專利名稱：：一種早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑，具體地說涉及肉羊舍飼圈養(yǎng)生產(chǎn)方式中、專用于早期斷奶肉用羔羊快速育肥日糧的一種保健、促長和減排污染物的綠色生物飼料添加劑。
背景技術(shù)：
：從依賴野生飼草資源的放牧詞養(yǎng)到以秸稈和精飼料資源為主的全混合日糧的舍伺圈養(yǎng)，是肉羊飼養(yǎng)和羊肉生產(chǎn)方式的巨大變革，也是肉羊業(yè)發(fā)展的必然方向。這種變革需要多項飼料與詞養(yǎng)技術(shù)的綜合配套才能實施并取得良好效果，其中的關(guān)鍵技術(shù)之一是早期斷奶肉用羔羊快速育肥技術(shù)的應(yīng)用。早期斷奶羔羊快速育肥帶來的難題有三其一，胃腸道健康狀況差，極易腹瀉導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降甚至死亡，通常解決快速育肥羔羊初期腹瀉問題的方法是大量使用抗生素類藥物和化學(xué)合成添加劑控制疾病，其結(jié)果是延緩瘤胃發(fā)育、營養(yǎng)不良而使得生產(chǎn)性能表現(xiàn)降低，目.造成環(huán)境污染和有害物殘留；其二，羔羊育肥期與瘤胃發(fā)育期同歩，促進(jìn)瘤胃正?？焖侔l(fā)育對提高羔羊健康水平和粗飼料消化率非常重要，但生產(chǎn)實踐中還遠(yuǎn)沒有解決該難題；其三，羔羊育肥后期日糧組成中含有30%40%的飼草或秸桿，以及大麥、豆粕等精飼料，導(dǎo)致非淀粉多糖含量高而降低消化率。微生態(tài)益生菌生物飼料添加劑是促進(jìn)瘤胃發(fā)育、替代抗生素用于動物保健的新一代環(huán)保促長添加劑，該類型添加劑通過動物胃腸道奪氧維持厭氧環(huán)境、產(chǎn)酶和產(chǎn)酸等一系列作用，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡而提高免疫力改善動物胃腸道健康水平、提高日糧消化率，從而提高動物生產(chǎn)性能，同時避免使用抗生素帶來的污染和抗藥性副作用，益生菌制劑中菌種組合、活菌含量及其配比是發(fā)揮其功能的重要技術(shù)參數(shù)，也是該領(lǐng)域科學(xué)研究的重點之一。非淀粉多糖酶(NSP酶)可以提高幼齡反芻動物日糧中非淀粉多糖類抗?fàn)I養(yǎng)因子消化率，降低腸道食糜的粘稠度而提高日糧整體消化率。該酶中的基本成員有五類，即纖維素酶、木聚糖酶、e-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、果膠酶，針對不同動物和飼養(yǎng)階段日糧特點應(yīng)設(shè)計不同的組合比例可以產(chǎn)生事半功倍的效果，目前為數(shù)不多的研究中多采用不同的單酶品種組合配方，該類方法因涉及液體發(fā)酵和單酶純化等復(fù)雜工藝成本過高而難以實際應(yīng)用。本發(fā)明人長期從事育肥羔羊飼料日糧的研究工作，曾以枯草芽孢桿菌和酵母菌為益生菌，以非淀粉多糖酶作為酶制劑應(yīng)用于羔羊育肥日糧中，發(fā)現(xiàn)試驗前期育肥日增重較對照組提高17.4%，而后期提高僅為5.99%，全期提高11.04%，在前期由于R齡小瘤胃沒有充分發(fā)育，消化酶的分泌量較低，添加益生菌和非淀粉多糖酶顯著提高了消化率從而提高了日增重，而后期瘤胃逐漸發(fā)育，由于瘤胃的發(fā)酵作用使得羔羊的消化功能得到了加強(qiáng)，飼料中添加的益生菌和非淀粉多糖酶的作用降低，從而導(dǎo)致上述現(xiàn)象發(fā)生。
發(fā)明內(nèi)容針對上述缺陷，本發(fā)明提供一種早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑，能提供早期斷奶羔羊全面的營養(yǎng)及生理調(diào)節(jié)，促進(jìn)動物健康成長，提高免疫力，且在斷奶后育肥前期及后期日增重提高均在10%以上，顯著提高了經(jīng)濟(jì)效益。