專利名稱：：RNAi介導(dǎo)的高眼壓靶標的抑制的制作方法RNAi介導(dǎo)的高a艮壓靶標的抑制發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及干擾RNA組合物的領(lǐng)域，該組合物用于抑制青光眼特別是原發(fā)性開角型青光眼眼壓靶標的表達。發(fā)明背景青光眼是具有一定臨床特征的視神經(jīng)病的異質(zhì)群體，青光眼視力的喪失是由于神經(jīng)視網(wǎng)膜中的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞選擇性死亡造成的，臨床診斷表現(xiàn)為視野的特征性變化、神經(jīng)纖維層缺損和視盤(ONH)的進行性凹陷。青光眼形成的主要危險因素之一是存在高眼壓(升高的眼內(nèi)壓，IOP)。適當?shù)难蹆?nèi)壓對于保持眼睛形狀和提供壓力梯度使房水向無血管角膜和晶狀體流動是必要的。普通眼壓性青光眼(NTG)的發(fā)病機理可能也涉及IOP水平，受益于降IOP藥物的患者可以證明這一點。對NTG患者進行眼壓測量時，一旦調(diào)整中央角膜厚炎可能就會發(fā)現(xiàn)這些患者中許多人有高眼壓。與青光眼有關(guān)的升高的IOP是由于小梁(TM)中升高的房水排出受阻所致，小梁是位于眼球前房的虹膜-角膜角中微小的專門組織。青光眼對沉積和積聚。另外，青光眼的ONH中也發(fā)生變化。在青光眼中，ONH神經(jīng)膠質(zhì)細胞中存在形態(tài)學(xué)上的和移動性的變化。應(yīng)答升高的IOP和/或短暫性腦缺血損傷，ONH細胞外基質(zhì)組分發(fā)生變化以及膠質(zhì)細胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞軸突的形態(tài)發(fā)生改變。原發(fā)性青光眼起因于具有解剖學(xué)或生理學(xué)基礎(chǔ)的眼內(nèi)液流動紊亂。繼發(fā)性青光眼是由于眼損傷或眼外傷或原有疾病所致。原發(fā)性開角型青光眼(POAG)，也稱為慢性或單純性青光眼，占所有原發(fā)性青光眼的卯％。POAG的特征在于小梁的變性，導(dǎo)致對眼中引流產(chǎn)生異常高的阻力。這種阻力的結(jié)果是導(dǎo)致IOP升高，IOP升高是為了驅(qū)動由眼睛正常產(chǎn)生的流體以克服增加的阻力。目前，抗青光眼的治療包括通過使用房水形成的抑制劑或增加眼色素層鞏膜外流量的物質(zhì)、激光小梁成形術(shù)或小梁切除術(shù)(其為改善引流的過濾手術(shù))，降低IOP。藥物學(xué)上的抗青光眼方法表現(xiàn)出多種不良副作用。例如，縮瞳藥如匹魯卡品可引起視力模糊和其他負面的視力副作用。全身性施用的碳酸酐酶抑制劑(CAI)也可引起惡心、消化不良、疲勞和代謝性酸中毒。另外，某些p受體阻滯劑已日益變得與嚴重的肺部副作用相關(guān)，這歸因于它們對肺組織中P-2受體的影響。仿交感神經(jīng)作用的胺物引起心動過速、心律失常和高血壓。這種負面的副作用可能導(dǎo)致病人的依從性減少或治療的終止。此外，目前的IOP降低療法的療效相對較短，需要每天重復(fù)給藥，且在某些情況下，藥效隨時間而減弱。鑒于高眼壓在青光眼中的重要性以及以前治療方法的不足，需要有一種治療高眼壓的改良的方法來解決其進展的根本原因。發(fā)明概述本發(fā)明是針對干擾RNA，該干擾RNA沉默高眼壓靶標mRNA表達，從而降低開角型青光眼及高眼壓患者的眼內(nèi)壓。高眼壓靶標包括碳酸酐酶II、IV和XII;pl和p2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶；或Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白。本發(fā)明的干擾RNA有助于治療開角型青光眼或高眼壓患者。本發(fā)明的一個實施方案提供了在受試者中減弱高眼壓靶標mRNA表達的方法，該高眼壓靶標mRNA是如碳酸酐酶II、IV或XII;pi或卩2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；3+/1^-入1酶或者~3-1<:-2(:1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白mRNA。該方法包括給受試者施用組合物，該組合物包括有效量的具有19-49個核苷酸長度的干擾RNA和藥物可接受載體對受試者的眼部給藥，以減弱人體內(nèi)高眼壓靶標的表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，干擾RNA包括有義核苷酸鏈、反義核酸鏈和至少19個核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。另外，反義鏈在生理條件下與mRNA的部分雜充所述mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQID戮126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134,這些是有義cDNA序列，分別編碼碳酸酐酶II和IV、pi和卩2腎上腺素能受體、乙酰膽堿酯酶(ACHE)的變體E4-E5、Na+/K+-ATP酶a2多肽、Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白NKCC2(SLC12A1)、碳酸酐酶XII變體1、乙酰膽堿酯酶變體E4-E6、Na+/K+-ATP酶al多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶a3多肽、Na+/K+-ATP酶a4多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶pl多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶|52多肽、Na+/K+-ATP酶卩3多肽、Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白NKCCl(SLC12A2)和碳酸酐酶XII變體2。反義鏈有至少19個核苷酸的與mRNA的雜交部分近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域，所述mRNA分別對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQID脆7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQID隱128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134這類組合物的施用減弱了受試者的高眼壓靶標mRNA的表達。在一個實施方案中，高眼壓靶標mRNA編碼碳酸酐酶II、IV或XII，而反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，并且包含與mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域，所述mRNA分別對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2SEQIDNO:101或SEQIDNO:134在另一個實施方案中，高眼壓靶標mRNA編碼pi或P2腎上腺素能受體，而反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的部分雜充并且包含與分別對應(yīng)于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸的近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。在另外的實施方案中，高目艮壓靶標mRNA編碼乙酰膽堿酯酶，而反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的部分雜交，并且包含與分別對應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸的近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。在另一個實施方案中，高眼壓靼標mRNA編碼Na+/K+-ATP酶的亞基而反義鏈在生理條件下與mRNA的部分雜交(該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:氐SEQIDNO:124SEQIDNO:SEQIDNO:SEQIDNO:127、SEQIDNO.128>SEQIDNO:129^SEQIDNO:13化SEQIDNO:131或SEQIDNO:132>并且包含與mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域(該mRNA分別對應(yīng)于SEQIDNO:6SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、或SEQIDNO:132)。在另一個實施方案中，高眼壓靶標mRNA編碼Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白，而反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的部分雜義并且包含與分別對應(yīng)于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的雜交部分有至少19個核苦酸的近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域在本發(fā)明的一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靼標，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:l,包含核苷酸232、527、721、728、809、810、855、856、921、1139、506、547、548、740、911、1009、1140、1149、1150、1151、1188、1194、1195、1223、1239、1456、1457、1458、100、158、166、247、286、318、322、328、371、412、482、504、505、541、734、772、777、814、972、998、1232、317或401。在本發(fā)明的另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:2，包含核苷酸213、252、258、266、399、457、463、490、595、1064、109、112、125、126、150、261、265、280、398、453、459、462、467、492、534、785、801、825、827、876、1003或1012。在本發(fā)明的另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:101，包含核苦酸191、239、274、275、341、389、412、413、423、687、689、695、710、791、792、794、983、993、994、995、691、1039、1568、2326、2332、2425、2433、2844、2845、2880、2884、2891、2954、2955、2956、2957、2964、2965、3006、3007、3012或3026。在另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:134，包含核苷酸687、1535、2293、2299、2392、2400、2811、2812、2847、2851、2858、2921、2922、2923、2924、2931、2932、2973、2974、2979或2993。本發(fā)明的另一個實施方案提供被設(shè)計成以mRNA為靶標的干擾RNA，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:3，包含核苷酸468、523、799、1563、1565、1569、1593、1613、1614、1626、310、322、726、769、772、801、802、1501、1576、1577、1579、1580、1581、1586、1590、1592、1594、1615、1616、1632、1633或1654。本發(fā)明的另一個實施方案提供被設(shè)計成以mRNA為靶標的干擾RNA^該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:4包含核苷酸329、375^1031、1046、1149、1163、1371、1401、1426、1880、283、607、608、609、619、623、722、857、1037、1091、1115、1124、1136、1137、1151、1164、1393、1394、1395、1406、1407、1427、1428、1429、1442、1725、1726、1756、1757、1758、1767、1790、1791、1792、1793、1803、1861、1869、1971、1972或1979。在本發(fā)明另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:123，包含核苷酸1875、1890、1891、2011、2012、2133或2134。本發(fā)明另一個實施方案提供被設(shè)計成以mRNA為靶標的干擾RNA，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:5，包含核苦酸366、370、384、385、525、588、768、1045、1046、1061、1090、1232、1314、1316、1460、1461、1462、1528、1607、1705、1713、382、393、397、622、1131、1459、1530、2251、2885、2886、386、1231、1315、2047、2049、2053、2055、2057、2125、2126、2127、2250、2253、2258、2260、2318、2395、2397、2404、2405、2643、2645或2887。在另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:124包含核苷酸220K2275^2307、252&25382592、2628、2979、2985、3093、3474、3504、3505、3506、3518、343、442、700、707、811、907、1059、1363、1594、1662、1758、1760、1896、2037或2147。在另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:125，包含核苷酸436、441、443、552、617、701、702、832、2204、2291或2495。本發(fā)明另一個實施方案提供被設(shè)計成以mRNA為靶標的干擾RNA,該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:6包含核苷酸471、199(X308(X3797、4037、4093、4225、4323、5213、5285、214、467、470、472、473、632、825、946、1693、1767、1768、2157、2263、2589、25卯、2765、2988、3094、3144、3145、3344、3345、3418、3666、3828、3850、4040、4041、4061、4882、4894、4900、5040、5114、5115、5128、5129、5253、5296、5375、5384或5385。在本發(fā)明另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為耙標，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:126，包含核苷酸24(X27136118361851、2103、2137、2138、2139、2157、2158、2160、2425、2580、2601、2646、2650、2794、2803、3116、3124、3126、3129或3377。在本發(fā)明另一個實施方案，干擾RNA設(shè)計成以mRNA為靼標，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:127，包含核苷酸113、612、702、833、1101、1732、1733、1836、2070、2071、2143、2328、2475、2861、2862、2952、3203、3281、3377、3379、3470、3471、3554、3614、3615、3616、3617、3625、3626、3642、3646、3647、3653、3655、3797、3801、3803、3809或3810。在另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:128，包含核苦酸126、251、252、253、331、427、429、520、521、530、601、602、603、604、664、665、666、667、675、676、692、696、697、702、703、705、707、847、851、853、859或860。