采用UIO-66-NH₂材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于金屬?有機(jī)框架復(fù)合材料應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種采用UIO?66?NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法。所述方法是采用三氟乙酸將血清樣品水解，除去蛋白質(zhì)后離心得到血清處理液；將所得血清處理液與UIO?66?NH2材料混合，經(jīng)漩渦振蕩萃取，血清處理液中的唾液酸被萃取到UIO?66?NH2材料中，離心后得到含有唾液酸的UIO?66?NH2材料；采用乙酸水溶液超聲洗脫離心后得到的含有唾液酸的UIO?66?NH2材料，唾液酸從UIO?66?NH2材料中完全洗脫得到洗脫液；熒光衍生試劑柱前衍生后，再進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。采用本發(fā)明方法測(cè)定血清中唾液酸的含量具有高選擇性、高靈敏性的特點(diǎn)。
【專利說明】
采用U10-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于金屬-有機(jī)框架復(fù)合材料應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種采用UI0-66- N也材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 金屬-有機(jī)骨架材料(MOF)是金屬離子與有機(jī)配體經(jīng)配位鍵連接成的一類新型的 納米多孔材料。由于MOF材料具有八面體結(jié)構(gòu)，其不僅具有孔隙率高、比表面積大、孔徑可 調(diào)、結(jié)構(gòu)多樣性等特點(diǎn)，而且在水中和有機(jī)溶液中表現(xiàn)出極大的熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性，因 而在諸多領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，如氣體吸附分離、催化作用、藥物輸送、生物成像等領(lǐng)域。然 而，MOF材料在分析化學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他領(lǐng)域。
[0003] 唾液酸是一種含有簇基的九碳糖，與生物體內(nèi)很多生理功能相關(guān)。但是由于含有 唾液酸樣品的成分復(fù)雜，且唾液酸的測(cè)定也易受到其他成分的干擾，測(cè)定難度較大。因此， 對(duì)樣品進(jìn)行前處理是準(zhǔn)確分析樣品中組分含量必不可少的步驟。分散固相萃取技術(shù)利用分 散的吸附劑將樣品溶液中被分析物吸附，分離樣品的基體和雜質(zhì)，然后用洗脫液解吸附或 者加熱解吸附，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物的分離和富集。目前一些商用吸附劑已用于唾液酸的吸 附，但是其選擇性、靈敏性較差，所得結(jié)果也相差較大。因此，開發(fā)一種高效靈敏的測(cè)定血清 中唾液酸含量的方法刻不容緩。
[0004] 目前，國(guó)內(nèi)外還未發(fā)現(xiàn)采用UI0-66-N也材料測(cè)定血清中唾液酸含量方法的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種高選擇性、高靈敏性的采用UI0-66-N也材料測(cè)定血清中 唾液酸含量的方法。
[0006] 本發(fā)明所述的采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，包括W下步 驟：
[0007] (1)制備血清處理液:采用=氣乙酸將血清樣品水解，除去蛋白質(zhì)后離屯、得到血清 處理液；
[000引（2)分散固相萃取:將步驟（1)所得血清處理液與UI0-66-N也材料混合，經(jīng)縱滿振 蕩萃取，血清處理液中的唾液酸被萃取到UI0-66-NH2材料中，離屯、后得到含有唾液酸的 UI0-66-N也材料；
[0009] (3)超聲洗脫:采用乙酸水溶液超聲洗脫步驟(2)離屯、后得到的含有唾液酸的UIO- 66-N也材料，唾液酸從UI0-66-N也材料中完全洗脫得到洗脫液；
[0010] (4)衍生處理、色譜檢測(cè)：將洗脫液通過巧光衍生試劑進(jìn)行柱前衍生，最后進(jìn)行高 效液相色譜檢測(cè)。
[001。 其中，
[001^ 步驟(2)中UI0-66-畑淋料的制備方法如下：
[0013]先將四氯化錯(cuò)、2-氨基對(duì)苯二甲酸和水混合，加入N，N-二甲基甲酯胺后，攬拌至形 成透明溶液，加熱后在靜止?fàn)顟B(tài)下進(jìn)行結(jié)晶，結(jié)晶完畢后經(jīng)冷卻、過濾、洗涂、干燥、提取，得 到UI0-66-N出材料粗品，再采用甲醇對(duì)粗品進(jìn)行洗涂，最后烘干后密閉保存。