一種早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑，包括占總重量為25-35%的益生素、40-60%的非淀粉多糖酶和15-25%的酵母培養(yǎng)物，所述益生素由產(chǎn)朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌菌劑組成，其菌劑的活菌數(shù)均^lXl(Tcfu/g，活菌數(shù)比為0.9-1.1:0.9-1.1:0.9-1.1;酵母培養(yǎng)物中粗蛋白含量—》50%，酸性蛋0酶活性》106u/kg，非淀粉多糖酶包括纖維素酶、木聚糖酶、e-葡聚糖酶、e-甘露聚糖酶和果膠酶，酶活力分別》4.0Xl(fu/kg、5.0X106u/kg、5.0X106u/kg、3.0X105u/kg、5.0X105u/kg，其酶活力組合比例為1.l-l.3:12—16:15-16:1.0-1.3:1-2。所述產(chǎn)朊假絲酵母為產(chǎn)朊假絲酵母(Cs/7力's"^7/sAccc20060)。所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(feci7hssW^'7人sCTCC10081)。所述植物乳桿菌為植物乳桿菌(7acto6s"W〃sph/^ico"，Acccl1118)。優(yōu)選組方30%益生素、50%非淀粉多糖和20%酵母培養(yǎng)物酶。上述添加劑的制備方法(i)將產(chǎn)朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌的粉劑按活菌數(shù)比例混合得到益生素；(2)用釀酒酵母菌株和以豆粕為主的培養(yǎng)基進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵制成酵母培養(yǎng)物；(3)用里氏木霉(7yyc力w/erasRutC-30菌株和以麥麩為主的培養(yǎng)基進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵方式制得非淀粉多糖酶；(4)將益生素、酵母培養(yǎng)物、非淀粉多糖酶按比例混合制成本發(fā)明添加劑。所述釀酒酵母菌株為釀酒酵母(Sacc/zaramycescwew'w'ae，Accc20063)。所述釀酒酵母的發(fā)酵條件為固體培養(yǎng)基為豆粕90%+麥麩10%，料水比例為l:1.5,接種量6%，培養(yǎng)溫度30。C，培養(yǎng)時間96小時。所述里氏木霉(rric力^ferfflsrees&)RutC-30菌株固態(tài)發(fā)酵條件為固體發(fā)酵培養(yǎng)基麥麩95g+玉米粉5g+K2HP043H2O0.lg+MgS047H200.16g，碳氮比21;接種量8%，濕度50%，于3(TC通氣恒溫箱或溫室中培養(yǎng)5d。本發(fā)明在原有的添加劑的基礎(chǔ)上進(jìn)行了調(diào)整，益生素類由產(chǎn)朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌組成，通過控制里氏木霉的發(fā)酵條件改變其酶譜產(chǎn)品，使其含有了確定量的e-甘露聚糖酶，且纖維素酶、木聚糖酶、e-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和果膠酶的活力配置較適合生產(chǎn)飼用非淀粉多糖酶(nsp酶)，還添加酵母培養(yǎng)物，三者按比例輔配，得到斷奶蓋羊育肥飼料添加劑，通過飼養(yǎng)證明，本發(fā)明添加劑對促進(jìn)早期斷奶黑羊瘤胃發(fā)育，體重增加，對于后期瘤胃發(fā)育完全的羔羊也同樣能增加體重，快速育肥黑羊。生物活性益生菌達(dá)到胃腸道并且發(fā)揮作用受到多種因素的影響，活菌數(shù)只是其中的一個重要因素，而這個因素的重要性也因為不同的家畜、家禽、乃至于反芻動物瘤胃的復(fù)雜性而有很大不同。本發(fā)明根據(jù)斷奶羔羊的生理特點，認(rèn)為飼喂的益生菌在日糧中添加數(shù)量級應(yīng)》106107cfu/g，本發(fā)明添加劑的組分活菌數(shù)在10W1011cfu/g，在日糧中的添加比例》0.1%時可以達(dá)到活菌數(shù)，即》l(^cfu/g，所以三者活菌數(shù)比例確定為1:1:l左右，同時在添加劑中所占比例為30%左右，當(dāng)該添加劑在日糧中添加1%時，則每種活菌組分在日糧中的添加比例正好均為0.1%左右，恰可以達(dá)到適宜的活菌數(shù)。1.產(chǎn)朊假絲酵母產(chǎn)朊假絲酵母又叫產(chǎn)朊圓酵母或食用圓酵母，其蛋白質(zhì)和維生素B的含量都比釀酒酵母高。