專利名稱：甜葉菊種苗的組培快繁技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甜葉菊種苗的組培快繁技術(shù)。
背景技術(shù)：
菊科甜菊屬甜葉菊種，學(xué)名Mevia rebaudianum Bertoni，多年生草本植物。原產(chǎn)南美洲巴拉圭和巴西交界的阿曼拜山脈，是一種很有價(jià)植的糖料作物。整株都含有糖分，以葉片的甜度最高。含糖苷14%，枝梗的糖苷相當(dāng)于葉片的一半。葉片經(jīng)曬干粉碎后即可當(dāng)糖料，或經(jīng)熱酒精處理，乙醚沉析也可獲得20-26%蛋黃色粗提物，甜度為白砂糖的100-150 倍，精制品白色，甜度相當(dāng)于白砂糖的250-300倍，而熱量?jī)H為白砂糖的1/300。甜菊已替糖精，廣泛應(yīng)用在食品工業(yè)上；作為淹漬劑加入醬油、醬瓜及其它醬品中，有防腐作用。作為強(qiáng)壯劑、醒酒劑、健胃劑，其功能具有提高血糖，促進(jìn)人體代謝的作用。甜葉菊用途非常廣泛，甜葉菊中的糖分目前是世界上公認(rèn)的第三代糖源，對(duì)人體有降血壓、強(qiáng)壯身體、治糠尿病作用；開(kāi)發(fā)甜葉菊茶，能夠有效緩解精神疲勞，促進(jìn)新陳代謝，有益于人體健康，是現(xiàn)代安全保健糖料。該項(xiàng)目以科技為第一生產(chǎn)力，努力做好甜葉菊的優(yōu)質(zhì)種苗繁育和推廣工作，為人類的健康、幸福助威。目前甜菊種植方式不科學(xué)，導(dǎo)致成本較高，產(chǎn)量較低，市場(chǎng)供應(yīng)不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供甜葉菊種苗的組培快繁技術(shù)。1、設(shè)施設(shè)備
擁有交通方便、環(huán)境清潔、空氣干燥的實(shí)驗(yàn)室化學(xué)實(shí)驗(yàn)室、洗滌室、滅菌室、接種室、培養(yǎng)室；生產(chǎn)所需的生產(chǎn)設(shè)備高壓蒸汽滅菌器、超凈工作臺(tái)、電子天平、解剖鏡、空調(diào)、培養(yǎng)架、加溫器、培養(yǎng)瓶，以及各類化學(xué)試劑；有可供品種試驗(yàn)的試驗(yàn)地、種苗假植大棚及種源圃(母本園)；
2、母本園
由無(wú)病蟲(chóng)危害、無(wú)病毒侵染的優(yōu)良甜葉菊株組成，母本園附近500m范圍內(nèi)不能有蚜蟲(chóng)傳播病毒的作物，有5(Tl00m的隔離區(qū)，并有良好的排灌設(shè)施；
3、種源的選取
甜葉菊花期長(zhǎng)達(dá)2個(gè)月，高溫季節(jié)結(jié)實(shí)率低。為培育甜葉菊良種種子，宜在3月份選擇親和力強(qiáng)、高產(chǎn)、高含量的父母本組合隔行種植；根據(jù)“節(jié)數(shù)平均M節(jié)，葉片大、莖桿粗壯、生長(zhǎng)迅速、適應(yīng)性強(qiáng)”的原則對(duì)單植株進(jìn)行初步篩選，將初選植株的葉片使用直徑 0. 5-1. 5cm打孔器打孔，避開(kāi)葉片的主脈打取1-10片，重量0. 5g ；將葉片破碎后，采用下列測(cè)定糖甙的試劑組成進(jìn)行一般性測(cè)定。將200g酒石酸鈉，10-30g氫氧化鈉溶于0. 8L蒸餾水中；攪拌加熱下，將3，5- 二硝基水楊酸3-9g、結(jié)晶酚3-9g、亞硫酸鈉3-9g，先后于溶液中溶解；最后再加入鐵氰化鉀0. 1-0. 5g使其溶解，冷卻后加蒸餾水定容至IL所得到的溶液； 在上述的一般性測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果中優(yōu)選出優(yōu)良單株，優(yōu)良單株占單株的0. 1%-10%，利用HPLC對(duì)優(yōu)良單株葉片中的甜葉菊糖甙做進(jìn)一步分析，初步獲得的甜葉菊糖甙含量較高的優(yōu)良植株，以這些植株為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)擴(kuò)繁，甜葉菊再生體系的外植體為無(wú)菌苗的莖尖；
4、培養(yǎng)基的配制 4. 1母液的配制
4. 1. 1基本培養(yǎng)基MS的母液配制