在另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:129，包含核苷酸109&1099、1130、1131、1167、1299、1441、1450、1451、1452、1564、1746、1750、1751、1752、1795、203、204、214、222、224、225、226、380、525、591、612、613、615、635、636、663、664、669、699、765、790、839、840、841、900、卯9、933或947。在另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:130,包含核苷酸1063、1102、1107、1108、1109、1111或1151。在另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為靶標該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:131，包含核苷酸653、654、771、773、841、849、853、917、918、926、927、931、981、983、984、996、998、1022、1023、1160、1214、1355、1356、1381、1394、1425、1474、1550、1620、1707、1740、1753、1825、1956、1965、2598、2599、2608、2828、2829、2888、3012或3251。在本發(fā)明另一個實施方案中，干擾RNA被設(shè)計成以mRNA為耙標，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:132，包含核苷酸292、434、438、457、459、488、490、498、499、592、639、723、774、775、788、857、858、910、911、930、931、932、1009、1010、1023、1024、1111、1146、1147、1220、1246、1321、1325、1326、1327、1331、1437、1548、1571、1785、1786或1787。本發(fā)明另一個實施方案提供被設(shè)計成以mRNA為靶標的千擾RNA，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:7，包含核苷酸675^9741373、1780>2102、2151、2315、2542、2609、3197、67、71、73、353、405、864、911、912、913、1409、1748、1811、1935、1937、1993、2012、2346、2388、2437、2586、3007、3008、3022、3130、3210、3237或3271。本發(fā)明另一個實施方案提供被設(shè)計成以mRNA為靶標的干擾RNA，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:133，包含核苷酸74&749、751lll認1169、1499、1509、1820、2081、2118、2147、2615、2644、2659、2663、2671、2672、2793、2812、2914、2948、3044、3334、3391、3480、3520、3549、3639、3840、3941、3944、4001、4995、4997、5141、5143、5249、5375、5834、5852、5981或6678。除第一種干擾RNA外，本發(fā)明還提供向受試者施用第二種干擾RNA。該方法包括向受試者施用長度為19-49個核苷酸的第二種干擾RNA，所述第二種千擾RNA還包括有義核苷酸鏈、反義核酸鏈和至少19個核苷酸的近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；其中第二種干擾RNA的反義鏈在生理條件下與mRNA的第二部分雜交，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6>SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123^SEQIDNO:12來SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQID脆132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134，而反義鏈與mRNA的第二個雜交部分有至少19個核苷酸的近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域，該mRNA分別對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。第二干擾RNA可能和第一干擾RNA以相同的mRNA為靶標，或以不同的mRNA為靼標。另外，也可以以相似的方式施用第三種、第四種或第五種等千擾RNA。本發(fā)明的另一個實施方案是應(yīng)受試者需要治療高眼壓的方法。該方法包括給受試者眼部施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體。該干擾RNA含有有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個核苷酸的近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域該反義鏈在生理條件下與mRNA的部分雜交，該mRNA對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQTDNO:133或SEQIDNO:134，并且包含與mRNA的雜交部分有至少19個核香酸的近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域，該mRNA分別對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQID隱127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。由此治療高眼壓。本發(fā)明另一個實施方案是在受試者中減弱高眼壓靶標mRNA表達的方法，包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的單鏈千擾RNA和藥物可接受載體。為減弱高眼壓耙標的表達，該單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于序列標識符和反義鏈的上述核苷酸位點的mRNA的部分雜交。本發(fā)明另一個實施方案是在受試者中減弱高眼壓靶標mRNA表達的方法，包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的單鏈千擾RNA和藥物可接受載體，其中，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核普酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:&SEQIDNO:14國SEQIDNO:IO(XSEQIDNO:102SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721，如下。當高眼壓靼標mRNA為編碼碳酸酐酶mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:32、SEQIDNO:83-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:219、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。當高眼壓粑標mRNA為編碼p-腎上腺素能受體mRNA詠干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3，端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:33-SEQIDNO:52和SEQIDNO:220-SEQIDNO:282。當高眼壓耙標mRNA為編碼ACHEmRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:53-SEQIDNO:62和SEQIDNO:283-333。當高眼壓耙標mRNA為編碼ATP1A1mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核普酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90。/。的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:334-SEQIDNO:374。當高眼壓耙標mRNA為編碼ATP1A2mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:63畫SEQIDNO:72和SEQIDNO:375國SEQIDNO:416。當高眼壓耙標mRNA為編碼ATP1A3mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域該連續(xù)核苦酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:417-SEQIDNO:440。當高眼壓靼標mRNA為編碼ATP1A4mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:441曙SEQIDNO:511。當高眼壓耙標mRNA為編碼ATP1B1mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苦酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:512-SEQIDNO:563。當高眼壓靼標mRNA為編碼ATP1B2mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苦酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:564墜SEQIDNO:606。當高眼壓乾標mRNA為編碼ATP1B3mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯°/0的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:607-SEQIDNO:648。當高眼壓耙標mRNA為編碼SLC12A1mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核脊酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:73-SEQIDNO:82和SEQEDNO:649畫SEQIDNO:675。當高眼壓耙標mRNA為編碼SLC12A2mRNA時，干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:676-SEQIDNO:717。在本發(fā)明的另一個實施方案中，連續(xù)核苷酸區(qū)域含有至少14個連續(xù)核苷酸，該連續(xù)核苷酸與序列標識符的序列的3'端次末端的14個核苷酸具有至少85%的序列互補性或至少85%的序列同一4生而在本發(fā)明的另一個實施方案中，連續(xù)核苷酸區(qū)域含有至少15、16、17或18個連續(xù)核苷酸，分別與序列標識符的序列的3'端次末端的15、16、17或18個核苷酸具有至少80%的序列互補性或至少80%的序列同一性。本發(fā)明的一個實施方案是包含干擾RNA的組合物和藥物可接受載體，該干擾RNA長度為19-49個核苷酸并且具有SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQEDNO:720以及SEQIDNO:721中任何一個核苷酸序列或其互補序列。在一個實施方案中，干擾RNA是分離的。術(shù)語"分離的"意指干擾RNA是從其總的天然環(huán)境游離的。本發(fā)明的另一個實施方案是應(yīng)受試者需要治療高眼壓的方法。該方法包括給受試者眼部施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受栽體，該干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721，由此治療高眼壓。本發(fā)明的另一個實施方案是減弱受試者高眼壓靶標mRNA第一種變體的表達而不減弱高眼壓靶標mRNA第二種變體的表達的方法。該方法包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述連續(xù)核苦酸與第一種變體的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達被減弱，而沒有減弱第二個變體mRNA的表達，且其中第一種變體耙標mRNA分別是SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129,和第二種變體耙標mRNA分別是SEQIDNO:134、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130。在以上所述方法的另一個實施方案中，第一種變體靶標mRNA分別是SEQIDNO:134、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130，并且第二種變體耙標mRNA分別是SEQIDNO:101、SEQID隱5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129。這里描述的任一項實施方案在制備用于減弱高眼壓mRNA表達的藥物中的用途也是本發(fā)明的實施方案。附圖簡述圖1提供western印跡，用抗CA2和肌動蛋白的抗體檢測以CA2siRNA#l、#3、#4和#5、無靶向?qū)φ誷iRNA和緩沖液對照(-siRNA)轉(zhuǎn)染的HeLa細胞。SiRNA濃度為100nM或1nM。箭頭指示30-kDaCA2蛋白和42-kDa肌動蛋白帶的位置。發(fā)明詳述RNA千擾(RNAi)是使用雙鏈RNA(dsRNA)來沉默基因表達的過程。盡管不期望被理論所束縛，RNAi首先通過類RNaseIII酶-dicer將長dsRNA切割成小的干擾RNA(siRNA)。SiRNA是長度通常為約19-28個核苷酸或20-25個核苷酸或21-22個核苷酸并且通常含有2-核苷酸的3'突出端以及5'磷酸和3'羥基末端的dsRNA。siRNA的一條鏈被摻入核糖核蛋白復(fù)合體即RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)中。RISC利用這一siRNA鏈來識別與摻入的siRNA鏈至少部分互補的mRNA分子，然后切割這些耙標mRNA或抑制它們的翻譯。因此，摻入RISC的siRNA鏈被稱為引導(dǎo)鏈或反義鏈。另一條siRNA鏈(稱為傳遞鏈或有義鏈)從siRNA上被除去，并且至少與耙標RNA有部分同源性。本領(lǐng)域技術(shù)人員公認，原則上siRNA的任一條鏈都能被摻入RISC中并作為引導(dǎo)鏈起作用。然而，siRNA設(shè)計(例如，在反義鏈的5'端降低的siRNA雙螺旋穩(wěn)定性)能夠有利于反義鏈摻入RISC介導(dǎo)的具有與引導(dǎo)鏈至少部分互補的序列的mRNA切割導(dǎo)致該mRNA和由該mRNA編碼的相關(guān)蛋白質(zhì)的穩(wěn)態(tài)水平降低。備選地，RISC也能通過抑制翻譯來減少相關(guān)蛋白質(zhì)的表達，而不切割靶標mRNA。其他RNA分子和類RNA分子也能夠與RISC相互作用并沉默基因表達。能夠鏈siRNA、微小RNA(miRNA)和dicer-底物27聚體雙螺旋。除非另有說明，術(shù)語，，siRNA"指雙鏈干擾RNA。能與RISC相互作用的類RNA分子的實例包括含有一個或多個經(jīng)化學(xué)修飾的核苷酸、一個或多個脫氧核糖核苷酸、和/或一個或多個非磷酸二酯鍵連接的RNA分子。對于本討論的目的而言，將所有能與RISC相互作用并參與到RISC介導(dǎo)的基因表達的改變中的RNA或類RNA分子稱為"干擾RNA"。因此，SiRNA、shRNA、miRNA和dicer-底物27聚體雙螺旋都是"千擾RNA"的亞群。本發(fā)明實施方案中的干擾RNA似乎以催化方式切割靶標mRNA，即干擾RNA能夠在亞化學(xué)計量上對靶標inRNA起抑制作用。與反義療法相比，在這樣的切割條件下提供療效所需要的千擾RNA明顯減少。本發(fā)明涉及到應(yīng)用干擾RNA抑制高眼壓耙標mRNA的表達，從而減少開角型青光眼或高眼壓患者的眼內(nèi)壓。高眼壓靶標包4舌碳酸酐酶I1、IV和XII;pi和p2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶亞基和Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白。