肉羊?qū)儆诜雌c動物，羔羊育肥期其瘤胃處于從未成熟到成熟的發(fā)育過程，盡快促進(jìn)瘤胃發(fā)育成熟有利于肉羊的生長和對纖維素、半纖維素等非淀粉多糖營養(yǎng)素的發(fā)酵消化，從而利于提高增重速度和飼料利用率。酵母菌屬于兼氧菌，但在有氧存在的條件下以好氧發(fā)酵為先。在肉羊采食過程中，帶入了大量的空氣(氧氣)，活酵母菌的發(fā)酵過程可以迅速消耗掉瘤胃內(nèi)的氧氣而使瘤胃處于更好的厭氧環(huán)境，這是瘤胃發(fā)酵的正常微生物體系環(huán)境，特別有利于纖維素分解菌等有益微生物的增殖。因為瘤胃中有益微生物數(shù)量的大幅度提高，增強(qiáng)了瘤胃的生理功能，實際結(jié)果是促進(jìn)了瘤胃微生物體系的快速發(fā)育，消化纖維和利用乳酸的功能得以提高，改善了羔羊生產(chǎn)性能。酵母細(xì)胞可以通過吸附有毒物質(zhì)和拮抗病原菌，從而有效預(yù)防胃腸道疾病，提高肉羊的抗病力。酵母菌本身含有50X以上的優(yōu)質(zhì)蛋白和大量的B族維生素，同時可以分泌大量的中性蛋白酶，促進(jìn)肉羊小腸消化率的提高，從而改善生產(chǎn)性能。2.枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌是好氧細(xì)菌，其特點是可以產(chǎn)生大量的胞外酶(蛋白酶、淀粉酶和半纖維素水解酶等)，這些酶類可以促進(jìn)飼料的消化和吸收，提高飼料的利用率，從而促進(jìn)動物生長。在肉羊飼料添加劑中的主要作用是迅速耗竭消化道的氧氣和產(chǎn)生大量的蛋白酶。由于該菌具有高強(qiáng)度的抗胃酸能力，對于植物乳桿菌產(chǎn)生的酸性腸道環(huán)境，其活性不受影響，所以在整個消化道的環(huán)境中均可以保持活性，除大量消耗瘤胃含氧量外，同時在各段腸道均起到保證厭氧環(huán)境的作用，并因此抑致有害好氧菌的增殖而保護(hù)胃腸道的健康，提高腸道正常厭氧菌5繁殖從而調(diào)節(jié)腸道微生物體系健康平衡。另外該菌繁殖過程中大量分泌蛋白酶，提高肉羊飼料蛋白消化率，這對于幼齡羔羊特別重要。3.植物乳桿菌植物乳桿菌屬于乳酸菌類，乳酸菌在動物腸道內(nèi)繁殖可以產(chǎn)生多種抑制性化合物，包括細(xì)菌素(乳桿菌素等蛋白抗菌素)、類細(xì)菌素類物質(zhì)以及各種對抗性物質(zhì)，如過氧化氫和某些有機(jī)酸等。乳酸菌產(chǎn)的細(xì)菌素對革蘭氏陽性菌具有抑制作用，可以抑制病原微生物的生長。乳酸菌還可以粘附于腸道細(xì)胞上，有占位性競爭和營養(yǎng)物競爭作用。它產(chǎn)生的有機(jī)酸可以降低腸道中的pH值，抑制腸道內(nèi)病原菌如人腸桿菌、沙門氏桿菌、梭菌的增殖，減少腸道疾病的發(fā)病率，降低因腸道疾病帶來的不利影響(采食量減少，服用抗生素等)。上述益生素的加入，改善了羔羊胃腸微生物環(huán)境，抑制了病原菌的生長，促進(jìn)有益的厭氧菌生長，提高免疫力，減少了斷奶期腹瀉帶來的不利因素，同時促進(jìn)了瘤胃的生長。飼用非淀粉多糖酶(NSP酶)是廣泛應(yīng)用于降解飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子非淀粉多糖以提高飼料消化率、日增重及經(jīng)濟(jì)與環(huán)境效益的復(fù)合酶,其中包括纖維素酶、木聚糖酶、(3-葡聚糖酶、p-甘露聚糖酶和果膠酶，由各種曲霉、木霉等菌種生產(chǎn)。固態(tài)發(fā)酵具有較好經(jīng)濟(jì)和環(huán)境效益，甚至在酶的活性與穩(wěn)定性、酶的性能、以及木霉和青霉產(chǎn)木聚糖酶與纖維素酶的工藝適用性等方面還具有獨特的優(yōu)勢。里氏木霉RutC-30是野生的里氏木霉QM6a的誘變株，是一種腐生絲狀真菌，對該菌株固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)NSP酶的初步研究表明該菌株NSP酶系較全，其中木聚糖和(3-葡聚糖酶活性較高，不同的碳源基料發(fā)酵產(chǎn)生的各種NSP酶比例不同。本添加劑使用該菌株產(chǎn)生的非淀粉多糖酶，其中纖維素酶活力、木聚糖酶以及(3-葡聚糖酶活力高，更適合與育肥肉羊的飼料日糧特點。隨羔羊日齡增加，其消化道迅速發(fā)生變化，其主要特點是瘤胃在初始基本不發(fā)揮作用，在發(fā)育成熟后起關(guān)鍵作用。