專利名稱：：一種防治灰霉病的復配殺菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種防治灰霉病的復配殺菌劑。
背景技術(shù)：
：番茄灰霉病是一種世界性重要病害，該病主要造成果實腐爛，產(chǎn)量損失。對保護地番茄生產(chǎn)造成極大威脅。該病在我國自20世紀80年代開始發(fā)生蔓延以來，目前國內(nèi)各地均有發(fā)生，已經(jīng)成為番茄設施栽培的限制性障礙。該病的病原為"."ereaPersexFr(anamorphof5ofryo"m'a_/i<cAe//a"<3(deBary)Whetz)，為半矢口菌亞門真菌。該菌可侵染溫帶地區(qū)的至少235種植物，并且能夠引起多種重要經(jīng)濟作物(包括蔬菜、花卉、球莖類植物以及果樹，尤其是葡萄)的灰霉病。對于丑ci/2er朋的防治主要有農(nóng)業(yè)防治、生物防治及化學防治等防治措施。由于灰霉病的發(fā)生要求有較高的濕度，所以生產(chǎn)上人們常常通過通風以降低大棚的濕度。另外，生物防治也起著一定的作用，孫延忠、曾洪梅等的研究表明武夷菌素對^^zy"sciVer朋分生孢子及菌絲均有較好的抑制作用；孫軍德，趙春燕等篩選出ll個生物防治菌株進行盆栽和田間小區(qū)防治番莉灰霉病試驗結(jié)果表明細菌B27，真菌F45和F120,放線菌A15和A1U，具有較好的預防效果，防治效果均在60%以上。然而，目前對于及c&er朋的防治主要還是依賴于化學防治。用于漢ci"6^res防治的化學合成藥劑分為五大類影響真菌呼吸的殺菌劑(如百菌清、福美雙、氟啶胺、腈嘧菌酯等)、影響微管功能的殺菌劑(如多菌靈、苯菌靈等)、影響滲透調(diào)節(jié)的殺菌劑(如腐霉利、異菌脲等)以及影響蛋氨酸合成的殺菌劑(如嘧霉胺、嘧菌胺、嘧菌環(huán)胺等)和甾醇合成抑制劑(如咪鮮胺、戊唑醇、十三嗎啉、環(huán)酰菌胺)等。由于Acheres具有較大的遺傳變異及廣范圍寄主的特點，因此，A"'/76^朋極容易對藥劑產(chǎn)生抗藥性。事實也正是如此1970s及cherea對苯并咪唑類殺菌劑產(chǎn)生了抗藥性；1981年，又對二甲酰亞胺類殺菌劑產(chǎn)生了中等水平抗性，并對多菌靈表現(xiàn)出高水平抗性；1989年和1996年，在歐洲的幾個國家發(fā)現(xiàn)對保護性殺菌劑(主要是苯氟磺胺)產(chǎn)生抗藥性的Acher朋菌株；1992年，Y.ELAD在田間檢測到對甾醇合成抑制劑戊唑醇和腈苯唑(fenethanil)產(chǎn)生抗性的及c^er朋菌株；從1994年起對法國葡萄園的抗藥性監(jiān)測中檢測到3種對苯胺嘧啶類殺菌劑產(chǎn)生抗性的丑ci/jerea菌株(AniRl，AniR2，AniR3);2000年，在甾醇合成抑制劑環(huán)酰菌胺作為防治灰霉病藥劑使用之前，就在法國的葡萄園檢測到對其產(chǎn)生抗性的Ac&er朋菌株；2000年，在日本的豆類作物上檢測到對新型藥劑氟啶胺產(chǎn)生高抗藥水平的Ac&erea菌株。顯而易見，及cj'/erea對防治它的幾大類藥劑均產(chǎn)生了抗藥性。人們習慣于將不同類型和不同作用機制的藥劑(尤其是具有負交互抗藥性的藥劑)進行復配或者交替使用進行抗藥性的治理，以延緩抗藥性的產(chǎn)生或?qū)σ呀?jīng)發(fā)生抗藥性的田塊進行治理。1970s末及w'/7er朋對苯并咪唑類殺菌劑(尤其是多菌靈)產(chǎn)生抗藥性以后，由于多菌靈和乙霉威具有負交互抗藥性，于是人們將多菌靈和乙霉威按一定比例進行復配進行抗藥性治理，然而，在其使用不到兩年，在法國就發(fā)現(xiàn)對該復配制劑產(chǎn)生抗藥性的丑"'/7eres菌株?？