專利名稱：洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)及其栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食用菌的栽培技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)及其栽培方法。
為實現(xiàn)本發(fā)明的第一個目的，洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)按以下方法步驟(一)分離培養(yǎng)基組份配方及配方比基 料10-60g葡萄糖1.5-2g瓊 脂1.8-2g
水100mlpH6.5(二)分離方法(A)培養(yǎng)基的配制①、按配方稱量基料，切碎，加水煮汁，煮沸5-10分鐘，用紗布過濾，取濾液定容100ml；②、在上述步驟①所取得的濾液中加入葡萄糖和瓊脂，攪拌煮溶；③、將步驟②所得的溶液分別裝于試管中，每支試管10ml，用棉花塞住試管口；④、將步驟③制得的試管9支一扎用牛皮紙包上試管口端，置入高壓鍋中滅菌，溫度為121--126℃，壓力1.1-1.5kg/cm2，維持30分鐘；⑤、自然降壓后取出試管打斜面，凝固后得培養(yǎng)基；(B)制取母種取上述步驟制得的試管培養(yǎng)基，在無菌條件下對半撕開野生洛巴伊口蘑新鮮子實體，用無菌接種刀在菌蓋與菌柄交界處切取一小塊菌肉組織，無菌操作條件下移入培養(yǎng)基斜面上，置于干凈環(huán)境中培養(yǎng)；(C)母種純培養(yǎng)①、母種培養(yǎng)基配方及配方比C源 0-1.5gN源 0-0.5gKH2PO40.05gMgSO40.05g瓊脂 1.8g水 100m②、純培養(yǎng)方法a、培養(yǎng)基的配制按配方稱量各組份，加水煮汁，煮沸5分鐘，然后分別裝于試管中，每支試管10ml，用棉花塞住試管口，將裝有溶液的試管9支一扎用牛皮紙包上試管口端，置入高壓鍋中來菌，溫度為121-126℃壓力1.1-1.5kg/cm2，維持30分鐘，自然降壓后取出試管打斜面，凝固后得培養(yǎng)基；b、母種純培養(yǎng)無菌條件下將分離的野生洛巴伊口蘑菌株用無菌接種刀切取一小塊菌絲，無菌操作移入步聚a所得的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得母種；(D)原種的純培養(yǎng)技術(shù)①、原種培養(yǎng)基配方及配方比基料79-99％塘泥0-20％CaCO31％麥麩0-10％②、純培養(yǎng)方法a、拌料將上述各原料用自來水調(diào)節(jié)含水量60-65％；b、裝袋選取12-20cm2一端開口的聚丙烯袋，每袋裝入10cm高的料，上下松緊合適，然后用繩綁緊；c、滅菌滅菌有兩種方法，一是在高溫高壓設(shè)備中，溫度121-126℃，壓力為1.1-1.5kg/cm2，維持1.5-2小時；二是在常溫常壓設(shè)備中，溫度100℃，常壓維持8-10小時；d、冷卻將滅菌的培養(yǎng)料自然冷卻至30-35℃；e、接種在消毒過的干凈環(huán)境條件下，將洛巴伊口蘑母種一小塊接入上述所得培養(yǎng)料中；f、發(fā)菌將接菌的培養(yǎng)料移入干凈室中培養(yǎng)，室內(nèi)溫度為30℃，空氣相對溫度為70％，培養(yǎng)30-40天，菌絲長滿整個培養(yǎng)料；所述步聚(一)分離培養(yǎng)基的基料為馬鈴薯、棉籽殼或稻草。
所述分離培養(yǎng)基配方比為基料25-60g、葡萄糖2g、瓊脂2g、水100ml、pH6.5。
所述分離培養(yǎng)基配方比為基料25g、葡萄糖2g、瓊脂2g、水100ml、pH6.5。
