專利名稱：拮抗多種病原真菌的小麥根際固氮菌及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及拮抗多種病原真菌的小麥根際固氮菌及其用途，特別涉及一種可以拮抗作物赤霉病菌、菌核病菌和黃萎病菌，并具有在小麥根際進行高效固氮功能的細菌。
背景技術(shù)：
氮肥是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中最重要的生產(chǎn)資料之一。生產(chǎn)化學(xué)氮肥消耗大量能源，占生產(chǎn)總成本的70% 80%。近年來能源日趨緊張，我國化肥生產(chǎn)用煤價格飚升導(dǎo)致化學(xué)氮肥價格上漲，農(nóng)民難以承受，反響強烈。此外，化學(xué)氮肥在提高作物產(chǎn)量、保障我國糧食安全方面發(fā)揮了巨大作用，但是不合理施氮已經(jīng)形成了嚴重的面源污染，造成一系列的嚴重危害，如太湖藍藻事件令人觸目驚心。城市地下水硝酸鹽污染已經(jīng)對飲用水安全造成了威脅。大氣中含有78%的氮素，但其存在形式是分子態(tài)氮氣，動植物不能直接利用，自然界只有某些原核微生物具有直接利用大氣中氮氣的能力，將其還原成氨，這就是生物固氮作用。選用高效固氮微生物菌種工廠化生產(chǎn)制成菌劑，或進一步與其它富含植物營養(yǎng)的物料復(fù)合加工成生物制品，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，可以提供作物氮素營養(yǎng)，改善作物根際生態(tài)環(huán)境，提高土壤生物肥力性狀，這就是通常所說的固氮微生物菌劑或固氮微生物肥料。生物氮肥具有多種優(yōu)勢①生物氮肥由可再生的生化制劑和活體微生物組成，可以再生，不存在資源枯竭問題，是可持續(xù)發(fā)展農(nóng)資產(chǎn)品。②生物氮肥是環(huán)境友好型肥料，其生產(chǎn)和使用過程均不產(chǎn)生三廢等污染性物質(zhì)，而且能改善土壤理化性質(zhì)，提高土壤肥力，是生態(tài)農(nóng)業(yè)農(nóng)資產(chǎn)品。③生物氮肥生產(chǎn)耗能少、成本低，其成本僅為等效化學(xué)氮肥的20% 40%，可以為國家節(jié)省大量的煤炭和石油等能源戰(zhàn)略物資。④使用生物氮肥可以顯著降低農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本，提高農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)，提升土壤肥力，使農(nóng)民受益，促進社會和諧發(fā)展。作物赤霉病的病原菌為玉米赤霉菌(Gibberella zeae)無性世代為禾谷鐮刀菌 (Fusarium graminearum)，是糧食作物的重要致病菌。我國小麥赤霉病有95 %是麥類赤霉病菌引起的，是長江中下游冬麥區(qū)和東北春麥區(qū)的重要病害，發(fā)病時經(jīng)常造成20% 30%的產(chǎn)量損失。此外，該菌還侵染玉米、水稻、大麥等作物，引起苗枯、莖腐、基腐、穗腐等。菌核病的病原菌是核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)，其形態(tài)特征表現(xiàn)為子囊盤小，呈小杯狀，淺肉色至褐色，單個或幾個從菌核上生出，直徑0. 5-lcm,柄褐色細長，彎曲， 長3-5cm，向下漸細，與菌核相連。菌絲體可以形成菌核，長柄的褐色子囊盤產(chǎn)生在菌核上。 菌核形狀多樣，長3-15 μ m。子囊圓柱形，120-140 μ mX 11 μ m，孢子通常8個，單行排列，橢圓形，8-14 μ mX 4-8 μ m，側(cè)絲細長，線形，無色，頂部較粗。該菌是一種危害作物和蔬菜的世界性的重要的植物病原菌，廣泛地侵染、危害十字花科、豆科、茄科、蕓香科等植物，如造成油菜、大豆、向日葵、黃瓜、辣椒等經(jīng)濟作物和蔬菜菌核病。棉花黃萎病菌(大麗輪枝菌 Verticillium dahliae)以土壤傳播為主，寄主范圍很廣，除侵染棉花引起黃萎病外，還侵染經(jīng)濟作物煙草、油料作物大豆、花生、向日葵、芝麻、蔬菜作物馬鈴薯、茄子、辣椒、番茄、黃瓜、西瓜，以及林木、花卉等，危害嚴重，造成巨大經(jīng)濟損失。目前對上述真菌病害的防治主要依靠化學(xué)農(nóng)藥，然而化學(xué)防治不僅成本高、污染環(huán)境，而且防效也不理想，同時食品的安全性也受到嚴重影響。菌種是微生物肥料生產(chǎn)應(yīng)用的基礎(chǔ)。目前，限制我國微生物肥料行業(yè)發(fā)展的瓶頸就是高效菌種的選育問題。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)迫切需求固氮效能高、拮抗病原真菌、抗逆性強、貨架期長的微生物肥料生產(chǎn)用菌種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株可以在作物根際進行高效固氮，并且拮抗作物赤霉病菌(Gibberella zeae)、菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)禾口棉花黃萎病菌 (Verticillium dahliae)的細菌。本發(fā)明所提供的根際固氮菌，是類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)⑶641，該菌株已于2011年7月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC， 地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏編號為CGMCC No. 5042。本發(fā)明的另一個目的是提供一種菌劑，該菌劑的活性成分為所述的類芽孢桿菌 (Paenibacillus sp.)GD641 CGMCC No. 5042。