根據(jù)本發(fā)明，外源提供的或內(nèi)源表達的干擾RNA使眼部組織中高眼壓乾標mRNA沉默。碳酸酐酶催化二氧化碳的可逆7JC合并且似乎對房水分泌起調(diào)節(jié)作用。碳酸酐酶抑制劑通過減少產(chǎn)生的流體量來降低眼內(nèi)壓力。碳酸酐酶抑制劑可作為滴眼液(多佐胺(dorzolamide)、布林佐胺(brinzolamide))或片劑/膠嚢(乙酰唑胺(acetazolamide)、醋甲唑胺(methazolamide))使用。滴眼液的副作用比片劑或膠嚢少，可以更好地被很多病人所接受。AZOPT⑧(布林佐胺)1。/。的眼懸浮液是典型的碳酸酐酶抑制劑(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)。眼部P受體阻滯劑通過減少眼內(nèi)產(chǎn)生的流體量來降低眼內(nèi)壓力。這些藥物被分為兩類非選擇性p受體阻滯劑(漆嗎心安(timolol)、左布諾洛爾(levobunolol)、美替洛爾(metipranolol)、卡替洛爾(carteolol))和p-l選擇性受體阻滯劑(倍他洛爾(betaxolol))。通常劑量是每次每眼一滴，一天一至兩次，取決于所使用的藥物。該產(chǎn)品的實例是BETOPTICS⑧(鹽酸倍他洛爾(betaxololHCl))0.25。/。的眼懸浮液(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)。乙酰膽堿酯酶的抑制劑通過阻斷造成乙酰膽堿水解的酶(乙酰膽堿酯酶)使乙酰膽堿保留在受體位點。乙酰膽堿積聚于受體，通過睫狀肌的收縮降低眼內(nèi)壓力，與直接作用的膽堿能激動劑作用相似。Na+/K+-ATP酶抑制劑例如烏本苷、一氧化氮供體和內(nèi)皮素降低Na+/K+-ATP酶的活性，減小由睫狀突分泌房水的驅(qū)動力。氯化物轉(zhuǎn)運抑制劑，例如利尿酸改變小梁細胞容量以增加流出易度。除非另外注明，這里引用的核酸序列都是按5'到3'方向書寫的。這里使用的術(shù)語"核酸"，指DNA或RNA或其修飾形式，包含存在于DNA(腺噤呤"A"、胞嘧咬"C"、鳥噤呤"G"、胸腺嘧啶"T")或RNA(腺嘌呤"A"、胞嘧咬"C"、鳥嘌呤"G"、尿嘧咬"U")中的嘌呤或嘧咬堿基。這里提供的干擾RNA可能包含"T"堿基，特別是在3'末端，盡管"T"堿基并不天然存在于RNA中。"核酸"包括術(shù)語"寡核苷酸，，和"多核苷酸，，并且可以指單鏈分子或雙鏈分子。雙鏈分子通過A和T堿基、C和G堿基、A和U堿基之間的沃森-克里克堿基配對而形成。雙鏈分子的雙鏈之間可以是部分、基本或完全的互補，并形成一個雙螺旋雜交體，其鍵強度取決于堿基序列互補的性質(zhì)和程度。很容易從相應(yīng)的DNA序列推斷出mRNA序列。例如，SEQIDNO:l提供對應(yīng)于編碼;友酸酐酶IImRNA的DNA的有義鏈序列。mRNA序列與DNA有義鏈序列是一樣的，其中，"U，，堿基代替"T，，堿基。因此，從SEQIDNO:l可知碳酸酐酶II的mRNA序列；從SEQIDNO:2可知碳酸酐酶IV的mRNA序列；從SEQIDNO:3可知卩l(xiāng)-腎上腺素能受體的mRNA序列；從SEQIDNO:4可知卩2-腎上腺素能受體的mRNA序列；從SEQIDNO:5可知乙酰膽堿酯酶剪接變體E4-E5的mRNA序列；從SEQIDNO:6可知Na+/K+-ATP酶a2的mRNA序列；從SEQIDNO:7可知Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白Al的mRNA序列；從SEQIDNO:lOl可知碳酸酐酶XII變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:123可知乙酰膽堿酯酶剪接變體E4-E6的mRNA序列；從SEQIDNO:124可知Na+/K+-ATP酶al，變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:125可知Na+/K+-ATP酶al，變體2的mRNA序列；從SEQIDNO:126可知Na+/K+-ATP酶a3的mRNA序列；從SEQIDNO:127可知Na+/K+-ATP酶a4,變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:128可知Na+/K+-ATP酶a4，變體2的mRNA序列；從SEQIDNO:129可知Na+/K+-ATP酶pl，變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:130可知Na+/K+-ATP酶pi,變體2的mRNA序歹'J;從SEQIDNO:131可知Na+/K+-ATP酶卩2的mRNA序列；從SEQIDNO:132可知NaVl^-ATP酶卩3的mRNA序列；從SEQIDNO:133可知Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白A2的mRNA序列；從SEQIDNO:134可知石友酸酐酶XII,變體2的mRNA序列。碳酸酐酶II、IV和XII的mRNA(CA2、CA4和CA12):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美國國立生物技術(shù)信息中心的GenBank數(shù)據(jù)庫所描述的，碳酸酐酶(CA)II、IV和XII是催化二氧化碳可逆水合的鋅金屬酶大家族成員。碳酸酐酶涉及重要的生理過程例如代謝組織和肺部之間C(V碳酸氫鹽的呼吸和運輸、pH和C02的內(nèi)穩(wěn)態(tài)、在多種組織和器官中的電解質(zhì)分泌、生物合成反應(yīng)(如糖異生、脂肪生成和尿素生成)、骨吸收、鉀化作用和腫瘤發(fā)生。已鑒定出14種不同的碳酸酐酶同工酶具有不同的亞細胞定位和組織分布。碳酸酐酶II是胞質(zhì)同功酶，而碳酸酐酶IV和XII是膜結(jié)合的。已鑒定出編碼CA-XII基因的不同亞型的兩個轉(zhuǎn)錄變體；變體1編碼較長的亞型，而變體2與變體1轉(zhuǎn)錄物相比缺少一個內(nèi)編碼的外顯子，從而與亞型l相比缺少了11個氨基酸的區(qū)段。全身施用碳酸酐酶抑制劑(CAI)有利于降低青光眼特征的升高的眼內(nèi)壓(IOP)。存在于睫狀突的同工酶抑制作用(磺胺易感同工酶CAII和CAIV)降低碳酸氫鹽和房水分泌的速率，從而導(dǎo)致IOP降低25-30%。然而，存在于眼外組織的多種CA同功酶的抑制作用產(chǎn)生副作用，包括四肢的麻痹和麻刺感、金屬味、抑郁癥、疲乏、不適、重量減輕、性欲減少、腸胃道刺激、代謝性酸中毒、腎結(jié)石和短暫性近視。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—000067提供CA2的DNA序列，其在"序列表"中被提供為SEQIDNO:l。SEQIDNO:l提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼CAII的mRNA(除了"T"堿基替代"U"堿基)。CAII的編碼序列來自核苷酸66-848。與以上所述的CA2mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:l同源的CA2mRNA(即直向同源物)。與SEQIDNO:l有關(guān)的CA2核酸序列包括GenBank登記號M77181、X03251、BC011949、BC035424、CR536526、CR541875、J03037、M36532、S69526和Y00339的那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM_000717提供CA4的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:2提供。SEQIDNO:2提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼CAIV的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。CAIV的編碼序列來自核苷酸47-985。與以上所述的CA4mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:2同源的CA4mRNA(即直向同源物)。與SEQIDNO:2有關(guān)的CA4核酸序列包括GenBank登記號L10955、BC057792、BC069649、BC074768、CR541766和M83670的那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—001218提供CA12，變體1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:101提供。SEQIDNO:101提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼CAXII，變體1的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。CAXII，變體l的編碼序列來自核苷酸157-1221。與以上所述的CA12,變體1的mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:101同源的CA12mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫為以登記號NM—206925提供CA12,變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:134提供。SEQIDNO:134提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼CAXII,變體2的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。CAXII，變體2的編碼序列來自核苷酸157-1188。與變體l相比，變體2缺少內(nèi)編碼的外顯子。與以上所述的CA12，變體2mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:134同源的CA12mRNA(即直向同源物)。腎上腺素能受體-jJl和-|52mRNA(ADRB1和ADRB2):正如在ncbi.nlm.nih.gov美國國立生物技術(shù)信息中心的GenBank數(shù)據(jù)庫所描述的，腎上腺素能受體(亞型al、a2、pl和卩2)是介導(dǎo)荷爾蒙腎上腺素和神經(jīng)遞質(zhì)去曱腎上腺素的生理效應(yīng)的G蛋白偶聯(lián)受體的原型家族。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM_000684提供ADRB1的DNA序歹'J，在"序列表，，中以SEQIDNO:3提供。SEQIDNO:3提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼pi-腎上腺素能受體的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。PI-腎上腺素能受體的編碼序列是核苷酸87-1520。與以上所迷的ADRB1mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:3同源的ADRB1mRNA(即直向同源物)。與SEQIDNO:3有關(guān)的ADRB1核酸序列包括GenBank登記號AF169006AF16卯07、AY567837和J03019的那些序列。GenBank數(shù)椐庫以登記號NM_000024提供ADRB2的DNA序列，在以下提供為SEQIDNO:4。SEQIDNO:4提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼卩2_腎上腺素能受體的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。P2-腎上腺素能受體的編碼序列是核苷酸220-1461。與以上所述的ADRB2mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種的并與SEQIDNO:4同源的ADRB2mRNA(即直向同源物)。與SEQIDNO:4有關(guān)的ADRB2核酸序列包4舌GenBank登記號AF022953、AF022954、AF022955、AF022956*AF16922&AF20230&AF20338&AY011291、J0296(KY00106、AY136741、BC012481、BC063486、BC073856、M15169和X04827的那些序列。乙酰膽堿酯酶mRNA剪接變體E4-E6和E4-E5(ACHE):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美國國立生物技術(shù)信息中心的GenBank數(shù)據(jù)庫所描述的，乙酰膽堿酯酶在神經(jīng)肌肉接頭和腦膽堿能突觸水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿，從而終止信號傳輸。同時也發(fā)現(xiàn)在紅血細胞膜上，其構(gòu)成了Yt血型抗原。乙酰膽堿酯酶以多種分子形式存在，其具有相似的催化性能，但在其寡聚體組裝和對細胞表面的細胞黏附模式上不同。它是由單個ACHE基因編碼的，且基因產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)多樣性來自選擇性的mRNA剪接以及催化亞基和結(jié)構(gòu)亞基的翻譯后締合。在腦、肌肉和其它組織中發(fā)現(xiàn)的乙酰膽堿酯酶的主要形式是親水型，該親水型與膠原性亞基或含脂的結(jié)構(gòu)亞基形成二硫鍵連接的寡聚體。另一方面，主要表達于紅細胞組織的選擇性剪接體在C-末端不同，且含有帶GPI-錨定位點的可切割的疏水肽。它通過翻譯后加入的磷酸肌醇(PI)部分與膜締合。剪接變體E4-E6是主要的轉(zhuǎn)錄物并且產(chǎn)生于外顯子4至外顯子6的剪接。剪接變體E4-E5產(chǎn)生于外顯子4至外顯子5的選擇性剪接。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—015831提供ACHE剪接變體E4-E5的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:5提供。SEQIDNO:5提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼乙酰膽堿酯酶E4-E5的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U"^J0。乙酰膽堿酯酶E4-E5的編碼序列是核苷酸95-1948。與以上所述的ACHEmRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并與SEQIDNO:5同源的ACHEmRNA(即直向同源物)。與SEQIDNO:5有關(guān)的ACHE核#列包括GenBank登記號AC011895、AF002993、AF312032、AY750146、CH236956、L06484、L42812、S71129、AF334270、BC026315、BC036813、M55040和NM_000665那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM_000665提供ACHE剪接變體E4-E6的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:123提供。SEQIDNO:123提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼乙酰膽堿酯酶E4-E6變體的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。乙酰膽堿酯酶E4-E6的編碼序列是核苷酸95-1939。與以上所述的ACHEmRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種的并與SEQIDNO:123同源的ACHEmRNA(即直向同源物)。與SEQIDNO:123有關(guān)的ACHE核酸序列包括GenBank登記號NM_015831、AC011895、AF002993、AF312032、AY750146、CH236956、L06484、L42812、S71129、AF334270、BC026315、BC036813和M55040那些序列。Na+/K+-ATP酶a和(JmRNA(ATP1-A1變體1、-Al變體2、-A2、-A3、-A4變體1、-A4變體2、-Bl變體1、-Bl變體2、-B2和-B3):正如在GenBank數(shù)據(jù)庫所描述，由所述基因編碼的蛋白質(zhì)屬于P-型陽離子轉(zhuǎn)運ATP酶家族，并屬于3+/1<:+-入1酶亞家族。3+/1^+-厶1酶是整合的膜蛋白，負責(zé)建立和維持用于鈉離子和鉀離子跨越質(zhì)膜的電化學(xué)梯度。這些梯度對于滲透調(diào)節(jié)、各種有機和無機分子的鈉偶聯(lián)的轉(zhuǎn)運以及神經(jīng)和肌肉的電興奮性是必不可少的。該酶由兩個亞基組成，即大的催化亞基(a或A)和較小的糖蛋白亞基(p或B)。