專利名稱：：干式分析元件的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及能夠迅速/簡(jiǎn)便地測(cè)定痕量樣品溶液中的生化物質(zhì)的干式分析元件。
背景技術(shù)：
：作為用于測(cè)定活體內(nèi)的生化物質(zhì)、酶和其它物質(zhì)的干式分析元件(包括多層分析元件、干式分析元件以及多層分析裝置所有這些)，例如，在專利文獻(xiàn)1和專利文獻(xiàn)2中描述了這些技術(shù)。這些技術(shù)涉及用于對(duì)生物樣品(例如血液、淋巴液、腦脊髓液或尿)中所含有的成分進(jìn)行定量分析的干式分析元件。然而，在活體內(nèi)或活體外的極大量的生物合成反應(yīng)(不僅涉及生物樣品中的常規(guī)生化物質(zhì)、酶等)中，都涉及焦磷酸的釋放和焦磷酸的分解。鑒于此，當(dāng)從熱力學(xué)角度研究生物合成反應(yīng)時(shí)，對(duì)焦磷酸進(jìn)行測(cè)定是有效的。例如，由DNA聚合酶催化脫氧核苷三磷酸聚合來(lái)合成核酸。在該步驟中，焦磷酸作為核酸合成的副產(chǎn)物被釋放。在核酸合成過程中，從能量角度而言，焦磷酸的釋放是很重要的。此外，通過檢測(cè)焦磷酸來(lái)確認(rèn)核酸合成是否進(jìn)行也是重要的。例如，對(duì)于核酸擴(kuò)增反應(yīng)后的反應(yīng)溶液，還通常實(shí)施以下的處理。通過測(cè)定焦磷酸來(lái)確認(rèn)擴(kuò)增反應(yīng)是否實(shí)際上發(fā)生。用于測(cè)定活體內(nèi)或活體外的此類液體樣品中的焦磷酸的干式分析元件技術(shù)在(例如)專利文獻(xiàn)3中有所描述。該技術(shù)如下所述。在干式分析元件中，焦磷酸(PPi)在無(wú)機(jī)焦磷酸酶(PPase)的作用下被轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸(Pi)。無(wú)機(jī)磷酸(Pi)通過嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)與黃嘌呤核苷或次黃嘌呤核苷反應(yīng)。所產(chǎn)生的黃嘌呤或次黃嘌呤被黃嘌吟氧化酶(XOD)氧化，從而形成尿酸。利用在該氧化過程中產(chǎn)生的過氧化氫(H202)、通過過氧化物酶(POD)的作用使成色劑(染料前體，例如隱色染料)顯色，并通過比色法測(cè)定該色度。另外，作為用于測(cè)定焦磷酸的反應(yīng)體系，以下的過程也是已知的。在生成黃嘌呤或次黃嘌呤的反應(yīng)過程中和反應(yīng)之后，例如，可以使用心肌黃酶(DI)和在黃嘌呤脫氫酶(XDH)作用下生成的NADH使成色劑(例如，甲臘型染料，如硝基四唑藍(lán))顯色，并通過比色法測(cè)定該色度。本文中可用的干式分析元件以這樣的方式構(gòu)建將一層或多層功能性層設(shè)置在透明的支持體上。使檢測(cè)試劑被包含在至少一層(或多層)中。由此，在滴加既定量的液體樣品之后，通過分析元件外部的反射光或透射光對(duì)層中反應(yīng)所得的染料進(jìn)行比色法測(cè)定。在滴加既定量的液體樣品之后，將干式分析元件保持在既定的溫度下(溫育)，以便使顯色反應(yīng)充分進(jìn)行。然后，(例如)照明光從透明支持體一側(cè)進(jìn)行輻照。由此，測(cè)量特定波長(zhǎng)區(qū)域的反射光的量或透射光的量，從而確定反射光密度或透射光密度。然后，根據(jù)先前測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析。在(例如)專利文獻(xiàn)3所述的焦磷酸測(cè)定用的干式分析元件或?qū)＠墨I(xiàn)4所述的干式分析元件中，在相關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
中，所述干式分析元件除了具有包含顯色反應(yīng)所需的試劑(如酶、顯色物質(zhì)或基質(zhì))的層和透明支持體以外，還設(shè)置有鋪展層，從而達(dá)到容納所滴加的液體樣品、并使該液體樣品迅速鋪展的目的。在這種情況下，作為鋪展層，可以使用膜過濾器(刷狀聚合物)、三維網(wǎng)格顆粒狀結(jié)構(gòu)物、織物等，其中，所述的三維網(wǎng)格顆粒狀結(jié)構(gòu)物含有通過在水的作用下不會(huì)發(fā)生溶脹的聚合物粘合劑以點(diǎn)接觸方式彼此接觸而形成的聚合物珠子。專利文獻(xiàn)1:JP-A-60-82859專利文獻(xiàn)2:JP-A-60-222770專利文獻(xiàn)3:JP-A-2004-156983專利文獻(xiàn)4:JP-A-2003-270249