[0014] 步驟(2)中，步驟（1)所得血清處理液與UI0-66-N此材料的體積質(zhì)量比例是2:8~ 10，血清處理液WmL計(jì)，UI0-66-N出材料Wmg計(jì)。
[0015] 步驟(2)中滿旋振蕩萃取時(shí)間5~7min，滿旋振蕩萃取完畢后，離屯、10~20min得到 含有唾液酸的UI0-66-N出材料。
[0016] 步驟(3)中乙酸水溶液中乙酸的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為4~6%。
[0017] 步驟（3)中乙酸水溶液與步驟（2)中UI0-66-N出材料的體積質(zhì)量比例是0.2 :8~ 10，乙酸水溶液WmL計(jì)，UI0-66-N出材料Wmg計(jì)。
[0018] 步驟(3)中洗脫時(shí)間為5~7min。
[0019] 步驟(4)中巧光衍生試劑為2-[2-(7H-二苯并[a，g郵挫-乙氧基)-乙基阱基甲酸 醋（DBCEEC)。
[0020] 步驟(4)中柱前衍生步驟如下：向2mL安飯瓶中依次加入20化L濃度為O.Olmol/L的 2-[2-(7H-二苯并[a, g郵挫-乙氧基)-乙基阱基甲酸醋乙臘溶液、45化冰乙酸、200化洗脫 液，封口后在70°C下反應(yīng)65min，取出冷卻后，加入乙臘定容到ImL，再經(jīng)0.22皿尼龍濾膜過 濾。
[0021 ] 衍生反應(yīng)式如下：
[0022]
[0023] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0024] 本發(fā)明是一種高選擇性、高靈敏性的測(cè)定血清中唾液酸含量的方法。本發(fā)明制備 的UI0-66-N也材料，目標(biāo)物進(jìn)入骨架材料內(nèi)部的S角形窗口孔徑為6 A:，有利于目標(biāo)物的吸 附，同時(shí)具有較大的比表面積，BET表面積和Langmuir表面積分別達(dá)到1112mVg和1313mVg， UI0-66-N出材料具有孔徑大小適中的多孔結(jié)構(gòu)并且具有功能基團(tuán)的高度選擇性，在多種有 機(jī)溶劑及酸性條件下具有很好的穩(wěn)定性。本發(fā)明將UI0-66-N出材料作為分散固相萃取吸附 劑用于血清樣品中唾液酸的萃取，并成功應(yīng)用于高效液相色譜檢測(cè)。本發(fā)明只需使用少量 的吸附劑和較短的時(shí)間就能實(shí)現(xiàn)低濃度的微量萃取富集，具有非常高的萃取能力和效率。
【附圖說明】
[0025] 圖I是本發(fā)明UI0-66-N出材料的掃描電鏡圖；
[0026] 圖2是本發(fā)明UI0-66-畑2材料的X畑衍射圖；
[0027] a、UI0-66-N出材料標(biāo)準(zhǔn)譜圖；
[002引 b、本發(fā)明UI0-66-N出材料譜圖；
[0029] 圖3是實(shí)施例1-3唾液酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和血清樣品色譜圖；
[0030] 其中：1、N-乙酷神經(jīng)氨酸;2、N-徑乙酷神經(jīng)氨酸;3、衍生試劑；
[0031 ] A、實(shí)施例1唾液酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖；
[0032] B、實(shí)施例2正常血清樣品的高效液相色譜圖；
[0033] C、實(shí)施例3癌癥血清樣品的高效液相色譜圖；
[0034] 圖4是本發(fā)明實(shí)施例4中血清樣品色譜圖；
[0035] 其中：1、N-乙酷神經(jīng)氨酸;2、N-徑乙酷神經(jīng)氨酸;3、衍生試劑。
【具體實(shí)施方式】
[0036] W下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。
[0037] 實(shí)施例1
[0038] 本發(fā)明UI0-66-N出材料的制備過程如下：
[0039] 準(zhǔn)確稱量3.15g四氯化錯(cuò)（13.5mmol)，2.45g 2-氨基對(duì)苯二甲酸（13.5mmol)和 0.24g水（13.5mmol)放到反應(yīng)蓋中，用489.7g N，N-二甲基甲酯胺(6.7mol)溶解，磁力攬拌 至形成透明溶液。將反應(yīng)蓋在120°C加熱反應(yīng)化，結(jié)晶化過程保持在靜止?fàn)顟B(tài)。反應(yīng)后冷卻， 過濾、洗涂、干燥，借助索氏提取器將得到的UI0-66-N此粗品用甲醇沖洗3天，除去晶體中殘 余的DMF，最后得到的晶體在60°C烘干。為防止UI0-66-N此材料吸潮降低活性，將晶體密閉 保存。
[0040] 本發(fā)明將UI0-66-N此材料成功應(yīng)用于唾液酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的萃取，并借助于高效液相 色譜對(duì)唾液酸進(jìn)行靈敏檢測(cè)。
[0041] 具體步驟如下；
