專(zhuān)利名稱(chēng)：淡褐奧德蘑的栽培方法及其專(zhuān)用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食用菌的栽培方法及其專(zhuān)用培養(yǎng)基，特別涉及淡褐奧德蘑的栽培方法及其專(zhuān)用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
食用菌淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii ),又稱(chēng)熱帶小奧德蘑,隸屬于傘菌目(Agaricales)白薦科(TrichoIomataceae)小奧德薦屬(Oudemansiella)。其子實(shí)體一般中等大。菌蓋直徑3-lOcm，表面褐色至棕褐色，濕潤(rùn)時(shí)粘。菌肉白色。菌褶白色至污白色，較稀，不等長(zhǎng)，直生至延生，褶緣粗糙呈褐色至暗色，菌柄常彎曲，污白色，表面有深褐色纖毛及縱條紋，內(nèi)部松軟至變空心。孢子卵圓形、寬卵圓至近球形，12-23 μ mX 10. 5-18 μ m。褶緣囊體長(zhǎng)達(dá)80-150 μ m，寬可達(dá)12-40 μ m。夏、秋季散生或單生于落葉林中朽木上。在我國(guó)·主要分布于云南、海南、黑龍江、吉林等地。目前，淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)的來(lái)源主要是從野外采集。國(guó)內(nèi)對(duì)小奧德蘑屬的部分菌株已實(shí)現(xiàn)了人工馴化栽培，如長(zhǎng)根小奧德蘑(O. radicata)、鱗柄小奧德蘑(O. furfuracea)、褐裙邊小奧德蘑(O. brunneomarginata),但未見(jiàn)有人工栽培淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii )的報(bào)道；國(guó)外 Marcelo JoseSilveira Ruegger 等公開(kāi)了一種栽培淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)的方法,該方法用小麥麩和甘鹿洛(質(zhì)量比I :4)或小麥麩和桉樹(shù)木屑(質(zhì)量比I :4)栽培淡褐奧德蘑，其最高生物學(xué)效率為采用小麥麩和甘鹿洛的栽培培養(yǎng)基，具體數(shù)值為55. 66% (Marcelo JoseSilveiraRuegger, etal. CULTIVATION OF THE EDIBLE MUSHROOM OUDEMANSIELLACANARII (JUNGH.) ；i{Oi !M. INLIGN0CELLUL0SIC SUBSTRATES. Brazilian Journalof Microbiology(2001)32:211-214)。開(kāi)展淡褐奧德蘑的生物學(xué)特性及人工栽培研究，篩選出較高生物學(xué)效率的淡褐奧德蘑(0. canarii)的栽培方法將有效降低淡褐奧德蘑的生產(chǎn)成本，增加菇農(nóng)收益，而且可為本屬其他種類(lèi)的人工馴化栽培提供理論基礎(chǔ)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，具有重要的推廣應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種生物學(xué)效率較高的淡褐奧德蘑的栽培方法。本發(fā)明所提供的淡褐奧德蘑的栽培方法，包括用子實(shí)體培養(yǎng)基培養(yǎng)淡褐奧德蘑的步驟，所述子實(shí)體培養(yǎng)基是將棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70% (質(zhì)量百分含量)的培養(yǎng)基,其中,棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰的配比為I) -5)中的任一種1) 50:30:18:2;2) 42:38:18:2;3) (42-50) : (30-38) 18 2 ；4)(50-65):(15-30):18:2;5) 42-65:15-38:18:2。
其中，所述子實(shí)體培養(yǎng)基的碳氮比可為50-60、56-60、50-56、56、60或50。其中，所述栽培方法具體包括如下步驟I)發(fā)菌將淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii) 二級(jí)菌種接入所述子實(shí)體培養(yǎng)基，在環(huán)境溫度為24°C _26°C，空氣相對(duì)濕度為50%-60%的條件下培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)基；2)低溫刺激將步驟I)的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至_5°C _5°C條件下處理3-5天，完成低溫刺激；3)出菇；將步驟I)的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至環(huán)境溫度為23°C -26°C，空氣相對(duì)濕度80%-90%，光照強(qiáng)度 300-600Lux(如 300Lux 或 600Lux)，二氧化碳濃度為 1500-2000ppm(ppm 一百萬(wàn)個(gè)空氣分子有一個(gè)二氧化碳分子)(如1500ppm或2000ppm)的條件下培養(yǎng)至子實(shí)體