所述步驟(C)母種純培養(yǎng)基的C源為蔗糖、麥芽糖、葡萄糖或可溶性淀粉；N源為蛋白胨、酵母膏、牛肉膏或NH4NO3。
所述步聚(D)原種培養(yǎng)基的基料為發(fā)酵甘蔗渣或棉籽殼。
為實現(xiàn)本發(fā)明的另一個目的，洛巴伊口蘑的栽培方法按以下步驟(A)拌料將栽培料用自來水調(diào)節(jié)含水量60-65％；(B)裝袋選取41×22cm2兩端開口的聚丙烯袋，每袋裝入20cm高的料，上下松緊合適，然后用纖維繩綁緊兩頭；(C)滅菌將步驟(B)裝好的培養(yǎng)料袋置入高溫高壓設(shè)備中，溫度為121-126℃，壓力為1.1-1.5kg/cm2，維持1.5-2小時；(D)冷卻將滅菌的培養(yǎng)料自然冷卻到30-35℃；(E)接種在消毒過的干凈環(huán)境條件下，將洛巴伊口蘑原種接入上述培養(yǎng)料中，兩頭接種，接種量為菌種鋪滿培養(yǎng)料表面，然后兩端袋口各用套環(huán)套上，外封無菌報紙，再用橡皮圈套??；(F)發(fā)菌將接菌的培養(yǎng)料移入干凈室中培養(yǎng)，室內(nèi)溫度為25-30℃，空氣相對濕度為70％，培養(yǎng)30-40天，菌絲長滿整個培養(yǎng)料，即可進行覆土；(G)覆土將發(fā)菌好的菌條袋子一端打開或?qū)⒋用摰?，然后以兩條緊密堆放在一起，表面覆蓋1cm厚的土，土質(zhì)采用肥沃的塘泥土或菜園土；(H)出菇管理旱晚在上述覆土層表面淋水一次，淋水量以土層發(fā)亮為度，保持室溫度在25℃以上，28-32天白色菇體形成；(I)采收待菇體長至6成熟，即菌蓋未打開之前采摘；(J)重復(fù)出菇管理將表面爛菇，雜物清潔干凈，停水10天后，早晚淋水一次，保持室溫25℃以上，28-32天白色菇體形成。
作為本發(fā)明洛巴伊口蘑栽培方法的改進，所述栽培料為棉籽殼、谷殼或甘蔗渣。
本發(fā)明的洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)及其栽培方法，經(jīng)過選擇不同的培養(yǎng)基，不同的培養(yǎng)條件，將營共生生活的野生洛巴伊口蘑菌株馴化為可營腐生生活，能獨立培養(yǎng)的菌株，其栽培料配方的生物學(xué)效率高，新菌株產(chǎn)量高，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為100％以上，新鮮子實單叢重達2.0kg左右。改變我國目前高溫期栽培食用菌困難的現(xiàn)狀，實現(xiàn)食用菌的周年栽培。
表1、栽培材料，栽培方法的比較及其生物學(xué)轉(zhuǎn)化率對照表

根據(jù)實施例一和實施例二，采用不同的基料棉籽殼與馬鈴薯，可見，馬鈴薯富含淀粉，棉籽殼富含多種糖類、脂肪等物質(zhì)，比馬鈴薯營養(yǎng)更全面豐富，所以，馬鈴薯是食用菌母種的常用培養(yǎng)基，但并不是洛巴伊口蘑的最佳培養(yǎng)基。實施例三稱取蔗糖1.5g，蛋白胨0.5g，KH2PO40.05g，MgSO40.05g，瓊脂1.8g，水100ml置入燒杯中，煮溶，分裝于試管中，每支試管10ml，試管口用棉花塞住，9支一扎用牛皮紙包上試管口端，放入高壓鍋中滅菌，溫度為121-126℃，壓力1.1-1.5kg/cm2，維持30分鐘，自然降壓為0時，取出打斜面，待斜面凝固后，在無菌條件下，將實施例一、二所述分離成功的野生洛巴伊口蘑菌株，用無菌接種刀切取一小塊菌絲，移入培養(yǎng)基斜面上，置于干凈環(huán)境中培養(yǎng)。菌絲長滿試管斜面無污染即為母種。
