用于快速檢定適用抗蛇毒血清的蛇毒試片裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型關(guān)于一種蛇毒檢驗(yàn)試片，特別是指一種能快速且有效地檢測(cè)出人體血 清中是否含有特定蛇毒的快速檢驗(yàn)試片，供第一線醫(yī)護(hù)人員選用適當(dāng)抗蛇毒血清加以治 療。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，毒蛇咬傷發(fā)生率及死亡率最高的地區(qū)，仍在于南亞、東南亞等熱帶地區(qū)，在 該些地區(qū)毒蛇咬傷往往容易造成死亡及失能，先前的醫(yī)療觀念主張?jiān)庥龆旧咭幕颊撸?醫(yī)師會(huì)嘗試要求該患者去辨識(shí)是哪一只毒蛇所咬傷，或希望病患或家屬將毒蛇帶來醫(yī)院辨 識(shí)，指認(rèn)正確的毒蛇種類。但毒蛇的外貌相當(dāng)多變復(fù)雜，若要求病人活捉及打死毒蛇則很有 可能造成旁人和患者的生命危險(xiǎn)；再加上依照患者主觀描述毒蛇的外貌仍有判斷錯(cuò)誤的風(fēng) 險(xiǎn)，進(jìn)而導(dǎo)致使用錯(cuò)誤的治療方法。
[0003] 臺(tái)灣眼鏡蛇（Najaatra)屬于亞洲種，是重要的毒蛇之一。根據(jù)統(tǒng)計(jì)，眼鏡蛇 咬傷事件占全臺(tái)灣毒蛇咬傷事件的10%。在中部地區(qū)，被眼鏡蛇的咬傷頻率與赤尾鮐 (Trimeresurusstejnegeri)或龜殼花（Protobothropsmucrosquamatus)的咬傷步頁(yè)率相 當(dāng)。受到眼鏡蛇咬傷時(shí)，臨床癥狀主要出現(xiàn)局部組織紅腫、發(fā)炎反應(yīng)后的組織壞死及少見的 神經(jīng)毒性等癥狀。由于眼鏡蛇咬傷初期，常因明顯的組織紅、腫及缺少典型的神經(jīng)癥狀，因 此常被誤認(rèn)為是赤尾鮐、龜殼花等毒蛇咬傷，而延遲給予正確且專一的抗血清的時(shí)機(jī)，延誤 診斷的結(jié)果，造成病人肢體局部傷口皮膚嚴(yán)重的壞死、潰爛，嚴(yán)重者需要做外科清創(chuàng)及皮膚 移植手術(shù)，而毒蛇咬傷的適當(dāng)處置安排，仰賴于醫(yī)師的臨床診斷經(jīng)驗(yàn)。再者，由于許多病患 可能是被非毒蛇咬傷，然而在缺乏明確的癥狀出現(xiàn)之前，需要觀察至少24小時(shí)，這樣的現(xiàn) 象不僅浪費(fèi)醫(yī)療資源也耗費(fèi)相當(dāng)多的人力成本。而真正被毒蛇咬傷的患者，卻因?yàn)樵缙谠\ 斷工具的缺乏，無法及時(shí)判別毒蛇種類及蛇咬傷的嚴(yán)重性，導(dǎo)致未能及時(shí)使用抗蛇毒血清 而造成更嚴(yán)重的臨床癥狀，甚至產(chǎn)生不可逆的組織損傷。
[0004] 根據(jù)林奈氏生物分類法（Linnaeantaxonomy)，眼鏡蛇屬（Naja)分類在蝙蝠蛇科 (Elapidae)下，目前約有20多個(gè)物種已確認(rèn)并歸類在眼鏡蛇屬。此屬的成員主要分布于 中東、東南亞、非洲、印度大陸等地。過去研究發(fā)現(xiàn)，眼鏡蛇屬的主要蛇毒成分與其他屬的蛇 毒組成具有相似的蛇毒蛋白（cobrotoxins)，差別在于濃度與含量的不同（Chang,etal.， 2000;Joubert&Taljaard, 1980;Wei,etal. , 2003) ；NPAV(NeuroPolyvalentSnake Antivenom)抗蛇毒血清對(duì)于大部分眼鏡蛇屬的蛇毒具有不同程度的中和效果（Leonget al.，2012)，即使同屬于蝙蝠蛇科的不同蛇種，其蛇毒組成成份雖有差異，卻仍具有相似之 處。
[0005]同樣地，蛇毒的差異性極其微細(xì)且種類繁多，蛇毒檢測(cè)的應(yīng)用上仍存在難度需要 克服，例如：樣本體積必須要多、要新鮮，取樣必須接近傷口，其檢測(cè)靈敏度亦較低，在臨床 的使用上有許多的限制。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0006] 本實(shí)用新型的目的在于提供一種用于快速檢定適用抗蛇毒血清的蛇毒試片裝置， 在于提供緊急時(shí)刻，可以協(xié)助醫(yī)護(hù)人員快速且正確的選用適當(dāng)抗蛇毒血清加以治療，于短 時(shí)間內(nèi)進(jìn)彳丁有效治療。
[0007] 本實(shí)用新型提供一種用于快速檢定適用抗蛇毒血清的蛇毒試片裝置，包括：
