技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物學(xué)領(lǐng)域，涉及秦嶺巖白菜，具體來(lái)說(shuō)是一種秦嶺巖白菜的無(wú)性繁殖方法。

背景技術(shù)：
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秦嶺巖白菜(bergeniascopulosat.p.wang)為虎耳草科巖白菜屬多年生草本，該屬植物全世界有10種，我國(guó)產(chǎn)7種，秦嶺巖白菜其根狀莖在陜西眉縣及秦嶺山區(qū)稱為盤龍七，不僅是我國(guó)3個(gè)特有種之一，而且為本屬最原始的種。國(guó)內(nèi)野生種多分布于陜西、四川及甘肅東南部，進(jìn)人冬季，在原產(chǎn)地多枯萎落葉，但開花較早，花朵粉色，觀賞價(jià)值高。全草含有巖白菜素，根莖含藥量比較高，已被《中華本草》和《陜西中草藥》所收載，是陜西民間常用藥，澀、味苦、平；具有補(bǔ)脾健胃，收澀固腸，除濕利水，活血的功效；主治急慢性腸胃炎、浮腫、禿瘡、疥癬等，是治療呼吸系統(tǒng)疾病的特效藥。近些年，學(xué)者們對(duì)其開花特性、傳粉適應(yīng)性及繁殖系統(tǒng)進(jìn)行了分析研究，認(rèn)為其存在自交退化現(xiàn)象，故自然結(jié)實(shí)率極低，種子萌發(fā)率不高，生長(zhǎng)緩慢。

課題組于2012年建立了秦嶺巖白菜快繁技術(shù)體系，并率先在國(guó)內(nèi)實(shí)現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，保護(hù)了野生資源，生產(chǎn)出的優(yōu)質(zhì)種苗在新疆、河南、福建、浙江等地進(jìn)行了示范種植，收到了良好的社會(huì)效益與生態(tài)效益。近幾年材料費(fèi)、人工費(fèi)持續(xù)高漲，使得組培生產(chǎn)種苗的費(fèi)用也居高不下，為了節(jié)約生產(chǎn)成本，又能提供優(yōu)質(zhì)種苗的目的，課題組就秦嶺巖白菜進(jìn)行了系統(tǒng)栽培，并統(tǒng)計(jì)了一年生組培苗的分株芽苗數(shù)，利用分株芽苗培育生根及帶芽根莖扦插等無(wú)性繁殖方式，使大面積人工栽培和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)成為可能。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的在于提供一種秦嶺巖白菜的無(wú)性繁殖方法，所述的這種秦嶺巖白菜的無(wú)性繁殖方法要解決現(xiàn)有技術(shù)中野生秦嶺巖白菜繁殖率低的技術(shù)問(wèn)題，又降低組培生產(chǎn)中費(fèi)用過(guò)高的現(xiàn)狀，使大面積人工栽培和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)成為可能。

本發(fā)明提供了一種秦嶺巖白菜的無(wú)性繁殖方法，包括一個(gè)選擇芽苗的步驟，如果所述的芽苗高度超過(guò)5cm，則保留0.1～1cm的根莖基部并修切平整，根莖基部用0.1～2.0mg·l^-1iba浸泡15～50s后，再種植于混合基質(zhì)中進(jìn)行培育；如果芽苗的高度低于5cm，保留于原根莖上，進(jìn)行根莖穗條扦插，將根莖穗條的長(zhǎng)度修切為1～6cm，于3～7月或者9～11月扦插于混合基質(zhì)中；所述的混合基質(zhì)由珍珠巖、草炭土和腐殖質(zhì)組成，種前先澆透水，然后用塑料薄膜搭拱棚封閉保濕，保持光照度在20001x～30001x，每天10～14h光照時(shí)間，棚內(nèi)溫度為20～28℃，施以肥水管理，培育2～3個(gè)月。。

進(jìn)一步的，芽苗根莖基部可以保留0.1～1cm區(qū)間的任一長(zhǎng)度；iba可以為0.1～2.0mg·l^-1區(qū)間的任一濃度；iba浸泡時(shí)間可以為15～50s區(qū)間的任一時(shí)間。

進(jìn)一步的，根莖穗條的長(zhǎng)度可以修切為1～6cm區(qū)間的任一長(zhǎng)度；可以在3～7月或者9～11月區(qū)間任一月份里進(jìn)行扦插。

進(jìn)一步的，混合基質(zhì)使用前，先用水澆透，種植后后澆一遍1500x的多菌靈，種后緩苗前補(bǔ)水，緩苗后干透澆透，并延長(zhǎng)光照來(lái)培育健壯種苗，澆肥原則是兩遍肥水之間加一遍清水，其ec控制在250～500um/cm之間，5～7天施一遍殺菌藥。