就實施例五和實施例六比較，覆土是該栽培技術(shù)的關(guān)鍵。其不僅有保溫保濕的作用，土壤中含有的多種微生物對子實體形成有促進作用。不同的土質(zhì)，其這種作用有差異。一般可選擇塘泥土、菜園土或鳳凰樹根際土。覆土?xí)r可采用脫袋覆土或不脫袋覆土，栽培料可選擇棉籽殼、谷殼或甘蔗渣。在選用泥土，覆土方式及栽培料的相互搭配中，以棉籽殼作為栽培料，采用熟料脫袋覆塘泥土為最佳，其生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達156％。
權(quán)利要求
1.一種洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)，按以下方法步驟(一)分離培養(yǎng)基組份配方及配方比基 料10-60g葡萄糖1.5-2g瓊 脂1.8-2g水100mlpH6.5(二)分離方法(A)培養(yǎng)基的配制①、按配方稱量基料，切碎，加水煮汁，煮沸5-10分鐘，用紗布過濾，取濾液定容100ml；②、在上述步驟①所取得的濾液中加入葡萄糖和瓊脂，攪拌煮溶；③、將步驟②所得的溶液分別裝于試管中，每支試管10ml，用棉花塞住試管口；④、將步驟③制得的試管9支一扎用牛皮紙包上試管口端，置入高壓鍋中滅菌，溫度為121-126℃，壓力1.1-1.5kg/cm2，維持30分鐘；⑤、自然降壓后取出試管打斜面，凝固后得培養(yǎng)基；(B)組織分離取上述步驟制得的試管培養(yǎng)基，在無菌條件下對半撕開野生洛巴伊口蘑新鮮子實體，用無菌接種刀在菌蓋與菌柄交界處切取一小塊菌肉組織，無菌操作條件下移入培養(yǎng)基斜面上，置于干凈環(huán)境中培養(yǎng)；(C)母種純培養(yǎng)①、母種培養(yǎng)基配方及配方比C源0-1.5gN源0-0.5gKH2PO40.05gMgSO40.05g瓊脂 1.8g水100m②、純培養(yǎng)方法a、培養(yǎng)基的配制按配方稱量各組份，加水煮汁，煮沸5分鐘，然后分別裝于試管中，每支試管10ml，用棉花塞住試管口，將裝有溶液的試管9支一扎用牛皮紙包上試管口端，置入高壓鍋中來菌，溫度為121-126℃壓力1.1-1.5kg/cm2，維持30分鐘，自然降壓后取出試管打斜面，凝固后得培養(yǎng)基；b、母種純培養(yǎng)無菌條件下將分離的野生洛巴伊口蘑菌株用無菌接種刀切取一小塊菌絲，無菌操作移入步聚a所得的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得母種；(D)原種的純培養(yǎng)技術(shù)①、原種培養(yǎng)基配方及配方比基料79-99％塘泥0-20％CaCo31％麥麩0-10％②、純培養(yǎng)方法a、拌料將上述各原料用自來水調(diào)節(jié)含水量60-65％；b、裝袋選取12-20cm2一端開口的聚丙烯袋，每袋裝入10cm高的料，上下松緊合適，然后用繩綁緊；c、滅菌滅菌有兩種方法，一是在高溫高壓設(shè)備中，溫度為121-126℃，壓力為1.1-1.5kg/cm2，維持1.5-2小時；二是在常溫常壓設(shè)備中，溫度100℃，常壓維持8-10小時；d、冷卻將滅菌的培養(yǎng)料自然冷卻至30-35℃；e、接種在消毒過的干凈環(huán)境條件下，將洛巴伊口蘑母種一小塊接入上述所得培養(yǎng)料中；f、發(fā)菌將接菌的培養(yǎng)料移入干凈室中培養(yǎng)，室內(nèi)溫度為30℃，空氣相對溫度為70％，培養(yǎng)30-40天，菌絲長滿整個培養(yǎng)料；
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于所述步聚(一)分離培養(yǎng)基的基料為馬鈴薯、棉籽殼或稻草。
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于所述分離培養(yǎng)基配方比為基料25-60g、葡萄糖2g、瓊脂2g、水100ml、pH6.5。