[0008] -試卡本體，包括一內(nèi)槽及與該內(nèi)槽相對(duì)應(yīng)接合的一基底層及一載體層，該載體 層上設(shè)置有相間隔的一檢體墊片、一與該檢體墊片相鄰接的金標(biāo)結(jié)合墊片、一吸收墊片及 一連接在該金標(biāo)結(jié)合墊片與該吸收墊片之間的分析薄膜，該分析薄膜上依序形成相間隔的 一測(cè)試線區(qū)及一控制線區(qū)，該測(cè)試線區(qū)包括多個(gè)抗蛇毒血清測(cè)試線；以及多個(gè)植入單元，包 括一分布于該金標(biāo)結(jié)合墊片的抗蛇毒金標(biāo)抗體，及多個(gè)分別固定于該測(cè)試線區(qū)的與蛇毒蛋 白具有特異性結(jié)合的抗蛇毒抗體，及固定于該控制線區(qū)的與該抗蛇毒金標(biāo)抗體結(jié)合的第二 抗體。
[0009] 其中該固定于該測(cè)試線區(qū)的抗蛇毒抗體由分別與抗同屬的不同種蛇毒蛋白具有 特異性結(jié)合的抗體組成。
[0010] 其中該固定于該測(cè)試線區(qū)的抗蛇毒抗體進(jìn)一步包括與抗不同屬的蛇毒蛋白具有 特異性結(jié)合的抗體。
[0011] 其中該植入單元包含5-100ng/ml的抗蛇毒抗體。
[0012] 其中該分布于該金標(biāo)結(jié)合墊片的抗蛇毒金標(biāo)抗體包含由不同抗蛇種蛇毒的抗體 組成的抗體混和物。
[0013] 本實(shí)用新型具有的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0014] 本實(shí)用新型只需要將檢體滴入該試卡本體的載體層的檢體墊片上，利用側(cè)流免疫 層析技術(shù)（lateral-flowimmunochromatographicassaytechnique,LFA)通過流體白然 的毛細(xì)作用，該檢體往該金標(biāo)結(jié)合墊片移動(dòng)，并與該金標(biāo)結(jié)合墊片內(nèi)的抗蛇毒金標(biāo)抗體相 互作用，再繼續(xù)沿該分析薄膜移動(dòng)至該測(cè)試線區(qū)與該控制線區(qū)，分別與該蛇毒蛋白具有特 異性結(jié)合的抗蛇毒抗體及該抗蛇毒金標(biāo)抗體結(jié)合的第二抗體相互作用，產(chǎn)生紅色指示線， 就能分別借由判讀該控制線區(qū)是否呈色判讀該檢驗(yàn)試片是否有效，及借由判讀該測(cè)試線區(qū) 呈色結(jié)果判讀該檢體是否含有蛇毒及其蛇種，借此，使本實(shí)用新型能快速且有效地檢驗(yàn)出 生物檢體中是否含有特定的蛇毒，以實(shí)時(shí)進(jìn)行治療。
[0015] 本實(shí)用新型的特點(diǎn)在于，該測(cè)試線區(qū)可能出現(xiàn)一道或多道的紅色指示線，表示醫(yī) 護(hù)人員可依照紅色指示線，選用任一種抗蛇毒血清加以治療，亦即通過本實(shí)用新型可以協(xié) 助第一線救護(hù)人員選用有效的抗蛇毒血清。
【附圖說明】
[0016] 圖1是一不完整的正視示意圖，說明現(xiàn)有的一蛇毒快速檢驗(yàn)試片一較佳實(shí)施例的 一試卡本體的一載體層的配置型式；
[0017]圖2是一不完整的側(cè)視示意圖，說明該較佳實(shí)施例的試卡本體由一基底層與該載 體層相對(duì)應(yīng)接合的情形；
[0018]圖3是一蛇毒試片裝置其較佳實(shí)施例的立體示意圖；
[0019]圖4是一側(cè)視的使用示意圖，說明將含有非眼鏡蛇科蛇毒的檢體滴加到該較佳實(shí) 施例的試卡本體的檢體墊片上的情形；
[0020] 圖5-側(cè)視的使用示意圖，說明將含有眼鏡蛇科蛇毒的檢體滴加到該較佳實(shí)施例 的試卡本體的檢體墊片上的情形；
[0021] 圖6是該蛇毒試片裝置其較佳實(shí)施例的正視示意圖；
[0022] 圖7是一使用示意圖，說明以該較佳實(shí)施例的試卡本體測(cè)試該檢體后呈現(xiàn)二道紅 色指示線時(shí)的顯示結(jié)果。
[0023] 圖中：
[0024] 10檢體；
[0025] 100非眼鏡蛇毒；
[0026]101眼鏡蛇毒；
[0027]2蛇毒試片裝置；
[0028] 3試卡本體；
[0029] 31基底層；
[0030] 32載體層；
[0031] 321檢體墊片；
[0032] 322吸收墊片；
[0033] 323金標(biāo)結(jié)合墊片；
[0034] 324分析薄膜；
[0035] 325測(cè)試線區(qū)；
[0036]3251測(cè)試線；
[0037]3252測(cè)試線；
[0038]3253測(cè)試線；
[0039]3254測(cè)試線；
