本發(fā)明提供方法的系統(tǒng)適應(yīng)性檢測(cè)
[0047] 檢測(cè)方法為：
[0048] 儀器：安捷倫高效液相色譜儀配備紫外檢測(cè)器
[0049] 色譜柱：WatersSymmetryC18 柱，250*4. 6mm, 5μm
[0050] 流動(dòng)相A:甲醇
[0051] 流動(dòng)相B:水
[0052] 流動(dòng)相比例：A:B= 69:31
[0053] 檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm
[0054] 流速：1.OmL/min
[0055] 進(jìn)樣量：10μL
[0056]柱溫：40°C
[0057] 運(yùn)行時(shí)間：25min
[0058] 標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取20mg二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼樣品，精密稱定于20mL容量瓶中，用 稀釋液（甲醇：水=70:30(ν/ν))溶解并超聲、后稀釋至刻度，混勻。用移液管精密移取lmL 上述母液于10mL容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度，混勻，即得。同法配制兩份標(biāo)準(zhǔn)溶 液。（二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼濃度：100μg/mL)
[0059] 空白溶液：甲醇：水=70:30 (v/v)。
[0060] 測(cè)定待測(cè)液，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算6次進(jìn)樣的主峰峰面積的RSD而實(shí)現(xiàn)的，要求6 次所得的主峰峰面積的RSD不得大于2.0%。同時(shí)檢測(cè)空白溶液，要求無干擾峰。檢測(cè)結(jié)果 如表1所示：
[0061] 表1系統(tǒng)適用性測(cè)走結(jié)果
[0062]
[0063] 結(jié)果顯示，本發(fā)明提供的方法具有良好的系統(tǒng)適用性。
[0064] 實(shí)施例2本發(fā)明提供方法的專屬性檢測(cè)
[0065] 取二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼樣品分別經(jīng)酸、堿、氧化、高溫及高濕條件破壞，破壞方 法采用中國藥典記載的方法。經(jīng)破壞的原料藥采用本發(fā)明提供的方法進(jìn)行二對(duì)甲苯磺酸緣 生替尼的含量檢測(cè)。
[0066] 檢測(cè)方法為：
[0067] 儀器：安捷倫高效液相色譜儀配備紫外檢測(cè)器
[0068]色譜柱：WatersSymmetryC18柱，250*4. 6mm, 5μm
[0069] 流動(dòng)相A:甲醇
[0070] 流動(dòng)相B:水
[0071]流動(dòng)相比例：A:B= 70:30
[0072] 檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm
[0073]流速：1.OmL/min
[0074]進(jìn)樣量：10μL
[0075]柱溫：4(TC
[0076] 運(yùn)行時(shí)間：25min
[0077] 待測(cè)液：稱取20mg二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼樣品，精密稱定于20mL容量瓶中，用溶 液（甲醇：水=70:30(ν/ν))溶解并超聲、后稀釋至刻度，混勻。用移液管精密移取lmL上 述母液于10mL容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度，混勻，即得。
[0078] 對(duì)本發(fā)明提供方法的專屬性檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果如表2所示：
[0079] 表2專屬性測(cè)試結(jié)果
[0080]
[0081] 結(jié)果顯示，在酸、堿、氧化、高溫及高濕破壞中，緣生替尼與其他雜質(zhì)分離度合格， 主峰純度符合規(guī)定。
[0082] 實(shí)施例3本發(fā)明提供方法的線性及范圍
[0083] 將二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥溶解為7個(gè)濃度，溶劑為甲醇：水=70:30 (v/ v)，濃度分別為 〇μg/mL、50μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、 200μg/mL。采用本發(fā)明提供的方法對(duì)檢測(cè)各溶液中二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼的含量進(jìn)行檢 測(cè)，每個(gè)濃度樣品檢測(cè)兩次，以兩次檢測(cè)高效液相色譜圖中二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼的峰面 積的平均值為縱坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1)。
[0084] 檢測(cè)方法為：
[0085] 儀器：安捷倫高效液相色譜儀配備紫外檢測(cè)器
[0086]色譜柱：WatersSymmetryC18 柱，250*4.6mm,5μm
[0087] 流動(dòng)相A:甲醇 [0088] 流動(dòng)相B:水
[0089]流動(dòng)相比例：A:B= 72:28
[0090] 檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm
[0091]流速：1.OmL/min
[0092] 進(jìn)樣量：10μL
[0093]柱溫：4(TC
[0094] 運(yùn)行時(shí)間：25min
[0095] 檢測(cè)結(jié)果如表3所示：
[0096] 表3二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼標(biāo)品線性測(cè)試結(jié)果
[0097]
[0098] 結(jié)果表明，二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼在線性范圍為5~200μg/ml，符合驗(yàn)證方案要 求（線性范圍：至少在進(jìn)樣濃度80%~120%的范圍內(nèi)），線性方程回歸系數(shù)r為0.9998， 符合驗(yàn)證方案要求（回歸系數(shù)應(yīng)不小于0. 999)
[0099] 實(shí)施例4本發(fā)明提供方法的精密度
[0100] 1、重復(fù)性檢測(cè)
[0101] 配制6個(gè)二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥溶液，濃度為100μg/ml，，溶劑為甲醇：水 =70:30(v/v)，每個(gè)溶液進(jìn)2針。用甲醇冰=70:30(v/v)配制濃度為100μg/ml二對(duì)甲 苯磺酸緣生替尼的原料藥溶液為對(duì)照計(jì)算主成分含量。結(jié)果如表4~表5所示：
[0102] 表4二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼含量方法學(xué)測(cè)定
[0103]
[0104] 表5二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥含量方法學(xué)測(cè)定
[0105]
[0106] 結(jié)論：6次測(cè)定結(jié)果，二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼平均含量為99. 7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD為0. 86%，符合驗(yàn)證方案的要求，證實(shí)該方法具有一定的精密度。
[0107] 2、中間精密度檢測(cè)