梢姡骳herea對生產(chǎn)上使用的各種類型的藥劑(包括復配制劑)均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。因此，尋找新的復配制劑或交替用藥模式或新的防治藥劑勢在必行。啶菌惡唑就是一種新型的替代藥劑，它是由我國沈陽化工研究院創(chuàng)制的一種對灰霉病有特效的藥劑，具有很好的內(nèi)吸性。韓平(2006)的研究表明啶菌惡唑?qū)Ψ鸦颐共【柠溄晴薮己铣删哂酗@著的抑制作用，因此推測啶菌惡唑作用于真菌的麥角甾醇合成。司乃國等(2004)田間試驗結(jié)果也表明，啶菌惡哇對Ac^er^有較好的防治效果。因此，啶菌惡唑有可能成為今后生產(chǎn)上用于防治及c眾er朋的新型替代藥劑。鑒于及c2'/2erea是一個具有高抗藥性風險的菌，有必要將啶菌惡唑與已有的殺菌劑(尤其是具有負交互抗藥性的藥劑或保護性的殺菌劑)進行復配，以延緩丑w'/7eres對啶菌惡唑的抗藥性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種用于防治灰霉病的復配殺菌劑。本發(fā)明所提供的復配殺菌劑，其活性成分為啶菌惡唑和百菌清，所述啶菌惡唑和百菌清的質(zhì)量比為(l-8):(l-8)，優(yōu)選質(zhì)量比為i:l、l:2、5:l或8:l，最優(yōu)選比例為i:i、l:2。按照所述殺菌劑質(zhì)量比進行復配后，還可按需要添加不同的填料和助劑，加工成任何可接受的劑型。例如可以是懸浮劑、水乳劑、可濕性粉劑、乳油、(水分散)粒劑。本發(fā)明的另一個目的是提供復配殺菌劑的用途。本發(fā)明所提供的所述復配殺菌劑的用途是該殺菌劑在防治灰霉病中的應用。其中，所述灰霉病是由So,o^;c/打erea病原菌弓l起的。本發(fā)明的研究表明啶菌惡唑與保護性殺菌劑百菌清之間存在負交互抗藥性，這一研究結(jié)果為啶菌惡唑與百菌清復配提供了理論依據(jù)。而且，百菌清是一個具有多作用位點的保護性殺菌劑，病原菌對其不易產(chǎn)生抗藥性。這一復配模式對于避免或延緩啶菌惡唑的抗藥性，擴大啶菌惡唑的防治譜，及其降低啶菌惡唑的使用成本具有重要的意義；此外，百菌清在全球的使用量很大，這也為這一復配制劑的推廣提供了寬闊的平臺。因此，本發(fā)明將啶菌惡唑與百菌清進行了復配，研究了其復配的最佳比例。為生產(chǎn)中啶菌惡唑和百菌清的復配產(chǎn)品的使用提供了理論依據(jù)。將具有不同作用機制的藥劑，尤其是具有負交互抗藥性的藥劑進行復配，是進行抗藥性治理和延緩藥劑抗藥性產(chǎn)生的一項重要的措施。本發(fā)明復配殺菌劑有以下優(yōu)點1、該殺菌劑將單作用位點的新型內(nèi)吸性殺菌劑啶菌惡唑和多作用位點的保護性殺菌劑百菌清進行復配，對于避免或延緩我國創(chuàng)制性殺菌劑啶菌惡唑的田間抗藥性產(chǎn)生及擴大其防治譜具有重要的意義。2、由于百菌清是一個保護性的殺菌劑，具有防治譜很廣，生產(chǎn)成本較低等特點，因此，本發(fā)明復配殺菌劑還能夠很好地擴大啶菌惡唑的防治譜，降低啶菌惡唑的使用成本，具有潛在的經(jīng)濟意義。圖1A為實施例1中紫外誘變菌絲塊獲得的突變體圖1B為實施例1中紫外誘導孢子獲得的突變體圖2為實施例l中啶菌惡唑單劑對供試菌株的EC5o的對數(shù)值與百菌清單劑對供試菌株的EC5o的對數(shù)值(lg)的回歸曲線。具體實施例方式實施例l、啶菌惡唑與百菌清交互抗性測定1、供試菌株供試菌株來自于山東、河南、北京、天津、南京等未施用過啶菌惡唑和其它甾醇合成抑制劑的地區(qū)。其中包括ll株敏感菌株，6株田間自然突變體和28株紫外誘導抗藥突變體。共計45株菌株用于交互抗藥性測定。