[0040]326控制線區(qū)；
[0041]4植入單元；
[0042]41抗蛇毒金標(biāo)抗體；
[0043]410金標(biāo)抗體-眼鏡蛇蛇毒蛋白結(jié)合體；
[0044]411兔抗Naja atra蛇毒抗體；
[0045]412奈米金顆粒；
[0046]42抗蛇毒抗體；
[0047]43抗蛇毒抗體；
[0048]44抗蛇毒抗體；
[0049]45抗蛇毒抗體；
[0050]46羊抗兔抗體；
[0051]43兔抗Naja atra抗體；
[0052]5卡匣；
[0053]51殼體；
[0054]511第一標(biāo)記；
[0055]512第二標(biāo)記；
[0056] 513第三標(biāo)記；
[0057] 514第四標(biāo)記；
[0058] 515第五標(biāo)記；
[0059] 52加樣區(qū)；
[0060] 53 判讀窗口。
【具體實(shí)施方式】
[0061] 下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步說明，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員 可以更好的理解本實(shí)用新型并能予以實(shí)施，但所舉實(shí)施例不作為對(duì)本實(shí)用新型的限定。
[0062] 參閱圖1、圖3與圖5,本實(shí)用新型用于快速檢定適用抗蛇毒血清的蛇毒試片裝置 2的較佳實(shí)施例是用以檢測(cè)一生物檢體10中的眼鏡蛇毒101，在該實(shí)施例中是以該蛇毒試 片裝置2偵測(cè)該生物檢體10中的蛇毒，該蛇毒試片裝置2包含一試卡本體3、一設(shè)置于該試 卡本體3的植入單元4,及一圍繞該試卡本體3設(shè)置的卡匣5。
[0063] 參閱圖1與圖2,該試卡本體3包括相對(duì)應(yīng)接合的一基底層（Backing) 31及一 載體層32,該載體層32具有相間隔設(shè)置的一檢體墊片（Samplepad)321、一吸收墊片 (Absorbentpad) 322、一與該檢體墊片321相鄰接的金標(biāo)結(jié)合墊片（Conjugatedrelease pad) 323,及一連接在該金標(biāo)結(jié)合墊片323與該吸收墊片322之間的分析薄膜324,在該分 析薄膜324上并依序形成相間隔設(shè)置的一測(cè)試線區(qū)325及一控制線區(qū)326,在該測(cè)試區(qū)325 上依序形成一測(cè)試線3251、一測(cè)試線3252、一測(cè)試線3253及一測(cè)試線3254。
[0064] 其中，該檢體墊片321、吸收墊片322及金標(biāo)結(jié)合墊片323均是由玻璃纖維材質(zhì)所 制成。且該分析薄膜324屬于硝化纖維膜（cellulosenitratemembrane，簡(jiǎn)稱為NC膜）。
[0065] 參閱圖4與圖5,該植入單元4包括多個(gè)分布在該試卡本體3的金標(biāo)結(jié)合墊片323 內(nèi)的抗蛇毒金標(biāo)抗體41、多個(gè)固定在該試卡本體3的分析薄膜324的控制線區(qū)326,用以與 該等金標(biāo)抗體41相結(jié)合呈色的第二抗體46、及多個(gè)分別固定在該分析薄膜324測(cè)試線區(qū) 325的測(cè)試線3251、測(cè)試線3252、測(cè)試線3253及測(cè)試線3254,用以與結(jié)合有蛇毒101的金 標(biāo)抗體41相結(jié)合呈色的抗蛇毒抗體42、抗蛇毒抗體43、抗蛇毒抗體44及抗蛇毒抗體45。
[0066] 其中，該多個(gè)抗蛇毒金標(biāo)抗體41實(shí)質(zhì)上為兔抗Naja蛇毒（Rabbitanti-Naja IgG)的金標(biāo)抗體，且是使用多個(gè)兔抗Naja蛇毒抗體411分別與一膠體金溶液中的多個(gè)奈 米金顆粒412相結(jié)合而制成。為了使呈色優(yōu)化，并可推廣應(yīng)用至東南亞地區(qū)，通過試片上 奈米金顆粒與不同比例的兔抗蛇毒抗體混合如表1。該等第二抗體46實(shí)質(zhì)上為羊抗兔抗 體（Goatanti-rabbitIgG)、該多個(gè)抗蛇毒抗體42實(shí)質(zhì)上為兔抗Najasiamensis抗體 (Rabbitanti-NajasiamensisIgG)、該等多個(gè)蛇毒抗體43實(shí)質(zhì)上為兔抗Najanaja抗體 (Rabbitanti-NajanajaIgG)、該多個(gè)抗蛇毒抗體44實(shí)質(zhì)上為兔抗Najakao