因此其育肥期日糧組成一般分為兩個階段，第一階段日糧含有80%甚至更高的精飼料，而第二階段則含有70%50%的精飼料，即第二階段大幅度增加了飼草或秸稈的比例，所以該階段的纖維素、半纖維素(主要為木聚糖)的含量迅速提高。為了適應(yīng)不同階段的日糧，非淀粉多糖酶的酶譜中應(yīng)具有較高的纖維素酶和木聚糖酶活性，兼顧葡聚糖酶和甘露聚糖酶較高的活性。而里氏木霉RutC-30固體發(fā)酵生產(chǎn)的復(fù)合酶基本適合于其日糧的要求，所以確定使用該菌株生產(chǎn)的酶。上述非淀粉多糖酶的加入，促進(jìn)了飼料中的非淀粉多糖物質(zhì)的消化，降低了飼料粘稠度，提高日糧消化率，同時利于腸道有益菌的生長，保持腸道微生態(tài)平衡，從而促進(jìn)動物生長。酵母培養(yǎng)物是在特定工藝條件控制下由酵母在固體培養(yǎng)基上經(jīng)過充分發(fā)酵后所形成的微生態(tài)制品。它由酵母細(xì)胞代謝產(chǎn)物和經(jīng)過發(fā)酵后變異的培養(yǎng)基，以及少量己無活性的酵母細(xì)胞所構(gòu)成。在酵母培養(yǎng)物的生產(chǎn)過程中，酵母細(xì)胞僅僅是被用來生產(chǎn)細(xì)胞代謝產(chǎn)物的一種工具。酵母培養(yǎng)物是一種成分復(fù)雜的產(chǎn)品，它不僅含有酵母細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng)物，還含有發(fā)酵后形成的酵母細(xì)胞代謝產(chǎn)物。已知的有效成分如蛋白、氨基酸、B組維生素、活菌細(xì)胞、小肽、各種消化酶等，還沒有研究證明其中哪一種是主要的或哪幾種協(xié)同作用發(fā)揮了主要功能，所以有人也將其歸類為未知功能閑了。正是這些代謝產(chǎn)物能夠剌激動物腸胃內(nèi)的微生物細(xì)菌，促使動物健康生長，從而達(dá)到提高詞料利用率和改善動物生產(chǎn)力水平的目的。酵母培養(yǎng)物在本發(fā)明添加劑中的添加量是綜合了已有研究結(jié)果，同時考慮了添加劑可以容納的空間等各種因素確定的，即最終在本發(fā)明添加劑屮的比例為20%左右，在日糧中的添加比例為0.2%。己有的飼養(yǎng)試驗表明酵母培養(yǎng)物對反芻動物是安全的，沒有不良反應(yīng)，作為添加劑能過發(fā)揮功能的添加量在0.1%5%之間。酵母培養(yǎng)物有刺激瘤胃纖維素菌和乳酸菌繁殖，改變瘤胃發(fā)酵方式，降低瘤胃氨濃度，提高瘤胃微生物蛋白產(chǎn)量和飼料消化率等作用，在黑羊斷奶前期和后期都發(fā)揮著重要的作用。本發(fā)明的目的是提供一種斷奶期肉羊?qū)Ｓ蒙镲暳咸砑觿Ｔ撎砑觿┑氖褂脤ο笫侨ι犸曫B(yǎng)的肉用羔羊在快速育肥期的H糧，其功能是通過益生菌在羔羊胃腸道奪氧、產(chǎn)酶、產(chǎn)酸和抑制有害微生物繁殖等一系列作用，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡而提高免疫力，改善羔羊健康水平、提高日糧消化率，同時避免使用抗生素帶來的污染和抗藥性副作用；通過非淀粉多糖酶(NSP酶)水解羔羊日糧中非淀粉多糖抗?fàn)I養(yǎng)因子，降低腸道食糜的粘稠度而提高日糧消化率，以及羔羊日增重與飼料效率；通過酵母培養(yǎng)物促進(jìn)瘤胃發(fā)育，提高瘤胃微生物蛋白產(chǎn)量和飼料消化率，本發(fā)明通過二類物質(zhì)的合理輔配(包括組分及含量的合理配伍)，提供給早期斷奶羔羊全面的營養(yǎng)及生理調(diào)節(jié)，提高免疫力，促進(jìn)羔羊健康生長，提高飼料效率，本發(fā)明添加劑專用于早期(S2月齡)斷奶的肉羊育肥日糧中，在3月齡5月齡快速育肥肉羊全混合日糧中添加比例為1%。本發(fā)明添加劑在斷奶羔羊育肥前期和后期，均能提高日增重10%以上，顯著提高了羔羊的經(jīng)濟(jì)效益。圖l本發(fā)明添加劑的制備工藝流程圖，圖2產(chǎn)朊假絲酵母菌劑的制備工藝流程圖，圖3枯草芽孢桿菌菌劑的制備工藝流程圖，圖4植物乳桿菌菌劑的制備工藝流程圖，圖5植物乳桿菌凍干曲線圖，圖6酵母培養(yǎng)物的制備工藝流程圖，圖7非淀粉多糖酶的制備工藝流程圖。具體實施例方式7實施例1早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑的制備1-1益生素輔配益生素的輔配可采用市場上的市售產(chǎn)品，如粉劑等，本發(fā)明采用如下方法制得。