將MS中所含的化學(xué)成份按大量元素(NH4N03、KN03、CaCl2 · 2H20、MgS04 · 7H20、 KH2P04), WmTtM (KI > H3B03, MnS04 · 4H20, ZnS04 · 7H20、Na2Mo04 · 2H20、CuS04 · 5H20、 CoC12 ·6Η20)、鐵鹽(FeS04 ·7Η20、Ν&2Ε ΤΑ ·2Η20)、有機(jī)物(維生素類、肌醇、甘氨酸)、蒸溜水，按照10 1:100:100:1000溶解后配制成的母液，裝入容量瓶后置于冰箱中保存；
4.1. 2生長(zhǎng)激素的配制
將生產(chǎn)所需的細(xì)胞分裂素6-BA (6-芐基腺嘌呤)、Ad (腺嘌呤)及生長(zhǎng)素NAA (萘乙酸)、 IBA(吲哚丁酸)用lmol/1 HCl或酒精溶解，再用蒸溜水稀釋后分別配制成200mg/l的母液， 裝入容量瓶中，置于冰箱保存；
5、外植體的獲得 5. 1材料的處理 5. 1. 1初處理
將吸芽外層苞片仔細(xì)剝?nèi)ィ?jīng)自來(lái)水沖洗干凈后，保留頂芽和側(cè)芽原基，切割成約2cm 假莖、2cm直徑的圓柱； 5. 1. 2滅菌
在超凈工作臺(tái)上將切好的吸芽先放入75%的乙醇溶液中浸泡30s后，用無(wú)菌水洗凈，再放入0. l%HgC12或5%次氯酸鈉溶液中l(wèi)(T20min后，用無(wú)菌水沖洗5 8次； 5. 1. 3切割及接種
在超凈工作臺(tái)上將已滅菌的吸芽置于無(wú)菌墊紙上，用事先已滅菌的手術(shù)刀、鑷子取吸芽中心大小約0. 5^0. 8cm3的材料，并將其均勻切成四小塊，接種于事先準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶一塊。基部切口應(yīng)插入培養(yǎng)基內(nèi)，在整個(gè)材料處理過(guò)程中要?jiǎng)幼餮杆?，減少暴露在空氣中的時(shí)間，減少因褐變而導(dǎo)致誘導(dǎo)的失敗； 5. 2誘導(dǎo)培養(yǎng)基
MS+6-BA0. 6mg/L) +NAAO. 25mg/L+3% 蔗糖 +0. 7% 瓊脂，
5.3培養(yǎng)條件
培養(yǎng)室溫度(25士 1) °C，相對(duì)濕度60%-70%，光照強(qiáng)度2000-30001XmOl / (m2/s), 先暗培養(yǎng)2d再進(jìn)行Mh / d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前pH均調(diào)至5. 8 ；
6、繼代培養(yǎng)
6. 1繼代培養(yǎng)基
MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂 6g/L，pH 值為 5. 8 左右； 6. 2培養(yǎng)條件
培養(yǎng)室溫度(25 士 1) °C，相對(duì)濕度60%-70%，光照強(qiáng)度2000-30001XmOl / (m2/s), 先暗培養(yǎng)2d再進(jìn)行Mh / d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前pH均調(diào)至5. 8 ； 6. 3方法只有經(jīng)檢驗(yàn)合格的材料才可以進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每2(T30d繼代增殖一次。為保證種性不受影響，減少變異率，繼代次數(shù)宜控制在10代以內(nèi)，最多不得超過(guò)15代，接種時(shí)，用手術(shù)刀將叢生芽以2 3個(gè)芽為一個(gè)單位分開(kāi)，同時(shí)為減弱頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)基盤(pán)腋芽生長(zhǎng)，切割時(shí)將主莖上部的大部分假莖葉切去，每瓶放入3、塊，合計(jì)10個(gè)芽左右； 7、生根培養(yǎng) 7. 1生根培養(yǎng)基
1/4MS+ IBAO. lmg/L+NAAO. lmg/L ； 7. 2培養(yǎng)條件
培養(yǎng)室溫度(25 士 1) V，相對(duì)濕度60%-70%，光照強(qiáng)度2000-30001xmOl/ (m2/s)，先暗培養(yǎng)2d再進(jìn)行Mh/d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前pH均調(diào)至5. 8 ； 7. 3方法