上述菌株按照如下方法獲得2006年5月分別在北京地區(qū)、南京、山東、河南及天津等地未使用過啶菌惡唑及同類藥劑(其它甾醇合成抑制劑)的大棚采集番茄灰霉病病果。采用5點法取樣以降低采集到同一菌株的幾率。用滅菌的解剖刀將病果腐爛的外皮去掉，取新鮮的發(fā)病果肉，將其切成小塊，于1.5y。的NaC10中消毒l分鐘，然后用無菌水清洗3遍后，放在滅菌的濾紙片上將組織表面的水吸干，然后放在YG培養(yǎng)基(酵母粉5g，瓊脂粉12.5g，葡萄糖18g，1000ml去離子水)上，于20。C22。C、黑暗培養(yǎng)；待其產(chǎn)孢后，進行單孢分離，每個病葉或病果上分離一株及ci"er^。經(jīng)單孢分離的菌株編號后保存在YG斜面上，加石蠟油于室溫長期保存。1)敏感菌株的篩選在含有1.O^/ml啶菌惡唑的YG培養(yǎng)基平板上可以生長的菌落為抗藥性菌株，不能生長的為敏感菌株。2)田間自然突變體的篩選將來自不同地區(qū)的番茄灰霉病菌菌株(親本菌株)，在YG培養(yǎng)基(酵母粉5g，瓊脂粉12.5g，葡萄糖18g，1000ml去離子水)上培養(yǎng)，使其產(chǎn)孢，使用無菌水配制濃度為5X106個孢子/ml的孢子懸浮液，不經(jīng)任何處理，直接涂布在含有濃度為1.(^g/ml啶菌惡唑的YG培養(yǎng)基平板上，每個平板涂布100ul。然后于2022。C、黑暗培養(yǎng)。7-10d后檢查結(jié)果，當有菌落長出時，則為疑似抗藥突變體，進行突變體的驗證。將疑似抗藥突變體轉(zhuǎn)移到無藥的YG平板上，待其形成菌落，連續(xù)轉(zhuǎn)代3次，再回接到含有1.OPg/ml啶菌惡唑的YG培養(yǎng)基平板上驗證，如果還能形成菌落，則為突變體，否則不是。將確認后的突變體待其產(chǎn)孢后，挑取單孢，備用。3)紫外誘導抗藥突變體的篩選選擇來自于不同地區(qū)的番茄灰霉病菌敏感菌株進行紫外誘導。A、紫外誘導孢子將敏感菌株(親本菌株)在YG培養(yǎng)基(酵母粉5g，瓊脂粉12.5g，葡萄糖18g，1000ml去離子水)上培養(yǎng)，使其產(chǎn)孢，使用無菌水配制濃度為5X106個孢子/ml的孢子懸浮液，取5ml置于培養(yǎng)皿(09cm)皿底，將其置于20w、254nm的紫外燈下4.5cm處照射45sec后，黑暗條件下放置lh左右(防止光修復導致突變恢復)，涂布在含有濃度為1.OPg/ml啶菌惡唑的YG培養(yǎng)基平板上，每個平板涂布100ul。平板中按400ml培養(yǎng)基加入500700ul的85%90%的乳酸，以抑制細菌的生長。然后于2022。C、黑暗條件下培養(yǎng)。1015d后檢査結(jié)果，當有菌落長出時，則為疑似抗藥突變體，進行突變體的驗證。將疑似抗藥突變體轉(zhuǎn)移到無藥的YG平板上，待其形成菌落，連續(xù)轉(zhuǎn)代3次，再回接到含有濃度為l.OPg/ml啶菌惡唑藥劑濃度平板上驗證，如果還能形成菌落，則為突變體，否則不是。將確認后的突變體(圖1B)待其產(chǎn)孢后，挑取單孢，備用。B、紫外誘導菌絲塊將敏感菌株(親本菌株)在YG平板上于2022t:、黑暗條件下培養(yǎng)3d，使其菌落長滿整個平板，打開培養(yǎng)皿蓋，將皿底置于20w、254nm的紫外燈下4.5cm處分別照射40min和50min，在黑暗條件下放置lh(防止光修復導致突變恢復)后用直徑為4mm的打孔器在菌落上打取菌餅，將其菌絲面朝下，接種于含濃度為1.OPg/ml啶菌惡唑帶毒平板上，每平板放置13個菌絲塊，于2022。C、黑暗培養(yǎng)1015d，檢査是否有疑似突變體產(chǎn)生，并進行突變體的驗證。