1-1-1產(chǎn)朊假絲酵母菌劑的制備1-1菌種與培養(yǎng)基產(chǎn)朊假絲酵母(Ca"必a"t/7is)Accc20060，北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所繁殖保存，—80'C冷凍保存菌種(5ml裝)，可以對公眾發(fā)放。馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基鮮馬鈴薯、葡萄糖、水，按照重量比10:1:50的比例配制，自然pH值。配制方法馬鈴薯去皮，切成小碎塊并按比例加水，煮沸30min，兩層紗布過濾得馬鈴薯浸汁，將浸汁補(bǔ)足水分到煮前量。取該馬鈴薯浸汁、葡萄糖、尿素，按5000:100:l的比例配制混勻，高壓0.lMPa滅菌20分鐘。l-l-l-2培養(yǎng)條件培養(yǎng)箱或溫室，5000ml培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，搖瓶機(jī)；每瓶培養(yǎng)基液量3000ml;接種量50ml、培養(yǎng)溫度30'C、搖瓶機(jī)轉(zhuǎn)速150r/min、培養(yǎng)時間24h1-1-1-3檢測檢測指標(biāo)活菌數(shù)；檢測培養(yǎng)基麥芽汁固體培養(yǎng)基；檢測培養(yǎng)時間24h;檢測方法采用平板涂布培養(yǎng)計數(shù)法。每樣品取三水平稀釋度、三重復(fù)，每平板取液lnL。1-1-1-4離心與低溫烘干將檢測合格的菌液置于高速離心機(jī)離心(4000r/min)，所得菌泥用液體保護(hù)劑稀釋為備用菌液，并與載體保護(hù)劑混合均勻低溫(40°C，4h)烘干。烘干品作為肉羊?qū)Ｓ蒙镲暳咸砑觿┑慕M方原料備用。液體保護(hù)劑配方15%脫脂奶。載體保護(hù)劑配方花生殼粉30%+麥麩70%。液體保護(hù)劑加量離心前菌液重量的5%載體保護(hù)劑加量1份菌液加入2份載體保護(hù)劑。備用組方原料活菌數(shù)干品實際活細(xì)胞含量^5.0X101Qcfu/g。制備工藝見圖2。1-1-2.枯草芽孢桿菌菌劑的制備1-1-2-1菌種與培養(yǎng)基枯草芽孢桿菌(3flcz7/^^Zm'fcCICC10081)，北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所有保存，可以對公眾發(fā)放。擴(kuò)大培養(yǎng)基配方牛肉膏2g、蛋白胨5g、氯化鈉2.5g，500ml無菌水，混合均勻并分裝，高壓O.lMpa滅菌20min，自然pH。1-1-2-2培養(yǎng)條件恒溫?fù)u床培養(yǎng)，32.5°C，振蕩頻率為250r/min，培養(yǎng)時間24h。1-1-2-3檢測檢測物檢測培養(yǎng)菌液；檢測指標(biāo)每毫升菌數(shù)(Cfu/ml);檢測培養(yǎng)基在擴(kuò)大培養(yǎng)基配方基礎(chǔ)上加入2%的瓊脂粉滅菌制成；檢測方法平板涂布培養(yǎng)計數(shù)法。每樣品取三水平稀釋度、二重復(fù)，每平板取液lpL。1-1-2-4離心與混合將檢測合格的菌液置于高速離心機(jī)離心(4000r/min)，所得菌泥用液體保護(hù)劑稀釋為備用菌液，并與載體保護(hù)劑混合均勻低溫(4(TC，4h)烘干。烘干品作為肉羊?qū)Ｓ蒙镲暳咸砑觿┑慕M方原料備用。液體保護(hù)劑配方15%脫脂奶。載體保護(hù)劑配方60目粒度的麥麩。液體保護(hù)劑加量離心前菌液重量的5%載體保護(hù)劑加量1份菌液加入2份載體保護(hù)劑。備用組方原料活菌數(shù)干品實際活細(xì)胞含量》10fu/g。制備工藝見圖3。1-1-3植物乳桿菌菌劑的制備1-1-3-1菌種和培養(yǎng)基植物乳桿菌ascto6sci刀"sp^7"c^s)Accc-1118。北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所有保存，可以對公眾發(fā)放。MRS培養(yǎng)基蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g,酵母膏5.0g，葡萄糖20.0g，三水合乙酸鈉5.0g，檸檬酸二氨2.0g，K2HF042.0g，Mgs04。7H200.58g，MnS04H200.19g，吐溫80l.OmL，蒸餾水1000mL，pH6.5，121。C滅菌20min。