專利名稱：亞心形扁藻培養(yǎng)基配方及三級(jí)培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海洋微藻養(yǎng)殖域，尤其涉及一種亞心形扁藻培養(yǎng)基配方及三級(jí)培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
目前，海洋微藻種類繁多、生長速度快、適應(yīng)性強(qiáng)、易于培養(yǎng)。微藻含有某些特異的高附加值生物活性成分，因此被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖、醫(yī)藥美容、廢水處理和生物能源等領(lǐng)域，有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值。亞心型扁藻是研究和應(yīng)用最廣泛的微藻之一。
亞心型扁藻為一種海產(chǎn)單細(xì)胞浮游藻類，適應(yīng)性強(qiáng)，上浮性好，生長繁殖迅速，能夠合成高濃度的多不飽和脂肪酸PuFA，常作為魚、蝦、貝類幼體的開口餌料及餌料動(dòng)物的餌料。目前，亞心形扁藻規(guī)?；囵B(yǎng)存在的主要問題是藻細(xì)胞生長緩慢、倍增時(shí)間長。合適的培養(yǎng)基是實(shí)現(xiàn)亞心形扁藻高密度培養(yǎng)的重要因素之一。以前使用的扁藻培養(yǎng)基沒有加入碳酸氫鈉，但我的實(shí)驗(yàn)表明，亞心形扁藻除了能利用空氣中游離的CO2，還能有效地利用培養(yǎng)液中的HCO3-作為碳源。添加碳酸氫鈉不僅縮短了亞心形扁藻的倍增時(shí)間，而且延長了亞心形扁操的生長時(shí)間。大量實(shí)驗(yàn)表明添加O. 8g/L的碳酸氧納能大大提聞生長速度。另夕卜，傳統(tǒng)的培養(yǎng)基磷酸二氫鉀添加量為5-10mg/L,我的實(shí)驗(yàn)表明,將磷酸二氫鉀添加量提高到45mg/L，亞心形扁藻的產(chǎn)量能提高47%?？傊?，使用優(yōu)化培養(yǎng)基并采用三級(jí)培養(yǎng)亞心形扁藻方法具有生長速度快、產(chǎn)量高、成本低的優(yōu)勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服目前技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種亞心形扁藻培養(yǎng)基配方及三級(jí)培養(yǎng)方法，具體技術(shù)方案如下一種亞心形扁藻培養(yǎng)基，配方如下硝酸鈉lOOmg，磷酸二氫鉀45mg，碳酸氫鈉800mg，檸檬酸鐵O. 2mg，人尿2ml，改良f/2維生素溶液1ml，消毒海水1000ml。所述改良f/2維生素溶液配制方法為維生素B12,0. 5mg ;維生素BI, IOOmg ;維生素H, O. 5mg ;純水定容至 1000ml。應(yīng)用本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基對(duì)亞心形扁藻進(jìn)行三級(jí)培養(yǎng)，包括如下步驟1) 一級(jí)培養(yǎng)，即用3000-20000ml玻璃瓶培養(yǎng)。一般接種密度為2X 104_5X 104cell/ml。消毒瓶中加入上述營養(yǎng)鹽，用酒精棉擦拭瓶口，用消毒的濾紙封口，搖勻后，置于光線充足處。最佳光照強(qiáng)度5000-8000lx，室溫24 26°C，每小時(shí)搖動(dòng)一次；5_6天細(xì)胞密度達(dá)到4X 105-8X 105cell/ml即可轉(zhuǎn)入二級(jí)培養(yǎng)；2) 二級(jí)培養(yǎng)，即用3m3玻璃鋼水槽或塑料薄膜袋封閉式充氣一次性培養(yǎng)。培養(yǎng)用水為煮過的水或消毒水。接種量I : 10 I : 20。接種后，玻璃鋼水槽用消毒的塑料布遮蓋，24小時(shí)連續(xù)充氣，日光燈照射。每天視藻液的顏色、濃度、生長情況補(bǔ)充培養(yǎng)用水，經(jīng)5 6天即可轉(zhuǎn)到三級(jí)生產(chǎn)性培養(yǎng)；3)三級(jí)培養(yǎng)，即用8m3玻璃鋼水槽或水泥池封閉或開放式充氣一次性培養(yǎng)。培養(yǎng)用水經(jīng)次氯酸鈉或漂白粉處理消毒，培養(yǎng)方法與二級(jí)培養(yǎng)基本相同，接種量據(jù)情掌握，但不宜低于I : 50。充氣量達(dá)到藻液翻騰，一般經(jīng)6天培養(yǎng)，藻細(xì)胞密度達(dá)到4 X IO5-IOX IO5CelΙ/ml時(shí)，即可用于投喂青蛤的D型幼蟲、日本對(duì)蝦的蚤狀幼體等。
