本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基，具體涉及一種提高藍(lán)莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)：
：藍(lán)莓是一種小漿果，果實(shí)呈藍(lán)色、果肉細(xì)膩、種子極小，具有“漿果之王”和“水果皇后”的美譽(yù)。藍(lán)莓果實(shí)平均重0.5～2.5g，最大重5g，可食率為100％，甜酸適口，且具有香爽宜人的香氣，為鮮食佳品。藍(lán)莓不僅富含常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)及微量元素等，而且還含有極為豐富的花青素、黃酮類和多糖類化合物，具有緩解視力疲勞，促進(jìn)視網(wǎng)膜細(xì)胞中的視紫質(zhì)再生，預(yù)防近視，改善和增進(jìn)視力等功效。除緩解視力疲勞外，藍(lán)莓還具有諸多保健功能，如預(yù)防心腦血管疾病、防癌、提高免疫力、緩解咽喉疼痛及腹瀉等等，所以，對(duì)藍(lán)莓的利用和衍生品開發(fā)越來越受到重視。鑒于藍(lán)莓的廣闊市場(chǎng)前景，對(duì)藍(lán)莓苗木的研發(fā)也越來越受到重視。在藍(lán)莓苗木培育中，可以通過扦插和組織培養(yǎng)脫毒方式。扦插苗由于可能含有病毒病菌等而造成一定時(shí)間后藍(lán)莓品質(zhì)退化，從而影響藍(lán)莓的產(chǎn)量、質(zhì)量和經(jīng)濟(jì)效益。因此，為防止藍(lán)莓品質(zhì)退化現(xiàn)象出現(xiàn)，保證藍(lán)莓的質(zhì)量和產(chǎn)量及藍(lán)莓生產(chǎn)企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，通過制作藍(lán)莓脫毒苗進(jìn)行繁育就成為優(yōu)秀科技企業(yè)或者科技工作人員的首選品種繁育方式。脫毒苗制作，一般選取藍(lán)莓莖尖或者葉芽等具有較強(qiáng)分生能力的分生組織，在實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)過滅菌除病毒處理，然后接種于無菌無病毒的培養(yǎng)基中，通過逐步培養(yǎng)，然后觀察藍(lán)莓苗的染毒染菌情況，篩選出沒有病毒和細(xì)菌侵染的藍(lán)莓幼苗，通過現(xiàn)代生物技術(shù)手段進(jìn)一步切段快繁，從而實(shí)現(xiàn)獲得大量藍(lán)莓脫毒苗的目的。藍(lán)莓脫毒苗制作過程中，如何保證已經(jīng)獲得的脫毒苗能夠快速生長(zhǎng)繁殖是藍(lán)莓脫毒苗制作成功與否的關(guān)鍵因素。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種提高藍(lán)莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養(yǎng)基，能夠使藍(lán)莓脫毒苗在組培快繁過程中的保持良好生長(zhǎng)狀態(tài)及極高的成活率，為藍(lán)莓組織培養(yǎng)制作脫毒苗奠定基礎(chǔ)；本發(fā)明同時(shí)提供其制備方法。本發(fā)明所述的提高藍(lán)莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基為WPM，并添加有0.2-1.0g/L水解乳蛋白、0.4-1.2g/L維生素E、0.002-0.006g/L玉米素、0.002-0.008g/L6-芐基腺嘌呤、0.003-0.01g/L萘乙酸、0.004-0.02g/L2,4-二氯苯氧乙酸和10-40g/L蔗糖。所述的培養(yǎng)基優(yōu)選為：基本培養(yǎng)基為WPM，并添加有0.5g/L水解乳蛋白、0.6g/L維生素E、0.003g/L玉米素、0.004g/L6-芐基腺嘌呤、0.004g/L萘乙酸、0.008g/L2,4-二氯苯氧乙酸和20g/L蔗糖。所述的提高藍(lán)莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養(yǎng)基的制備方法，將水解乳蛋白、維生素E、玉米素、6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸和蔗糖加入到基本培養(yǎng)基中，混合均勻后分裝，滅菌后備用。所述的分裝規(guī)格為20-30mL/瓶。