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明待解決的問題然而，當(dāng)按照專利文獻(xiàn)3和4的方式設(shè)置含有所述物質(zhì)的鋪展層、并對(duì)其進(jìn)行透射光光度測(cè)定時(shí)，入射到干式分析元件內(nèi)部的光會(huì)受到衰減/散射等的影響。這會(huì)妨礙進(jìn)行精確的測(cè)定。另一方面，取出鋪展層對(duì)透射光光度測(cè)定是有利的。然而，此時(shí)被滴加到功能性層中的液體樣品的液體滲透速率降低，這不適于進(jìn)行快速的定量分析。本發(fā)明的目的是提供這樣的干式分析元件能夠迅速、簡(jiǎn)便地分析(例如)液體樣品中的生物材料，并且不需要設(shè)置鋪展層。解決所述問題的方法為了解決以上問題，本發(fā)明人進(jìn)行了密切的研究。結(jié)果，他們獲得以下發(fā)現(xiàn)。通過使凝膠薄膜中含有吸水性聚合物，使得液體樣品進(jìn)入凝膠薄膜的滲透速度即使在不設(shè)有鋪展層的條件下也會(huì)加快。由此，可以提供能夠?qū)嵤┛焖俜治龅母墒椒治鲈?。從而完成本發(fā)明。艮卩，本發(fā)明為如下所述(1)一種干式分析元件，該干式分析元件在透明支持體上具有試劑層，該試劑層具有包含至少一種吸水性聚合物的凝膠薄膜。(2)以上(1)所述的干式分析元件，其中，在所述的試劑層中，在每單位面積上，所述吸水性聚合物的量為凝膠的量的至多10質(zhì)量％。(3)以上(1)或(2)所述的干式分析元件，其中，所述試劑層中的凝膠含量為2g/r^到100g/m2。(4)以上(1)到(3)中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，其中，所述試劑層包含至少一種表面活性劑。(5)以上(4)所述的干式分析元件，其中，在所述的試劑層中，在每單位面積上，所述表面活性劑的量為凝膠的量的至多80質(zhì)量％。(6)以上(4)或(5)所述的干式分析元件，其中，所述表面活性劑包括含硅化合物。(7)以上(1)到(6)中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，其中，所述吸水性聚合物為選自以下物質(zhì)中的至少一種聚合物化合物聚丙烯酸鹽類、支鏈淀粉類、聚乙烯醇類、醋酸乙烯酯共聚物、馬來(lái)酐共聚物、羧甲基纖維素類和聚環(huán)氧乙烷類。(8)以上(1)到(7)中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，其中，所述試劑層包含用于將焦磷酸轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸的試劑；和試劑群，該試劑群用于進(jìn)行與所轉(zhuǎn)化的無(wú)機(jī)磷酸的量相關(guān)的顯色反應(yīng)。(9)以上(8)所述的干式分析元件，其中，所述試劑層包含黃嘌呤核苷或次黃嘌呤核苷、無(wú)機(jī)焦磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶和成色劑。(10)以上(9)所述的干式分析元件，其中，所述成色劑為隱色型染料。(11)以上(8)所述的干式分析元件，其中，所述試劑層包含黃嘌呤核苷或次黃嘌呤核苷、無(wú)機(jī)焦磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黃嘌呤脫氫酶、心肌黃酶和成色劑。(12)以上(11)所述的干式分析元件，其中，所述成色劑為甲謄型染料。(13)以上(8)到(12)中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，其中，所述的試劑層包含鎂離子。(14)以上(1)到(13)中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，該分析元件通過利用反射光光度測(cè)定或透射光光度測(cè)定的比色法對(duì)生物物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，在該比色法中，將含有生物物質(zhì)的液體樣品滴加到所述試劑層上，以使該試劑層顯色。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)根據(jù)本發(fā)明，所述試劑層具有包含至少一種吸水性聚合物的凝膠薄膜。因此，液體樣品在吸水性聚合物的作用下迅速地滲透到凝膠薄膜中。由此，可以迅速、簡(jiǎn)便地對(duì)(例如)液體樣品中的生物物質(zhì)進(jìn)行定量分析。