Na+/K+-ATP酶的催化亞基由多基因編碼。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—000701提供ATP1A1變體1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:124提供。SEQIDNO:124提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶亞基Al變體1的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。3+/1^+-入1酶亞基入1變體l的編碼序列來自核苷酸299-3370。與以上所述的ATP1A1變體1mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:124同源的ATP1A1變體1mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—001001586提供ATP1A1變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:125提供。SEQIDNO:125提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶亞基Al變體2的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U，，堿基)。Na+/K+-ATP酶亞基Al變體2的編碼序列是核苷酸299-2344。與以上所述的ATP1A1變體2mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:125同源的ATP1A1變體2mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM_000702提供ATP1A2的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:6提供。SEQIDNO:6提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶A2亞基的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶A2亞基的編碼序列是核普酸105-3167。與以上所述的ATP1A2mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:6同源的ATP1A2mRNA(即直向同源物>與SEQIDNO:6有關(guān)的ATP1A2核酸序列包括GenBank登記號J05096、M27578、AB018321、AK091617、AK124581、AK126573、AL831991、AL831997、BC013680、BC047533、BC052271、M16795和Y07494的那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM_152296提供ATP1A3的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:126提供。SEQIDNO:126提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶A3亞基的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶A3亞基的編碼序列是核苷酸155-3196。與以上所述的ATP1A3mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:126同源的ATP1A3mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM144699提供ATP1A4變體1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:127提供。SEQIDNO:127提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶A4亞基變體1的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶A4亞基變體1的編碼序列是核苷酸469-3558。與以上所述的ATP1A4變體1mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:127同源的ATP1A4變體1mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM_01001734提供ATP1A4變體2的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:128提供。SEQIDNO:128提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶A4亞基變體2的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U，，堿基)。Na+/K+-ATP酶A4亞基變體2的編碼序列是核苦酸111-608。與以上所述的ATP1A4變體2mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:128同源的ATP1A4變體2mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—001677提供ATP1B1變體1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:129提供。SEQIDNO:129提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體1的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U，，堿基)。Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體1的編碼序列是核苷酸122-1033。與以上所述的ATP1B1變體1mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:129同源的ATP1B1變體1mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—001001787提供ATP1B1變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:130提供。SEQIDNO:130提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體2的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U，，堿基)。Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體2的編碼序列是核苷酸122-1027。與以上所述的ATP1B1變體2mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:130同源的ATP1B1變體2mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—001678提供ATP1B2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:131提供。SEQIDNO:131提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶B2亞基的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶B2亞基的編碼序列是核普酸584-1456。與以上所述的ATP1B2mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:131同源的ATP1B2mRNA(即直向同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM—001679提供ATP1B3的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:132提供。SEQIDNO:132提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶B3亞基的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U，，堿基)。Na+/K+-ATP酶B3亞基的編碼序列是核苦酸175-1014。與以上所述的ATPlB3mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接朱等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:132同源的ATP1B3mRNA(即直向同源物)。Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白mRNA(SLC12Al和SLC12A2):鈉-鉀-氯化物協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白(Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白或NKCC)便于Na+、K+和Cr離子的偶聯(lián)協(xié)同轉(zhuǎn)運跨越質(zhì)膜。有兩種亞型NKCC1和NKCC2。NKCC1在包括眼睛的大多數(shù)組織中表達。相比之下，NKCC2主要在腎中表達，然而，有證據(jù)證明這一亞型在眼睛中也有較低水平的表達。NKCC1由SLC12A2基因(溶質(zhì)載體家族12，成員2)編碼且NKCC2由SLC12A1基因編碼。小梁細胞具有有力的Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白。該協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白的活性由神經(jīng)遞質(zhì)和激素調(diào)節(jié)，如去曱腎上腺素降低協(xié)同轉(zhuǎn)運活性，或血管加壓素增強協(xié)同轉(zhuǎn)運活性。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM_000338提供SLC12A1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:7提供。SEQIDNO:7提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白NKCC2的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白NKCC2的編碼序列是核普酸20-3319。與以上所述的Na-K-2C1NKCC2協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:7同源的Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白NKCC2mRNA(即直向同源物)。與SEQIDNO:7有關(guān)的SLC12A1核餅列包括GenBank登記號AJ005332、AJ005333、AB032525、AB032527、BC040138、BX647067、BX647484和U58130的那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫以登記號NM_001046提供SLC12A2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:133提供。SEQIDNO:133提供DNA的有義鏈序列，對應(yīng)于編碼Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白NKCC1的mRNA(除了"T，，堿基替代了"U"堿基)。Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白NKCC1的編碼序列是核苷酸165-3803。與以上所述的Na-K-2C1NKCC1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白mRNA序列相當?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:133同源的Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白NKCC1mRNA(即直向同源物)。mRNA的減弱表達這里使用的短語"mRNA的減弱表達"，意指施用或表達一定量的干擾RNA(如siRNA)，通過切割mRNA或直接抑制翻譯來減少靶標mRNA翻譯成蛋白質(zhì)。靶標mRNA或相應(yīng)蛋白質(zhì)表達的降低通常稱為"敲除"，并且是相對于所報道的施用或表達無耙標對照RNA(如無靶標對照siRNA)后的水平。這里的實施方案考慮到包括并在50%-100%之間的表達量的敲除。然而，對于本發(fā)明的目的而言，不必要達到這樣的敲除水平。在一個實施方案中，施用靶向高眼壓靶標之一的單獨的干擾RNA以降低IOP。在其它實施方案中，施用靶向相同的高眼壓乾標(如CA2)的兩個或多個干擾RNA以降低IOP。在另一些實施方案中，施用靼向多個高眼壓耙標(如CA2和ADRB2)的兩個或多個千擾RNA以降低IOP。通常通過使用定量聚合酶鏈式反應(yīng)(qPCR)擴增測定mRNA水平，或通過利用western印跡或酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)測定蛋白質(zhì)水平來評估敲除。蛋白質(zhì)水平的分析為mRNA切割和翻譯抑制兩者提供了評估。測定敲除的其它技術(shù)包括RNA溶液雜交、核酸酶保護、northern雜交、用基因芯片的基因表達監(jiān)控、抗體結(jié)合、放射性免疫測定以及熒光激活的細胞分析。通過觀察青光眼癥狀的改善，例如眼內(nèi)壓的改善、視野喪失的改善或視盤變化的改善，推斷在人體或哺乳動物中也存在這里所述的靶標的抑制作用。本發(fā)明實施方案中的干擾RNA似乎以催化方式切割靶標mRNA，即干擾RNA能夠在亞化學(xué)計量上對靶標mRNA起抑制作用。與反義療法相比，在這樣的切割條件下提供療效所需要的干擾RNA明顯減少。干擾RNA:在本發(fā)明的一個實施方案中，干擾RNA(如siRNA)具有有義鏈和反義錈并且有義鏈和反義鏈包含至少19個核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。在本發(fā)明的另一個實施方案中，千擾RNA包含至少13、14、15、16、17或18個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，分別與mRNA中相應(yīng)耙標序列的3'端次末端的13、14、15、16、17或18個核苷酸有一定百分比的序列互補性或序列同一性。干擾RNA每條鏈的長度包含19-49個核苷酸，還可能包含19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49個核苷酸的長度。siRNA的反義鏈是siRNA的活性導(dǎo)向劑，因為反義鏈被摻入RISC中，從而使RISC識別與反義siRNA鏈至少有部分互補的耙標mRNA以用于切割或抑制翻譯。在本發(fā)明中，通過使用可獲得的設(shè)計工具選擇靶標mRNA序列中的干擾RNA靶標序列(如siRNA靼標序列)。通過轉(zhuǎn)染表達靼標mRNA的細胞來檢驗對應(yīng)于這些靶標序列的干擾RNA,隨后如上所述通過敲除來評估。選擇產(chǎn)生50%-100%之間的表達敲除的干擾RNA用作進一步分析。選擇siRNA的靼標序列的技術(shù)由Tuschl,T.等人，"ThesiRNAUserGuide",修訂于2004年5月6日提供，可獲于Rockefeller大學(xué)網(wǎng)站；也可由Ambion公司的Ambion網(wǎng)站上"siRNADesignGuidelines"中的技術(shù)報告#506提供；也可以通過其它基于網(wǎng)絡(luò)的設(shè)計工具，例如，Invitrogen、Dharmacon、IntegratedDNATechnologies、Genscript或Proligo網(wǎng)站獲知。起始搜索參數(shù)可包括介于35%-55%之間的G/C含量和19-27個核苷酸之間的siRNA長度。耙標序列可以定位于mRNA的編碼區(qū)或定位于mRNA的5'或3'端非翻譯區(qū)。在一個實施方案中，碳酸酐酶II的19個核苷酸的DNA靶標序列存在于SEQIDNO:l的核苷酸232-250中5'-CCCTGAGGATCCTCAACAA-3'SEQIDNO:8。用作靶向SEQIDNO:8的相應(yīng)mRNA序列并且具有21個核苷酸鏈和2-核苷酸3'突出端的本發(fā)明的siRNA是5'-CCCUGAGGAUCCUCAACAANN國3，SEQIDNO:93'畫NNGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5，SEQIDNO:IO。