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：(1)本發(fā)明中，WPM基本培養(yǎng)基提供了藍(lán)莓組培苗的生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)成分，而維生素E，水解乳蛋白具有抑制酚氧化酶活性的功能，其組合可以減輕組培苗代謝產(chǎn)物對(duì)藍(lán)莓苗的毒害作用，水解乳蛋白作為營(yíng)養(yǎng)元素還可以供給幼苗所需養(yǎng)分；玉米素、6-芐基腺嘌呤、萘乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸等作為植物激素成分，具有促進(jìn)細(xì)胞分裂，促進(jìn)根系形成，促進(jìn)葉芽分化等功能，四者協(xié)同增效保證了藍(lán)莓組培苗的快速分裂增殖；蔗糖不僅提供了藍(lán)莓組培幼苗生長(zhǎng)所需的碳元素供應(yīng)，同時(shí)可以調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓力，保證了藍(lán)莓瓶苗的正常生長(zhǎng)。(2)本發(fā)明所述的提高藍(lán)莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養(yǎng)基，能夠保證藍(lán)莓脫毒苗在組培快繁中的良好生長(zhǎng)狀態(tài)及極高的成活率，為藍(lán)莓組織培養(yǎng)制作脫毒苗奠定了基礎(chǔ)。(3)本發(fā)明所述的制備方法，簡(jiǎn)單易行、便于操作。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實(shí)施例中采用的基本培養(yǎng)基WPM采用本領(lǐng)域人員公知配方進(jìn)行配制。實(shí)施例1所述的提高藍(lán)莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基為WPM，并添加有0.5g/L水解乳蛋白、0.6g/L維生素E、0.003g/L玉米素、0.004g/L6-芐基腺嘌呤、0.004g/L萘乙酸、0.008g/L2,4-二氯苯氧乙酸和20g/L蔗糖。其制備方法為：將水解乳蛋白、維生素E、玉米素、6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸和蔗糖加入到基本培養(yǎng)基中，混合均勻后分裝，滅菌后備用。分裝規(guī)格為25mL/瓶。實(shí)施例2所述的提高藍(lán)莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基為WPM，并添加有0.2g/L水解乳蛋白、0.4g/L維生素E、0.002g/L玉米素、0.002g/L6-芐基腺嘌呤、0.003g/L萘乙酸、0.004g/L2,4-二氯苯氧乙酸和10g/L蔗糖。其制備方法為：將水解乳蛋白、維生素E、玉米素、6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸和蔗糖加入到基本培養(yǎng)基中，混合均勻后分裝，滅菌后備用。分裝規(guī)格為20mL/瓶。實(shí)施例3基本培養(yǎng)基為WPM，并添加有1.0g/L水解乳蛋白、1.2g/L維生素E、0.006g/L玉米素、0.008g/L6-芐基腺嘌呤、0.01g/L萘乙酸、0.02g/L2,4-二氯苯氧乙酸和40g/L蔗糖。其制備方法為：將水解乳蛋白、維生素E、玉米素、6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸和蔗糖加入到基本培養(yǎng)基中，混合均勻后分裝，滅菌后備用。分裝規(guī)格為30mL/瓶。將藍(lán)莓苗分別接種到WPM基本培養(yǎng)基以及實(shí)施例1-3制備的培養(yǎng)基上，5周后觀察藍(lán)莓苗在不同培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況，具體見表1。成活情況用成活率表示。成活率計(jì)算公式為：成活率＝每個(gè)培養(yǎng)瓶中成活的藍(lán)莓苗棵數(shù)/每個(gè)培養(yǎng)瓶中所接種的總藍(lán)莓苗棵數(shù)。表1不同培養(yǎng)基上藍(lán)莓苗的生長(zhǎng)情況每瓶接種總數(shù)成活棵數(shù)成活率(％)WPM基本培養(yǎng)基30826.7實(shí)施例1培養(yǎng)基3030100實(shí)施例2培養(yǎng)基302686.7實(shí)施例3培養(yǎng)基302480觀察發(fā)現(xiàn)：實(shí)施例1-3制備的培養(yǎng)基能夠顯著提高藍(lán)莓脫毒快速繁殖組培苗的成活率，改善瓶苗的生長(zhǎng)狀態(tài)。實(shí)施例1-3培養(yǎng)基上的藍(lán)莓苗的生長(zhǎng)情況遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于基本培養(yǎng)基上的，其中實(shí)施例1培養(yǎng)基上的藍(lán)莓苗生長(zhǎng)情況最優(yōu)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3