實(shí)施本發(fā)明的最佳方式對(duì)本發(fā)明的干式分析元件的待測(cè)對(duì)象沒有特別限定，只要其是生物物質(zhì)即可。待測(cè)對(duì)象的例子包括焦磷酸、葡萄糖、GPT、GOT、尿酸、總膽固醇、中性脂肪和白蛋白。當(dāng)焦磷酸為待測(cè)定對(duì)象時(shí)，可以利用(例如)以下反應(yīng)式1或反應(yīng)式2所示的反應(yīng)原理。在下式(1)或式(2)所示的反應(yīng)體系中，焦磷酸(PPi)在無(wú)機(jī)焦磷酸酶(PPase)的作用下被轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸(Pi)。無(wú)機(jī)磷酸(Pi)通過嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)與黃嘌呤核苷或次黃嘌呤核苷反應(yīng)。所產(chǎn)生的黃嘌呤或次黃嘌呤被黃嘌呤氧化酶(XOD)氧化，從而形成尿酸。利用在該氧化過程中產(chǎn)生的過氧化氫(H202)，通過過氧化物酶(POD)的作用使成色劑顯色，并通過比色法測(cè)定該色度。順便提及，作為成色劑，可以舉出N,N-二取代苯胺(例如4-氨基安替比林)、苯酚或萘酚和隱色染料。在這些物質(zhì)中，染料前體(例如隱色染料)是優(yōu)選的?；蛘?，如式3所示，以下的方法也是可行的。在生成黃嘌呤或次黃嘌呤的反應(yīng)過程中和反應(yīng)之后，例如，可以使用心肌黃酶(DI)和由NAD在黃嘌呤脫氫酶(XDH)作用下還原生成的NADH使成色劑顯色，并通過比色法測(cè)定該色度。順便提及，作為成色劑，可以舉出甲臘型染料。在該甲謄型染料中，硝基四唑藍(lán)等是優(yōu)選的。式l<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>式2焦磷酸酶PPi+H20~~^2Pi核糖-1-磷酸次黃嘌呤核苷次黃嘌呤PNPXOD黃嘌呤2染料前體尿酸POD2染料式3焦磷酸酶PPi+H20-2Pi核糖-1-磷酸黃嘌呤核苷XDH黃嘌呤PNP尿酸NADMADHNAD染料前體染料DI或者，用于測(cè)定焦磷酸的其它顯色反應(yīng)也是可用的。例如，在用無(wú)機(jī)焦憐酸酶使焦磷酸轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸之后，可以使用用于測(cè)定無(wú)機(jī)磷酸的己知的顯色反應(yīng)。對(duì)于在轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸之后的反應(yīng)步驟中和反應(yīng)步驟之后，如專利文獻(xiàn)3所述，可以采用生物化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域中已知的無(wú)機(jī)磷酸的測(cè)定方法進(jìn)行與無(wú)機(jī)磷酸的量相關(guān)的顯色反應(yīng)。而且，對(duì)于除了焦磷酸以外的其它生物物質(zhì)而言，可以通過將用于測(cè)定各種物質(zhì)的已知的顯色反應(yīng)與本發(fā)明的干式分析元件相結(jié)合，來(lái)進(jìn)行簡(jiǎn)便/快速的測(cè)定。至于除了焦磷酸以外的其它生物物質(zhì)，以下文獻(xiàn)可以作為參考。葡萄糖JP-A-1-231897GPT:JP-A-57-144996GOT:JP-A-62-195299尿酸JP-A-63-219400總膽固醇JP-A-2-181656中性脂肪JP-A-63-119695白蛋白JP-A-62-137564對(duì)于本發(fā)明的干式分析元件，使用干式方法。將元件保存/貯存在干燥狀態(tài)下直到進(jìn)行分析時(shí)為止。因此，不需要如所謂的濕法那樣在使用試劑之前對(duì)試劑進(jìn)行制備。此外，試劑在干燥狀態(tài)下通常更安全，因此，干法在簡(jiǎn)便性/快速性方面優(yōu)于濕法。另外，干法作為能夠?qū)哿恳后w樣品快速地進(jìn)行高精確度的檢測(cè)的方法也是優(yōu)異的。本發(fā)明的干式分析元件可以采用與已知的多種干式分析元件相同的層結(jié)構(gòu)。干式分析元件可以是多層結(jié)構(gòu)，該多層結(jié)構(gòu)除了具有含有用于測(cè)定生物物質(zhì)的試劑群(包括諸如酶和基質(zhì)之類的試劑)的試劑層以外，還具有透明支持體、檢測(cè)層、粘合層、吸水層、底涂層、透氣層、緩沖層和其它層。