1-1-3-2培養(yǎng)條件液體種子培養(yǎng)。溫度37。C，培養(yǎng)時間24h，500ml三角瓶振搖培養(yǎng)(裝液量300ml);接種量5%。擴(kuò)繁培養(yǎng)。溫度37°C，培養(yǎng)時間24h，5000ml培養(yǎng)瓶振搖培養(yǎng)(裝液量3000ml);接種量5%。91-1-3-3檢測指標(biāo)與方法檢測方法MRS固體培養(yǎng)基平板涂布培養(yǎng)計數(shù)法，指標(biāo)cfu/ml，cfu/g。每樣品取三水平稀釋度、三重復(fù)，每平板取液lpL。1-1-3-4離心與凍干將檢測合格的菌液置于高速離心機(jī)離心(4000r/min)，分離出菌體菌泥，并與凍干保護(hù)劑以混合均勻凍干。凍干品作為肉羊?qū)Ｓ蒙镲暳咸砑觿┑慕M方原料備用。液體凍干保護(hù)劑配方脫脂奶粉I5g，蔗糖5g，無菌水100tnl。液體凍干保護(hù)劑加量一份離心后的菌泥加入相當(dāng)于離心前菌液體積10%的保護(hù)劑。凍千品的活菌數(shù)》](V'cfu/g。制備工藝見圖4，凍干曲線見圖5。1-1-4益生素配制產(chǎn)朊假絲酵母菌劑，枯草芽孢桿菌菌劑，植物乳桿菌菌劑，按活菌數(shù)含量l:1:1轉(zhuǎn)化為本發(fā)明干品原料的重量比例為2:1:l配制混合。卜2酵母培養(yǎng)物1-2-1菌種與培養(yǎng)基菌種釀酒酵母(5^cc力3r，7cescei^iw'se)Accc20063,北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所擴(kuò)繁保存，可以對公眾發(fā)放，-8(TC冷凍保存菌種(5ml裝)液體種子培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，配方與制作方法如下。鮮馬鈴薯、葡萄糖、水，按照重量比10:1:50的比例配制，自然pH值。配制方法馬鈴薯去皮，切成小碎塊并按比例加水，煮沸30min，兩層紗布過濾得馬鈴薯浸汁，將浸汁補(bǔ)足水分到煮前量。取該馬鈴薯浸汁、葡萄糖、尿素，按5000:100:l的比例配制混勻，高壓0.lMPa滅菌20分鐘。酵母培養(yǎng)物固態(tài)培養(yǎng)基豆粕90%+麥麩10%，料水比例l:1.51-2-2培養(yǎng)條件液體種子培養(yǎng)條件溫室，5000ml培養(yǎng)瓶培養(yǎng)；每瓶培養(yǎng)基液量3000ml;接種量50ml、培養(yǎng)溫度3(TC、搖瓶機(jī)轉(zhuǎn)速100r/min、培養(yǎng)時間24h。固態(tài)培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度30°C，接種量6%，培養(yǎng)時間96h;敞口塑料袋(規(guī)格400X800)，裝料量每袋10kg，靜置培養(yǎng)。l-2-3檢測指標(biāo)與方法酵母細(xì)胞數(shù)血球計數(shù)板計數(shù)，發(fā)酵培養(yǎng)36h時測定，達(dá)到或超過l(f個/g時為合格；10粗蛋白含量采用凱氏定氮法。酶種酸性蛋白酶。酶活定義1g固態(tài)發(fā)酵曲在4CTC、pH3.0條件下，每分鐘水解濃度為10gL—'的酪蛋白產(chǎn)生1嗎酪氨酸的酶量定為一個酶活力單位。制備工藝見圖6。1-3非淀粉多糖酶的制備1-3-1菌種、培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法菌種里氏木霉(7>j'c/ocfe7^reesw')RutC-30，CICC13052,中國工業(yè)微生物菌種保藏中心(CICC)，公眾可以從這獲取，北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所有保存，也可以對公眾發(fā)放。斜面培養(yǎng)基馬鈴薯汁，葡萄糖，pH6.8，2%瓊脂；液體培養(yǎng)基馬鈴薯汁，葡萄糖，P服.8;固體發(fā)酵培養(yǎng)基麥麩95g+玉米粉5g+KzHP043H200.lg+MgS047H200.16g，碳氮比21;將凍干菌種加無菌水活化混勻后制成菌懸液，無菌臺中接種于斜面培養(yǎng)基上。24°C,培養(yǎng)7d，見斜面培養(yǎng)基布滿綠色菌絲，置4'C冰箱中備用。