每個"N，，殘基可以是任何核普酸(A、C、G、U、T)或修飾的核普酸。3'末端可以具有的"N，，殘基數(shù)目在1、2、3、4、5和6之間并包括它們。在任一條鏈上的"N，，殘基可以是相同的殘基(如UU、AA、CC、GG或TT)也可以不同0口AC、AG、AU、CA、CG、CU、GA、GC、GU、UA、UC或UG)。3'突出端可以相同也可以不同。在一個實施方案中，兩條鏈都有3'UU突出端。靼向SEQIDNO:8的相應(yīng)mRNA序列并且具有21個核苷酸鏈和在每條鏈上有3'UU突出端的本發(fā)明的siRNA是5,-CCCUGAGGAUCCUCAACAAUU-3'SEQIDNO:ll3'-UUGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5'SEQIDNO:12。干擾RNA也可能有5'核苷酸的突出端或其可能有平末端。靶向SEQIDNO:8的相應(yīng)mRNA序列并且具有19個核苷酸鏈和平末端的本發(fā)明的siRNA是5'-CCCUGAGGAUCCUCAACAA國3'SEQIDNO:7223'-GGGACUCCUAGGAGUUGUU-5'SEQIDNO:723。雙鏈干擾RNA(如siRNA)的鏈可以連結(jié)形成發(fā)夾或莖環(huán)結(jié)構(gòu)(如shRNA)。靼向SEQIDNO:8的相應(yīng)mRNA序列并且具有19個堿基對的雙鏈莖區(qū)域和3'UU突出端的本發(fā)明的shRNA是/\/NUN本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知N是核苷酸A、T、C、G、U或其修飾形式。環(huán)中核苷酸N的數(shù)目在3-23或5-15或7-13或4-9或9-11之間并包括它們，或者核苷酸N的數(shù)目是9。環(huán)中的一些核苷酸可能涉及與環(huán)中其他核苷酸的堿基對相互作用。可用來形成環(huán)的寡核苷酸序列的實例包括5'-UUCAAGAGA-3，(Brummelkamp，T.R.等人，(2002)Science296:550)和5'-UUUGUGUAG-3'(Castanotto，D,等人，(2002)RNA8:1454)。本領(lǐng)域技術(shù)人員公認產(chǎn)生的單鏈寡核苷酸形成莖環(huán)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)包含能與RNAi系統(tǒng)相互作用的雙鏈區(qū)域。上面確定的siRNA靶標序列能在3'末端延伸以利于dicer底物27聚體雙螺旋的設(shè)計。通過6個核苷酸在碳酸酐酶I1DNA序列(SEQIDNO:l)中識別的19個核苷酸的DNA靶標序列(SEQIDNO:8)的延伸，得到25個核苷酸的DNA靶標序列，其存在于SEQIDNO:1的核苷酸232-256:5'-CCCTGAGGATCCTCAACAATGGTCA-3'SEQIDNO:724。粑向SEQIDNO:724的相應(yīng)mRNA序列的本發(fā)明的dicer底物27聚體雙螺旋是5'-CCCUGAGGAUCCUCAACAAUGGUCA-3,SEQIDNO:7183'畫UUGGGACUCCUAGGAGUUGUUACCAGU-5'SEQIDNO:719。有義鏈3'末端的兩個核苷酸(即SEQIDNO:718的CA核苷酸)可能是用于改良的加工的脫氧核苷酸。正如在這里提供的，來自19-21個核苷酸耙標序列的dicer底物27聚體雙螺旋的設(shè)計在整合DNA技術(shù)(IDT)網(wǎng)站和Kim，D.-H.等人(February，2005)NatureBiotechnology23:2;222-226中有進一步的討論。當通過化學(xué)合成產(chǎn)生干擾RNA時，在一條或兩條鏈(如果存在)的5，末端核苦酸5'位置的磷酸化作用能增強結(jié)合的RISC復(fù)合體的siRNA有效性和特異性，但是因為磷酸化作用能在細胞內(nèi)發(fā)生，所以并不需要進行磷酸化。表1列出CA2、CA4以及CA12變體1和變體2的DNA序列(分別是SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101和SEQIDNO:134)中的siRNA靼標序列的實例，以如上闡明的方式從其設(shè)計本發(fā)明的siRNA。CA2、CA4以及CA12變體1和變體2分別編碼碳酸酐酶I1、IV以及XII變體l和2。表1.siRNA的CA2、CA4和CA12耙標序列<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>CA1乙變體1和2的常用把標序列#起始核苷酸的位置，參考SEQIDNOs101S恥IDNO:<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>表4列出Na+/K+-ATP酶A和B亞基DNA序列(ATP1Al變體1，SEQIDNO:124;ATP1A1變體2，SEQIDNO:125;ATP1A2，SEQIDNO:6;ATP1A3，SEQIDNO:126;ATP1A4變體1，SEQIDNO:127;ATP1A4變體2，SEQIDNO:128;ATP1B1變體l，SEQIDNO:129;ATP1B1變體2，SEQIDNO:130;ATP1B2,SEQIDNO:131和ATP1B3，SEQIDNO:132)中siRNA靶標序列的實例，按如上闡明的方式從其中設(shè)計本發(fā)明的siRNA。表4.用作siRNA的ATP1A和ATP1B靼標序列<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>林多態(tài)性或進化趨異而可以預(yù)計的序列變化。在本發(fā)明的一個實施方案中，siRNA的反義鏈與靶標mRNA具有至少19個核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補。這里^f吏用的"近乎完全"意指siRNA的反義鏈與至少部分的靶標mRNA是"基本互補的"，并且siRNA的有義鏈與部分的靼標mRNA是"基本一致的"。如本領(lǐng)域所有普通技術(shù)人員公知，"同一性"是指通過匹配序列之間核苷酸的順序和特征來確定核普酸序列之間的序列關(guān)聯(lián)程度。在一個實施方案中，siRNA的反義鏈與耙標mRNA序列具有80%和80%-100%之間的互補，例如，85°Xk90%或95%的互補，這被認為是近乎完全的互補并且可以在本發(fā)明中應(yīng)用。"完全的，，連續(xù)互補是指相鄰堿基對的標準沃森-克里克堿基配對。"至少近乎完全的，，連續(xù)互補包括在這里用到的"完全的，，互補。設(shè)計用于測定同一性或互補性的計算機方法，例如BLASTN，來確定核苷酸序列的最大匹配程度(Altschul，S.F.,等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-410)。術(shù)語"同一性百分數(shù)"描述連續(xù)核苷酸在第一個核酸分子中的百分比，該術(shù)語也描述一系列相同長度的連續(xù)核苷酸在第二個核酸分子中所占的百分比。術(shù)語"互補百分數(shù)"描述連續(xù)核苷酸在第一個核酸分子中的百分比，該核酸分子能按沃森-克里克原則與第二個核酸分子中一系列連續(xù)核苷酸進行堿基配對。靶標mRNA(有義鏈)和siRNA中的一條鏈(有義鏈)之間的關(guān)系是同一性的。siRNA的有義鏈，如果存在，也被稱為傳遞鏈。靶標mRNA(有義鏈)和siRNA的另一條鏈(反義鏈)之間的關(guān)系是互補的。siRNA的反義鏈也被稱為引導(dǎo)鏈。以5'到3'方向書寫的核酸序列的次末端g是倒數(shù)第二個堿基，即3'端堿基的相鄰堿基。以5'到3'方向書寫的核酸序列的次末端13個堿基是3'端堿基相鄰的最后13個堿基序列，且不包括3，端堿基。相似地，以5'到3'的方向書寫的核酸序列的次末端14、15、16、17或18個堿基分別是3'端堿勤目鄰的最后14、15、16、17或18個堿基序列，且不包括3'端堿基。標識符)的3'末端次末端的13個核苷酸具有至少卯％序列互補性或至少卯％序列同一性的至少含有13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域"允許一個核苷酸取代。在這樣的短語中不包括兩個核苦酸的取代(即11/13=85%同一性/互補性)。在本發(fā)明的一個實施方案中，連續(xù)核苷酸區(qū)域是至少14個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該區(qū)域與每個序列標識符識別的序列3'末端次末端的14個核普酸具有至少85%序列互補性或至少85%序列同一4生在這樣的短語中包4舌兩個核苷酸的取K(即12/14=86%同一性/互補性)。在本發(fā)明的另一個實施方案中，連續(xù)核苷酸的區(qū)域是至少15、16、17或18個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該區(qū)域與序列標識符的序列3'末端次末端的14個核苷酸具有至少80%序列互補性或至少80%序列同一性。在這樣的短語中包括三個核苷酸的取代。mRNA中對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQID職128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的靶標序列可能在mRNA的5'或3'端非翻譯區(qū)以及在mRNA的編碼區(qū)。雙鏈干擾RNA的一條或兩條鏈可能含有1-6個核苷酸的3'突出端，該3'突出端可能是核糖核苷酸或脫氧核糖核苦酸或其混合物。突出端的核苷酸不是堿基配對的。在本發(fā)明的一個實施方案中，干擾RNA包括TT或UU的3'突出端。在本發(fā)明的另一個實施方案中，干擾RNA包括至少一個平末端。該末端通常含有5'磷酸基或3'羥基，在其他實施方案中，反義鏈具有5'磷g，而有義鏈含有5'羥基。在另外一些實施方案中，該末端通過共價加入其他分子或功能團而被進一步修飾。雙鏈siRNA的有義鏈和反義鏈可能是如上所述的兩條單鏈的雙螺旋形式，也可能是單獨的分子，其中互補區(qū)域是堿基配對的并通過發(fā)夾環(huán)共價連接以形成單鏈。普遍認為，稱為dicer的蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)切割發(fā)夾以形成兩個單獨的堿基配對的RNA分子的干擾RNA。通過添加、刪除、取代或修飾一個或多個核苷酸，干擾RNA可不同于自然形成的RNA。非核苷酸材料可能結(jié)合到干擾RNA的5'末端或者3'末端或者其內(nèi)部。通常設(shè)計這樣的修飾來增加干擾RNA的核酸酶抗性、改善細胞的攝入、增強細胞的靶向性、協(xié)助追蹤干擾RNA、進一步改善穩(wěn)定性或減少干擾素通路的活化作用潛能。例如，干擾RNA可能在突出端末端包含嘌呤核苷酸。例如，膽固醇通過吡咯烷接頭連接到siRNA分子有義鏈的3，末端也給siRNA提供穩(wěn)定性。進一步修飾包括例如3'末端生物素分子、已知具有細胞穿透性能的肽、納米顆粒、擬肽類、熒光染料或樹狀聚體?？梢栽诜肿拥膲A基部分、糖基部分或磷酸部分修飾核苷酸并在本發(fā)明的實施方案中發(fā)揮作用。修飾包括用如烷基、烷氧基、氨基、脫氮、離素、羥基、巰基或其組合物取代?？梢杂酶€(wěn)定的類似物取代核苷酸，如用脫氧核糖核苷酸取代核糖核苷酸，或具有糖基修飾例如用2'氨基、2'O-曱基、2'甲氧基乙基或2'-0，4'-C亞甲基橋取代2，-羥基。核苷酸的嘌呤或嘧啶類似物的例子包括黃噤呤、次黃噪呤、氮雜噤呤、曱硫基腺噤呤、7-脫氮腺苷以及O-修飾的和N-修飾的核普酸。核苷酸的磷酸基可通過用氮或硫(硫代磷酸)來取代磷酸基中的一個或多個氧來修飾。修飾有利于，例如，增強功能性，提高^l定性或滲透性或指導(dǎo)定位或靶向。反義干擾RNA鏈可以有一個或多個區(qū)域與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO,128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的部分并不互補。非互補區(qū)域可能是在互補區(qū)域的3'端、5'端或這兩個末端同時或兩個互補區(qū)域之間?？赏ㄟ^化學(xué)合成、體外轉(zhuǎn)錄，或者使用dicer或其它具有相似活性的合適的核酸酶切割較長的雙鏈RNA而外源性生成干擾RNA?？蓮纳虡I(yè)供應(yīng)商如AmbionInc.(Austin，TX)>mvitrogen(Carlsbad,CA)或Dharmacon(Lafayette,CO)處獲得化學(xué)合成的干擾RNA，該干擾RNA是使用常規(guī)的DNA/RNA合成儀、從保護的核糖核苷亞磷酰胺中制得?？赏ㄟ^例如利用溶劑或樹脂的萃取沉淀、電永層析或這些方法的結(jié)合來純化干擾RNA。備選地，可以使用沒有純化或經(jīng)過極少純化的干擾RNA以避免因樣品加工處理而造成的損失。干擾RNA也可以從質(zhì)?；虿《颈磉_載體或從最小表達盒(例如由PCR產(chǎn)生的片段，其包含一個或多個啟動子和干擾RNA的一個或多個合適的模板)進行內(nèi)源表達。商品化的shRNA基于質(zhì)粒的表達載體實例包括pSilencer系歹'J(Ambion,Austin,TX)和pCpG-siRNA(InvivoGen，SanDiego,CA)成員。表達干擾RNA的病毒載體可能來源于多種病毒，包括腺病毒、腺相關(guān)病毒、慢病毒(如HIV、FIV和EIAV)和皰滲病毒。商品化的表達ShRNA的病毒載體實例包括pSilenceradeno(Ambion，Austin，TX)和pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST(Invitrogen，Carlsbad,CA)。病毒載體的選擇、從載體表達干擾RNA的方法和傳遞病毒載體的方法都在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。用作生產(chǎn)PCR產(chǎn)生的shRNA表達盒的試劑盒的實例包4舌SilencerExpress(Ambion,Austin,TX)和siXpress(Mirus，Madison,WT)?？梢詮谋绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的多種真核啟動子包括polIII啟動子(如U6或HI啟動子)或者polII啟動子(如巨細胞病毒啟動子)中表達干擾RNA。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員承認這些啟動子也適用于允許干擾RNA的誘導(dǎo)表達。在生理條件下雜交在本發(fā)明的某些實施方案中，干擾RNA的反義鏈與在體內(nèi)作為RISC復(fù)合體部分的mRNA雜交。"雜交"指其中單鏈核酸與互補或近乎互補的堿基序列相互作用以形成稱為雜交體的氫鍵復(fù)合體的過私雜交反應(yīng)具有靈敏性和選擇'I"么在體外，度以及雜交溫度控制，這些操作是本領(lǐng)域所熟知的。特別的，通過降低鹽濃度、增加甲酰胺濃度或升高雜交溫度而增強嚴緊性。例如，在大約50%甲酰胺、37。C-42'C時產(chǎn)生高嚴緊性條件。在大約35%-25%甲酰胺、30。C-35。C時產(chǎn)生降低的嚴緊性條件。用于雜交的嚴緊性條件的實例提供在Sambrook，J.,1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.中。嚴緊性雜交條件的其它實例包括400mMNaCl、40mMPIPES,pH6.4、lmMEDTA、50。C或70。C下12-16小時后再洗滌；或者在70°C、lxSSC或50°C、lxSSC和50%甲酰胺中雜交后，在70。C、0.3xSSC中洗滌；或者在70。C、4xSSC或50。C、4xSSC和50%曱酰胺中雜交后，在67°C、lxSSC中洗滌。雜交溫度比雜交體的熔解溫度(TnO大約低5-10°C,使用下面的計算方法確定19-49個堿基對長度的雜交體的Tm:Tm°C=81.5+16.6(log10[Na+)+0.41(%G+C)-(600/N),其中N是雜交體中的堿基數(shù)，且[Na+是雜交緩沖液中鈉離子的濃度。上述體外雜交測定提供預(yù)測在候選siRNA和耙標之間的結(jié)合是否具有特異性的方法。然而，在RISC復(fù)合物體系中，用不能證明體外雜交的高嚴緊性的反義鏈也能對靶標進行特異性的切割。單鏈干擾RNA:如上所述，干擾RNA最終作為單鏈起作用。已發(fā)現(xiàn)單鏈(ss)千擾RNA能影響mRNA沉默，但是比雙鏈RNA效率低。因此，本發(fā)明的實施方案也提供施用ss干擾RNA,其在生理條件下與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的部分雜交，并且與雜交部分有至少19個核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域所述雜交部分分別對應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQlDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。