甜葉菊試管苗在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至長(zhǎng)有6片以上葉子和發(fā)達(dá)的根系后。先敞口煉苗2d， 用上述培養(yǎng)液浸根2d(促使根系進(jìn)一步生長(zhǎng)及在根的表面形成一層根絨毛)后洗凈根部， 將苗轉(zhuǎn)入裝有土沙并澆少量培養(yǎng)液(1/20MQ的小花盆中，為了提高莖稈強(qiáng)度，增強(qiáng)抗倒伏能力，可在沙土中添加少量草木灰，澆足水，如果室外溫度達(dá)不到25°C左右，可暫時(shí)將小花盆放入溫度適宜的溫室中，每隔2d澆1次水，如室溫適宜.可先放在室內(nèi)陰涼處，每l-2d 澆1次水，4-5d后，如果苗長(zhǎng)勢(shì)良好，則可移入陽(yáng)光下培養(yǎng)，定期澆水，待小苗成活后，溫度適宜時(shí)再移于大地栽培。有益效果
本發(fā)明可以培養(yǎng)出大量的優(yōu)質(zhì)甜菊苗，解決市場(chǎng)上甜菊供不應(yīng)求的局面，有利于大面積推廣甜菊種植，增加國(guó)民收入。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、工作流程、使用方法達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。1、設(shè)施設(shè)備
擁有交通方便、環(huán)境清潔、空氣干燥的實(shí)驗(yàn)室化學(xué)實(shí)驗(yàn)室、洗滌室、滅菌室、接種室、培養(yǎng)室；生產(chǎn)所需的生產(chǎn)設(shè)備高壓蒸汽滅菌器、超凈工作臺(tái)、電子天平、解剖鏡、空調(diào)、培養(yǎng)架、加溫器、培養(yǎng)瓶，以及各類化學(xué)試劑；有可供品種試驗(yàn)的試驗(yàn)地；
2、選母本園
由無(wú)病蟲(chóng)危害、無(wú)病毒侵染的優(yōu)良甜葉菊株組成，母本園附近500m范圍內(nèi)不能有蚜蟲(chóng)傳播病毒的作物，有IOOm的隔離區(qū)，并有良好的排灌設(shè)施；
3、種源的選取
甜葉菊花期長(zhǎng)達(dá)2個(gè)月，高溫季節(jié)結(jié)實(shí)率低，為培育甜葉菊良種種子，宜在3月份選擇親和力強(qiáng)、高產(chǎn)、高含量的父母本組合隔行種植；根據(jù)“節(jié)數(shù)平均M節(jié)，葉片大、莖桿粗壯、 生長(zhǎng)迅速、適應(yīng)性強(qiáng)”的原則對(duì)單植株進(jìn)行初步篩選，將初選植株的葉片使用直徑Icm打孔器打孔，避開(kāi)葉片的主脈打取6片，重量0. 5g ；將葉片破碎后，采用下列測(cè)定糖甙的試劑組成進(jìn)行一般性測(cè)定。將200g酒石酸鈉，20g氫氧化鈉溶于0.8L蒸餾水中；攪拌加熱下，將 3，5- 二硝基水楊酸5g、結(jié)晶酚6g、亞硫酸鈉6g，先后于溶液中溶解；最后再加入鐵氰化鉀0. 3g使其溶解，冷卻后加蒸餾水定容至IL所得到的溶液；在上述的一般性測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果中優(yōu)選出優(yōu)良單株，優(yōu)良單株占單株的7%，利用HPLC對(duì)優(yōu)良單株葉片中的甜葉菊糖甙做進(jìn)一步分析，初步獲得的甜葉菊糖甙含量較高的優(yōu)良植株，以這些植株為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)擴(kuò)繁，甜葉菊再生體系的外植體為無(wú)菌苗的莖尖； 4、培養(yǎng)基的配制 4. 1母液的配制
4. 1. 1基本培養(yǎng)基MS的母液配制
將MS中所含的化學(xué)成份按大量元素(NH4N03、KN03、CaCl2 · 2H20、MgS04 · 7H20、 KH2P04), WmTtM (KI > H3B03, MnS04 · 4H20, ZnS04 · 7H20、Na2Mo04 · 2H20、CuS04 · 5H20、 CoC12 ·6Η20)、鐵鹽(FeS04 ·7Η20、Ν&2Ε ΤΑ ·2Η20)、有機(jī)物(維生素類、肌醇、甘氨酸)、蒸溜水，按照10 1:100:100:1000溶解后配制成的母液，裝入容量瓶后置于冰箱中保存；
4.1. 2生長(zhǎng)激素的配制
將生產(chǎn)所需的細(xì)胞分裂素6-BA (6-芐基腺嘌呤)、Ad (腺嘌呤)及生長(zhǎng)素NAA (萘乙酸)、 IBA(吲哚丁酸)用lmol/1 HCl或酒精溶解，再用蒸溜水稀釋后分別配制成200mg/l的母液， 裝入容量瓶中，置于冰箱保存；