該菌劑除包含作為活性成分的類芽孢桿菌(Paenikicillus sp.)⑶641 CGMCC No. 5042外，還可包括輔料，如草炭、動物的糞便、各類作物的秸稈、松殼、稻草、花生皮等。該菌劑可用于抑制病原真菌、防治植物真菌病害、固氮、產(chǎn)生固氮酶等。所述類芽孢桿菌(Paenibacillussp. )GD641 CGMCC No. 5042 在制備下述 1)-4) 中任一菌劑中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護范圍1)用于抑制病原真菌的菌劑；2)用于防治植物真菌病害的菌劑；3)用于固氮的菌劑；4)產(chǎn)生固氮酶的菌劑。所述病原真菌可為通過土壤、施入土壤中的肥料、和/或種子傳播的真菌，具體可為引起赤霉病的真菌、或為引起菌核病的真菌、或為引起黃萎病的真菌；所述植物真菌病害可為赤霉病、菌核病或黃萎病。所述引起赤霉病的真菌可為玉米赤霉菌(Gibberella zeae)或禾谷鐮刀菌(Fusarium grammearum)；所述弓I起菌核病的真菌可為核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)；所述引起黃萎病的真菌可為棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae)。所述的類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042或以該類芽孢桿菌(PaenikiciIlus sp.)⑶641 CGMCC No. 5042為活性成分的菌劑在生產(chǎn)固氮酶中的應(yīng)用以及在制備生物有機肥中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明的再一個目的是提供一種含有所述類芽孢桿菌(Paenikicillus sp.) GD641 CGMCC No. 5042或以所述類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042為活性成分的菌劑的生物有機肥。本發(fā)明的又一目的是提供一種培養(yǎng)類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)⑶641 CGMCCNo. 5042的方法，該方法包括將類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.) GD641 CGMCC No. 5042在用于培養(yǎng)類芽孢桿菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的步驟。本發(fā)明的又一目的是提供一種制備所述菌劑的方法，該方法包括如下步驟將所述的類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)⑶641 CGMCC No. 5042作為活性成分，得到所述菌劑。實驗證明，本發(fā)明是從土壤樣品中經(jīng)過層層篩選，最終篩選出了類芽孢桿菌 (Paenibacillus sp.)⑶641 CGMCC No. 5042，該菌株具有很高的固氮酶活性，能夠拮抗作物赤霉病病原菌玉米赤霉菌(Gibberella zeae)、菌核病病原菌核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)和棉花黃萎病菌(大麗輪枝菌Verticillium dahliae)，競爭適應(yīng)能力強， 接種效果好，在固氮微生物菌劑和生物有機肥生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。保藏說明菌種名稱類芽孢桿菌拉丁名(Paenibacillus sp.)菌株編號⑶641保藏機構(gòu)中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏機構(gòu)簡稱CGMCC地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號保藏日期2011年7月6日保藏中心登記入冊編號CGMCC No. 504

圖 1 為類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042 的固氮酶活性。圖2為類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042拮抗赤霉病菌玉米赤霉菌(Gibberella zeae)。左側(cè)菌落為類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042，右側(cè)菌落為赤霉病菌玉米赤霉菌(Gibberella zeae)。圖 3 為類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042 拮抗菌核病菌 (Sclerotinia sclerotiorum)。左側(cè)菌落為類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)GD641 CGMCC No. (Sclerotinia sclerotiorum)。圖4為類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042拮抗棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae)。左側(cè)菌落為類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)GD641 CGMCC No. 5042，右側(cè)菌落為棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae)。