進(jìn)一步的，所述的肥料由肥料寶力豐和銨鈣鎂組成，所述的寶力豐和銨鈣鎂的質(zhì)量為7:3。

進(jìn)一步的，所述的拱棚內(nèi)光照度可以保持在20001x～30001x區(qū)間之間的任一強(qiáng)度；光照時(shí)間可以保持在10～14h區(qū)間之間的任一時(shí)間，溫度可以保持在20～128℃區(qū)間之間的任一溫度。

進(jìn)一步的，當(dāng)種苗根部形成土球，高度為10cm時(shí)，移植入口徑為8cm的小缽中進(jìn)行再次培育。

本發(fā)明和已有技術(shù)相比，其技術(shù)進(jìn)步是積極和明顯的。生根培育中，生根率最高可達(dá)100％。扦插培育中，成活率最高可達(dá)90％。本發(fā)明利用芽苗培育生根或者根莖穗條扦插等無(wú)性繁殖方式培育秦嶺巖白菜，種苗成本降低，使大面積人工栽培和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)成為可能，保護(hù)了野生資源。

附圖說(shuō)明：

圖1為秦嶺巖白菜10棵一年生組培苗芽苗總數(shù)的照片。

圖2為秦嶺巖白菜芽苗生根情況的照片。

圖3為秦嶺巖白菜根莖的照片。

圖4為秦嶺巖白菜根莖扦插的照片。

圖5為秦嶺巖白菜根莖扦插成活種苗的照片。

具體實(shí)施方式：

下述實(shí)施方式統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)時(shí)，每種處理調(diào)查20個(gè)，每種處理重復(fù)3次。統(tǒng)計(jì)芽苗生根率、根莖扦插成活率。芽苗生根率＝生根株數(shù)/接種數(shù)，根莖扦插成活率＝成活數(shù)/扦插數(shù)。

采用excel2003和dps14.5數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用完全隨機(jī)單因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)法和lsd法進(jìn)行方差分析和多重比較(α＝0.05)

實(shí)施例1

芽苗生根培育

1.1梯度設(shè)計(jì)

芽苗生根培育時(shí)，采用naa和iba處理，設(shè)置為0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0計(jì)6種濃度梯度；浸泡時(shí)間設(shè)置為10s、15s、20s、30s、40s、50s六個(gè)梯度；芽苗基部修切為0.1、0.2、0.5、0.8、1.0cm五種長(zhǎng)度。

1.2培養(yǎng)條件

芽苗生根培育時(shí)，在溫室里進(jìn)行，操作后澆透水，然后用塑料薄膜搭拱棚封閉保濕，適時(shí)加蓋草簾或遮陽(yáng)網(wǎng)遮陰降溫，保持光照度在20001x～30001x，每天10～14h光照時(shí)間，棚內(nèi)溫度為20～28℃。

1.3芽苗培育

表1不同生長(zhǎng)激素及其濃度對(duì)芽苗生根的影響

*表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(n＝3)，同列數(shù)字后不同的字母表示0.05水平差異顯著性(p﹤0.05)，下同。

高度超過(guò)5cm的芽苗進(jìn)行生根培育，保留1cm的基部并修切平整，用不同濃度生長(zhǎng)素處理20s后，再種植于配制好的混合基質(zhì)中，施以肥水管理，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)生根率，不同激素及其濃度對(duì)芽苗生根的影響差異顯著(表1)。不管是采用naa還是iba處理，隨著激素濃度的升高，生根率也隨著提高，當(dāng)濃度為1.0mg·l^-1時(shí)，生根率達(dá)到最高，分別為65％、75％，之后生長(zhǎng)素濃度升高，反而對(duì)生根有抑制效果，生根率下降。篩選iba1.0mg·l^-1做為最佳處理濃度，與其它處理比較，差異顯著。

采用1.0mg·l^-1iba浸泡芽苗基部，浸泡時(shí)間設(shè)置為10s、15s、20s、30s、40s、50s六個(gè)梯度。結(jié)果顯示，浸泡時(shí)間對(duì)生根率影響顯著，短時(shí)速浸，生根率不高，隨著浸泡時(shí)間延長(zhǎng)，生根率快速提高，浸泡時(shí)間為30s時(shí)，生根率達(dá)最高95％(表2)，與其它處理比較，差異顯著。綜合激素種類、濃度以及浸泡時(shí)間，篩選出1.0mg·l^-1iba浸泡30s為最佳處理方式。