5、外植體的獲得 5. 1材料的處理 5. 1. 1初處理
將吸芽外層苞片仔細(xì)剝?nèi)?，?jīng)自來(lái)水沖洗干凈后，保留頂芽和側(cè)芽原基，切割成約2cm 假莖、2cm直徑的圓柱； 5. 1. 2滅菌
在超凈工作臺(tái)上將切好的吸芽先放入75%的乙醇溶液中浸泡30s后，用無(wú)菌水洗凈，再放入0. l%HgC12或5%次氯酸鈉溶液中15min后，用無(wú)菌水沖洗7次； 5. 1. 3切割及接種
在超凈工作臺(tái)上將已滅菌的吸芽置于無(wú)菌墊紙上，用事先已滅菌的手術(shù)刀、鑷子取吸芽中心大小約0. 7cm的材料，并將其均勻切成四小塊，接種于事先準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中， 每瓶一塊，基部切口應(yīng)插入培養(yǎng)基內(nèi)，在整個(gè)材料處理過(guò)程中要?jiǎng)幼餮杆?，減少暴露在空氣中的時(shí)間，減少因褐變而導(dǎo)致誘導(dǎo)的失?。?5. 2誘導(dǎo)培養(yǎng)基
MS+6-BA0. 6mg/L) +NAAO. 25mg/L+3% 蔗糖 +0. 7% 瓊脂，
5.3培養(yǎng)條件
培養(yǎng)室溫度(25士 1) 0C，相對(duì)濕度70%，光照強(qiáng)度21001Xmol / (m2/s)，先暗培養(yǎng)2d 再進(jìn)行Mh / d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前pH均調(diào)至5. 8;
6、繼代培養(yǎng)
6. 1繼代培養(yǎng)基
MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂 6g/L，pH 值為 5. 8 左右； 6. 2培養(yǎng)條件
培養(yǎng)室溫度(25 士 1) °C，相對(duì)濕度70%，光照強(qiáng)度21001Xmol / (m2/s)，先暗培養(yǎng)2d 再進(jìn)行Mh / d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前pH均調(diào)至5. 8 ；6.3培養(yǎng)方法
只有經(jīng)檢驗(yàn)合格的材料才可以進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每21d繼代增殖一次。為保證種性不受影響，減少變異率，繼代次數(shù)宜控制在10代以內(nèi)，最多不得超過(guò)15代，接種時(shí)，用手術(shù)刀將叢生芽以2個(gè)芽為一個(gè)單位分開(kāi)，同時(shí)為減弱頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)基盤(pán)腋芽生長(zhǎng)，切割時(shí)將主莖上部的大部分假莖葉切去，每瓶放入3塊，合計(jì)10個(gè)芽左右；
7、生根培養(yǎng)
7. 1生根培養(yǎng)基
1/4MS+ IBAO. lmg/L+NAAO. lmg/L;
7. 2培養(yǎng)條件
培養(yǎng)室溫度(25 士 1) V，相對(duì)濕度70%，光照強(qiáng)度2000-30001xmOl/ (m2/s)，先暗培養(yǎng)2d 再進(jìn)行Mh/d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前pH均調(diào)至5. 8 ；
7. 3培養(yǎng)方法
甜葉菊試管苗在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至長(zhǎng)有6片以上葉子和發(fā)達(dá)的根系后。先敞口煉苗2d， 用上述培養(yǎng)液浸根2d (促使根系進(jìn)一步生長(zhǎng)及在根的表面形成一層根絨毛)后洗凈根部， 將苗轉(zhuǎn)入裝有土沙并澆少量培養(yǎng)液(1/20MQ的小花盆中，為了提高莖稈強(qiáng)度，增強(qiáng)抗倒伏能力，可在沙土中添加少量草木灰，澆足水，如果室外溫度達(dá)不到25°C左右，可暫時(shí)將小花盆放入溫度適宜的溫室中，每隔2d澆1次水，如室溫適宜.可先放在室內(nèi)陰涼處，每2d澆1 次水，4d后，如果苗長(zhǎng)勢(shì)良好，則可移入陽(yáng)光下培養(yǎng)，定期澆水，待小苗成活后，溫度適宜時(shí)再移于大地栽培。 以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)及其效物界定。