將疑似抗藥突變體轉(zhuǎn)移到無藥的YG平板上，待其形成菌落，連續(xù)轉(zhuǎn)代3次，再回接到含有濃度為1.(mg/ml啶菌惡唑藥劑濃度平板上驗證，如果還能形成菌落，則為突變體，否則不是。將確認后的突變體(圖1A)待其產(chǎn)孢后，挑取單孢，備用。2、交互抗藥性的測定選擇步驟1的45株菌株用于交互抗藥性測定。采用菌絲生長速率法(如實施例2中的4實驗方法)分別測定啶菌惡唑單劑對上述45株供試菌株的EC5。及百菌清單劑對上述45株供試菌株的EC5。。并將所獲得的EC5。換算為對數(shù)值。分別以啶菌惡唑單劑對供試菌株的EC5。的對數(shù)值為橫坐標，以百菌清單劑對供試菌株的EC5。的對數(shù)值為縱坐標，做直線圖，求出回歸直線方程和相關(guān)系數(shù)。如圖2所示，隨著供試菌株對啶菌惡唑敏感性的降低，而相應地對百菌清的敏感性卻增加，R為0.8186，表明啶菌惡唑與百菌清之間存在明顯的負交互抗藥性。選擇合理的配比進行啶菌惡唑與百菌清復配。實施例2、啶菌惡唑與百菌清復配的聯(lián)合毒力測定1、供試菌株選擇實施例1中一株對啶菌惡唑表現(xiàn)為敏感的番茄灰霉病菌(B.cinerea)菌株，一株對啶菌惡唑表現(xiàn)為抗性的番茄灰霉病菌(B.cinerea)的抗藥性菌株進行聯(lián)合毒力測定試驗。2、供試藥劑供試藥劑為92%啶菌惡唑原藥和90%百菌清原藥。啶菌惡唑單劑與百菌清單劑分別按照質(zhì)量比為l0(啶菌惡唑單劑)、11、1:2、15、1:8、21、51、8:1、0:1(百菌清單劑)的比例復配。3、供試培養(yǎng)基YG培養(yǎng)基(酵母粉5g，葡萄糖18g，瓊脂粉12.5g，1000ml去離子水)，滅菌。4、實驗方法采用菌絲生長速率法進行毒力測定。4.l藥液的配置4丄1各復配比例母液的配置分別將啶菌惡唑原藥和百菌清原藥用丙酮溶解稀釋成濃度為10^g/ml的母液，按質(zhì)量比為l:0(啶菌惡唑單劑)、1:1、1:2、1:5、1:8、2:1、5:1、8:1、0:1(百菌清單劑)的比例混合，就配成了各復配比例藥劑的母液。各復配比例梯度藥液均用丙酮稀釋。4丄2敏感菌株各復配比例梯度藥劑的配制將l:0比例混配的母液稀釋成30、50、70、100、200、350^ig/ml的梯度藥液；將l:l和2:l比例混配的母液稀釋成10、30、50、100、200、400i!g/ml的梯度藥液;將5l和8l比例混配的母液稀釋成20、50、70、100、150、200、400嗎/ml的梯度藥液；將l:2比例混配的母液稀釋成100、200、300、400、600、800嗎/ml的梯度藥液；將l:5比例混配的母液稀釋成200、500、700、1000、1500、1800|ig/ml的梯度藥液；將l:8比例混配的母液稀釋成200、500、1000、1300、1600、2000、3000lug/ml的梯度藥液；將0:l比例混配的母液稀釋成600、1000、2000、5000、15000、25000叫/ml的梯度藥液(其中15000叫/ml和25000ng/ml的藥液不用單獨配置，分別往60ml培養(yǎng)基中加入90pl和150nl濃度為10^g/ml的母液配置對應的帶毒平板)。4丄3抗性菌株各復配比例梯度藥液的配制將l:O比例混配的母液稀釋成IOO、200、500、1000、2000嗎/ml的梯度藥液；將0:l比例混配的母液稀釋成300、500、1000、5000、10000、15000嗎/ml的梯度藥液(其中15000)Lig/ml的藥液不用單獨配置，在60ml培養(yǎng)基中加入90ull0、g/ml的母液配置相應的帶毒平板)；其余各復配比例的藥液均稀釋成200、500、1000、1300、1600、2000、3000iLig/ml的梯度藥液。