進(jìn)一步的，所述的亞心形扁藻培養(yǎng)基的三級(jí)培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟I) 一級(jí)培養(yǎng)，即用3000-20000ml玻璃瓶培養(yǎng)；一般接種密度為2 X IO4 5X104cell/ml ;消毒瓶中加入上述營養(yǎng)鹽，用酒精棉擦拭瓶口，用消毒的濾紙封口，搖勻后，置于光線充足處；最佳光照強(qiáng)度2000-40001x，室溫18 25°C，光暗比L D=12h 12h 14h IOh,鹽度4 58每小時(shí)搖動(dòng)一次；5_6天細(xì)胞密度達(dá)到4X 105-8X 105cell/ml即可轉(zhuǎn)入二級(jí)培養(yǎng)。2) 二級(jí)培養(yǎng)，即用3m3玻璃鋼水槽或塑料薄膜袋封閉式充氣一次性培養(yǎng)；培養(yǎng)用水為煮過的水或消毒水；接種量I : 10 I : 20。接種后，玻璃鋼水槽用消毒的塑料布遮蓋，24小時(shí)連續(xù)充氣，日光燈照射；每天視藻液的顏色、濃度、生長情況補(bǔ)充培養(yǎng)用水，經(jīng)5 6天即可轉(zhuǎn)到三級(jí)生產(chǎn)性培養(yǎng)；3)三級(jí)培養(yǎng)，即用8m3玻璃鋼水槽或水泥池封閉或開放式充氣一次性培養(yǎng)。培養(yǎng)用水經(jīng)次氯酸鈉或漂白粉處理消毒，培養(yǎng)方法與二級(jí)培養(yǎng)基本相同，接種量據(jù)情掌握，但不宜低于I : 50 ;充氣量達(dá)到藻液翻騰，一般經(jīng)6天培養(yǎng)，藻細(xì)胞密度達(dá)到4X IO5-IOX IO5Cell/ml時(shí)，即可用于投喂青蛤的D型幼蟲、日本對(duì)蝦的蚤狀幼體。有益效果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用優(yōu)化培養(yǎng)基并采用三級(jí)培養(yǎng)亞心形扁藻具有生長速度快、產(chǎn)量高、成本低、易于操作、不易污染的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式培養(yǎng)基配制方法I檸檬酸鐵較難溶解，可加少量自來水在火爐上微熱至80-90°C，并不斷攪拌至全部融化；2加營養(yǎng)鹽的過程中需不斷攪水，而且各種營養(yǎng)鹽按配方中提供的順序加入，以免發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；3各種營養(yǎng)鹽可先配成濃度較高的母液，再依次添加；4三級(jí)培養(yǎng)各階段營養(yǎng)鹽配方和濃度相同。一種亞心形扁藻培養(yǎng)基，其特征在于該亞心形扁藻培養(yǎng)基配方如下硝酸鈉IOOmg,磷酸二氫鉀45mg,碳酸氫鈉800mg,朽1檬酸鐵O. 2mg,人尿2ml,改良f/2維生素溶液lml，消毒海水1000ml。所述改良f/2維生素溶液配制方法為維生素B12，O. 5mg ;維生素BI，IOOmg ;維生素H，O. 5mg ;純水定容至1000ml。亞心形扁藻三級(jí)培養(yǎng)方法I 一級(jí)培養(yǎng)培養(yǎng)容器為3000ml-20000ml玻璃瓶。在消毒培養(yǎng)用水中加入上述營養(yǎng)鹽。選擇生命力旺盛、無污染的藻液進(jìn)行接種培養(yǎng)。將藻種上清液緩慢倒入玻璃瓶中，一般接種密度為2X104cell/ml。最后用酒精棉擦拭瓶口，用消毒的濾紙封口，搖勻后，置于光線充足處。最佳光照強(qiáng)度5000-8000lx，室溫24 26 °C，每小時(shí)搖動(dòng)一次，5_6天細(xì)胞密度達(dá)到4X 105-8X 105cell/ml即可轉(zhuǎn)入二級(jí)培養(yǎng)。