一種柑橘類水果中708種農(nóng)藥殘留gc-q-tof/ms偵測技術的制作方法
【技術領域】
[00011本發(fā)明涉及農(nóng)殘檢測領域，特別涉及一種應用GC-Q-T0F/MS篩查柑橘類水果中708 種農(nóng)殘的偵測方法。
【背景技術】
[0002] 水果蔬菜與人們的生活息息相關，尤其是柑橘類水果(橙、橘、檸檬和柚）的營養(yǎng)價 值備受消費者的青睞。目前在柑橘類水果的種植，生長以及保藏過程中可能使用的農(nóng)藥及 化學品已超過1100種。然而，伴隨了農(nóng)藥的廣泛使用，其過量使用、濫用和誤用等不規(guī)范行 為也隨之產(chǎn)生，使得農(nóng)藥殘留于農(nóng)產(chǎn)品中，從而給人類健康造成潛在威脅，同時也對農(nóng)產(chǎn)品 的進出口貿(mào)易產(chǎn)生了不利影響。
[0003] 早在1976年世界衛(wèi)生組織(WH0)、糧農(nóng)組織(FA0)和聯(lián)合國環(huán)境規(guī)劃署(UNEP)共同 建立了全球環(huán)境檢測系統(tǒng)/食品項目（Global Environment Monitoring System，GEMS/ Food)，旨在掌握會員國食品污染狀況，了解食品污染物攝入量，保護人體健康，促進貿(mào)易發(fā) 展?，F(xiàn)在，世界各國都把食品安全提升到國家安全的戰(zhàn)略地位。農(nóng)藥殘留限量是食品安全標 準之一，也是國際貿(mào)易準入門檻。同時，對農(nóng)藥殘留的要求呈現(xiàn)出品種越來越多，限量越來 越嚴格的發(fā)展趨勢，也就是國際貿(mào)易設立的農(nóng)藥殘留限量門檻越來越高?，F(xiàn)在歐盟已制定 了839種農(nóng)藥的162248項MRL標準，美國制定了351種農(nóng)藥的39147項MRL標準，日本制定了 579種農(nóng)藥的51600多項MRL標準，我國2014年發(fā)布了381種農(nóng)藥的3650項MRL標準。目前，國 際上普遍采用的一律標準限量為l〇yg/kg。因此，食品安全和國際貿(mào)易都呼喚高通量快速農(nóng) 藥殘留檢測技術，這無疑也給廣大農(nóng)藥殘留分析工作者提供了機遇和挑戰(zhàn)。在目前的眾多 農(nóng)藥殘留分析技術中，色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術是實現(xiàn)高通量多殘留快速檢測的最佳分析手段。
[0004] 目前農(nóng)藥殘留分析多以氣相色譜、液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用技術為主。這些檢測技術都首先需要農(nóng)藥標準品對照進行定性。例如，對100種農(nóng)藥的檢 測就需要準備相應的100種農(nóng)藥標準品對照，而這100種之外的農(nóng)藥都會被漏檢。在農(nóng)獸藥 殘留實驗室的實際工作中，絕大多數(shù)實驗室都不會儲備數(shù)百種農(nóng)藥標準品，其原因是農(nóng)藥 標準品不僅價格昂貴，而且有效期只有2-3年，需要重復投資。一般實驗室常備農(nóng)藥標準品 只有幾十種，其日常監(jiān)測的農(nóng)藥品種也就只限于這幾十種，由此造成食品安全監(jiān)測漏洞。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了克服上述缺陷，本發(fā)明人團隊經(jīng)過多年潛心研究，研發(fā)了708種農(nóng)藥的精確質(zhì) 量數(shù)據(jù)庫以及一種果蔬中708種農(nóng)藥殘留的GC-Q-T0F/MS偵測技術，實現(xiàn)了不需標準品對 照、即可對柑橘類水果中708種農(nóng)藥殘留進行快速偵測檢測，滿足了當前農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 高通量快速檢測的急需。
[0006] 一方面，本發(fā)明提供了一種GC-Q-T0F/MS檢測柑橘類水果中708種農(nóng)藥殘留的偵測 方法，其特征在于:建立708種農(nóng)藥T0F/MS數(shù)據(jù)庫，同時對柑橘類水果中708種農(nóng)藥進行定性 偵測與確證;該方法包括以下步驟：
[0007] (1)將農(nóng)藥標準品分別配制成l_5mg/L的標準溶液，設定條件下經(jīng)GC-QT0F/MS-級 模式全譜數(shù)據(jù)測定每種標準溶液的全譜數(shù)據(jù)，分別得到每種農(nóng)藥的化學分子式、保留時間、 碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、離子豐度比；