在(例如)JP-A-49-53888(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.3,992,158)、JP-A-51-40191(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.4,402,335)、JP-A-55-164356(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.4,292,272)和JP-A-61-4959(對(duì)應(yīng)于EPCNo.0166365A)的各自說明書中批露的那些作為此類干式分析元件。當(dāng)所述的干式分析元件使用透光不透水的支持體時(shí)，其實(shí)際上可以采用以下結(jié)構(gòu)。但是，本發(fā)明的內(nèi)容不限于此。(1)在支持體上具有試劑層的結(jié)構(gòu)；(2)在支持體上依次具有檢測(cè)層和試劑層的結(jié)構(gòu)；(3)在支持體上依次具有第二試劑層和第一試劑層的結(jié)構(gòu)；或是(4)在支持體上依次具有檢測(cè)層、第二試劑層和第一試劑層的結(jié)構(gòu)。如(3)項(xiàng)或(4)項(xiàng)所述，試劑層可具有多個(gè)不同的層。例如，當(dāng)以焦磷酸作為待測(cè)對(duì)象時(shí)，可以在第一試劑層上進(jìn)行焦磷酸酶的反應(yīng)和PNP反應(yīng)，在第二試劑層上進(jìn)行XOD反應(yīng)和POD反應(yīng)?？晒┻x用的另外一種方式是，可以在第一試劑層上進(jìn)行焦磷酸酶的反應(yīng)、PNP反應(yīng)和XOD反應(yīng)，在第二試劑層上進(jìn)行POD反應(yīng)。下文中，將詳細(xì)地對(duì)各層進(jìn)行描述。但是，本發(fā)明不限于此。支持體任何材料都是可用的。但是，透光不透水的支持體為優(yōu)選。用于透光不透水的支持體的優(yōu)選材料為聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯和聚苯乙烯。為了使親水層牢固地粘附在支持體上，通常在支持體的表面上設(shè)置底涂層，或者對(duì)支持體進(jìn)行親水化處理。對(duì)支持體的厚度并沒有特別限定。但是，合適的厚度為約10pm到1000pm、優(yōu)選為50|iim至U300(im。檢測(cè)層檢測(cè)層含有至少一種成色劑。當(dāng)待測(cè)對(duì)象為焦磷酸時(shí)，顯色反應(yīng)是對(duì)應(yīng)于焦磷酸的量進(jìn)行的。檢測(cè)層和試劑層可以互相分開。但是，檢測(cè)層和試劑層也可以是一體的。此外，除了成色劑以外，檢測(cè)層可以含有用于實(shí)現(xiàn)顯色反應(yīng)的試劑群(例如酶)。對(duì)形成檢測(cè)層的材料沒有特別限定。但是，凝膠是優(yōu)選合適的。對(duì)檢測(cè)層的厚度沒有特別限定。但是，當(dāng)將檢測(cè)層設(shè)置為涂層形式時(shí)，其合適的厚度為約1pm到約500pm、優(yōu)選為約10pm到約100pm。在通過涂敷以外的其它方法形成多層結(jié)構(gòu)(例如通過層疊來(lái)形成多層結(jié)構(gòu))的情況下，其厚度可在幾十微米到幾百微米的范圍內(nèi)發(fā)生較大的變化。檢測(cè)層中的凝膠的量為2g/m2到100g/m2、優(yōu)選為5g/m2到50g/m2。試劑層試劑層具有包含至少一種吸水性聚合物的凝膠薄膜。試劑層含有(例如)上述用于將焦磷酸轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸的試劑；以及試劑群，該試劑群用于進(jìn)行與所轉(zhuǎn)化的無(wú)機(jī)磷酸的量相關(guān)的顯色反應(yīng)。作為試劑層中所包含的凝膠，還可以使用衍生物(例如鄰苯二甲酸酯化凝膠)。對(duì)試劑層的厚度沒有特別限定。然而，當(dāng)將試劑層設(shè)置為涂層形式時(shí)，其合適的厚度為約1到約500pm、優(yōu)選為約10pm到約100pm。在通過涂敷以外的其它方法形成多層結(jié)構(gòu)(例如通過層疊來(lái)形成多層結(jié)構(gòu))的情況下，其厚度可在幾十微米到幾百微米的范圍內(nèi)發(fā)生較大的變化。試劑層中的凝膠的量為2g/n^到100g/m2、優(yōu)選為5g/m2到50g/m2。將吸水性聚合物加入試劑層中，使得試劑層一旦保持有所滴加的液體樣品，接著就能使液體樣品迅速地滲透到試劑層中。