表2不同浸泡時(shí)間對(duì)芽苗生根的影響

采用1.0mg·l^-1iba浸泡芽苗基部30s，芽苗基部修切為0.1、0.2、0.5、0.8、1.0cm五種長(zhǎng)度。結(jié)果顯示，芽苗基部根莖越長(zhǎng)，生根率越高，當(dāng)長(zhǎng)度為0.5cm時(shí)，生根率達(dá)到最高100％，與低于0.5cm的兩種處理比較，差異顯著(表3)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果以及節(jié)約根莖藥材考慮，芽苗基部的最佳保留長(zhǎng)度為0.5cm。

表3不同芽苗基部長(zhǎng)度對(duì)芽苗生根的影響

實(shí)施例2根莖扦插

高度低于5cm的芽苗，單獨(dú)切割下來(lái)不容易生根成活，宜保留于原根莖上，進(jìn)行根莖扦插，才能成活。

2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根莖扦插時(shí)，修切為1cm、2cm、3cm、4cm、5cm、6cm六種長(zhǎng)度；扦插時(shí)間設(shè)置為1～12月等不同月份。

2.2培養(yǎng)條件

根莖扦插時(shí)，在溫室里進(jìn)行，操作后澆透水，然后用塑料薄膜搭拱棚封閉保濕，適時(shí)加蓋草簾或遮陽(yáng)網(wǎng)遮陰降溫，保持光照度在2000～30001x左右，10～14h光照時(shí)間，棚內(nèi)溫度為20～28℃左右。

2.3根莖扦插

根莖修切為1cm、2cm、3cm、4cm、5cm、6cm六種長(zhǎng)度，發(fā)現(xiàn)根莖長(zhǎng)度低于4cm時(shí)，對(duì)于扦插影響顯著(表4)。當(dāng)根莖長(zhǎng)度為1cm時(shí)，扦插成活率僅為15％，而當(dāng)根莖長(zhǎng)度達(dá)到4cm及以上時(shí)，扦插成活率可以達(dá)到100％，這與根莖積累營(yíng)養(yǎng)多少緊密相關(guān)。為了降低種植成本提高藥材產(chǎn)量，根莖扦插時(shí)取4cm即可。

表4不同根莖長(zhǎng)度對(duì)扦插成活率的影響

取4cm根莖扦插時(shí)，季節(jié)不同，成活率也有差異，不同月份扦插發(fā)現(xiàn)(表5)，3～7月、9～11月，扦插成活率在90％以上，與其它月份比較，差異顯著；而8月份雨水比較多的時(shí)候，根莖出現(xiàn)部分腐爛現(xiàn)象，影響成活率略低為85％；而在12月至明年的2月期間，成活率甚至降低到55％，這與溫度低，根莖發(fā)新根慢有直接關(guān)系。

表5不同月份扦插對(duì)成活率的影響

實(shí)施例3基質(zhì)及管理

秦嶺巖白菜芽苗生根培養(yǎng)和根莖穗條扦插都采用透氣性良好的進(jìn)口草炭，草炭長(zhǎng)度2mm左右，以珍珠巖:草炭土:腐殖質(zhì)＝2:1:1的比例調(diào)制成混合基質(zhì)，種植前2d澆透，種后澆一遍1500x的多菌靈。種后緩苗前補(bǔ)小水，哪里干補(bǔ)哪里，以當(dāng)天蒸發(fā)完為佳；緩苗后干透澆透，并適當(dāng)延長(zhǎng)光照來(lái)培育健壯種苗。澆肥原則是兩遍肥水之間加一遍清水，其ec控制在250～500um/cm之間，肥料按寶力豐：銨鈣鎂＝7:3的比例混合。5～7d施一遍殺菌藥，及時(shí)防治根蛆。養(yǎng)護(hù)至2個(gè)月時(shí)，不論是芽苗還是根莖扦插苗，根部已經(jīng)形成土球，高度為10cm，此時(shí)可以作為成品苗發(fā)售。2個(gè)月以上的生根苗需要移植入口徑直徑為8cm的小缽中，以利于后期生長(zhǎng)。

結(jié)論:

巖白菜芽苗生根培養(yǎng)或者根莖扦插成本低，管理較為簡(jiǎn)單，這樣就形成了通過(guò)組培來(lái)生產(chǎn)前期母本苗，后期通過(guò)芽苗生根培養(yǎng)或者根莖扦插繁殖的生產(chǎn)鏈條，為大規(guī)模種植開發(fā)提供了保障和前提。