原基形成。 上述栽培方法中，所述二級(jí)菌種是將淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)母種接入二級(jí)菌種培養(yǎng)基得到的培養(yǎng)物；所述二級(jí)菌種培養(yǎng)基可為將蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、蔗糖、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70% (質(zhì)量百分含量)、pH自然的培養(yǎng)基，其中蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、蔗糖和熟石灰的質(zhì)量比為80 18 1 1 (以干重計(jì))。上述栽培方法中，所述二級(jí)菌種是將所述淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)母種在所述二級(jí)菌種培養(yǎng)基中在24°C _26°C下培養(yǎng)得到的培養(yǎng)物。上述栽培方法中，所淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)母種在母種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述母種培養(yǎng)基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨4g、馬鈴薯200g、KH2PO4 lg、MgS04 O. 5g、維生素C 10mg、瓊脂16g、余量的水；所述母種培養(yǎng)基的pH為8. 5。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種淡褐奧德蘑的子實(shí)體培養(yǎng)基。本發(fā)明所提供的淡褐奧德蘑的子實(shí)體培養(yǎng)基是將棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70% (質(zhì)量百分含量)的培養(yǎng)基，其中，棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰的配比為I) -5)中的任一種1) 50:30:18:2;2) 42:38:18:2;3) (42-50) : (30-38) 18 2 ；4) (50-65) (15-30) 18 2 ；5) 42-65:15-38:18:2。其中，所述子實(shí)體培養(yǎng)基的碳氮比可為50-60、56-60、50-56、56、60或50。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供淡褐奧德蘑的栽培培養(yǎng)基。本發(fā)明所提供的淡褐奧德蘑的栽培培養(yǎng)基，包括上述淡褐奧德蘑的子實(shí)體培養(yǎng)基。進(jìn)一步，所述淡褐奧德蘑的栽培培養(yǎng)基還包括二級(jí)菌種培養(yǎng)基；所述二級(jí)菌種培養(yǎng)基是將蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、鹿糖、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70% (質(zhì)量百分含量)的培養(yǎng)基，其中蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、蔗糖和熟石灰的質(zhì)量比為80 18 1 :1。進(jìn)一步，所述淡褐奧德蘑的栽培培養(yǎng)基還包括母種培養(yǎng)基，所述母種培養(yǎng)基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨4g、馬鈴薯200g、KH2PO4 lg、MgSO4O. 5g、維生素C10mg、瓊脂16g、余量的水；所述母種培養(yǎng)基的pH為8. 5。本發(fā)明的淡褐奧德蘑的栽培方法的生物學(xué)效率達(dá)109%_123%，從將菌種接入子實(shí)體培養(yǎng)基至采收第一潮菇需要31-42天，采收四潮菇的整個(gè)栽培生產(chǎn)周期共55-79天。


圖I為淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)野生子實(shí)體形態(tài)。圖2為淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)擔(dān)孢子形態(tài)。圖中的條長(zhǎng)為50. O μ m。圖3為淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)人工栽培子實(shí)體。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中的淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)(楊祝良，臧穆.我國(guó)西南小奧德蘑屬的分類(lèi)[J].真菌學(xué)報(bào)，1993，12(1):16 27;[2]李繼東，林躍鑫.熱帶小奧德蘑深層發(fā)酵工藝研究[J].食用菌學(xué)報(bào)，2003，10(1) :46^51 ;卯曉嵐.中國(guó)大型真菌[M].鄭州河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000:113)采自中國(guó)云南，其菌蓋直徑4-lOcm，初扁半球形，表面有粘液；初期中央褐色、邊緣漸淺(圖1A)，后期變?yōu)榛野字潦蠡疑?；菌肉白色，膠質(zhì)；菌柄常彎曲，長(zhǎng)5-16cm，粗5-15mm，污白色，表面有深褐色纖毛及縱條紋；菌褶白色至污白色，較稀，不等長(zhǎng)，直生至延生；孢子印白色，孢子卵圓形至近球形，直徑14-16 μ mX 16-18 μ m (圖IB)。公眾可從野外采集，也可從北京市農(nóng)林科學(xué)院獲得該菌種。下述實(shí)施例中的培養(yǎng)基如下I、綜合PDA培養(yǎng)基每升由如下原料制成馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖20g、大豆蛋白胨5g、KH2PO43g、MgS04 I. 5g、維生素B1 10mg、余量的水。121°C高壓滅菌30分鐘。2、基礎(chǔ)培養(yǎng)基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨2g、KH2PO4 lg、MgSO4 O. 5g、維生素B1 10mg、瓊脂16g、余量的水。121°C高壓滅菌30分鐘。3、加富培養(yǎng)基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨2g、馬鈴薯200g、KH2PO4 Ig、MgSO4O. 5g、維生素B1 10mg、瓊脂16g、余量的水。121°C高壓滅菌30分鐘。