2 二級(jí)培養(yǎng)培養(yǎng)容器為3m3玻璃鋼水槽、塑料薄膜袋封閉式充氣一次性培養(yǎng)。培養(yǎng)用水為煮過的水或消毒水。擴(kuò)種時(shí)，將藻液倒入容器中，用泵將水打入藻液中，加入相應(yīng)營養(yǎng)鹽。接種量I : 10 I : 20。接種后，玻璃鋼水槽用消毒的塑料布遮蓋，24小時(shí)連續(xù)充氣，日光 燈照射，最佳光照強(qiáng)度5000-80001X，每天視藻液的顏色、濃度、生長情況添加營養(yǎng)鹽和消毒培養(yǎng)用水。經(jīng)5 6天即可轉(zhuǎn)入三級(jí)生產(chǎn)性培養(yǎng)。3三級(jí)培養(yǎng)培養(yǎng)容器為8m3玻璃鋼水槽、水泥池封閉式或開放式充氣一次性培養(yǎng)。培養(yǎng)用水經(jīng)次氯酸鈉或漂白粉處理消毒。培養(yǎng)方法與二級(jí)培養(yǎng)基本相同。接種量據(jù)情掌握，但不宜低于I : 50。充氣量達(dá)到藻液翻騰，一般經(jīng)6天培養(yǎng)，藻細(xì)胞密度達(dá)到4X IO5-IOX IO5Cell/ml時(shí)，即可用于投喂青蛤的D型幼蟲、鋸緣青蟹的Z幼體和南美白對(duì)蝦、日本對(duì)蝦的蚤狀幼體等。進(jìn)一步的，所述的亞心形扁藻培養(yǎng)基的三級(jí)培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟I) 一級(jí)培養(yǎng)，即用3000-20000ml玻璃瓶培養(yǎng)；一般接種密度為2 X IO4 5X104cell/ml ;消毒瓶中加入上述營養(yǎng)鹽，用酒精棉擦拭瓶口，用消毒的濾紙封口，搖勻后，置于光線充足處；最佳光照強(qiáng)度2000-40001x，室溫18 25°C，光暗比L D=12h 12h 14h IOh,鹽度4 58每小時(shí)搖動(dòng)一次；5_6天細(xì)胞密度達(dá)到4X 105-8X 105cell/ml即可轉(zhuǎn)入二級(jí)培養(yǎng)。2) 二級(jí)培養(yǎng)，即用3m3玻璃鋼水槽或塑料薄膜袋封閉式充氣一次性培養(yǎng)；培養(yǎng)用水為煮過的水或消毒水；接種量I : 10 I : 20。接種后，玻璃鋼水槽用消毒的塑料布遮蓋，24小時(shí)連續(xù)充氣，日光燈照射；每天視藻液的顏色、濃度、生長情況補(bǔ)充培養(yǎng)用水，經(jīng)5 6天即可轉(zhuǎn)到三級(jí)生產(chǎn)性培養(yǎng)；3)三級(jí)培養(yǎng)，即用8m3玻璃鋼水槽或水泥池封閉或開放式充氣一次性培養(yǎng)。培養(yǎng)用水經(jīng)次氯酸鈉或漂白粉處理消毒，培養(yǎng)方法與二級(jí)培養(yǎng)基本相同，接種量據(jù)情掌握，但不宜低于I : 50 ;充氣量達(dá)到藻液翻騰，一般經(jīng)6天培養(yǎng)，藻細(xì)胞密度達(dá)到4X IO5-IOX IO5Cell/ml時(shí)，即可用于投喂青蛤的D型幼蟲、日本對(duì)蝦的蚤狀幼體。最后應(yīng)說明的是以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解其依然可以對(duì)前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.一種亞心形扁藻培養(yǎng)基，其特征在于該亞心形扁藻培養(yǎng)基配方如下硝酸鈉lOOmg，磷酸二氫鉀45mg,碳酸氫鈉800mg,朽1檬酸鐵O. 2mg,人尿2ml,改良f/2維生素溶液Iml,消毒海水IOOOml ;所述改良f/2維生素溶液配制方法為維生素B12，0. 5mg;維生素BI，IOOmg ;維生素H，O. 5mg ;純水定容至1000ml。
2.如權(quán)利要求I所述的亞心形扁藻培養(yǎng)基的三級(jí)培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟 1)一級(jí)培養(yǎng)，即用3000-20000ml玻璃瓶培養(yǎng)；一般接種密度為2X IO4 5X IO4Cell/ml ;消毒瓶中加入上述營養(yǎng)鹽，用酒精棉擦拭瓶口，用消毒的濾紙封口，搖勻后，置于光線充足處；最佳光照強(qiáng)度5000-80001χ，室溫24 26°C，每小時(shí)搖動(dòng)一次；5_6天細(xì)胞密度達(dá)到4X 105-8X 105cell/ml即可轉(zhuǎn)入二級(jí)培養(yǎng)。