權(quán)利要求
1.甜葉菊種苗的組培快繁技術(shù)，其特征在于，包括以下步驟(1)、設(shè)施選取擁有交通方便、環(huán)境清潔、空氣干燥的實(shí)驗(yàn)室化學(xué)實(shí)驗(yàn)室、洗滌室、滅菌室、接種室、培養(yǎng)室；生產(chǎn)所需的生產(chǎn)設(shè)備高壓蒸汽滅菌器、超凈工作臺(tái)、電子天平、解剖鏡、空調(diào)、培養(yǎng)架、加溫器、培養(yǎng)瓶，(2)、選母本園由無(wú)病蟲(chóng)危害、無(wú)病毒侵染的優(yōu)良甜葉菊株組成，母本園附近500m范圍內(nèi)不能有蚜蟲(chóng)傳播病毒的作物，有5(Tl00m的隔離區(qū)，并有良好的排灌設(shè)施；(3)、種源的選取甜葉菊花期長(zhǎng)達(dá)2個(gè)月，高溫季節(jié)結(jié)實(shí)率低，為培育甜葉菊良種種子，宜在3月份選擇親和力強(qiáng)、高產(chǎn)、高含量的父母本組合隔行種植；根據(jù)“節(jié)數(shù)平均M節(jié)，葉片大、莖桿粗壯、生長(zhǎng)迅速、適應(yīng)性強(qiáng)”的原則對(duì)單植株進(jìn)行初步篩選，將初選植株的葉片使用直徑 0. 5-1. 5cm打孔器打孔，避開(kāi)葉片的主脈打取1-10片，重量0. 5g ；將葉片破碎后，采用下列測(cè)定糖甙的試劑組成進(jìn)行一般性測(cè)定，將200g酒石酸鈉，10-30g氫氧化鈉溶于0. 8L蒸餾水中；攪拌加熱下，將3，5- 二硝基水楊酸3-9g、結(jié)晶酚3-9g、亞硫酸鈉3-9g，先后于溶液中溶解；最后再加入鐵氰化鉀0. 1-0. 5g使其溶解，冷卻后加蒸餾水定容至IL所得到的溶液；(4)、培養(yǎng)基的配制(4. 1)基本培養(yǎng)基MS的母液配制將MS中所含的化學(xué)成份按大量元素(NH4N03、KN03、CaCl2 · 2H20、MgS04 · 7H20、 KH2P04), WmTtM (KI > H3B03, MnS04 · 4H20, ZnS04 · 7H20、Na2Mo04 · 2H20、CuS04 · 5H20、 CoC12 ·6Η20)、鐵鹽(FeS04 ·7Η20、Ν&2Ε ΤΑ ·2Η20)、有機(jī)物(維生素類、肌醇、甘氨酸)、蒸溜水，按照10 1:100:100:1000溶解后配制成的母液，裝入容量瓶后置于冰箱中保存；(4. 2)生長(zhǎng)激素的配制將生產(chǎn)所需的細(xì)胞分裂素6-BA (6-芐基腺嘌呤)、Ad (腺嘌呤)及生長(zhǎng)素NAA (萘乙酸)、 IBA(吲哚丁酸)用lmol/1 HCl或酒精溶解，再用蒸溜水稀釋后分別配制成200mg/l的母液， 裝入容量瓶中，置于冰箱保存；(5)、外植體的獲得(5. 1)初處理將吸芽外層苞片仔細(xì)剝?nèi)?，?jīng)自來(lái)水沖洗干凈后，保留頂芽和側(cè)芽原基，切割成1. 5-2. 5cm假莖、1. 5—2. 5cm直徑的圓柱；(5. 1. 2)滅菌在超凈工作臺(tái)上將切好的吸芽先放入75%的乙醇溶液中浸泡25-3 后，用無(wú)菌水洗凈，再放入0. l%HgC12或5%次氯酸鈉溶液中l(wèi)(T20min后，用無(wú)菌水沖洗5、次；(5. 1.3)切割及接種在超凈工作臺(tái)上將已滅菌的吸芽置于無(wú)菌墊紙上，用事先已滅菌的手術(shù)刀、鑷子取吸芽中心大小約0. 5^0. 8cm3的材料，并將其均勻切成四小塊，接種于事先準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，基部切口應(yīng)插入培養(yǎng)基內(nèi)，在整個(gè)材料處理過(guò)程中要?jiǎng)幼餮杆?，減少暴露在空氣中的時(shí)間，減少因褐變而導(dǎo)致誘導(dǎo)的失??；(5. 2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA0. 6mg/L) +NAAO. 25mg/L+3% 蔗糖 +0. 7% 瓊脂，(5. 