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。固氮菌富集培養(yǎng)液ACCC55 成份蔗糖 10g、K2HPO4 · 3H20 0. 5g、NaCl 0. 2g、CaCO3 lg、MgSO4 · 7H20 0. 2g、蒸餾水 IOOOmUpH 7. 0 7. 2。改良的ACCC55固氮菌固體培養(yǎng)基成份蔗糖10g、K2HP04 · 3H20 0. 5g、NaCl 0. 2g、 CaCO3 lg、MgSO4 · 7H20 0. 2g、酵母膏 0. 5g、蒸餾水 1000ml、瓊脂 1. 5% 2· 0%, pH 7· 0 7. 2。無氮培養(yǎng)基蔗糖10g, NaCl 0. 12g，K2HPO4 · 3H20 0. 5g，CaCO3 lg, MgSO4 · 7H20 0. 2g，蒸餾水 lOOOmL，pH7. 2。
圓褐固氮菌(Azotobacter chroococcum) ACCCl 1103 (參見“孫建光等.高效固氮芽孢桿菌篩選及其生物學(xué)特性.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，42 (6) :2043-2051”)。赤霉病菌-玉蜀黍赤霉菌(Gibberella zeae)(中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，ACCC31053)。菌核病菌-核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)(中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，ACCC30046)。棉花黃萎病菌-大麗花輪枝孢(Verticillium dahliae)(中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，ACCC30308)。實施例1、小麥根際固氮菌⑶641的分離與鑒定—、小麥根際固氮菌⑶641的富集與分離取IOg 土樣(采自中國內(nèi)蒙古)放入90ml無菌水中搖床振蕩20min制成混濁液， 吸取5ml放入30ml固氮菌富集培養(yǎng)液ACCC55中，lOOrpm，28°C進行搖床振蕩培養(yǎng)，72h后換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。重復(fù)培養(yǎng)3次后進行固氮芽孢菌分離。吸取Iml上述固氮菌富集培養(yǎng)物放到9ml無菌水中制成ICT1稀釋度，繼續(xù)稀釋制成10_2、10_3、10_4、10_5稀釋度的菌懸液，在100°C沸水中加熱lOmin，冷卻后每個稀釋度取0. Iml涂布在固氮菌分離培養(yǎng)基平板上，29°C靜置培養(yǎng)。2 3d待菌落形成后，在改良的ACCC55固氮菌培養(yǎng)基平板上用平板劃線法進行菌種純化。將分離純化所得的其中一個菌株命名為小麥根際固氮菌GD641。二、小麥根際固氮菌⑶641的鑒定從以下幾個方面鑒定步驟一分離并純化得到的小麥根際固氮菌1、形態(tài)學(xué)鑒定將處于對數(shù)生長期，且菌落大小穩(wěn)定，上述步驟一分離并純化得到的固氮菌⑶641 進行單菌落狀態(tài)描述，主要包括菌落的大小、顏色、透明度、濕潤度、菌落表面狀態(tài)(是否平坦、突起、褶皺、凹陷等)、菌落邊緣狀態(tài)(是否整齊、不規(guī)則、放射狀等)。對于處于對數(shù)生長期的所述固氮菌⑶641，經(jīng)涂片染色后采用光學(xué)顯微鏡觀察菌體的形態(tài)。結(jié)果表明，上述步驟一分離并純化得到的固氮菌⑶641菌落圓形凸起，水滴狀，透明，有光澤，表面濕潤光滑，邊緣暈圈；菌體桿狀，0.5 1.0X0. 5 1.0 μ m，無芽孢。2、生理生化特征分析參考《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》(東秀珠，蔡妙英.常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊.北京科學(xué)出版社，2011.)和《微生物學(xué)實驗》(沈萍，范秀容，李廣武.微生物學(xué)實驗(第三版).北京高等教育出版社，1999.)測定上述固氮菌⑶641的生理生化特征。所述固氮菌⑶641的生理生化特征測定結(jié)果如下接觸酶反應(yīng)陽性氧化酶反應(yīng)陰性生長溫度4°C不生長，28°C生長，37°C生長，60°C不生長耐鹽性試驗:2% NaCl生長，5% NaCl不生長，7% NaCl不生長，10% NaCl不生長苯丙氨酸脫氨酶試驗陰性利用檸檬酸鹽陰性水解淀粉陽性
卵黃卵磷脂酶陽性甲基紅試驗陰性

V. P試驗陰性PH 5. 7生長陽性糖醇發(fā)酵產(chǎn)酸葡萄糖陽性，甘露醇陽性，乳糖陽性，蔗糖陽性3、16s rDNA序列同源性分析常規(guī)方法培養(yǎng)上述步驟一分離純化得到的固氮菌GD641，提取菌株的總DNA作為基因擴增模板，以細菌 16s rDNA 通用引物，27f 5' -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ‘，1492r 5' -TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3‘進行PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系采用上海生物工程有限公司 PCR擴增試劑盒。反應(yīng)程序為951變性308、551退火lmin、72°C延伸2min，共30個循環(huán)。 DNA測序由北京三博遠志生物技術(shù)公司完成，序列拼接及相似性分析使用DNAStar軟件完成，序列比對通過美國國家生物技術(shù)信息中心NCBI數(shù)據(jù)庫(http://WWW. ncbi. nlm. nih. gov)在線完成。