鑒于此，使用本發(fā)明的干式分析元件，即使在試劑層上不設(shè)有可以使上述含有生物樣品的液體樣品擴(kuò)散/滲透的鋪展層時(shí)，也可以快速地進(jìn)行測(cè)定。關(guān)于吸水性聚合物，可以使用通?？墒褂玫木酆衔铮缇郾┧猁}類、支鏈淀粉類、聚乙烯醇類、醋酸乙烯酯共聚物、馬來(lái)酐共聚物、羧甲基纖維素類和聚環(huán)氧乙烷類。然而，尤其優(yōu)選聚丙烯酸鹽類聚合物。另外，可以使用由聚合方法和研磨方法中的一種方法制備的任何吸水性聚合物。關(guān)于吸水性聚合物的粒徑，優(yōu)選使用中心粒徑為約10pm到約800pm的吸水性聚合物，更優(yōu)選的是中心粒徑為約10pm到約100pm的吸水性聚合物。此外，經(jīng)改性等處理的高度交聯(lián)型吸水性聚合物、或耐鹽性增強(qiáng)型吸水性聚合物也是可用的。在試劑層中，在每單位面積上，吸水性聚合物的用量為凝膠的量的至多10質(zhì)量％。然而待加入的吸水性聚合物的量?jī)?yōu)選為0.1質(zhì)量％或更多。在每單位面積上，待使用的吸水性聚合物的更優(yōu)選的量為凝膠的量的1質(zhì)量％到5質(zhì)量％。為了增強(qiáng)吸水性聚合物在本發(fā)明中的效果(即，為了進(jìn)一步增強(qiáng)一旦保持有液體樣品、接著就能使液體樣品迅速地滲透到試劑層中的效果)，可以將表面活性劑加入到試劑層中。具體而言，優(yōu)選含硅的表面活性劑。此外，優(yōu)選非反應(yīng)性的聚醚改性的硅油作為表面活性劑。可以使用H丄.B.值為4到16的表面活性劑。然而，尤其優(yōu)選H丄.B.值為7到12的表面改性劑。在試劑層中，在每單位面積上，表面活性劑的用量為凝膠的量的至多80質(zhì)量％。然而待加入的表面活性劑的量?jī)?yōu)選為1質(zhì)量％或更多。在每單位面積上，待使用的表面活性劑的更優(yōu)選的量為凝膠的量的5質(zhì)量％到50質(zhì)量％。順便提及，還可以將含硅表面活性劑和其它表面活性劑組合使用。然而，在本發(fā)明中，試劑層中含有鎂離子是優(yōu)選的，這是因?yàn)殒V離子會(huì)產(chǎn)生這樣的效果在滴加樣品后的第一階段中，使焦磷酸酶的反應(yīng)平穩(wěn)地進(jìn)行。為了將鎂離子引入試劑層中，通常，只需將鎂鹽(例如MgCl2)和水包含在試劑層中即可。在試劑層中，在每單位面積上，鎂離子的含量?jī)?yōu)選為凝膠的量的1質(zhì)量％到75質(zhì)量％、更優(yōu)選為凝膠的量的5質(zhì)量％到55質(zhì)量％。為了達(dá)到改善諸如涂敷性能、擴(kuò)散性化合物的擴(kuò)散性、以及反應(yīng)性和耐貯性之類的各種性能的目的，除了所述的各種成分外，可以向試劑層中加入酶的活化劑和穩(wěn)定劑、輔酶、表面活性劑、pH緩沖劑組合物、細(xì)粉末、抗氧化劑以及各種添加劑(包括有機(jī)物質(zhì)或無(wú)機(jī)物質(zhì))。可以包含在試劑層中的緩沖劑的實(shí)例包括以下文獻(xiàn)所述的pH緩沖劑體系，所述文獻(xiàn)為由日本化學(xué)會(huì)編輯的《化學(xué)便覧基礎(chǔ)》(由丸善株式會(huì)社于1966年出版)，1312到1320頁(yè)；由R.M.C.Dawson等人編輯的DataforBiochemicalResearch,第二版(由牛津大學(xué)的Clarendon出版社在1969年出版)，476到508頁(yè)；Biochemistry,5，467到477頁(yè)(1966);禾口AnalyticalBiochemistry，104，300到310頁(yè)(1980)。pH緩沖劑體系的具體實(shí)例包括含有硼酸鹽的緩沖劑、含有檸檬酸或檸檬酸鹽的緩沖劑、含有甘氨酸的緩沖劑、含有N-二(羥乙基)甘氨酸的緩沖劑、含有HEPES的緩沖劑和Good's緩沖劑(如含有MES的緩沖劑)。順便提及，不能將含有磷酸鹽的緩沖劑用于檢測(cè)焦磷酸的干式分析元件?？梢园凑找韵路绞皆O(shè)置試劑層根據(jù)在JP-B-53-21677(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.3,992,158)、JP-A-55-164356(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.4,292,272)'和JP-A-54-101398(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.4,132,528)的各自說明書中所述的方法，將含有本發(fā)明中各種試劑的水溶液或水分散液涂敷在支持體或其它層上(例如檢測(cè)層)，并使其干燥。順便提及，如上所述，試劑層可以包含多個(gè)不同的層。