[0008] (2)將步驟(1)中獲得的一級模式全譜數(shù)據(jù)，經(jīng)核實后的碎片離子全掃描質(zhì)譜圖導 入PCDL軟件中，并與對應的農(nóng)藥信息相關聯(lián)，建成T0F/MS精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫，用于數(shù)據(jù)檢索分 析；
[0009] (3)與步驟(1)相同的設定條件下柑橘類水果的測定待測樣品中農(nóng)藥的全譜數(shù)據(jù)， 得到其含有的農(nóng)藥的化學分子式、保留時間、碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、離子豐度比；
[0010] (4)對樣品測定結(jié)果經(jīng)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫檢索，對符合鑒定依據(jù)的檢出農(nóng)藥進行準 確鑒定，從而獲得柑橘類水果中的農(nóng)殘種類。
[0011]優(yōu)選的，通過對柑橘類水果進行前處理以獲得柑橘類水果的測定待測樣品，所述 前處理方法包括以下程序：
[0012]樣品制備:柑橘類水果樣品經(jīng)0.5-5體積％醋酸乙腈勾漿提取，經(jīng)脫水和離心、濃 縮后，再經(jīng)Carbon/NH2柱凈化，乙腈+甲苯洗脫殘留農(nóng)藥，經(jīng)再濃縮、過濾后制成待測樣液a。
[0013] 本發(fā)明所具有的有益效果：
[0014] 1、本發(fā)明以高分辨碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、保留時間、離子豐度比等化合物信息為 識別標準，建立的708種農(nóng)藥偵測和確證技術方法，徹底改變了原有以化合物標準物為參比 的定性模式，是一種不需要標準物對照，快速、高通量、準確可靠的農(nóng)藥殘留檢測新技術。
[0015] 2、本發(fā)明在不需標準物對照的前提下，實現(xiàn)了 708種農(nóng)藥殘留的定性偵測和確證， 可以大大節(jié)省購買標準物的成本，也更加環(huán)保、安全。
[0016] 3、本發(fā)明可在1小時內(nèi)完成708種農(nóng)藥偵測、定性與確證，與傳統(tǒng)檢測方法相比較， 可以提高工作效率數(shù)百倍。
[0017] 4、本發(fā)明能夠做到對柑橘類水果樣品中708種農(nóng)藥殘留一次性提取凈化，一次進 樣檢測，與傳統(tǒng)檢測方法相比較，可以節(jié)省檢測成本、提高工作效率數(shù)百倍。
[0018] 5、本發(fā)明可以測試的柑橘類水果樣品中農(nóng)藥包括以下物質(zhì)中的一類或幾類:有機 磷類農(nóng)藥，氨基甲酸酯類農(nóng)藥，苯并咪唑類農(nóng)藥，磺酰脲類農(nóng)藥，煙堿類農(nóng)藥，除蟲菊酯類農(nóng) 藥及其他類型的農(nóng)藥及代謝物。
[0019] 6、本發(fā)明建立的GC-QT0F/MS偵測技術指標:掃描范圍50-600m/z;測定的精確質(zhì)量 可達O.OOOlm/ζ;質(zhì)量精度可控制在20ppm以內(nèi)；掃描速度在50-600m/z范圍為每秒5次。
[0020] 7、本發(fā)明提供的一種應用氣相色譜四級桿飛行時間質(zhì)譜(GC-Q-T0F/MS)快速篩查 柑橘類水果中708種農(nóng)藥殘留的高分辨質(zhì)譜偵測技術在7個農(nóng)藥殘留分析實驗室得到了推 廣和應用，經(jīng)過對30多個省市多個市售柑橘類水果樣品的偵測驗證，取得了重要的殘留偵 測數(shù)據(jù)。
[0021] 8、同時偵測的708種農(nóng)藥中，偵測靈敏度一律低于標準10微克/千克，滿足各國農(nóng) 藥殘留MRL水平篩查的要求。
[0022] 本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將在隨后的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
【附圖說明】
[0023]附圖是用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與下面的具 體實施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構成對本發(fā)明的限制。在附圖中：
[0024]圖1是北京地區(qū)市售橙樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出頻次最高農(nóng)藥(特草靈)結(jié)果示 例。
