評(píng)價(jià)機(jī)體免疫能力試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及生物領(lǐng)域，特別是涉及ATP作為生物標(biāo)志物用于評(píng)價(jià)免疫能力的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]機(jī)體擔(dān)負(fù)免疫功能的物質(zhì)基礎(chǔ)是免疫系統(tǒng)(immune system)。免疫系統(tǒng)由免疫組織與器官、免疫細(xì)胞和免疫分子組成。免疫系統(tǒng)可分為天然免疫系統(tǒng)(即非特異性免疫系統(tǒng))和獲得性免疫系統(tǒng)(即特異性免疫系統(tǒng))。獲得性免疫系統(tǒng)一般可以分成兩大類:體液免疫和細(xì)胞免疫。體液免疫主要涉及人體內(nèi)可以與各種外源抗原結(jié)合的抗體，它們是一類大分子蛋白質(zhì)，也稱作免疫球蛋白，包括IgG、IgA、IgM和IgD、IgE五種類型。細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)(cell-mediated immunity, CMI)主要涉及兩大類細(xì)胞:B細(xì)胞和T細(xì)胞，T細(xì)胞還可以分成CD4細(xì)胞和CD8細(xì)胞等；從功能上簡單地說，B細(xì)胞可以產(chǎn)生各種抗體，而T細(xì)胞本身就能殺死或吞噬進(jìn)入體內(nèi)的各種病原體。
[0003]如果Ig量降低或者B細(xì)胞、T細(xì)胞數(shù)目降低或功能異常(特別是CD4、CD8細(xì)胞)都提示可能存在免疫力下降?！懊庖吡ο陆怠敝傅木褪求w內(nèi)抗體水平降低或者T、B細(xì)胞功能降低，使得人體容易發(fā)生各種感染。勞累、營養(yǎng)不良、慢性疾病(例如結(jié)核病、肝炎、惡性腫瘤、糖尿病)、艾滋病、藥物(如化療藥或免疫抑制劑)等都會(huì)引起機(jī)體免疫力下降。免疫力低下的身體易于被感染或患癌癥；免疫力超常也會(huì)產(chǎn)生對(duì)身體有害的結(jié)果，如引發(fā)過敏反應(yīng)、自身免疫疾病等。因此，準(zhǔn)確檢測(cè)機(jī)體免疫力高低具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
[0004]目前檢測(cè)機(jī)體免疫能力的技術(shù)主要有:1.淋巴細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù):淋巴細(xì)胞前體沒有任何效應(yīng)功能，但在遇到抗原刺激時(shí)可以增殖，淋巴細(xì)胞增殖是評(píng)估機(jī)體免疫能力的一種重要方法。目前臨床上常用的檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖的方法有3H-TdR摻入法，MTT法以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)法。2.T細(xì)胞分泌功能測(cè)定技術(shù):體外培養(yǎng)的T細(xì)胞經(jīng)各種絲裂原或抗原刺激后，分泌各種細(xì)胞因子，通過檢測(cè)各細(xì)胞因子含量，生物學(xué)活性或基因表達(dá)水平，以反映T細(xì)胞功能。常用的檢測(cè)方法有Elisa、Eli spot和PCR/RT-PCR。3.T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性測(cè)定技術(shù):細(xì)胞毒性Τ淋巴細(xì)胞(CTLs)是T細(xì)胞在體內(nèi)或體外經(jīng)抗原刺激后產(chǎn)生的一種效應(yīng)細(xì)胞，可特異性裂解靶細(xì)胞，這種能力可以反映機(jī)體的抗腫瘤能力，因此細(xì)胞毒活性檢測(cè)可以反映機(jī)體的免疫能力。常用的方法有鉻釋放檢測(cè)和LDH釋放檢測(cè)。
[0005]但是現(xiàn)有免疫力檢測(cè)方法具有如下問題:1.淋巴細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)的缺陷:3H-TdR摻入法它表示的是某一定量培養(yǎng)液中細(xì)胞的DNA合成總量，而不是特異性T細(xì)胞的試劑數(shù)目，會(huì)受體外培養(yǎng)條件影響，還存在放射性核素污染污染問題；MTT方法受實(shí)驗(yàn)條件影響很大，培養(yǎng)體系需要嚴(yán)格控制；流式細(xì)胞技術(shù)分析需要一定的設(shè)備條件及所需實(shí)驗(yàn)時(shí)間周期較長。2.T細(xì)胞分泌功能測(cè)定技術(shù)的缺陷:Elisa方法和Elispot方法操作較繁瑣檢測(cè)所需時(shí)間較長，檢測(cè)的T細(xì)胞必須能分泌目標(biāo)細(xì)胞因子；PCR/RT-PCR存在假陽性和假陰性的結(jié)果，得到的不一定就是目的片段，操作嚴(yán)格否則易污染，最重要的是常規(guī)的PCR檢測(cè)不出潛伏性的目的片段。3.T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性測(cè)定技術(shù)的缺陷:鉻有放射性，不利于安全操作和廢物處置以及不是定量分析且操作步驟多；LDH是細(xì)胞本身代謝的產(chǎn)物，可能存在自發(fā)釋放現(xiàn)象，且效應(yīng)細(xì)胞作用于靶細(xì)胞后也會(huì)有損傷，同樣會(huì)釋放LDH，從而影響細(xì)胞毒活性測(cè)定的精確性。目前市場(chǎng)上所有相關(guān)的產(chǎn)品及檢測(cè)手段均不能對(duì)患者的治療效果進(jìn)行有效的分析與評(píng)估，并且對(duì)于HIV病人或免疫能力低下者均不能適用。因此，提供一種免疫力強(qiáng)弱的檢測(cè)裝置具有現(xiàn)實(shí)意義。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0006]有鑒于此，有必要針對(duì)上述的問題，提供一種評(píng)價(jià)機(jī)體免疫能力試劑盒。