下述實(shí)施例中采用如下測(cè)定方法(I)菌絲平均生長(zhǎng)速度測(cè)定淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)菌種接種于平板培養(yǎng)基表面的中央，培養(yǎng)10天后，測(cè)量菌落直徑，以菌落平均半徑除以天數(shù)即為菌絲的日平均生長(zhǎng)速度。(2)菌絲干重測(cè)定測(cè)定完生長(zhǎng)速度的平皿，放入高壓鍋內(nèi)121°C加熱至培養(yǎng)基融化(IOmin),趁熱將淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii )菌絲取出置于單層紗布,熱水浴lh，然后置于烘干箱內(nèi)105°C烘干至恒重，稱(chēng)量。(3)生長(zhǎng)勢(shì)測(cè)定淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)菌絲生長(zhǎng)濃密,長(zhǎng)勢(shì)旺盛，用“ + + + + ”表示；菌絲生長(zhǎng)較密，長(zhǎng)勢(shì)較好，用“ + + + ”表示；菌絲生長(zhǎng)密，長(zhǎng)勢(shì)一般，用“++”表示；菌絲生長(zhǎng)稀，長(zhǎng)勢(shì)較弱，用“十”表示；菌絲不生長(zhǎng)，用“一”表示。(4)生物學(xué)效率計(jì)算生物學(xué)效率(％)=(鮮菇重/培養(yǎng)料干重)X 100%其中，培養(yǎng)基或物料干重的測(cè)定方法如下將培養(yǎng)基或物料置于烘干箱內(nèi)105°C烘干至恒重，稱(chēng)量。實(shí)施例I、栽培淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)一、淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)母種的制備I、采用組織分離法從淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)的菌蓋處分離菌塊接種于裝有上述綜合PDA培養(yǎng)基的斜面中，25°C培養(yǎng)7-8天，長(zhǎng)出淡褐奧德蘑(Oudemansiellacanarii)的菌絲,獲得淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)母種。2、母種培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的優(yōu)化·(I)同步菌絲的制備將分離的淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)母種在超凈工作臺(tái)中挑取一小塊菌種轉(zhuǎn)接到綜合PDA培養(yǎng)基制成的平板(直徑9cm)中央，置于25°C培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，待菌絲快長(zhǎng)滿(mǎn)平皿時(shí)用打孔器(6mm)在平板相同直徑的圓圈上打菌絲塊，保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)的菌塊菌齡相同。(2)碳源實(shí)驗(yàn)以每升基礎(chǔ)培養(yǎng)基中20g葡萄糖的含碳量為標(biāo)準(zhǔn)，分別用和20g葡萄糖相等含碳量的蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉、山梨醇、甘露醇、羧甲基纖維素鈉八種碳源，代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中葡萄糖，每處理5次重復(fù)，pH自然，25°C恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，以不含碳源培養(yǎng)基(每升由如下原料制成大豆蛋白胨2g、KH2P04 lg、MgS04 O. 5g、維生素B1 10mg、瓊脂16g、余量的水)做對(duì)照(CK)，觀(guān)測(cè)不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表I所示,不同碳源間淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)菌絲生長(zhǎng)速度、菌絲體干重和長(zhǎng)勢(shì)有顯著差異。其中，在以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基上日生長(zhǎng)速度較快，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)旺盛，達(dá)5. 45mm/d ;其次為蔗糖和麥芽糖，日生長(zhǎng)速度分別為4. 81mm/d和
4.67mm/d ;在乳糖為碳源的培養(yǎng)基上日生長(zhǎng)速度最慢,僅為2. 01mm/d,遠(yuǎn)小于對(duì)照,這可能是由于乳糖對(duì)該菌株菌絲具有一定的抑制作用。在菌絲干重方面，以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基上最高，為O. 0530g ;羧甲基纖維素鈉最低,僅為O. 0094g ;其中乳糖和對(duì)照為碳源的菌絲干重差異不顯著。因此，綜合以上分析，本實(shí)驗(yàn)選取的最佳碳源為葡萄糖。表I碳源對(duì)淡褐奧德蘑菌絲生長(zhǎng)的影響
權(quán)利要求