用接種環(huán)于斜面培養(yǎng)基菌種挑取3環(huán)孢子與菌絲混合物分別接種到3只三角瓶液體培養(yǎng)基中。24'C，搖瓶培養(yǎng)6d，培養(yǎng)基中布滿菌絲團(tuán)，置4'C冰箱中備用。將配制好的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基置接種量8%，加水至濕度50%，10kg裝于400X800塑料袋，袋口處于捆扎但松弛透氣狀態(tài)，于30'C通氣恒溫箱或溫室中培養(yǎng)5d，發(fā)酵結(jié)束后稱重，置40'C烘干，備用。1-3-2檢測指標(biāo)與方法檢測底物羧甲基纖維素鈉；葡聚糖(Sigma);木聚糖(Sigma);魔芋精粉(武漢強(qiáng)森)、果膠粉(Sigma)1-3-3酶活力定義與檢測方法纖維素酶酶活力測定方法采用國家農(nóng)業(yè)行業(yè)推薦標(biāo)準(zhǔn)NY/T912-2004。木聚糖酶活力酶活力測定方法參照NY/T912-2004，將底物更換為木聚糖溶液。P-葡聚糖酶酶活力測定方法參照NY/T912-2004，將底物更換為葡聚糖溶液。e-甘露聚糖酶酶活力測定方法參照NY/T912-2004，將底物更換為魔芋精粉溶液。果膠酶酶活力測定方法采用QB1502-1992。制備工藝見圖7。l-4添加劑輔配在如下配方比例內(nèi)輔配即可。25-35%的益生素、40-60%的非淀粉多糖酶和15-25%的酵母培養(yǎng)物。試驗例將48頭小尾寒羊早期斷奶羔羊(2月齡)按性別和體重相近的原則分為對照組和試驗組，對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗1組在基礎(chǔ)日糧中添加0.2%的酵母培養(yǎng)物，試驗2組飼喂基礎(chǔ)日糧中添加1%本發(fā)明添加劑，分兩期進(jìn)行共8周時間的飼養(yǎng)試驗。分別測定試驗一期、試驗二期和試驗全期的日增重。結(jié)果是添加0.2%酵母培養(yǎng)物的試驗1組較對照組育肥前期日增重提高7.6%，育肥后期提高4.8%，全期提高7.6%;試驗2組較對照組日增重育肥前期提高17.9%,育肥后期提高12.7%，全期提高15.1%。表l飼養(yǎng)試驗全期日增重表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表3飼養(yǎng)試驗育肥后期日增重表項目指標(biāo)對照組試驗1試驗2N頭161616平均Kg24.124.925.4標(biāo)準(zhǔn)差Kg4.34.84.60平均Kg30.431.532.5標(biāo)準(zhǔn)差Kg4.55.14.8平均g225.0235.7253.6標(biāo)準(zhǔn)差g38.542.543.5比對照組提高g10.728.6比對照組提高%4.812.7頭數(shù)始重末重円增重詞養(yǎng)試驗結(jié)論以酵母培養(yǎng)物作為促生長添加劑添加于基礎(chǔ)R糧提高了早期斷奶羔羊R增重，但程度較低；在基礎(chǔ)日糧中添加1%的本發(fā)明添加劑，將酵母培養(yǎng)物與益生菌和非淀粉多糖酶協(xié)同添加于日糧中，使得早期斷奶羔羊育肥期全期日增重提高15.1%,具有更為明顯的促生長作用。由此可見，羔羊育肥飼料中添加益生菌+非淀粉多糖酶+酵母培養(yǎng)物存在作用疊加的效果，其組合協(xié)同作用優(yōu)于其中的單項添加效果。1權(quán)利要求1、一種早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑，包括占總重量為25-35％的益生素、40-60％的非淀粉多糖酶和15-25％的酵母培養(yǎng)物。所述益生素由產(chǎn)朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌菌劑組成，其菌劑的活菌數(shù)含量均≥1×1010cfu/g，活菌數(shù)比為0.9-1.1∶0.9-1.1∶0.9-1.1；所述酵母培養(yǎng)物中粗蛋白含量≥50％，酸性蛋白酶活性≥106u/kg；所述非淀粉多糖酶包括纖維素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和果膠酶，酶活力分別≥4.0×105u/kg、5.0×106u/kg、5.0×106u/kg、3.0×105u/kg、5.0×105u/kg，其酶活力組合比例為1.1-1.3∶12-16∶15-16∶1.0-1.3∶1-2。