3)培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度(25士 1) °C，相對(duì)濕度60%-70%，光照強(qiáng)度2000-30001XmOl / (m2/s), 先暗培養(yǎng)2d再進(jìn)行Mh / d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前pH均調(diào)至5. 8 ；(6)、繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0. 05mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂 6g/ L, pH值為5. 8左右，培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度(25士 1) °C，相對(duì)濕度60 %-70%，光照強(qiáng)度 2000-30001xmol / (m2/s)，先暗培養(yǎng)2d再進(jìn)行Mh / d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前PH均調(diào)至5. 8 ；培養(yǎng)方法只有經(jīng)檢驗(yàn)合格的材料才可以進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每2(T30d繼代增殖一次，繼代次數(shù)宜控制在10代以內(nèi)，最多不得超過(guò)15代，接種時(shí)，用手術(shù)刀將叢生芽以 2 3個(gè)芽為一個(gè)單位分開(kāi)，同時(shí)為減弱頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)基盤(pán)腋芽生長(zhǎng)，切割時(shí)將主莖上部的大部分假莖葉切去，每瓶放入3、塊，合計(jì)10個(gè)芽左右；(7)、生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基1/4MS+IBAO. lmg/L+NAAO. lmg/L，培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度 (25 士 1) °C，相對(duì)濕度60%-70%，光照強(qiáng)度2000-30001xmOl/ (m2/s)，先暗培養(yǎng)2d再進(jìn)行Mh/ d的光培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前pH均調(diào)至5. 8 ；培養(yǎng)方法甜葉菊試管苗在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至長(zhǎng)有6片以上葉子和發(fā)達(dá)的根系后，先敞口煉苗2d，用上述培養(yǎng)液浸根2d后洗凈根部，將苗轉(zhuǎn)入裝有土沙并澆少量培養(yǎng)液(1/20MQ的小花盆中，可在沙土中添加少量草木灰，澆足水，如果室外溫度達(dá)不到25°C左右，可暫時(shí)將小花盆放入溫度適宜的溫室中，每隔 2d澆1次水，如室溫適宜.可先放在室內(nèi)陰涼處，每l-2d澆1次水，4-5d后，如果苗長(zhǎng)勢(shì)良好，則可移入陽(yáng)光下培養(yǎng)，定期澆水，待小苗成活后，溫度適宜時(shí)再移于大地栽培。
全文摘要
甜葉菊種苗的組培快繁技術(shù)，包括以下步驟(1)設(shè)施選取；(2)選母本園；(3)種源的選??；(4)培養(yǎng)基的配制；(5)外植體的獲得；(6)繼代培養(yǎng)；(7)生根培養(yǎng)。本發(fā)明可以培養(yǎng)出大量的優(yōu)質(zhì)甜菊苗，解決市場(chǎng)上甜菊供不應(yīng)求的局面，有利于大面積推廣甜菊種植，增加國(guó)民收入。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102165919SQ20111002982
公開(kāi)日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2011年1月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月27日
發(fā)明者孫景文, 陽(yáng)晃江, 馬光明 申請(qǐng)人:贛州菊隆高科技實(shí)業(yè)有限公司