固氮菌⑶641菌株16s rDNA的序列詳見序列表中序列1。4、生長特性分析進行了菌株最適溫度和最適pH生長實驗。采用無氮培養(yǎng)基，分別在4°C、28°C、 37°C、60°C培養(yǎng)、觀察、記錄菌株的溫度適應(yīng)性，每個處理3次重復(fù)。調(diào)整酸度分別為pH3、 pH4、pH5、pH6、pH7、pH8、pH9、pHIO、pHll，每個處理3次重復(fù)，培養(yǎng)、觀察、記錄菌株生長的最適pHo結(jié)果表明，所述小麥根際固氮菌⑶641的最適生長溫度為28°C，最適生長pH為 pH7 8。鑒于上述形態(tài)、生理生化特征分析和16s rDNA序列同源性分析結(jié)果，將步驟一分離并純化得到的小麥根際固氮菌GD641鑒定為變型細菌α亞群類芽孢桿菌科類芽孢桿菌屬(Paenibacillus sp.)。該小麥根際固氮菌⑶641已于2011年7月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏編號為CGMCC No. 5042。實施例2、類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042 固氮酶活性測
定對實施例1 所得到的類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)GD641 CGMCC No. 5042 it 行固氮酶活性測定，具體方法如下所述在15X 150mm螺口玻璃管中加入5ml改良固氮培養(yǎng)基制成斜面，接種固氮菌，28°C培養(yǎng)。以微生物肥料常用生產(chǎn)菌種圓褐固氮菌(Azotobacter chroococcum)ACCCl 1103為陽性對照，不接種空白斜面為陰性對照，設(shè)3個重復(fù)。培養(yǎng)72h 后，換橡膠塞，注入乙炔氣體使終濃度為10%，用醫(yī)用膠布密封，繼續(xù)培養(yǎng)72h，取100 μ 1 反應(yīng)氣體，用氣相色譜儀測定乙烯生成量，根據(jù)以下公式計算類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042 的固氮酶活性。固氮酶活性(nmol/mg · h) =C2H4nmol/[菌體蛋白量(mg) X 反應(yīng)時間(h)]，其中 C2H4nmol = IOOOXC2H4 體積(μ 1) X273XP/ [22.4X(273+t)X760]，其中P為氣壓(mm汞柱)，t為反應(yīng)溫度(V)。其中，菌體蛋白含量測定方法如下所述用5ml生理鹽水將試管斜面上的菌苔洗入離心管中，收集菌體，向沉淀中加入3ml 0. 5M的NaOH沸水煮沸5min，加入3ml 0. 5M的HCl混合，離心后取上清1. Oml，加入5ml考馬斯亮藍溶液，在漩渦混合器上混合，顯色3min， 測定595nm處的吸光值A(chǔ)595，根據(jù)牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線計算菌體蛋白含量。結(jié) 果顯示，篩選到的類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042的固氮酶活性為27. 357nmol C2H4/h ^g蛋白，統(tǒng)計分析與微生物肥料常用生產(chǎn)菌種圓褐固氮菌 ACCCl 1103的固氮酶活性25. IOOnmol C2H4/h mg蛋白無差異，如圖1所示。這一結(jié)果表明， 本發(fā)明的類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042能高效固氮。實施例3、類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)GD641 CGMCC No. 5042 拮抗病原真菌抑菌率測定 采用兩點對峙法對實施例1所得到的類芽孢桿菌(Paenibaci 1 Ius sp.) GD641 CGMCC No. 5042進行拮抗病原真菌抑菌率測定，具體操作如下所述在PDA平板上距離中心2cm的兩點上分別接種作物赤霉病菌(Gibberella zeae)(或者菌核病菌 (Sclerotinia sclerotiorum),或者棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae))禾口類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042，每個篩選處理3個重復(fù)，以只接病原真菌不接固氮菌的平板為對照。28°C恒溫培養(yǎng)，15d后用毫米刻度尺測量對峙平板上病原真菌沿被測類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042方向的菌落半徑T1、及對照平板上病原真菌的菌落半徑4。病原真菌生長抑制率(％)=(對照半徑對峙培養(yǎng)病原真菌菌落半徑巧)/對照半徑rQ X 100 %。 結(jié)果顯示，赤霉病菌(Gibberella zeae)的r。是63. 3士2. Smnur1 是26· 6士0. 8mm ； 菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的 r0 是 63. 0士2. Imm,巧是 27. 3士 1. 5mm ；棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae)的 r。是 41. 0士 1. 9mm，巧是 21. 7士 1. 1mm。將平均值代人上述公式計算得所述類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)⑶641 CGMCC No. 5042對赤霉病菌(Gibberella zeae)的抑菌率為57. 98%，如圖2所示；對菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的抑菌率為56. 67 %，如圖3所示；對棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae)的抑菌率為47. 07%，如圖4所示。這一結(jié)果表明所述類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)GD641 CGMCC No. 5042可以有效拮抗作物赤霉病菌(Gibberella zeae)、菌核病菌 (Sclerotinia sclerotiorum)禾口棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae)。