4.2帶毒平板的制備用移液槍吸取60pl配置好的各系列梯度濃度溶液，加入已滅菌的冷卻至45'C的60mlYG培養(yǎng)基中，制作帶毒平板，對照吸取相同體積的丙酮溶液，每個濃度3次重復。4.3接菌、培養(yǎng)用直徑為4mm的打孔器從2(TC、黑暗培養(yǎng)3d的供試菌株的菌落邊緣同一圓周上打取菌餅，菌絲面朝下接種于帶毒平板中央(每個平板接種一枚)。然后，置于20'C、黑暗培養(yǎng)3d，測定結(jié)果。4.4結(jié)果測定及分析用直尺按十字交叉法量取菌落直徑，各濃度取3個重復共6個值的平均值作為該濃度菌落平均直徑值。根據(jù)下式計算出各濃度藥劑對菌絲生長的抑制率。菌絲生長抑制率對照菌落平均直徑-處理菌落平均直徑對照菌落平均直徑-菌餅直徑然后將抑制率數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成機率值(Y)、藥劑濃度(pg/mL)轉(zhuǎn)換成以10為底的對數(shù)值(X)，在MicrosoftExcd中作回歸直線，分別求出兩單劑及其各復配制劑的毒力回歸方程(Y=A+BX)和相關(guān)系數(shù)(r)，計算出藥劑對番茄灰霉菌菌絲生長抑制的有效中濃度(EC5())。最后根據(jù)ECso計算各復配比例藥劑的聯(lián)合毒力。復配制劑的聯(lián)合毒力采用孫云沛的共毒系數(shù)方法表示將各藥劑(單劑及復配制劑)中ECso最低的那種藥劑的實際毒力指數(shù)設定為100;混配制劑的實際毒力指數(shù)二單劑中最低的EC5o/待測比例的EC50X100;混配制劑的理論毒力指數(shù)A^i:(某藥的實際毒力指數(shù)x在混劑中該藥有效成分的百分率)；實際毒力指數(shù)混配制劑的共毒系數(shù)〔=溫溫x10oC大于120時為增效作用，小于80時為拮抗作用，80120時為加和作用；混配制劑的增效倍數(shù)E^^M^^—!很m制刑toJ曰歡i口雙Ji混劑理論毒力指數(shù)丄5、結(jié)果5.1啶菌惡唑和百菌清不同比例混配制劑對番茄灰霉病菌(B.dnerea)的毒力測定啶菌惡唑和百菌清按質(zhì)量比l:0、1:1、1:2、1:5、1:8、2:1、5:1、8:1、0:l比例復配制劑對番茄灰霉病菌(B.dnerea)抗性菌株和敏感菌株的毒力回歸方程式、相關(guān)系數(shù)和ECso值見表l和表2。表l啶菌惡唑和百菌清單劑及復配制劑對抗性菌株的毒力作用啶菌惡唑百菌清回歸方程式相關(guān)系數(shù)rEC5o(fxg/ml)11y=1.3806X+5.46840.98820.45812y=1.3979x+5.3050.99660.6051二y=1.4046x+5.30590.9977O馬1二8y=1.0779x+5.24890.99890.5882:1y=1.4899x+5.42330.98360.5205:1y=1.3798x+5.38390.96690.52781y=1.4795x+5.32850.9873O扁10y=1.4982x+5.47560.99130.4810:1y=0.5438x+5.13390.99520.567表2啶菌惡唑和百菌清單劑及復配制劑對敏感菌株的毒力作用啶菌惡唑:百菌清回歸方程式相關(guān)系數(shù)rEC50(pg/ml)1:1y=1.9591x+6.73720.99890.1301:2y=2.104x+6.59860.97860.1741:5y=2.6394x+5.53110.94980.6291:8y=2.251x+5.56320.98500.5622:1y=L8186x+6.74430.96590.1101y=l,8261x+6.94560.97190.0868二1y=1.9357x+7.37270.98040.0591:0y=1.6948x+7.09860.98630.0580:1y=1.0156x+4.76390.