一種祖師麻的有效成分測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物的檢測方法，特別涉及一種祖師麻的有效成分測定方法
【背景技術(shù)】：
[0002] 祖師麻為瑞香科瑞香屬植物黃瑞香的根皮及莖皮，別名為祖師麻、黃瑞香、大救 駕、金腰帶、黃狗皮。本品為非常用中藥材，但制成中成藥后應(yīng)用較廣泛，民間廣泛用于治療 疼痛、跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和支氣管炎等癥。
[0003]現(xiàn)有祖師麻制劑包括祖師麻片，性狀:本品為薄膜衣片，除去薄膜衣后，片心呈棕 色;味微苦。
[0004] 功能與主治:祛風(fēng)除濕，活血止痛。用于風(fēng)濕閉阻，淤血阻絡(luò)所致的痹病，癥見肢體 關(guān)節(jié)腫痛、畏寒肢冷;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎見上述癥候者。
[0005]用法與用量：口服。一次3片，一日3次。
[0006]注意:孕婦及風(fēng)濕熱痹者慎用;有胃病者可飯后服用，并配合健胃藥使用。
[0007]規(guī)格：（1)薄膜衣片每片重0.3g(2)糖衣片(片芯重0.29g)
[0008] 貯藏:密封。
[0009]現(xiàn)有的祖師麻的制劑的鑒別方法包括：
[0010] 理化鑒別
[0011] (1)樣品水浸出液適量，蒸干，冷后加乙酸酥1ml，微熱溶解，加濃硫酸1滴，溶液呈 紅色。（檢查皂戒）
[0012](2)薄層色譜取本品粉末lg，加乙醇5ml，冷浸24h，濾過，濾液濃縮至lml，供點樣 用。以7,8_二羥基香豆素作對照。點于硅膠G板上，用氯仿-丙醇(4:1)為展開劑，展距10cm， 置紫外光燈(254nm)下觀察。樣品與對照品色譜的相對應(yīng)的位置處顯相同的熒光斑點。
[0013]近年來，關(guān)于祖師麻質(zhì)控的文獻(xiàn)有很多，但對于指紋圖譜的研究尚無任何報道，本 發(fā)明經(jīng)過研究找到一種特別適合祖師麻制劑的含量測定方法，建立了一種檢測更加全面、 更快速的祖師麻質(zhì)量評價方法。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0014]本發(fā)明提供一種祖師麻制劑的有效成分測定方法，本發(fā)明所述的祖師麻制劑，包 括任何一種以祖師麻為原料藥的藥物制劑，包括片劑，膠囊，丸劑，顆粒等，優(yōu)選片劑，所述 片劑制備方法如下：
[0015]取祖師麻1 l〇〇g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次，第三次1小時，合并煎液，濾 過，濾液濃縮至相對密度為1.22~1.26(50°C)的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)75%，靜置使沉 淀，取上清液，回收乙醇并濃縮至適量，加入碳酸鈣l〇g、淀粉、糊精適量，混勻，制成顆粒，干 燥，壓制成1 〇〇〇片，包薄膜衣或糖衣，即得。
[0016]本發(fā)明所述的祖師麻制劑的有效成分測定方法，包括以下步驟：
[0017]1)對照品溶液的制備取祖師麻甲素、7-羥基香豆素對照品，制成含祖師麻甲素、7- 羥基香豆素的混合溶液。
[0018] 2)供試品溶液的制備取祖師麻片，研細(xì)，加入溶劑超聲處理，濾過，得到續(xù)濾液。
[0019] 3)測定法取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，得到色譜圖，根據(jù)色譜圖 計算供試品中相應(yīng)成分的含量。
[0020]優(yōu)選的，本發(fā)明的有效成分測定方法，包括以下步驟：
[0021 ] 1)對照品溶液的制備取祖師麻甲素、7-羥基香豆素對照品適量，精密稱定，加80- 90 %甲醇制成每0.5-2ml含祖師麻甲素0.08-0.12mg、7-羥基香豆素18-22yg的混合溶液，即 得。
[0022] 2)供試品溶液的制備取祖師麻片18-22片，除去包衣，研細(xì)，取0.55-0.65g，精密稱 定，置具塞錐形瓶中，精密加入80-90 %甲醇45-55ml，密塞，稱定重量，超聲處理25-35分鐘， 放冷，再稱定重量，用80-90%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0023] 3)測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各8_12μ1，注入液相色譜儀，得到色 譜圖，根據(jù)色譜圖計算供試品中相應(yīng)成分的含量。
[0024]最優(yōu)選的，本發(fā)明的有效成分測定方法，包括以下步驟：
[0025] 1)對照品溶液的制備取祖師麻甲素、7-羥基香豆素對照品適量，精密稱定，加85 % 甲醇制成每lml含祖師麻甲素0.1mg、7-羥基香豆素20yg的混合溶液，即得。
[0026] 2)供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.6g，精密稱 定，置具塞錐形瓶中，精密加入85 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率500W，頻率 40kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用85 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即 得。