4.據(jù)權(quán)利要求1所述的洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于所述分離培養(yǎng)基配方比為基料25g、葡萄糖2g、瓊脂2g、水100ml、pH6.5。
5.據(jù)權(quán)利要求1所述的洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于所述步驟(C)母種純培養(yǎng)基的C源為蔗糖、麥芽糖、葡萄糖或可溶性淀粉；N源為蛋白胨、酵母膏、牛肉膏或NH4NO3。
6.據(jù)權(quán)利要求1所述的洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于所述步聚(D)原種培養(yǎng)基的基料為發(fā)酵甘蔗渣或棉籽殼。
7.一種洛巴伊口蘑的栽培方法，按以下步驟(A)拌料將栽培料用自來水調(diào)節(jié)含水量60-65％；(B)裝袋選取41×22cm2兩端開口的聚丙烯袋，每袋裝入20cm高的料，上下松緊合適，然后用纖維繩綁緊兩頭；(C)滅菌將步驟(B)裝好的培養(yǎng)料袋置入高溫高壓設(shè)備中，溫度為121-126℃，壓力為1.1-1.5kg/cm2，維持1.5-2小時；(D)冷卻將滅菌的培養(yǎng)料自然冷卻到30-35℃；(E)接種在消毒過的干凈環(huán)境條件下，將洛巴伊口蘑菌種接入上述培養(yǎng)料中，兩頭接種，接種量為菌種鋪滿培養(yǎng)料表面，然后兩端袋口各用套環(huán)套上，外封無菌報紙，再用橡皮圈套?。?F)發(fā)菌將接菌的培養(yǎng)料移入干凈室中培養(yǎng)，室內(nèi)溫度為25-30℃，空氣相對濕度為70％，培養(yǎng)30-40天，菌絲長滿整個培養(yǎng)料，即可進行覆土；(G)覆土將發(fā)菌好的菌條袋子一端打開或?qū)⒋用摰?，然后以兩條緊密堆放在一起，表面覆蓋1cm厚的土，土質(zhì)采用肥沃的塘泥土或菜園土；(H)出菇管理旱晚在上述覆土層表面淋水一次，淋水量以土層發(fā)亮為度，保持室溫度在25℃以上，28-32天白色菇體形成；(I)采收待菇體長至6成熟，即菌蓋未打開之前采摘；(J)重復(fù)出菇管理將表面爛菇，雜物清潔干凈，停水10天后，早晚淋水一次，保持室溫25℃以上，28-32天白色菇體形成。
8.據(jù)權(quán)利要求7所述的洛巴伊口蘑的栽培方法，其特征在于所述栽培料為棉籽殼、谷殼或甘蔗渣。
全文摘要
本發(fā)明屬于食用菌的栽培技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)及其栽培方法。本發(fā)明的洛巴伊口蘑菌株分離純培養(yǎng)技術(shù)及其栽培方法，經(jīng)過選擇不同的培養(yǎng)基，不同的培養(yǎng)條件，將營共生生活的野生洛巴伊口蘑菌株馴化為可營腐生生活，能獨立培養(yǎng)的菌株，其栽培料配方的生物學(xué)效率高，新菌株產(chǎn)量高，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為100％以上，新鮮子實單叢重達2.0kg左右。改變我國目前高溫期栽培食用菌困難的現(xiàn)狀，實現(xiàn)食用菌的周年栽培。
文檔編號A01G1/04GK1419809SQ01129940
公開日2003年5月28日 申請日期2001年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月15日
發(fā)明者劉月廉, 郭榮發(fā), 譚樹明, 溫美英 申請人:湛江海洋大學(xué)