權(quán)利要求
1.類芽孢桿菌(Paenikicillussp.)⑶641，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC No. 5042。
2.一種菌劑，它的活性成分為權(quán)利要求1所述的類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.) GD641 CGMCC No. 5042。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌劑，其特征在于所述菌劑為下述1)-4)中任一的菌劑1)用于抑制病原真菌的菌劑；2)用于防治植物真菌病害的菌劑；3)用于固氮的菌劑；4)產(chǎn)生固氮酶的菌劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類芽孢桿菌(Paenibacillussp. )GD641 CGMCC No. 5042在制備下述1)-4)中任一的菌劑中的應(yīng)用1)用于抑制病原真菌的菌劑；2)用于防治植物真菌病害的菌劑；3)用于固氮的菌劑；4)產(chǎn)生固氮酶的菌劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌劑或權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述病原真菌為引起赤霉病的真菌、或為引起菌核病的真菌、或為引起黃萎病的真菌；所述植物真菌病害為赤霉病、菌核病或黃萎病。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的菌劑或應(yīng)用，其特征在于所述引起赤霉病的真菌為玉米赤霉菌(Gibberella zeae)或禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum)；所述引起菌核病的真菌為核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)；所述引起黃萎病的真菌為棉花黃萎病菌 (Verticillium dahliae)。
7.權(quán)利要求1所述的類芽孢桿菌(Paenibacillussp. )GD641 CGMCC No. 5042、或權(quán)利要求2、3、5或6所述菌劑在生產(chǎn)固氮酶中應(yīng)用；或，權(quán)利要求1所述的類芽孢桿菌(Paenibacillus sp. )GD641 CGMCC No. 5042、或權(quán)利要求2、3、5或6所述菌劑在制備生物有機肥中應(yīng)用。
8.含有權(quán)利要求1所述類芽孢桿菌(Paenibacillussp. )GD641 CGMCC No. 5042、或權(quán)利要求2、3、5或6所述菌劑的生物有機肥。
9.培養(yǎng)權(quán)利要求1所述類芽孢桿菌(Paenibacillussp. )GD641 CGMCC No. 5042的方法，包括將類芽孢桿菌(Paenikicillus sp.)⑶641 CGMCC No. 5042在用于培養(yǎng)類芽孢桿菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的步驟。
10.權(quán)利要求2、3、5或6所述菌劑的制備方法，包括如下步驟將權(quán)利要求1所述的類芽孢桿菌(PaenikiciIlus sp.)⑶641 CGMCC No. 5042作為活性成分，得到所述菌劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了拮抗多種病原真菌的小麥根際固氮菌及其用途。該小麥根際固氮菌是類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)GD641，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的藏編號為CGMCC No.5042。本發(fā)明所提供的類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)GD641 CGMCC No.5042具有較高的固氮活性，可以有效拮抗作物赤霉病菌(Gibberella zeae)、菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)和棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae)，在固氮微生物菌劑和生物有機肥生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號C05F11/08GK102250809SQ20111019765
公開日2011年11月23日 申請日期2011年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月15日
發(fā)明者孫建光, 徐晶, 胡海燕, 高淼 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所