[0007]本實(shí)用新型通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的:
[0008]評(píng)價(jià)機(jī)體免疫能力試劑盒，包括盒子，盒子內(nèi)可拆卸的安裝酶標(biāo)板、盒子內(nèi)設(shè)有免疫能力評(píng)估卡、ATP標(biāo)準(zhǔn)液瓶、10XATP標(biāo)準(zhǔn)液稀釋液瓶、檢測(cè)試劑I液瓶、檢測(cè)試劑II液瓶、檢測(cè)組分A液管和檢測(cè)組分B液管。
[0009]優(yōu)選地，所述盒子包括盒體、頂蓋以及泡沫板；盒體內(nèi)安裝泡沫板和酶標(biāo)板，泡沫板上開設(shè)有試劑瓶的安裝孔。
[0010]優(yōu)選地，所述ATP標(biāo)準(zhǔn)液瓶、10XATP標(biāo)準(zhǔn)液稀釋液瓶、檢測(cè)試劑I液瓶、檢測(cè)試劑II液瓶、檢測(cè)組分A液管和檢測(cè)組分B液管安放在安裝孔內(nèi)。
[0011]優(yōu)選地，所述盒體內(nèi)設(shè)有隔板，隔板位于泡沫板和酶標(biāo)板之間。
[0012]優(yōu)選地，所述酶標(biāo)板為96孔不透明酶標(biāo)板。
[0013]優(yōu)選地，所述免疫能力評(píng)估卡設(shè)置于頂蓋內(nèi)表面或泡沫板上。
[0014]優(yōu)選地，所述免疫能力評(píng)估卡根據(jù)ATP濃度對(duì)應(yīng)設(shè)有免疫能力低下、免疫能力正常和免疫能力超常三檔。
[0015]優(yōu)選地，所述免疫能力低下檔對(duì)應(yīng)ATP濃度<150ng/mL;免疫能力正常檔對(duì)應(yīng)150ng/mL彡ATP濃度< 500ng/mL，免疫能力超常檔對(duì)應(yīng)ATP的濃度彡500ng/mL。
[0016]三磷酸腺苷(ATP)在生物體的生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用。血清免疫球蛋白的合成以及分泌乃至發(fā)揮功能的過程都需要ATP的參與；另一方面T細(xì)胞發(fā)揮功能來殺死或吞噬進(jìn)入體內(nèi)的各種病原體也需要ATP提供能量；Ca2+、DAG等第二信使對(duì)于免疫信號(hào)通路的傳導(dǎo)以及放大起著必不可少的作用，但它們的合成分泌以及跨膜運(yùn)輸都需要ATP ;此外ATP產(chǎn)生后會(huì)分泌到胞外，與其受體結(jié)合，進(jìn)而激活第二信使，進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
[0017]本實(shí)用新型評(píng)價(jià)機(jī)體免疫能力試劑盒的檢測(cè)原理為:螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)能高效利用ATP，催化底物熒光素反應(yīng)產(chǎn)生熒光(檢測(cè)波長為562nm)。當(dāng)熒光素酶和熒光素都過量時(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)產(chǎn)生的熒光與ATP的濃度成很好的線性依賴關(guān)系，并具有$父尚的敏感性。ATP濃度的尚低和樣品免疫能力強(qiáng)弱呈正相關(guān)，酶標(biāo)儀檢測(cè)分析確定免疫能力強(qiáng)弱。因此，細(xì)胞的三磷酸腺苷(ATP)值的測(cè)定對(duì)于檢測(cè)機(jī)體免疫能力具有重要的臨床意義，對(duì)免疫能力做出客觀的評(píng)估，進(jìn)而能夠提早預(yù)防感染，及早進(jìn)行干預(yù)治療免疫性疾病，又能檢測(cè)治療恢復(fù)的效果。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型具有如下有益效果:
[0019]本實(shí)用新型評(píng)價(jià)免疫能力試劑盒以ATP作為生物標(biāo)志物，可對(duì)細(xì)胞整體水平的免疫狀態(tài)進(jìn)行分析進(jìn)而評(píng)估免疫性疾病患病風(fēng)險(xiǎn)，通過對(duì)個(gè)體免疫狀態(tài)診斷評(píng)估進(jìn)行分類:高危易感者，中危易感者以及低危易感者，根據(jù)免疫狀態(tài)以及疾病的特異性診斷，能更有效對(duì)患者進(jìn)行個(gè)體化診斷和治療，也能有效的控制疾病人群，為免疫性疾病患者篩查提供一種新的、費(fèi)用低的、個(gè)體化的快速檢測(cè)手段。本實(shí)用新型適用于HIV病人或免疫能力低下者更具有整體性與說服力；還可以通過測(cè)定同一患者不同疾病階段的ATP濃度，對(duì)患者的治療效果進(jìn)行有效的分析與評(píng)估。
【附圖說明】
[0020]圖1為本實(shí)用新型其中一個(gè)實(shí)施例的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0021]附圖標(biāo)記說明:
[0022]1-白色不透明酶標(biāo)板，2-標(biāo)準(zhǔn)液瓶，3-10 X標(biāo)準(zhǔn)液稀釋液瓶，4_檢測(cè)試劑I液瓶，
5-檢測(cè)試劑II液瓶，6-檢測(cè)組分A液管，7-檢測(cè)組分B液管，8-泡沫板，9-盒體，10-頂蓋，I1-隔板，12-免疫能力評(píng)估卡。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為了便于本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，下面將結(jié)合附圖以及實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行進(jìn)一步描述。本實(shí)施例中使用的試劑及儀器都是市售產(chǎn)