抑素-E或其功能性類似物。84.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，進(jìn)一步包括共同給予抗癌試劑。85.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，其中抗癌試劑選自博來霉素、多西他賽(肽帝索)、阿霉素、依達(dá)曲沙、厄洛替尼(特羅凱)、依托泊苷、非那雄胺(保列治)、氟利坦(氟他胺)、吉西他濱(健擇)、吉非替尼(易瑞沙)、醋酸性瑞林(諾雷德)、格雷西隆(凱特瑞)、伊馬替尼(格列衛(wèi))、伊立替康(開普拓/開普拓沙)、奧丹西隆(樞復(fù)寧)、紫杉醇(他克唑)、培加帕酶(培門冬酶)、鹽酸毛果蕓香堿(匹羅卡品)、外吩姆鈉(光敏素)、白介素-2(普羅白精)、利妥希單抗(利妥?，?、拓樸替康(鹽酸拓樸替康)、司徒曼布(赫賽汀)、特立平、長春新堿和長春瑞賓(諾維本)，以及它們的治療性抗體或片段。86.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，其中抗癌試劑是阻斷或抑制多藥物抗性表型的試劑，選自他莫昔芬、維拉帕米和環(huán)孢菌素A。87.4艮據(jù)斥又利要求66的方法，其中MN相關(guān)病癥是癌癥。88.根據(jù)權(quán)利要求87的方法，其中癌癥是實體瘤癌癥。89.根據(jù)權(quán)利要求88的組合物，其中實體瘤位于或源自乳腺、呼吸道、肺、腦、生殖器、消化道、結(jié)腸、泌尿道、腎、食道、子宮頸、眼、肝、皮膚、頭部、頸部、曱狀腺和甲狀旁腺。90.根據(jù)權(quán)利要求l的抗體或抗體片段，其中抗原結(jié)合位點包括一對重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其選自(a)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:133和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:134;(b)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:135和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:136;(c)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:137和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:138;(d)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:139和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:140;(e)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:141和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:142;(f)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:143和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:144;(g)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:145和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:146;(h)重《連可變區(qū)SEQIDNO:147和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:148;(i)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:149和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:150;以及(j)重鏈可變區(qū)SEQIDNO:151和輕鏈可變區(qū)SEQIDNO:152。91.由SEQIDNO:153的核苷酸序列編碼的抗MNIgG抗體。全文摘要本發(fā)明提供了具有特異性針對MN蛋白的抗原結(jié)合位點的抗體，以及使用這些抗體治療和診斷MN相關(guān)病癥的方法。文檔編號C12N5/02GK101501184SQ200680052716公開日2009年8月5日申請日期2006年12月12日優(yōu)先權(quán)日2005年12月12日發(fā)明者G·蘭杰斯,L·阿德南,P·坦布里尼,P·特雷爾,S·哈,T·麥凱布申請人:拜爾健康護(hù)理有限責(zé)任公司