專利名稱：一種制備轉(zhuǎn)線粒體基因組小鼠的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的是一種制備轉(zhuǎn)線粒體基因組小鼠的方法。
生物學常識告訴我們，所有的真核生物都至少有兩套遺傳的機構(gòu)核基因組和線粒體基因組。前者攜帶的基因是通過孟德爾方式遺傳的，后者則是通過母系遺傳的，即通過卵傳遞給后代。現(xiàn)有的制備轉(zhuǎn)基因小鼠的方法所轉(zhuǎn)移的目的基因都是核基因。
本發(fā)明的目的在于提出一種制備轉(zhuǎn)線粒體基因組小鼠的方法，原則上它也可以用來制備帶有轉(zhuǎn)線粒體基因組的其他動物。這種品系的動物在理論研究和實際應用方面都有廣闊的前景，如用于研究人類線粒體基因缺陷的遺傳病、研究線粒體對動物胚胎發(fā)育的影響、培育具有高生產(chǎn)性能的核-質(zhì)雜種牲畜、以及克隆珍稀和瀕臨滅絕的動物，等等。
本發(fā)明的方法步驟如下一、將帶有核遺傳標記(如控制毛色遺傳的標記)的小鼠胚胎干細胞(ES細胞)的線粒體去除，代之以異源的線粒體。具體操作如下1.將小鼠ES細胞和異種動物的細胞分別培養(yǎng)在適當?shù)幕稀?br> 2.將培養(yǎng)的兩種細胞分別用細胞松弛素處理。
3.將處理的兩種細胞分別離心，獲得相應的核體和胞質(zhì)體。
4.取樣檢測上述核體和胞質(zhì)體的處理效果，調(diào)整處理方法，使(1)小鼠ES細胞的核體中不含有或幾乎不含有線粒體；(2)異種細胞的胞質(zhì)體中不殘留有任何的細胞核。
5.將達到上述(1)與(2)要求的兩種成分用PEG(聚乙二醇)或電擊的方法融合。
6.將上述的融合細胞在適當條件下培養(yǎng)一段時間。
二、將經(jīng)過上述處理的ES細胞注射到帶有不同的核遺傳標記的小鼠品系的早期囊胚中。
三、將上述囊胚移植到代孕母鼠的子宮中，飼養(yǎng)到直至產(chǎn)下子鼠。只要移植操作足夠多，這些子鼠中總可以發(fā)現(xiàn)具有核遺傳標記的鑲嵌性狀(如雜色皮毛)者。
四、取上述具有鑲嵌性狀的雌性小鼠與一般品系的小鼠雜交。對所產(chǎn)后代中的雌性小鼠進行線粒體基因組的鑒定篩選，只帶有外源線粒體基因組的留作種用。
五、用上述小鼠與一般品系的雄性小鼠交配繁殖，擴增雌性小鼠的數(shù)量，作為種用，建立起攜帶有外源線粒體基因組的小鼠品系。
本發(fā)明的效果是，可以獲得轉(zhuǎn)線粒體基因組的小鼠，且此性狀能夠通過母系穩(wěn)定地傳遞給后代。
權利要求
1.一種制備轉(zhuǎn)基因動物的方法，其特征在于，所轉(zhuǎn)移的是整個線粒體基因組，其操作步驟包括將帶有核遺傳標記的小鼠胚胎干細胞(ES細胞)的線粒體去除，代之以異源的線粒體。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述去除線粒方法包括如下步驟(1)將小鼠ES細胞和異種動物的細胞分別培養(yǎng)在適當?shù)幕希?2)將培養(yǎng)的兩種細胞分別用細胞松弛素處理；(3)將處理的兩種細胞分別離心，獲得相應的核體和胞質(zhì)體；(4)取樣檢測上述核體和胞質(zhì)體的處理效果，調(diào)整處理方法，使小鼠ES細胞的核體中不含有或幾乎不含有線粒體、異種細胞的胞質(zhì)體中不殘留有任何的細胞核；(5)將達到上述要求的兩種成分用PEG(聚乙二醇)或電擊的方法融合；(6)將上述的融合細胞在適當條件下培養(yǎng)一段時間，然后注射到囊胚中，以得到鑲嵌小鼠。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備轉(zhuǎn)線粒體基因組小鼠的方法，該方法所采用的步驟是在帶有核遺傳標記的小鼠胚胎干細胞中引入異源線粒體基因組，然后按照經(jīng)典的制備轉(zhuǎn)基因小鼠的方法將這種胚胎干細胞引入帶有不同的核遺傳標記的小鼠品系的早期囊胚中，做成鑲嵌小鼠。使具有鑲嵌性狀的雌性子代小鼠與一般品系的小鼠雜交，對所產(chǎn)后代中的雌性小鼠進行線粒體基因組的鑒定篩選，只帶有異源線粒體基因組的留作種用。
文檔編號A01K67/027GK1412302SQ0113645
公開日2003年4月23日 申請日期2001年10月18日 優(yōu)先權日2001年10月18日
發(fā)明者孫群 申請人:孫群