順便提及，根據(jù)本發(fā)明的干式分析元件可以設(shè)有鋪展層或不設(shè)有鋪展層。但是，不設(shè)置鋪展層是所需要的，這是因?yàn)檫@樣有利于透射光光度測(cè)定。當(dāng)設(shè)置鋪展層時(shí)，鋪展層可以由膜過濾器(刷狀聚合物)、三維網(wǎng)格顆粒狀結(jié)構(gòu)物、織物等形式，其中，所述的三維網(wǎng)格顆粒狀結(jié)構(gòu)物含有通過在水的作用下不會(huì)發(fā)生溶脹的聚合物粘合劑以點(diǎn)接觸方式彼此接觸而形成的聚合物珠子?？梢酝ㄟ^在上述各專利說明書中所述的已知方法來(lái)制備本發(fā)明的干式分析元件。將該干式分析元件切成各邊長(zhǎng)為約5mm到約30mm的正方形或具有大致相同尺寸的圓形等的既定的小片。將得到的小片存放于在JP-B-57-283331(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.4,169,751)、JP-UM-A-56-142454(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.4,387,990)、JP-A-57-63452、JP-UM-A-58-32350、JP-T-58-501144(本文所用的術(shù)語(yǔ)"JP-T"是指公開的PCT專利申請(qǐng)的日文翻譯)(對(duì)應(yīng)于WO83/00391)等中所述的分析片(7，,K)框等內(nèi)，并用作化學(xué)分析用分析片?？晒┻x用的另外一種方式是，可采用以下的方式使用干式分析元件將其容納在市售可得的96孔板(或孔數(shù)更多的板)的各孔的底部。此外，作為本發(fā)明的干式分析元件，上述分析片形式的干式分析元件是優(yōu)選的。然而，根據(jù)預(yù)期目的，所述的干式分析元件可以為小片形式或長(zhǎng)的帶狀形式。另外，對(duì)于本發(fā)明的干式分析元件，其切片可以以原樣形式使用。但是，它們也可以以這樣的形式被使用將其存放在盒子、存放箱或具有開口的容器中，或?qū)⑺鼈冑N附在或附著在外露的卡片上。本發(fā)明的干式分析元件可以按照與所述的各個(gè)專利說明書中所述的操作方法相同的操作方法來(lái)檢測(cè)和測(cè)定液體樣品中的測(cè)試對(duì)象。例如，將約2到約30(優(yōu)選為4nL到15pL)的液體樣品水溶液滴加(點(diǎn)滴施加)到試劑層上。將經(jīng)點(diǎn)滴施加的分析元件在約15。C到45。C(優(yōu)選為約20'C到40°C)的恒溫下溫育1分鐘到30分鐘。從透明支持體一側(cè)對(duì)分析元件中的顯色程度或變色程度進(jìn)行反射光光度測(cè)定或透射光光度測(cè)定。由此，采用先前制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線、根據(jù)比色法的原理可以測(cè)定測(cè)試對(duì)象的量。通過使待點(diǎn)滴施加的液體樣品的量、以及溫育時(shí)間和溫育溫度保持恒定，就可以高精確度地進(jìn)行定量分析。對(duì)于測(cè)定操作方法，可以借助于在JP-A-60-125543、JP-A-60-220862、JP-A-61-294367、JP-A-58-161867(對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利No.4,424,191)等中所述的化學(xué)分析裝置和市售可得的平板讀取器，以很簡(jiǎn)單的操作方式實(shí)施高精確度的定量分析。順便提及，根據(jù)目的或所需的精確度，通過目視判斷顯色程度來(lái)進(jìn)行半定量的測(cè)定也是可以接受的。實(shí)施例通過以下實(shí)施例來(lái)更具體地描述本發(fā)明。但是，本發(fā)明不限于以下的實(shí)施例。(1)用于測(cè)定焦磷酸的干式分析元件將具有表i所示的組成(a)的水溶液涂敷到180pm厚的無(wú)色透明聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯(PET)的光滑膜片(支持體)(其上設(shè)有凝膠底涂層)上，從而得到以下所示的覆蓋率，然后使該涂層干燥，進(jìn)而形成試劑層。為了進(jìn)行對(duì)比，將含有表2所示組成(b)的水溶液以相同的方式進(jìn)行涂敷，并使其干燥，進(jìn)而形成試劑層。