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑，所述產(chǎn)朊假絲酵母為產(chǎn)朊假絲酵母(Cs"力's〃"JisAccc20060)。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物詞料添加劑，所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(fe"7A/ssu6tj7j'sCICC10081)。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑，所述植物乳桿菌為植物乳桿菌U3cz^s"7j^一/7t/cWs,Acccl1118)。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑，其中包括占重量為30%益生素、50%非淀粉多糖酶和20%酵母培養(yǎng)物。6、權(quán)利要求1-5任一早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑的制備方法(1)將產(chǎn)朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌的粉劑按活菌數(shù)比例混合得到益生素；(2)用釀酒酵母菌株和以豆粕為主.的培養(yǎng)基進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵制成酵母培養(yǎng)物；(3)用里氏木霉(7yi'c力oatenn3reese/)RutC-30菌株和以麥麩為主的培養(yǎng)基進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵方式制得非淀粉多糖酶；(4)將益生素、酵母培養(yǎng)物、非淀粉多糖酶按比例混合制成本發(fā)明添加劑。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，所述釀酒酵母菌株為釀酒酵母(&cc/37Y^"escerwj-幻'ae，Accc20063)。8、根據(jù)權(quán)利要7所述的制備方法，所述釀酒酵母的固態(tài)發(fā)酵條件為固體培養(yǎng)基為豆粕90%+麥麩10%,料水比例為l:1.5，接種量6%，培養(yǎng)溫度3(TC，培養(yǎng)時間96小時。9、根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，所述里氏木霉(Zric力oofer/z7sree5")RutC-30菌株固態(tài)發(fā)酵條件為固體發(fā)酵培養(yǎng)基為麥麩95g+玉米粉5g+K2HP043H200.lg+MgS047H200.16g，碳氮比21;接種量8%，濕度50%，于30'C通氣恒溫箱或溫室中培養(yǎng)5d。全文摘要本發(fā)明涉及“一種早期斷奶肉羊育肥復(fù)合生物飼料添加劑”，屬于畜牧飼料飼養(yǎng)
技術(shù)領(lǐng)域：
。包括由產(chǎn)朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌菌劑組成的益生素；含有纖維素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和果膠酶的非淀粉多糖酶；由釀酒酵母完全發(fā)酵豆粕形成的酵母培養(yǎng)物。本發(fā)明添加劑專用于早期斷奶(斷奶月齡≤2月齡)肉羊的育肥期日糧中，在3月齡～5月齡快速育肥肉羊全混合日糧中添加比例為1％。本發(fā)明添加劑能提供早期斷奶羔羊分泌不足及缺乏的消化酶、B族維生素、促長因子等功能性營養(yǎng)物，同時含有調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)環(huán)境的益生菌，可以提高肉羊羔羊的免疫力和健康水平，斷奶后育肥前期和后期提高日增重均在10％以上，顯著提高了經(jīng)濟(jì)效益。文檔編號A23K1/18GK101485402SQ200910077748公開日2009年7月22日申請日期2009年2月16日優(yōu)先權(quán)日2009年2月16日發(fā)明者單達(dá)聰,季海峰,張董燕,王四新,王雅民申請人:北京市農(nóng)林科學(xué)院