卯921.7085.2啶菌惡唑和百菌清不同比例混配制劑對番茄灰霉病菌(B.cinerea)的共毒系數(shù)根據(jù)孫云沛的計算公式求得啶菌惡唑和百菌清分別按照質(zhì)量比l:0、1:1、1:2、1:5、1:8、2:1、5:1、8:1、禾QO:l的配比制成的混劑對番茄灰霉病菌10(B.cinerea)抗性菌株和敏感菌株的理論毒力指數(shù)A和共毒系數(shù)C見表3和表4。聯(lián)合毒力測定結(jié)果表明啶菌惡唑和百菌清按質(zhì)量比l:1、1:2、1:5、1:8、2:1、5:1、和8:l的比例混配的藥劑對啶菌惡唑抗藥番茄灰霉病菌菌株的共毒系數(shù)位于81.65113.76，介于80120之間，均表現(xiàn)出加和作用；對于敏感菌株，啶菌惡唑和百菌清按質(zhì)量比l:1、1:2、5:l和8:l的比例混配時，共毒系數(shù)位于80.06108.85，介于80120之間，同樣也表現(xiàn)出加和作用；而兩者按l:5、1:8和2:1的比例混配時，共毒系數(shù)位于47.1277.57，小于80，表現(xiàn)出拮抗作用。可以看出，啶菌惡唑和百菌清按l:1、1:2、5:l和8:l的比例混配時，對于抗藥性菌株和敏感菌株均表現(xiàn)出加和作用，但是兩者按l:l和l:2的比例混配時能更好地降低藥劑成本，因此建議將這兩個比例應用于田間施藥。表3啶菌惡唑和百菌清的復配制劑對抗性菌株的共毒系數(shù)啶菌惡唑百菌清實際毒力指數(shù)理論毒力指數(shù)共毒系數(shù)1二1100.0087.91113.761二275.6785.5188.491575.6083.1190.961:877.9282.3194.662:188.0790.3097.535:186.8992.7093.738:176.3493.5081.651二095.10一—0:180.72—一表4啶菌惡唑和百菌清的混配制劑對敏感菌株的共毒系數(shù)啶菌惡唑百菌清實際毒力指數(shù)理論毒力指數(shù)共毒系數(shù)1二144.5151.6986.111233.2335.5993.371二59.1819.4947,121:810.2814.1272.812:152.5967.7977.575:167.1783.90訓68:197.1689.26108.851二0100.00一一0:1"8—一一實施例3、啶菌惡唑和百菌清復配制劑的田間小區(qū)防病實驗供試作物品種番茄，品種為合作908(上海長征良種實驗場生產(chǎn)，市售)。該品種屬中早熟型，無限型，植物生長旺盛，適用栽培區(qū)域廣，抗病抗逆性強。實驗設7個處理I:25%的啶菌惡唑乳油和75%百菌清可濕性粉劑復配制劑，其中啶菌惡唑和百菌清的質(zhì)量比為1:2，以600倍稀釋液進行噴施；II:25%的啶菌惡唑乳油和75%百菌清可濕性粉劑復配制劑，其中啶菌惡唑和百菌清的質(zhì)量比為1:2，以1250倍稀釋液進行噴施；III:25%的啶菌惡唑乳油和75%百菌清可濕性粉劑復配制劑，其中啶菌惡唑和百菌清的質(zhì)量比為1:1，以600倍稀釋液進行噴施；IV:25%的啶菌惡唑乳油和75%百菌清可濕性粉劑復配制劑，其中啶菌惡唑和百菌清的質(zhì)量比為l:1，以1250倍稀釋液進行噴施；V:25%的啶菌惡唑乳油，以1250倍稀釋液進行噴施；VI:75%百菌清可濕性粉劑，以600倍稀釋液進行噴施；VII:清水對照。