表1試劑層水溶液的組成(a)_凝膠對(duì)壬基苯氧基聚縮水甘油(縮水甘油單元平均含有10個(gè)單元)(C9H19-Ph-O-(CH2CH(OH)-CH2-O)10H)吸水性聚合物(AQUALICCAML-10,由日本觸媒株式會(huì)社制造)次黃嘌呤核苷過氧化物酶黃嘌呤氧化酶嘌呤核苷磷酸化酶無(wú)機(jī)焦磷酸酶雙甲酮(5，5-二甲基環(huán)己垸-1，3-二酮)隱色染料(2-(3，5-二甲氧基-4-羥基苯基)-4，5-二(4-二甲基氨基苯基)咪唑)18.90.5g/m20.44g/m21.6g/cm215200U/m:4600U/m22300U/m2500U/m20.07g/m20.28g/m2MgCl26H206.8g/m:聚醚改性的硅油8.0g/m2(KF-618,由信越化學(xué)株式會(huì)社制造)水97.3g/m用NaOH/HCl稀溶液調(diào)節(jié)pH為6.5注)作為吸水性聚合物的AQUALICCAML-10是聚丙烯酸鹽類吸水性聚合物，并且其平均粒徑為lOpm。表2試劑層水溶液的成(b)_凝膠對(duì)壬基苯氧基聚縮水甘油(縮水甘油單元平均含有IO個(gè)單元)(C9H19-Ph-O-(CH2CH(OH)-CH2-O)10H)次黃嘌呤核苷過氧化物酶黃嘌呤氧化酶嘌呤核苷磷酸化酶焦磷酸酶雙甲酮隱色染料(2-(3，5-二甲氧基-4-羥基苯基)-4，5-二(4-二甲基氨基苯基)咪唑)MgCl26H20水用NaOH/HCl稀溶液調(diào)節(jié)pH為6.5將這些分析元件切成直徑為約6mm的圓形，并將其粘結(jié)在市售可得的96孔板的底部。測(cè)定例1:液體樣品中焦磷酸的濃度與用于測(cè)定焦磷酸的干式分18.9g/m"0.5g/m21.6g/cm215200U/m:4600U/m22300U/mz500U/m20.07g/m20.28g/m26.8g/m297.3g/m2析元件的顯色之間的關(guān)系采用具有確定純度的焦磷酸鉀(由和光純藥株式會(huì)社制造)制備成各自濃度分別為0、0.05、0.10和0.15(mM)的焦磷酸鹽水溶液，并以每點(diǎn)滴5pL的量施加到實(shí)施例中所制備的干式分析元件中。將該干式分析元件在25'C下溫育10分鐘。然后，借助于平板讀取器(GENiosPro，由TECAN公司制造)從支持體那一側(cè)測(cè)定650nm波長(zhǎng)處的透射光密度(ODt)。結(jié)果示于表3和圖1中。結(jié)果表明使用本發(fā)明的干式分析元件可以定量地測(cè)定液體樣品中焦磷酸的量。表3液體樣品中焦磷酸的濃度與IO分鐘后的透射光密度之間的關(guān)系焦磷酸濃度(mM)_IO分鐘后的透射光密度(ODt)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>測(cè)定例2:加入吸水性聚合物和含硅表面活性劑的效果就本發(fā)明的例子而言，使用具有組成(a)的干式分析元件和作為對(duì)照而制備的具有組成(b)的干式分析元件實(shí)施以下的過程。采用具有確定純度的焦磷酸鉀(由和光純藥株式會(huì)社制造)制備各自濃度分別為0、0.05、0.10(mM)的焦磷酸鹽水溶液，并以每點(diǎn)滴5pL的量施加到實(shí)施例中所制備的干式分析元件中。將該干式分析元件在25°。下溫育10分鐘。然后，借助于平板讀取器(GENiosPro，由TECAN公司制造)從支持體那一側(cè)測(cè)定650nm波長(zhǎng)處的透射光密度(ODt)。將顯色反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程的結(jié)果以O(shè)Dt的方式示于表4中。組成(b)是通過從組成(a)中除去吸水性聚合物和含硅表面活性劑而得到的。組成(a)和組成(b)的比較如下所示。對(duì)于組成(b)而言，在0分鐘時(shí)的噪聲較高，此外，在點(diǎn)滴施加5pL的測(cè)試溶液(焦磷酸鹽水溶液)以后，即使過去5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，測(cè)試溶液也沒有完全滲透。與其形成對(duì)比的是，對(duì)于具有組成(a)的干式分析元件，在點(diǎn)滴施加5pL的測(cè)試溶液以后，在15秒內(nèi)測(cè)試溶液就完全滲透。將滲透速率的提高會(huì)改善顯色反應(yīng)的時(shí)間進(jìn)程這一實(shí)際情況用第3分鐘和第10分鐘之間的AODt差值來(lái)表示。表4:點(diǎn)滴施加焦磷酸鹽水溶液之后的顯色反應(yīng)的時(shí)間進(jìn)程(在各測(cè)定時(shí)間的ODt)組成(a)o分鐘3分鐘10分鐘AODt(10分鐘-3分鐘)0.00mM0.0690.1220.1510.0290.05mM0,0880.2790.3110.032O.lOmM0.0940.3790.3980.019組成(b)o分鐘3分鐘10分鐘AODt(10分鐘-3分鐘)O.OOmM0.1440.1750.1980.0230.05mM0.1600.2520.3100.058O.lOmM0.1970.3390.3960.05圖1示出液體樣品中焦磷酸濃度和IO分鐘后透射光密度(ODt)之間的關(guān)系的圖。