1.淡褐奧德蘑的栽培方法，包括用子實(shí)體培養(yǎng)基培養(yǎng)淡褐奧德蘑的步驟，所述子實(shí)體培養(yǎng)基是將棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70% (質(zhì)量百分含量)的培養(yǎng)基，其中棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰的配比為1)-5)中的任一種 1)50 30 18 2 ； 2)42 38 18 2 ；3)(42-50):(30-38)18 2 ；4)(50-65):(15-30) 18 2 ；5)42-65 15-38 18 :2。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的栽培方法，其特征在于所述栽培方法包括如下步驟 1)發(fā)菌將淡褐奧德蘑(Oudemansiellacanarii)二級(jí)菌種接入所述子實(shí)體培養(yǎng)基,在環(huán)境溫度為24°C _26°C，空氣相對(duì)濕度為50%-60%的條件下培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)基； 2)低溫刺激將步驟I)的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至_5°C_5°C條件下處理3-5天，完成低溫刺激； 3)出菇；將步驟I)的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至環(huán)境溫度為23°C_26°C，空氣相對(duì)濕度80%-90%，光照強(qiáng)度300-600Lux, 二氧化碳濃度為1500-2000ppm的條件下培養(yǎng)至子實(shí)體原基形成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的栽培方法，其特征在于所述二級(jí)菌種是將淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)母種在二級(jí)菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到的培養(yǎng)物；所述二級(jí)菌種培養(yǎng)基是將蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、鹿糖、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70% (質(zhì)量百分含量)的培養(yǎng)基，其中蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、蔗糖和熟石灰的質(zhì)量比為80 18 1 :1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的栽培方法，其特征在于所述二級(jí)菌種是將所述淡褐奧德蘑(Oudemansiella canarii)母種在所述二級(jí)菌種培養(yǎng)基中在24°C -26°C下培養(yǎng)得到的培養(yǎng)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的栽培方法，其特征在于所淡褐奧德蘑(Oudemansiellacanarii)母種在母種培養(yǎng)基中培養(yǎng),所述母種培養(yǎng)基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨4g、馬鈴薯200g、KH2P04 lg、MgS04 0.5g、維生素C 10mg、瓊脂16g、余量的水；所述母種培養(yǎng)基的pH為8. 5。
6.淡褐奧德蘑(Oudemansiellacanarii)的子實(shí)體培養(yǎng)基,所述子實(shí)體培養(yǎng)基是將棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70% (質(zhì)量百分含量)的培養(yǎng)基，其中棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰的配比為I)-5)中的任一種 1)50 30 18 2 ； 2)42 38 18 2 ；3)(42-50):(30-38)18 2 ；4)(50-65):(15-30) 18 2 ；5)42-65 15-38 18 :2。
7.淡褐奧德蘑(Oudemansiellacanarii)的栽培培養(yǎng)基,包括權(quán)利要求6的子實(shí)體培養(yǎng)基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述栽培培養(yǎng)基包括二級(jí)菌種培養(yǎng)基；所述二級(jí)菌種培養(yǎng)基是將蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、蔗糖、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70% (質(zhì)量百分含量)的培養(yǎng)基，其中蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、蔗糖和熟石灰的質(zhì)量比為 80 :18 :1 :1。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述栽培培養(yǎng)基包括母種培養(yǎng)基，所述母種培養(yǎng)基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨4g、馬鈴薯200g、KH2P04 lg、MgSO4 O. 5g、維生素C 10mg、瓊脂16g、余量的水；所述母種培養(yǎng)基的pH為8. 5。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了淡褐奧德蘑的栽培方法及其專(zhuān)用培養(yǎng)基。本發(fā)明的淡褐奧德蘑的栽培方法，包括用子實(shí)體培養(yǎng)基培養(yǎng)淡褐奧德蘑的步驟，所述子實(shí)體培養(yǎng)基是將棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰與水混合制成含水量為65%-70%(質(zhì)量百分含量)的培養(yǎng)基，其中棉籽殼、蘋(píng)果枝條木屑、小麥麩皮、熟石灰的質(zhì)量比為5030182。本發(fā)明的淡褐奧德蘑的栽培方法的生物學(xué)效率達(dá)109%-123%，從將菌種接入子實(shí)體培養(yǎng)基至采收第一潮菇需要31-42天，采收四潮菇的整個(gè)栽培生產(chǎn)周期共55-79天。
文檔編號(hào)C05G3/00GK102907257SQ20121042949
公開(kāi)日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2012年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月31日
發(fā)明者王守現(xiàn), 劉宇, 許峰, 趙爽, 王蘭青, 耿小麗, 孟莉莉 申請(qǐng)人:北京市農(nóng)林科學(xué)院