與上述ds干擾RNA—樣，ss干擾RNA長度為19-49個核苷酸。ss千擾RNA含有5'端磷酸或在原位或體內(nèi)的5，端位置被磷酸化。術(shù)語"5，磷酸化，，用于描述，例如，具有磷酸基團的多核苷酸或寡核苷酸，該磷酸基團經(jīng)由酯鍵連接到多核苷酸或寡核苦酸的5'末端糖(例如核糖、脫氧核糖或其類似物)的C5羥基上。與ds干擾RNA—樣，通過化學(xué)合成或體外轉(zhuǎn)錄或從載體或表達盒內(nèi)源性表達得到ss干擾RNA。可以通過激酶加入5，端磷脧基，或5'端磷酸可以由RNA的核酸酶切割生成。傳遞與ds干擾RNA—樣。在一個實施方案中，施用具有保護末端和核酸酶抗性修飾的ss干擾RNA來實現(xiàn)沉默。SS干擾RNA可以千燥貯存或溶解于水溶液中。為了抑制退火或為了穩(wěn)定，該溶液可以包含緩沖液或鹽。發(fā)夾干擾RNA:發(fā)夾干擾RNA是單個分子(如單個寡核苷酸鏈)，包含莖環(huán)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)中的干擾RNA的有義鏈和反義鏈兩者(如shRNA)。例如，shRNA能從DNA栽體表達，其中編碼有義干擾RNA鏈的DNA寡核苷酸通過短的間隔區(qū)與編碼反向互補的反義干擾RNA鏈的DNA寡核普酸相連接。如果出于所選擇表達載體的需要，可以加入3'末端T's和形成限制性位點的核苷酸。得到的RNA轉(zhuǎn)錄物自身折疊以形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。施用模式可以通過眼組織注射如眼周、結(jié)膜、筋膜嚢(subtenon)、前房內(nèi)(intracameral)、玻璃體內(nèi)(intravitreal)、目艮內(nèi)、視網(wǎng)膜下、結(jié)膜下、眼球后或淚管內(nèi)(intracanalicular)的注射；或通過使用導(dǎo)管或其他放置裝置如視網(wǎng)膜藥丸、目艮內(nèi)插入、栓劑或包含多孔的、非多孔的或凝膠狀物質(zhì)的植入物直接運用到眼睛；通過局部眼滴劑或藥膏；或通過盲管中或植入的相鄰鞏膜(鞏膜睫狀體)或在眼內(nèi)的緩慢釋放裝置將干擾RNA直接遞送到眼部。前房內(nèi)注射可通過角膜ii^前房，讓藥劑到達小梁。淚管內(nèi)注射可進入靜脈收集管引流施萊姆管或進入施萊姆管。預(yù)期可以進行全身的或腸道外施用，包括但不限于靜脈內(nèi)、皮下和經(jīng)口給藥。受試者需要治療高眼壓或有發(fā)展成高眼壓危險的受試者是患有高眼壓或具有發(fā)展成有高眼壓危險的人或哺乳動物，所迷高眼壓與這里所述的靶標的不需要或不適當?shù)谋磉_或活性有關(guān)，所述靼標即碳酸酐酶II、IV或XII;pi-或卩2-腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶或Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白。與這類病癥有關(guān)的目艮部結(jié)構(gòu)可能包括例如眼、視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、晶狀體、角膜、小梁、虹膜、視神經(jīng)、視盤、鞏膜、眼房、玻璃體房或睫狀朱受試者也可能是眼部細胞細胞培養(yǎng)物、器官或活體外(exvivo)器官或組織。制劑和劑量藥物制劑包括以重量計可高達99。/o的本發(fā)明的干擾RNA或其鹽，其與生理可接受的眼科栽體介質(zhì)如水、緩沖液、生理鹽水、甘氨酸、透明質(zhì)酸、甘露醇等等混合。以溶液、懸浮液或乳劑的形式施用本發(fā)明的干擾RNA。下面是本發(fā)明可能實施的制劑的實例。重量含量％干擾RNA達到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0羥丙基甲基纖維素0.5氯化鈉0.8苯扎氯銨0.01EDTA0.01NaOH/HClqspH7.4純凈水(不含RNA酶)qs100mL重量含量％干擾RNA達到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸鹽緩沖液1.0苯扎氯銨0.01聚山梨酯800.5<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>一般來說，本發(fā)明實施方案中有效量的千擾RNA在靶細胞表面產(chǎn)生的細胞外濃度從100pM至100nM,或從1nM至50nM，或從5nM至約10nM或至約25nM。達到這一局部濃度所需的劑量取決于許多的因素，包括給藥方法、給藥位點、在給藥位點和靶細胞或組織之間的細胞層數(shù)、局部給藥還是全身給藥等等。給藥位點上的濃度比在靶細胞或組織表面的濃度可能高出很多。將組合物局部施用到眼睛表面，每天l-4次，或根據(jù)臨床醫(yī)師的常規(guī)判斷按更大范圍的給藥時間表如每日、每周、雙周、每月或更長時間施用。制劑的pH大約是pH4-9或pH4.5-pH7.4。通過增加作用的持續(xù)時間，從而允許減少給藥次數(shù)和增強受試者依從性，用針對高眼壓靶標mRNA的siRNA對受試者的治療比用小分子局部眼藥滴劑被期望更為有利。雖然正確的給藥方案取決于臨床醫(yī)師的決定，可以按臨床醫(yī)師指導(dǎo)在每只眼中滴一滴的方法施用干擾RNA。制劑的有效量可能取決于許多因素，例如受試者的年齡、種族和性別，高眼壓的嚴重性、耙標基因轉(zhuǎn)錄物/蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換的比率、干擾RNA效能和干擾RNA穩(wěn)定性。在一個實施方案中，將干擾RNA按治療劑量局部施用到眼睛并到達小梁、視網(wǎng)膜或視盤，從而改善與高眼壓相關(guān)的疾病?？山邮艿妮d體眼科可接受的栽體指那些至多引起很少到無眼刺激的載體，如果需要提供適當?shù)姆栏⑶乙跃鶆騽┝枯斔鸵环N或多種本發(fā)明的千擾RNA。用作施用本發(fā)明實施方案的干擾RNA的可接受載體包括陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染試劑TransIT-TKO(MinisCorporation,Madison,WI>LIPOFECTIN私LipofectamiimOLIGOFECTAMINETM(Invitrogen，Carlsbad,CA)或DHARMAFECTTM(Dharmacon，Lafayette,CO);聚陽離子如聚乙烯亞胺；陽離子肽如Tat、多聚精氨酸或穿膜肽(Antp肽)；或脂質(zhì)體。脂質(zhì)體形成于標準的小泡形成脂質(zhì)和固醇，如膽固醇，并可包括靶標分子例如對內(nèi)皮細胞表面抗原具有結(jié)合親和力的單克隆抗體。此外，脂質(zhì)體可以是加入PEG的脂質(zhì)體?？梢栽谌芤骸腋∫夯蛘咴谏锶芪g或非生物溶蝕的給藥裝置中傳遞干擾RNA?？梢詫⒏蓴_RNA單獨施用，也可以作為共價綴合物的成分，與陽離子脂質(zhì)體、陽離子肽或陽離子聚合物絡(luò)合或包裹在靶向的或非靶向的納米顆粒中施用。為了眼部給藥，可將干擾RNA與眼科可接受的防腐劑、共溶劑、表面活性劑、增粘劑、滲透促進劑、緩沖液、氯化鈉或水結(jié)合，以形成水溶的無菌眼科懸浮液或溶液?？赏ㄟ^將干擾RNA溶解于生理上可接受的等滲水溶緩沖液來制備眼科溶液制劑。另外，眼科溶液可能包括眼科學(xué)的可接受的表面活性劑來協(xié)助溶解抑制劑?？蓪⒃稣硠┤缌u甲基纖維素、羥乙基纖維素、曱基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或類似物添加到本發(fā)明的組合物中，以提高化合物的滯留。為了制備無菌眼藥膏制劑，將干擾RNA與防腐劑在合適載體(如礦物油、液體羊毛脂或白凡士林)上組合。根據(jù)本領(lǐng)域已知的用于制備其它目艮科制劑的方法，通過將干擾RNA懸浮于由例如CARBOPOL-940(BFGoodrich,Charlotte,NC)或其相似物的組合制備的親水基質(zhì)中可制備無菌眼用凝膠制劑。例如VISCOAT(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)可用作眼內(nèi)注射。本發(fā)明的其他組合物可能包含滲透促進藥劑如cremephor和TWEEN80(聚氧乙烯山梨醇單月桂酸酯，SigmaAldrich，St.Louis,MO)，其中干擾RNA較少滲透入眼中。試劑盒本發(fā)明的實施方案提供試劑盒，其包括用于減弱在這里所述mRNA在細胞中的表達的試劑。試劑盒包含siRNA或shRNA表達載體。對于siRNA和非病毒的shRNA表達栽體，該試劑盒也可能包含轉(zhuǎn)染試劑或其他合適的傳遞載體。對于病毒的shRNA表達栽體，該試劑盒也可能包含病毒載體和/或用于產(chǎn)生病毒載體的必需組分(例如，包裝細胞系以及用于包裝的包含病毒載體4莫板和額外的輔助載體的載體)^該試劑盒也可能包含陽性和陰性對照siRNA或shRNA表達載體(例如，無輩巴向?qū)φ誷iRNA或靶向無關(guān)mRNA的siRNA)。該試劑盒也可能包含用作評估指定靶標基因的敲除的試劑(例如，用于檢測耙標mRNA的定量PCR的引物和探針和/或針對western印跡的相應(yīng)蛋白質(zhì)的抗體)。備選地，該試劑盒可能包含siRNA序列或shRNA序列和使用說明以及用于通過體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生siRNA或構(gòu)建shRNA表達載體的必需物質(zhì)。還提供試劑盒形式的藥物組合，其包括(在包裝的組合中)適于接受與此的密閉容器裝置的栽體裝置，和包括干擾RNA組合物和眼科可接受載體的第一種容器裝置。如果需要，該試劑盒還可以包括一種或多種常規(guī)的藥物學(xué)試劑盒組分，例如含有一種或多種藥物可接受栽體的容器、額外的容器等等，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。該試劑盒也可以包括作為插件或作為標簽的用于指示施用的組分量的印刷的使用說明、用于施用的指南和/或用于混合組分的指南。干擾RNA在例如人小梁(TM)細胞中敲除內(nèi)源靶標基因表達水平的能力在體外按以下方式評估。將轉(zhuǎn)化的人TM細胞，例如指定的細胞系GTM-3或HTM畫3(見Pang，I.H.等人，1994.Curr.EyeRes.13:51-63)，在轉(zhuǎn)染之前24小時在標準生長培養(yǎng)基(如用10%牛胎兒血清增補的DMEM)中鋪板培養(yǎng)。根據(jù)制造商的說明書，使用Dharmafectl(Dharmacon，Lafayette,CO)在干擾RNA濃度從0.1nM-100nM范圍內(nèi)進行轉(zhuǎn)染。無乾向?qū)φ崭蓴_RNA和核纖素蛋白A/C干擾RNA(Dharmacon)作為對照。在轉(zhuǎn)染后24小時，使用例如TAQMAN⑧正向和反向引物以及包含乾位點的探針系歹'J(AppliedBiosystems,FosterCity,CA),通過定量PCR來評估耙標mRNA水平?？稍谵D(zhuǎn)染后約72小時(實際時間取決于蛋白質(zhì)的更新率)例如通過western印跡評估靼標蛋白質(zhì)水平。從培養(yǎng)細胞中分離RNA和/或蛋白質(zhì)的標準技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。為減少非特異性、脫乾效應(yīng)的幾率，應(yīng)該使用會產(chǎn)生期望的敲除耙基因表達水平的可能最低濃度干擾RNA。本發(fā)明的千擾RNA敲除CA2蛋白質(zhì)表達水平的能力在如下的實施例1中得以進一步例證。實施例1用于在HeLa細胞中特異性沉默CA2的干擾RNA本研究檢測CA2-干擾RNA在培養(yǎng)的Hela細胞中敲除內(nèi)源CA2表達水平的能力。HeLa細胞的轉(zhuǎn)染是使用CA2siRNA的標準體外濃度(IOOnM和1nM)或無靼向?qū)φ誷iRNA和DharmaFECTTM1轉(zhuǎn)染試劑(Dharmacon，Lafayette,CO)完成的。所有的siRNA溶解在lxsiRNA緩沖液中，該緩沖液是含有20mMKC1、6mMHEPES(pH7.5)、0.2mMMgCl2的水溶液。在轉(zhuǎn)染后72小時，通過western印跡分析來評估CA2蛋白質(zhì)表達和肌動蛋白蛋白質(zhì)表達(上樣對照)。CA2siRNA是雙鏈干擾RNA，其對以下靼標序列具有特異性siCA2#l靼向SEQIDNO:721;siCA2#3靼向SEQIDNO:13siCA2#4靼向SEQIDNO:72QsiCA2#5乾向SEQIDNO:14L如圖1中western印跡數(shù)據(jù)顯示，相對于非靼向?qū)φ誷iRNA，四個CA2siRNA中的每一個在100nM和1nM都顯著降低CA2表達靶向SEQIDNO:720的SiCA2#4和革G向SEQIDNO:141的siCA2#5顯得特別有效。這里引用的參考文獻被特別并入作為參考，其提供示例性的操作或其他的細節(jié)作為對在此闡明的那些內(nèi)容的補充。在本公開的指導(dǎo)下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將會認可，可以對這里公開的實施方案進行明顯的修飾而不背離本發(fā)明的精神或范圍。在本公開的指導(dǎo)下，在這里公開的所有實施方案都能夠得到實現(xiàn)和執(zhí)行而無需過度的實驗。在本公開及其等同的實施方案中公布本發(fā)明的全部范圍。說明書不應(yīng)該被過于狹隘的解釋為本發(fā)明要求保護的全部范圍。除非另有說明，在這里使用的術(shù)語"a"和"an"意指"一個，，、"至少一個"或"一個或多個"。權(quán)利要求1.在受試者中減弱高眼壓靶標mRNA表達的方法，該方法包括向受試者施用包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受的載體的組合物，該干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3′端次末端的13個核苷酸具有至少90％的序列互補性或至少90％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO33-SEQIDNO82和SEQIDNO220-SEQIDNO717。2.權(quán)利要求l的方法，其中干擾RNA是shRNA。3.權(quán)利要求l的方法，其中高眼壓靶標mRNA編碼p-腎上腺素能受體，且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:33-SEQIDNO:52和SEQIDNO:220-SEQIDNO:282。4.權(quán)利要求1的方法，其中高眼壓乾標mRNA編碼乙酰膽堿酯酶，且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:53-SEQIDNO:62和SEQIDNO:283-333。5.權(quán)利要求l的方法，其中高眼壓靶標mRNA編碼ATP1A1，且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核普酸的區(qū)域，該連續(xù)核普酸與以下任一序列的3，端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:334-SEQIDNO:374。6.權(quán)利要求l的方法，其中高眼壓靶標mRNA編碼ATP1A2,且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3，端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:63-SEQIDNO:72和SEQIDNO:375-SEQIDNO:416。7.4又利要求1的方法，其中高眼壓靶標mRNA編碼ATP1A3，且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:417曙SEQIDNO:440。8.^又利要求1的方法，其中高眼壓耙標mRNA編碼ATP1A4，且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:441畫SEQIDNO:511。9.沖又利要求1的方法，其中高眼壓乾標mRNA編碼ATP1B1,且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:512-SEQIDNO:563。10.權(quán)利要求l的方法，其中高眼壓耙標mRNA編碼ATP1B2,且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:564-SEQIDNO:606。11.權(quán)利要求l的方法，其中高目艮壓靶標mRNA編碼ATP1B3,且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:607-SEQIDNO:648。12.權(quán)利要求1的方法，其中高眼壓耙標mRNA編碼SLC12A1，且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:73-SEQIDNO:82和SEQIDNO:649SEQID隱675。13.