權(quán)利要求1.一種干式分析元件，該干式分析元件在透明的支持體上具有試劑層，該試劑層具有包含至少一種吸水性聚合物的凝膠薄膜。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干式分析元件，其中，在所述的試劑層中，在每單位面積上，所述的吸水性聚合物的量為凝膠的量的至多10質(zhì)量％。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的干式分析元件，其中，所述的試劑層中的凝膠含量為2g/n^到100g/m2。4.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，其中，所述試劑層包含至少一種表面活性劑。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的干式分析元件，其中，在所述的試劑層中，在每單位面積上，所述表面活性劑的量為凝膠的量的至多80質(zhì)量％。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的干式分析元件，其中，所述表面活性劑包括含硅化合物。7.根據(jù)權(quán)利要求1到6中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，其中，所述吸水性聚合物為選自以下物質(zhì)中的至少一種聚合物化合物聚丙烯酸鹽類、支鏈淀粉類、聚乙烯醇類、醋酸乙烯酯共聚物、馬來(lái)酐共聚物、羧甲基纖維素類和聚環(huán)氧乙垸類。8.根據(jù)權(quán)利要求1到7中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，其中，所述試劑層包含用于將焦磷酸轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸的試劑；和試劑群，該試劑群用于進(jìn)行與所轉(zhuǎn)化的無(wú)機(jī)磷酸的量相關(guān)的顯色反應(yīng)。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的干式分析元件，其中，所述試劑層包含黃嘌呤核苷或次黃嘌呤核苷、無(wú)機(jī)焦磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶和成色劑。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的干式分析元件，其中，所述成色劑為隱色型染料。11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的干式分析元件，其中，所述試劑層包含黃嘌呤核苷或次黃嘌呤核苷、無(wú)機(jī)焦磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黃嘌呤脫氫酶、心肌黃酶和成色劑。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的干式分析元件，其中，所述成色劑為甲臘型染料。13.根據(jù)權(quán)利要求8到12中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，其中，所述的試劑層包含鎂離子。14.根據(jù)權(quán)利要求1到13中任意一項(xiàng)所述的干式分析元件，該分析元件通過利用反射光光度測(cè)定或透射光光度測(cè)定的比色法對(duì)生物物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，在該比色法中，將含有生物物質(zhì)的液體樣品滴加到所述試劑層上，以使該試劑層顯色。全文摘要本發(fā)明提供一種干式分析元件，其在透明的支持體上具有試劑層，該試劑層具有包含至少一種吸水性聚合物的凝膠薄膜。所述干式分析元件能夠迅速、簡(jiǎn)便地分析(例如)液體樣品中的生物物質(zhì)，并且不需要在所述干式分析元件中設(shè)置鋪展層。文檔編號(hào)C12Q1/48GK101107521SQ200680002670公開日2008年1月16日申請(qǐng)日期2006年2月21日優(yōu)先權(quán)日2005年2月28日發(fā)明者村谷浩二申請(qǐng)人:富士膠片株式會(huì)社