在前一年有番茄灰霉病菌(B.cinerea)發(fā)生的田間，按照農(nóng)藥田間藥效試驗準則(一)GB/T17980.28-2000—"殺菌劑防治蔬菜灰霉病"準則中番茄灰霉病的病害分級標準和計算方法，于發(fā)病之前進行第一次噴藥、噴藥間隔期為10天，第三次噴藥后七天調(diào)查各小區(qū)病情指數(shù)。每小區(qū)隨機取5點，每點取2株，每小區(qū)共計調(diào)查10株番茄的全部葉片的發(fā)病情況，每片葉按病斑面積占葉面積的百分率分級記錄，計算各小區(qū)病情指數(shù)，最后以病情指數(shù)計算供試藥劑對番茄灰霉病的防治效果。經(jīng)鑒定，該田間病害由是番茄灰霉病菌(B.cinerea)引起的灰霉病。番茄灰霉病以葉片為單位的病害分級標準及藥劑防治效果計算方法如下。病情調(diào)査以葉片為單位進行普查，病害分級標準如下0級無病斑；l級單葉片有病斑3個；3級單葉片有病斑4-6個；5級單葉片有病斑7-10個；7級單葉片有病斑11-20個，部分密集成片；9級單葉片有病斑密集占葉面積25%以上；病情指數(shù)=(S(各級病葉數(shù)X相對級數(shù)值)/(調(diào)查總?cè)~數(shù)X9)〕X100防治效果(％)=〔(對照病情指數(shù)一處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)〕X100發(fā)病率=發(fā)病株數(shù)/調(diào)査株數(shù)。結(jié)果如表5所示，表明本發(fā)明的啶菌惡唑和百菌清復配制劑對番茄灰霉病防治效果與啶菌惡唑的防效相當。表5啶菌惡唑和百菌清復配制劑對番茄灰霉病的田間防治效果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注Ri、R2、R3.R4表示四次重復；防病效果中，具有相同字母的處理間在p:O.Ol水平上無顯著差異。權(quán)利要求1、一種防治灰霉病的殺菌劑，其活性成分為啶菌惡唑和百菌清，所述啶菌惡唑和百菌清的質(zhì)量比為(18)∶(1-8)。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的殺菌劑，其特征在于所述啶菌惡唑和百菌清的質(zhì)量比為i:i、i:2、5:l或8:i。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的殺菌劑，其特征在于所述啶菌惡唑和百菌清的質(zhì)量比為i:i或i:2。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的殺菌劑，其特征在于所述灰霉病由^oo;^c/e^"病原菌引起。5、權(quán)利要求l-4中任一所述的殺菌劑在防治灰霉病中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種用于防治灰霉病的復配殺菌劑。該復配殺菌劑，其活性成分為啶菌惡唑和百菌清，兩種活性成分的質(zhì)量比為(1-8)∶(1-8)，優(yōu)選質(zhì)量比為1∶1，1∶2或5∶1，8∶1，最優(yōu)選比例為1∶1或1∶2。本發(fā)明將單作用位點的新型內(nèi)吸性殺菌劑啶菌惡唑和多作用位點的保護性殺菌劑百菌清進行復配，對于避免或延緩我國創(chuàng)制性殺菌劑啶菌惡唑的田間抗藥性產(chǎn)生及擴大其防治譜具有重要的意義，同時可降低啶菌惡唑的使用成本，具有潛在的經(jīng)濟意義。文檔編號A01N43/80GK101485316SQ20091007885公開日2009年7月22日申請日期2009年3月4日優(yōu)先權(quán)日2009年3月4日發(fā)明者敏劉,劉西莉,李健強,陳風平,平韓,黃中喬申請人:中國農(nóng)業(yè)大學