[0025]圖2是北京地區(qū)市售橙樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出的頻次最高農(nóng)藥(特草靈）的質(zhì) 譜信息與數(shù)據(jù)庫進行比對的結(jié)果。
[0026] 圖3是天津地區(qū)市售橘樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出頻次最高農(nóng)藥(噠螨靈)結(jié)果示 例。
[0027] 圖4是天津地區(qū)市售橘樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出的頻次最高農(nóng)藥(噠螨靈）的質(zhì) 譜信息與數(shù)據(jù)庫進行比對的結(jié)果。
[0028] 圖5是河北地區(qū)市售檸檬樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出頻次最高農(nóng)藥(水胺硫磷)結(jié) 果示例
[0029] 圖6是河北地區(qū)市售檸檬樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出的頻次最高農(nóng)藥(水胺硫磷） 的質(zhì)譜信息與數(shù)據(jù)庫進行比對的結(jié)果。
【具體實施方式】
[0030] 以下對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體 實施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0031] 本發(fā)明提供了一種GC-Q-T0F/MS檢測柑橘類水果中708種農(nóng)藥殘留的偵測方法，其 特征在于：建立708種農(nóng)藥T0F/MS數(shù)據(jù)庫，同時對柑橘類水果中708種農(nóng)藥進行定性偵測與 確證;該方法包括以下步驟：
[0032] (1)將農(nóng)藥標準品分別配制成l_5mg/L的標準溶液，設定條件下經(jīng)GC-QT0F/MS-級 模式全譜數(shù)據(jù)測定每種標準溶液的全譜數(shù)據(jù)，分別得到每種農(nóng)藥的化學分子式、保留時間、 碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、離子豐度比；
[0033] (2)將步驟(1)中獲得的一級模式全譜數(shù)據(jù)，經(jīng)核實后的碎片離子全掃描質(zhì)譜圖導 入PCDL軟件中，并與對應的農(nóng)藥信息相關聯(lián)，建成T0F/MS精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫，用于數(shù)據(jù)檢索分 析；
[0034] (3)與步驟(1)相同的設定條件下柑橘類水果的測定待測樣品中農(nóng)藥的全譜數(shù)據(jù)， 得到其含有的農(nóng)藥的化學分子式、保留時間、碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、離子豐度比；
[0035] (4)對樣品測定結(jié)果經(jīng)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫檢索，對符合鑒定依據(jù)的檢出農(nóng)藥進行準 確鑒定，從而獲得柑橘類水果中的農(nóng)殘種類。
[0036] 具體的，以稻豐散(Phenthoate)為例說明本發(fā)明的GC-QT0F/MS數(shù)據(jù)庫通過如下的 方法進行建立：
[0037] 1)在數(shù)據(jù)采集界面，對稻豐散(Phenthoate)標準物（l_5mg/L)在指定色譜質(zhì)譜條 件下經(jīng)GC-QT0F/MS-級模式進行碎片離子全掃描質(zhì)譜圖采集。
[0038]色譜條件為：色譜柱：VF-1701MS(30mX0.25mmX0.25um)(J&W Scientific， Folsom，CA);色譜柱升溫程序:30-50°C保持0 · 5-5min，然后以再以3-10°C/min升溫至200-280°C，然后以 20-50°C/min 升溫至 110-150°C，再以 3-10°C/min 升溫至 200-280°C，隨后以 5-15°C/min 升溫至 250-320°C，保持 3-10min，再以 5-20°C/min 降溫至 200-290°C，保持 l_5min; 載氣：氦氣；純度2 99.999% ; 0.5-2mL/min;進樣口溫度：230-320°C;進樣量lyL;進樣方式： 無分流進樣，