[0108] 為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，由不同分析員，使用不同的儀器，在不同日 期對(duì)同一批樣品進(jìn)行檢測(cè)。樣品為二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥配制為100μg/ml的溶 液，溶劑為甲醇：水=70:30(v/v)。檢測(cè)結(jié)果如表6所示：
[0109] 表6:含量測(cè)定中間精密度試驗(yàn)結(jié)果
[0110]
[0111] 結(jié)論：三組6個(gè)樣品的平均含量為99. 23 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%為1.23%，符合 驗(yàn)證方案對(duì)精密度的要求，證明該方法具有良好的精密度。
[0112] 實(shí)施例5本發(fā)明提供方法的耐用性
[0113] 考察二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料供試品溶液隨時(shí)間變化的規(guī)律，在常溫環(huán)境下將 供試品溶液放置〇h、lh、2h、4h、6h、8h、12h、24h后，考察供試品溶液主峰峰面積的變化情 況，要求各時(shí)間點(diǎn)峰面積的RSD不得大于2. 0%，為檢測(cè)時(shí)供試品溶液的放置時(shí)間提供依 據(jù)。測(cè)試結(jié)果如表7所示：
[0114] 表7耐用性考察一一溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0115]
[0116] 結(jié)論：二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼供試品溶液在常溫24h內(nèi)穩(wěn)定。
[0117] 實(shí)施例6~17本發(fā)明提供方法檢測(cè)待測(cè)樣品
[0118] 取二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥用甲醇：水=70:30(V/v)配制待測(cè)溶液，用甲 醇：水=70:30(V/v)配制二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼的原料藥溶液為對(duì)照計(jì)算主成分含量。以 本發(fā)明提供的方法對(duì)各待測(cè)溶液進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)施例6~17檢測(cè)條件如表8所示：
[0119] 表8實(shí)施例6~17
[0120]
[0121] 各實(shí)施例檢測(cè)結(jié)果如表9~20所示：
[0122] 表9實(shí)施例6檢測(cè)結(jié)果
[0123]
[0124] 表10實(shí)施例7檢測(cè)結(jié)果
[0125]
[0126] 表11實(shí)施例8檢測(cè)結(jié)果
[0127]
[0128] 表12實(shí)施例9檢測(cè)結(jié)果
[0129]
[0130] 表13實(shí)施例10檢測(cè)結(jié)果
[0131]
[0132] 表14實(shí)施例11檢測(cè)結(jié)果
[0133]
[0134] 表15實(shí)施例12檢測(cè)結(jié)果
[0135]
[0136] 表16實(shí)施例13檢測(cè)結(jié)果
[0137]
[0138] 表17實(shí)施例14檢測(cè)結(jié)果
[0139]
[0140] 表18實(shí)施例15檢測(cè)結(jié)果
[0141]
[0142] 表19實(shí)施例16檢測(cè)結(jié)果
[0143]
[0144] 表20實(shí)施例17檢測(cè)結(jié)果
[0145]
[0146] 以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來 說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有效成分的定量檢測(cè)方法，其特征在于，將二對(duì)甲 苯磺酸緣生替尼原料藥溶解，以甲醇-水為流動(dòng)相，以高效液相色譜檢測(cè)獲得色譜圖，根據(jù) 所述色譜圖獲得二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有效成分的含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述甲醇水溶液中甲醇的體積 分?jǐn)?shù)為69 %~76%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述甲醇水溶液中甲醇的體積 分?jǐn)?shù)為72 %~76%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述流動(dòng)相的流速為0. 8mL/ min~L2mL/min〇5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測(cè)的色譜 柱為Waters Symmetry C18柱。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測(cè)的柱溫 為 35°C~45°C。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述溶解的溶劑為體積分?jǐn)?shù)為 70 %的甲醇水溶液。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測(cè)的波長(zhǎng) 為 240nm。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測(cè)的進(jìn)樣 量為10μL。10. 根據(jù)權(quán)利要求1~9任一項(xiàng)所述的定量檢測(cè)方法，其特征在于，獲得二對(duì)甲苯磺酸 緣生替尼原料藥中有效成分的含量的方法為：根據(jù)二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼樣品濃度與高效 液相色譜檢測(cè)所得峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)所述標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原 料藥中有效成分的含量。
【專利摘要】本發(fā)明涉及化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼的定量檢測(cè)方法。該方法將二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥溶解，以甲醇水溶液為流動(dòng)相，以高效液相色譜檢測(cè)獲得色譜圖，根據(jù)色譜圖獲得二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼原料藥中有效成分的含量。采用本發(fā)明提供的方法，二對(duì)甲苯磺酸緣生替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，主峰面積RSD為0.22％；流速在0.8ml/min～1.2ml/min之內(nèi)、柱溫在35℃～45℃之內(nèi)、流動(dòng)相中甲醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在72％～76％范圍內(nèi)皆可獲得良好的分離度。本發(fā)明提供的方法重復(fù)性RSD為0.96％，中間精密度RSD為1.23％，樣品線性及范圍回歸系數(shù)為r＝0.9997。
【IPC分類】G01N30/04, G01N30/02
【公開號(hào)】CN105424831
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510767247
【發(fā)明人】蕭偉, 仲艷, 李家春, 陳保來, 王志霞, 劉利, 黃文哲, 王振中
【申請(qǐng)人】江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2016年3月23日
【申請(qǐng)日】2015年11月11日