權(quán)利要求l的方法，其中高目艮壓靶標mRNA編碼SLC12A2，且干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核普酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:676-SEQIDNO:717。14.權(quán)利要求1的方法，其中連續(xù)核苷酸的區(qū)域是至少14個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該區(qū)域與序列標識符的序列3'端次末端14個核苷酸具有至少85%的序列互補性或至少85%的序列同一性。15.權(quán)利要求1的方法，其中連續(xù)核苷酸的區(qū)域是至少15、16、17或18個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該區(qū)域分別與序列標識符的序列3'端次末端15、16、17或18個核苷酸具有至少80%的序列互補性或至少80%的序列同一性。16.權(quán)利要求l的方法，其中干擾RNA是miRNA。17.權(quán)利要求l的方法，其中千擾RNA是siRNA。18.組合物在制備用于治療受試者高眼壓的藥物中的用途，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3，端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:33-SEQIDNO:82和SEQIDNO:220-SEQIDNO:717,其中由此治療高眼壓。19.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苦酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:33-SEQIDNO:42和SEQIDNO:220-SEQIDNO:241。20.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3，端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:43-SEQIDNO:52和SEQIDNO:242-SEQIDNO:282。21.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:53-SEQIDNO:62和SEQIDNO:283-333。22.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:334-SEQIDNO:374。23.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:63-SEQIDNO:72和SEQIDNO:375-SEQIDNO:416。24.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:417-SEQIDNO:440。25.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:441-SEQIDNO:511。26.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:512-SEQIDNO:563。27.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:564國SEQIDNO:606。28.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90。/。的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:607-SEQIDNO:648。29.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互#卜性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:73-SEQIDNO:82和SEQIDNO:649-SEQIDNO:675。30.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:676-SEQIDNO:717。31.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA是shRNA。32.4又利要求18的用途，其中干擾RNA是siRNA。33.權(quán)利要求18的用途，其中制備組合物用于局部、玻璃體內(nèi)、鞏膜睫狀體、眼周、結(jié)膜、筋膜嚢、前房內(nèi)、視網(wǎng)膜下、結(jié)膜下、眼球后或淚管內(nèi)的施用。34.權(quán)利要求18的用途，其中組合物是能夠表達干擾RNA的表達載體。35.權(quán)利要求18的用途，其中干擾RNA是miRNA。36.減弱受試者高眼壓靶標mRNA第一種變體的表達而不減弱高眼壓靶標mRNA第二種變體的表達的方法，其包括對受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受栽體，該干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與第一種變體的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達被減弱，而沒有減弱第二種變體mRNA的表達，并且其中第一種變體靶標mRNA分別是SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129，且第二種變體耙標mRNA分別是SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130。37.減弱受試者高眼壓靶標mRNA第一種變體的表達而不減弱高眼壓靶標mRNA第二種變體的表達的方法，其包括對受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受栽體，該干擾RNA包含至少13個連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與第一種變體的3，端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達被減弱，而沒有減弱第二種變體mRNA的表達，并且其中第一種變體單巴標mRNA分別是SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130，且第二種變體靼標mRNA分別是SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQID隱129。38.減弱受試者高眼壓靶標mRNA表達的方法，其包括對受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；其中反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的部分雜交，并且與mRNA的雜交部分具有至少19個核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域，所述mRNA分別對應(yīng)于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133,其中高眼壓靶標mRNA的表達被減弱。39.權(quán)利要求38的方法，其中經(jīng)由局部、玻璃體內(nèi)、鞏膜睫狀體、眼周、結(jié)膜、筋膜嚢、前房內(nèi)、視網(wǎng)膜下、結(jié)膜下、目艮球后或淚管內(nèi)的途徑施用組合物。40.權(quán)利要求38的方法，其中通過從能夠表達干擾RNA的表達栽體在體內(nèi)表達施用組合物。41.權(quán)利要求38的方法，其中高眼壓靶標mRNA編碼卩l(xiāng)-或|52-腎上腺素能受體，并且反義鏈在生理條件下與分別對應(yīng)于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的部分雜交，且含有至少19個核苷酸的與mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域，所述mRNA分別對應(yīng)于SEQIDNO:3或SE()IDNO:4。42.權(quán)利要求38的方法，其中高眼壓靶標mRNA編碼乙酰膽堿酯酶，并且反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的部分雜交，且含有至少19個核苷酸的、與分別對應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。43.權(quán)利要求38的方法，其中高眼壓耙標mRNA編碼Na+/K+-ATP酶的亞基，并且反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:6、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQID脆128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131或SEQIDNO:132的mRNA的部分雜交，且含有至少19個核苷酸的、與分別對應(yīng)于SEQIDNO:6、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131或SEQIDNO:132的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。44.權(quán)利要求38的方法，其中高眼壓耙標mRNA編碼Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白，并且反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的部分雜交，且含有至少19個核苷酸的、與分別對應(yīng)于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。45.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:3的mRNA為耙標，所述mRNA包含核苷酸468、523、799、1563、1565、1569、1593、1613、1614、1626、310、322、726、769、772、801、802、1501、1576、1577、1579、1580、1581、1586、1590、1592、1594、1615、1616、1632、1633或1654。46.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:4的mRNA為耙標，所述mRNA包含核苷酸329、375、1031、1046、1149、1163、1371、1401、1426、1880、283、607、608、609、619、623、722、857、1037、1091、1115、1124、1136、1137、1151、1164、1393、1394、1395、1406、1407、1427、1428、1429、1442、1725、1726、1756、1757、1758、1767、1790、1791、1792、1793、1803、1861、1869、1971、1972或1979。47.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:123的mRNA為輩巴標，所述mRNA包含核苷酸1875、18卯、1891、2011、2012、2133或2134。48.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:5的mRNA為耙標，所述mRNA包含核苷酸366、370、384、385、525、588、768、1045、1046、1061、10卯、1232、1314、1316、1460、1461、1462、1528、1607、1705、1713、382、393、397、622、1131、1459、1530、2251、2885、2886、386、1231、1315、2047、2049、2053、2055、2057、2125、2126、2127、2250、2253、2258、2260、2318、2395、2397、2404、2405、2643、2645或2887。49.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:124的mRNA為耙標，所述mRNA包含核苷酸2208、2275、2307、2526、2538、2592、2628、2979、2985、3093、3474、3504、3505、3506、3518、343、442、700、707、811、907、1059、1363、1594、1662、1758、1760、1896、2037或2147。50.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:125的mRNA為靶標，所述mRNA包含核苦酸436、441、443、552、617、701、702、832、2204、2291或2495。51.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:6的mRNA為輩巴標，所述mRNA包含核苷酸471、1990、3080、3797、4037、4093、4225、4323、5213、5285、214、467、470、472、473、632、825、946、1693、1767、1768、2157、2263、2589、2590、2765、2988、3094、3144、3145、3344、3345、3418、3666、3828、3850、4040、4041、4061、4882、4894、4900、5040、5114、5115、5128、5129、5253、5296、5375、5384或5385。52.;f又利要求38的方法，其中反義鏈#_設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:126的mRNA為乾標，所述mRNA包含核苷酸240、272、362、1836、1851、2103、2137、2138、2139、2157、2158、2160、2425、2580、2601、2646、2650、2794、2803、3116、3124、3126、3129或3377。53.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈^皮設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:127的mRNA為靶標，所述mRNA包含核苷酸113、612、702、833、1101、1732、1733、1836、2070、2071、2143、2328、2475、2861、2862、2952、3203、3281、3377、3379、3470、3471、3554、3614、3615、3616、3617、3625、3626、3642、3646、3647、3653、3655、3797、3801、3803、3809或3810。54.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:128的mRNA為革巴標，所述mRNA包含核苷酸126、251、252、253、331、427、429、520、521、530、601、602、603、604、664、665、666、667、675、676、692、696、697、702、703、705、707、847、851、853、859或860。55.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈浮皮設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:129的mRNA為靼標，所述mRNA包含核苷酸1096、1099、1130、1131、1167、1299、1441、1450、1451、1452、1564、1746、1750、1751、1752、1795、203、204、214、222、224、225、226、380、525、591、612、613、615、635、636、663、664、669、699、765、790、839、840、841、900、909、933或947。56.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈祐沒計成以對應(yīng)于SEQIDNO:130的mRNA為靶標，所述mRNA包含核苷酸1063、1102、1106、1107、1108、1109、1111或1151。57.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:131的mRNA為靶標，所述mRNA包含核苷酸653、654、771、773、841、849、853、917、918、926、927、931、981、983、984、996、998、1022、1023、1160、1214、1355、1356、1381、1394、1425、1474、1550、1620、1707、1740、1753、1825、1956、1965、2598、2599、2608、2828、2829、2888、3012或3251。