2)二級(jí)培養(yǎng)，即用3m3玻璃鋼水槽或塑料薄膜袋封閉式充氣一次性培養(yǎng)；培養(yǎng)用水為 煮過的水或消毒水；接種量I : 10 I : 20。接種后，玻璃鋼水槽用消毒的塑料布遮蓋，24小時(shí)連續(xù)充氣，日光燈照射；每天視藻液的顏色、濃度、生長情況補(bǔ)充培養(yǎng)用水，經(jīng)5 6天即可轉(zhuǎn)到三級(jí)生產(chǎn)性培養(yǎng)。
3)三級(jí)培養(yǎng)，即用8m3玻璃鋼水槽或水泥池封閉或開放式充氣一次性培養(yǎng)。培養(yǎng)用水經(jīng)次氯酸鈉或漂白粉處理消毒，培養(yǎng)方法與二級(jí)培養(yǎng)基本相同，接種量據(jù)情掌握，但不宜低于I : 50 ;充氣量達(dá)到藻液翻騰，一般經(jīng)6天培養(yǎng)，藻細(xì)胞密度達(dá)到4X 105-10X 105Cell/ml時(shí)，即可用于投喂青蛤的D型幼蟲、日本對(duì)蝦的蚤狀幼體。
3.如權(quán)利要求1-2所述的亞心形扁藻培養(yǎng)基的三級(jí)培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟 1)一級(jí)培養(yǎng)，即用3000-20000ml玻璃瓶培養(yǎng)；一般接種密度為2X IO4 5X IO4Cell/ml ;消毒瓶中加入上述營養(yǎng)鹽，用酒精棉擦拭瓶口，用消毒的濾紙封口，搖勻后，置于光線充足處；最佳光照強(qiáng)度2000-40001x，室溫18 25°C，光暗比L D = 12h 12h 14h 10h，鹽度4 58每小時(shí)搖動(dòng)一次；5-6天細(xì)胞密度達(dá)到4X 105-8X 105cell/ml即可轉(zhuǎn)入二級(jí)培養(yǎng)。
2)二級(jí)培養(yǎng)，即用3m3玻璃鋼水槽或塑料薄膜袋封閉式充氣一次性培養(yǎng)；培養(yǎng)用水為煮過的水或消毒水；接種量I : 10 I : 20。接種后，玻璃鋼水槽用消毒的塑料布遮蓋，24小時(shí)連續(xù)充氣，日光燈照射；每天視藻液的顏色、濃度、生長情況補(bǔ)充培養(yǎng)用水，經(jīng)5 6天即可轉(zhuǎn)到三級(jí)生產(chǎn)性培養(yǎng)； 3)三級(jí)培養(yǎng)，即用8m3玻璃鋼水槽或水泥池封閉或開放式充氣一次性培養(yǎng)。培養(yǎng)用水經(jīng)次氯酸鈉或漂白粉處理消毒，培養(yǎng)方法與二級(jí)培養(yǎng)基本相同，接種量據(jù)情掌握，但不宜低于I : 50 ;充氣量達(dá)到藻液翻騰，一般經(jīng)6天培養(yǎng)，藻細(xì)胞密度達(dá)到4X 105-10X 105Cell/ml時(shí)，即可用于投喂青蛤的D型幼蟲、日本對(duì)蝦的蚤狀幼體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種亞心形扁藻培養(yǎng)基及其三級(jí)培養(yǎng)方法，配方如下硝酸鈉100mg，磷酸二氫鉀45mg，碳酸氫鈉800mg，檸檬酸鐵0.2mg，人尿2ml，改良f/2維生素溶液1ml，消毒海水1000ml。所述改良f/2維生素溶液配制方法為維生素B12，0.5mg；維生素B1，100mg；維生素H，0.5mg；純水定容至1000ml。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用優(yōu)化培養(yǎng)基并采用三級(jí)培養(yǎng)亞心形扁藻具有生長速度快、產(chǎn)量高、成本低、易于操作、不易污染的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12R1/89GK102643750SQ20121012268
公開日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月25日
發(fā)明者王培磊 申請(qǐng)人:王培磊