[0027] 3)測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，得到 色譜圖，根據(jù)色譜圖計算供試品中相應(yīng)成分的含量。
[0028]其中，色譜條件如下：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇為流動相A，以 0.1 %冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測波長327nm。理論板數(shù)按 祖師麻甲素峰計算應(yīng)不低于4000。
[0029]梯度洗脫表
[0030]
[0031]本發(fā)明進(jìn)一步包括祖師麻制劑的鑒別方法，所述方法，包括以下步驟：
[0032] 1)取祖師麻片劑2片，除去包衣，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，加甲醇25ml，超聲處理20 分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。
[0033] 2)取祖師麻對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。
[0034] 3)再取祖師麻甲素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。
[0035] 4)照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各2 ~5μ1，對照提取物溶液5μ1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-冰醋酸 (7:1:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照 品色譜相應(yīng)的位置上，顯一個相同顏色的主斑點；在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 顏色的主斑點
[0036]本發(fā)明進(jìn)一步包括祖師麻藥材的指紋圖譜建立方法，所述方法，包括以下步驟：
[0037] 1)取祖師麻對照藥材，加水煎煮，濾過，濾液濃縮，加甲醇使成為甲醇溶液，搖勻， 濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0038] 2)測定取取續(xù)濾液，注入液相色譜儀，得到色譜圖。
[0039 ]優(yōu)選的，本發(fā)明的指紋圖譜建立方法，包括以下步驟：
[0040] 1)取祖師麻對照藥材1.8-2.2g，加水煎煮0.5-2小時，濾過，濾液濃縮至約8-12ml， 加甲醇使成為65-75 %的甲醇溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0041] 2)測定法吸取續(xù)濾液8_12μ1，注入液相色譜儀，得到色譜圖，
[0042]最優(yōu)選的，本發(fā)明的有效成分測定方法，包括以下步驟：
[0043] 1)取祖師麻對照藥材2g，加水煎煮1小時，濾過，濾液濃縮至約10ml，加甲醇使成為 70 %的甲醇溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0044] 2)測定法精密吸取續(xù)濾液10μ1，注入液相色譜儀，測定，得到色譜圖。
[0045]其中，色譜條件如下：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇為流動相A，以 0.1 %冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測波長327nm。理論板數(shù)按 祖師麻甲素峰計算應(yīng)不低于4000。
[0046]梯度洗脫表
[0047]
[0048] 經(jīng)過不同批次，10次以上的測定，經(jīng)過處理得到一種呈現(xiàn)八個特征峰的標(biāo)準(zhǔn)指紋 圖譜(圖19)
[0049]本發(fā)明所述的指紋圖譜，可以用于評價祖師麻藥材的質(zhì)量，如:對生產(chǎn)過程中的祖 師麻藥材進(jìn)行指紋圖譜測定，將測定結(jié)果和本發(fā)明上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對照，按中藥色 譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)計算，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于 0.90。從而確定藥材是否合格。上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立使用的均為合格的祖師麻藥材作 為對照藥材，經(jīng)過多批次測定，得到。
[0050]經(jīng)過本發(fā)明方法檢測，對于祖師麻制劑，如對于每片片劑，其中含祖師麻以祖師麻 甲素(C9H604)計，不得少于2 ·Omg;含7-羥基香豆素(C9H603)計，不得少于0 · 30mg。為合格產(chǎn) 品。
[0051]本發(fā)明方法是經(jīng)過篩選獲得的，篩選過程如下：
[0052] 1實驗儀器
[0053]高效液相色譜儀:Agilent1260、Ultimate3000、ShimadzuLC20A
[0054]色譜柱：ShiseidoCapcell