58.4又利要求38的方法，其中反義鏈蜂皮i更計成以對應(yīng)于SEQIDNO:132的mRNA為靼標，所述mRNA包含核苷酸292、434、438、457、459、488、4卯、498、499、592、639、723、774、775、788、857、858、910、911、930、931、932、1009、1010、1023、1024、1111、1146、1147、1220、1246、1321、1325、1326、1327、1331、1437、1548、1571、1785、1786或1787。59.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈,皮設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:7的mRNA為耙標，所述mRNA包含核苷酸675、974、1373、1780、2102、2151、2315、2542、2609、3197、67、71、73、353、405、864、911、912、913、1409、1748、1811、1935、1937、1993、2012、2346、2388、2437、2586、3007、3008、3022、3130、3210、3237或3271。60.權(quán)利要求38的方法，其中反義鏈被設(shè)計成以對應(yīng)于SEQIDNO:133的mRNA為耙標，所述mRNA包含核苷酸748、749、753、1119、1169、1499、1509、1820、2081、2118、2147、2615、2644、2659、2663、2671、2672、2793、2812、2914、2948、3044、3334、3391、3480、3520、3549、3639、3840、3941、3944、4001、4995、4997、5141、5143、5249、5375、5834、5852、5981或6678。61.權(quán)利要求38的方法，還包括向受試者施用長度為19-49個核苷酸的第二種干擾RNA,并且包括有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個核普酸的至少近乎完全互補的區(qū)域；其中第二種干擾RNA的反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的第二部分雜交，且反義鏈含有至少19個核苷酸的、與分別對應(yīng)于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的第二雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。62.組合物在制備用于治療受試者高眼壓的藥物中的用途，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個核香酸的至少近乎完全互補的區(qū)域；其中反義鏈在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的部分雜交，并且具有至少19個核苷酸的、與分別對應(yīng)于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132或SEQIDNO:133的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域。63.權(quán)利要求62的用途，其中有義核苷酸鏈和反義核苷酸鏈通過環(huán)形核苷酸序列連結(jié)。64.權(quán)利要求62的用途，其中制備組合物用于局部、玻璃體內(nèi)、鞏膜睫狀體、眼周、結(jié)膜、筋膜嚢、前房內(nèi)、視網(wǎng)膜下、結(jié)膜下、眼球后或淚管內(nèi)的施用。65.權(quán)利要求62的用途，其中組合物包含能夠表達干擾RNA的表達載體。66.減弱受試者高眼壓靶標mRNA的表達的方法，其包括向受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核*酸的干擾RNA和藥物可接受載體，其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:3的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸468、523、799、1563、1565、1569、1593、1613、1614、1626、310、322、726、769、772、801、802、1501、1576、1577、1579、1580、1581、1586、1590、1592、1594、1615、1616、1632、1633或1654，并且該干擾RNA具有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:4的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸329、375、1031、1046、1149、1163、1371、1401、1426、1880、283、607、608、609、619、623、722、857、1037、1091、1115、1124、1136、1137、1151、1164、1393、1394、1395、1406、1407、1427、1428、1429、1442、1725、1726、1756、1757、1758、1767、1790、1791、1792、1793、1803、1861、1869、1971、1972或1979，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:4的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:123的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸1875、18卯、1891、2011、2012、2133或2134，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:123的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:5的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸366、370、384、385、525、588、768、1045、1046、1061、1090、1232、1314、1316、1460、1461、1462、1528、1607、1705、1713、382、393、397、622、1131、1459、1530、2251、2885、2886、386、1231、1315、2047、2049、2053、2055、2057、2125、2126、2127、2250、2253、2258、2260、2318、2395、2397、2404、2405、2643、2645或2887,并且該干擾RNA含有至少19個核苦酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:5的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:124的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸2208、2275、2307、2526、2538、2592、2628、2979、2985、3093、3474、3504、3505、3506、3518、343、442、700、707、811、卯7、1059、1363、1594、1662、1758、1760、1896、2037或2147，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:124的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:125的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸436、441、443、552、617、701、702、832、2204、2291或2495，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:125的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:6的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸471、1990、3080、3797、4037、4093、4225、4323、5213、5285、214、467、470、472、473、632、825、946、1693、1767、1768、2157、2263、2589、25卯、2765、2988、3094、3144、3145、3344、3345、3418、3666、3828、3850、4040、4041、4061、4882、4894、4900、5040、5114、5115、5128、5129、5253、5296、5375、5384或5385,并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:6的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:126的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸240、272、362、1836、1851、2103、2137、2138、2139、2157、2158、2160、2425、2580、2601、2646、2650、2794、2803、3116、3124、3126、3129或3377,并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:126的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:127的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸113、612、702、833、1101、1732、1733、1836、2070、2071、2143、2328、2475、2861、2862、2952、3203、3281、3377、3379、3470、3471、3554、3614、3615、3616、3617、3625、3626、3642、3646、3647、3653、3655、3797、3801、3803、3809或3810，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:127的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:128的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸126、251、252、253、331、427、429、520、521、530、601、602、603、604、664、665、666、667、675、676、692、696、697、702、703、705、707、847、851、853、859或860,并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:128的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:129的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸1096、1099、1130、1131、1167、1299、1441、1450、1451、1452、1564、1746、1750、1751、1752、1795、203、204、214、222、224、225、226、380、525、591、612、613、615、635、636、663、664、669、699、765、790、839、840、841、卯0、卯9、933或947，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:129的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:130的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸1063、1102、1106、1107、1108、1109、1111或1151，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:130的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:131的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸653、654、771、773、841、849、853、917、918、926、927、931、981、983、984、996、998、1022、1023、1160、1214、1355、1356、1381、1394、1425、1474、1550、1620、1707、1740、1753、1825、1956、1965、2598、2599、2608、2828、2829、2888、3012或3251，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:131的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:132的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸292、434、438、457、459、488、490、498、499、592、639、723、774、775、788、857、858、910、911、930、931、932、1009、1010、1023、1024、1111、1146、1147、1220、1246、1321、1325、1326、1327、1331、1437、1548、1571、1785、1786或1787，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:132的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:7的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸675、974、1373、1780、2102、2151、2315、2542、2609、3197、67、71、73、353、405、864、911、912、913、1409、1748、1811、1935、1937、1993、2012、2346、2388、2437、2586、3007、3008、3022、3130、3210、3237或3271，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:7的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應(yīng)于SEQIDNO:133的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸748、749、753、1119、1169、1499、1509、1820、2081、2118、2147、2615、2644、2659、2663、2671、2672、2793、2812、2914、2948、3044、3334、3391、3480、3520、3549、3639、3840、3941、3944、4001、4995、4997、5141、5143、5249、5375、5834、5852、5981或6678，并且該干擾RNA含有至少19個核苦酸的、與對應(yīng)于SEQIDNO:133的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補的區(qū)域；其中高眼壓靶標mRNA的表達由此被減弱。67.權(quán)利要求66的方法，其中干擾RNA是miRNA。68.權(quán)利要求66的方法，其中干擾RNA是siRNA。69.包含干擾RNA和藥物可接受載體的組合物，所迷干擾RNA長度為19-49個核苷酸并且含有SEQIDNO:33-SEQIDNO:82和SEQIDNO:220-SEQIDNO:717中任一的核苷酸序列或其互補序列。70.權(quán)利要求69的組合物，其中干擾RNA是shRNA。71.權(quán)利要求69的組合物，其中干擾RNA是siRNA。72.權(quán)利要求69的組合物，其中干擾RNA是miRNA。全文摘要本發(fā)明提供抑制高眼壓靶標mRNA表達的RNA干擾以降低開角型青光眼或高眼壓患者中升高的眼內(nèi)壓。高眼壓靶標包括碳酸酐酶II、IV和XII；1和2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na⁺/K⁺-ATP酶和Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白。通過施用本發(fā)明的干擾RNA來治療高眼壓。文檔編號C12N15/11GK101155918SQ200680010246公開日2008年4月2日申請日期2006年2月1日優(yōu)先權(quán)日2005年2月1日發(fā)明者A·F·克拉克,A·R·謝帕德,J·E·查特爾頓申請人:愛爾康公司