[0042] (1)量取2mL濃度為lxl〇-5mol/L的唾液酸標(biāo)準(zhǔn)溶液加入4mL離屯、管中，然后加入9mg 合成的UI0-66-N此材料，滿旋振蕩6min充分萃取得到萃取液，在100(K)rpm，4°C條件下離屯、 IOmin棄掉上清液；
[0043] (2) 0.2mL含5Wt. %乙酸的水溶液加入離屯、后的試管中，超聲6min，使唾液酸從 UI0-66-N出材料中完全洗脫；
[0044] (3)將洗脫液通過巧光衍生試劑進(jìn)行柱前衍生，最后進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。
[0045] 柱前衍生步驟如下：向2血安飯瓶中依次加入2(K)化濃度為O.Olmol/L的2-[2-(7H- 二苯并[a, g]巧挫-乙氧基)-乙基阱基甲酸醋乙臘溶液、4扣L冰乙酸、200化洗脫液，封口后 在70 °C下反應(yīng)6 5m i n，取出冷卻后，加入乙臘定容到ImL，再經(jīng)0.2 2曲1尼龍濾膜過濾。
[0046] 實(shí)施例2
[0047] 本發(fā)明采用實(shí)施例1制備的UI0-66-N出材料，成功應(yīng)用于人類正常血清中唾液酸 的萃取，并借助于高效液相色譜對(duì)唾液酸進(jìn)行靈敏檢測(cè)。
[004引具體步驟如下；
[0049] (1)采用S氣乙酸將血清樣品水解，除去蛋白質(zhì)后離屯、得到血清處理液；
[0化0] (2)量取2mL血清處理液加入4mL離屯、管中，然后加入9mg合成的UI0-66-N此材料， 滿旋振蕩6min充分萃取得到萃取液，在1000化pm，4°C條件下離屯、IOmin棄掉上清液；
[0 0川 （3) 0.2 m L含5 W t. %乙酸的水溶液加入離屯、后的試管中，超聲6 m i n，使唾液酸從 UIO-66-N出材料中完全洗脫；
[0052] (4)將洗脫液通過巧光衍生試劑進(jìn)行柱前衍生，最后進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。
[0053] 其余如實(shí)施例1。
[0054] 實(shí)施例3
[0055] 本發(fā)明采用實(shí)施例1制備的UI0-66-N出材料，成功應(yīng)用于人類癌癥血清中唾液酸 的萃取，并借助于高效液相色譜對(duì)唾液酸進(jìn)行靈敏檢測(cè)。
[0056] 具體步驟如下；
[0057] (1)采用S氣乙酸將癌癥血清樣品水解，除去蛋白質(zhì)后離屯、得到血清處理液；
[0化引 （2)量取2mL血清處理液加入4血離屯、管中，然后加入IOmg合成的UI0-66-N此材料， 滿旋振蕩7min充分萃取得到萃取液，在5000巧m，4°C條件下離屯、15min棄掉上清液；
[0059] (3) 0.2mL含5Wt. %乙酸的水溶液加入離屯、后的試管中，超聲5min，使唾液酸從 UI0-66-N出材料中完全洗脫；
[0060] (4)將洗脫液通過巧光衍生試劑進(jìn)行柱前衍生，最后進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。
[0061] 其余如實(shí)施例1。
[0062] 對(duì)實(shí)施例1唾液酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的洗脫液、實(shí)施例2正常血清樣品的洗脫液、實(shí)施例3癌 癥血清樣品的洗脫液分別進(jìn)行柱前衍生，再進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，具體譜圖見圖3中的A、 B、C。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法即可得到實(shí)施例2正常血清樣品及實(shí)施例3癌癥血清樣品中的唾液酸 的含量。
[0063] 實(shí)施例4
[0064] 為了證明本發(fā)明的有效性，進(jìn)行W下對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
[0065] (一)按照實(shí)施例1處理的唾液酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，具體譜圖見圖4中的a;
[0066] (二)按照實(shí)施例2中的（1)制備血清處理液，未經(jīng)UI0-66-N出材料處理直接進(jìn)行柱 前衍生，然后高效液相色譜分析，具體譜圖見圖4中的b;
[0067] (S)按照實(shí)施例2中（1)制備血清處理液，經(jīng)過UI0-66-N此材料的分散固相萃取處 理，洗脫液進(jìn)行柱前衍生，然后高效液相色譜分析，具體譜圖見圖4中的C;
[0068] (四）向?qū)嵤├?血清樣品中加入定量的唾液酸標(biāo)準(zhǔn)品，得到加標(biāo)的血清樣品。加標(biāo) 的血清樣品按照實(shí)施例2步驟進(jìn)行，具體譜圖見圖4中的d。
[0069] 實(shí)驗(yàn)(一)是確定兩種唾液酸(N-乙酷神經(jīng)氨酸和N-徑乙酷神經(jīng)氨酸）的峰位置，為 了對(duì)實(shí)驗(yàn)(二巧IK四）血清中的唾液酸進(jìn)行定位和定量;實(shí)驗(yàn)(二)是常規(guī)的血清樣品的處理 方法，實(shí)驗(yàn)(S)是本發(fā)明的血清樣品處理方法，由圖4中的b和C可知血清中只含有N-乙酷神 經(jīng)氨酸，且圖中C的峰高大于b的峰高，表明本發(fā)明中的血清分散固相萃取方法明顯優(yōu)于血 清常規(guī)處理方法;實(shí)驗(yàn)（四）測(cè)得的唾液酸的含量應(yīng)該是實(shí)驗(yàn)(=)血清中的唾液酸的含量與 加入唾液酸標(biāo)準(zhǔn)品的含量的總值，對(duì)比圖4中的C和d可知，本發(fā)明的分散固相萃取方法對(duì)于 血清的萃取是準(zhǔn)確的、有效的。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 制備血清處理液:采用三氟乙酸將血清樣品水解，除去蛋白質(zhì)后離心得到血清處理 液； (2) 分散固相萃取:將步驟（1)所得血清處理液與UI0-66-NH2材料混合，經(jīng)漩渦振蕩萃 取，血清處理液中的唾液酸被萃取到UI0-66-NH 2材料中，離心后得到含有唾液酸的UI0-66-NH2材料； (3) 超聲洗脫：采用乙酸水溶液超聲洗脫步驟(2)離心后得到的含有唾液酸的UI0-66-NH2材料，唾液酸從UI0-66-NH 2材料中完全洗脫得到洗脫液； (4) 衍生處理、色譜檢測(cè)：將洗脫液通過熒光衍生試劑進(jìn)行柱前衍生，最后進(jìn)行高效液 相色譜檢測(cè)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，其特征在 于:步驟(2)中UI0-66-NH 2材料的制備方法如下： 先將四氯化鋯、2-氨基對(duì)苯二甲酸和水混合，加入N，N-二甲基甲酰胺后，攪拌至形成透 明溶液，加熱后在靜止?fàn)顟B(tài)下進(jìn)行結(jié)晶，結(jié)晶完畢后經(jīng)冷卻、過濾、洗滌、干燥、提取，得到 UI0-66-NH2材料粗品，再采用甲醇對(duì)粗品進(jìn)行洗滌，最后烘干后密閉保存。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，其特征在 于：步驟(2)中，步驟（1)所得血清處理液與UI0-66-NH 2材料的體積質(zhì)量比例是2:8~10，血 清處理液以mL計(jì)，UIO-66-NH2材料以mg計(jì)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1~3任一所述的采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法， 其特征在于:步驟(2)中渦旋振蕩萃取時(shí)間5~7min，渦旋振蕩萃取完畢后，離心10~20min 得到含有唾液酸的UI0-66-NH2材料。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，其特征在 于:步驟(3)中乙酸水溶液中乙酸的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為4~6%。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，其特征在 于:步驟(3)中乙酸水溶液與步驟⑵中1]10-66-順 2材料的體積質(zhì)量比例是0.2:8~10，乙酸 水溶液以mL計(jì)，UIO-66-NH2材料以mg計(jì)。7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的采用1]10-66-順2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，其特 征在于:步驟(3)中洗脫時(shí)間為5~7min。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，其特征在 于:步驟(4)中熒光衍生試劑為2-[2-(7H-二苯并[a，g]咔唑-乙氧基)-乙基肼基甲酸酯。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用UI0-66-NH2材料測(cè)定血清中唾液酸含量的方法，其特征在 于:步驟(4)中柱前衍生步驟如下：向2mL安瓿瓶中依次加入200yL濃度為0.01mol/L的2-[2_ (7H-二苯并[a，g]咔唑-乙氧基)-乙基肼基甲酸酯乙腈溶液、45ylJ/K乙酸、200yL洗脫液，封 口后在70 °C下反應(yīng)65min，取出冷卻后，加入乙腈定容到ImL，再經(jīng)0.22μπι尼龍濾膜過濾。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK105954404SQ201610268197
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年4月27日
【發(fā)明人】夏蓮, 武傳香, 劉麗潔
【申請(qǐng)人】曲阜師范大學(xué)