一種果蔬中氟吡菌胺的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明提供一種生物有毒有害物質(zhì)的檢測方法，特別地提供一種蔬菜水果中氟吡 菌胺的測定方法，屬于農(nóng)副產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)殘留安全檢測領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氣吡菌胺（fluopicolide)化學(xué)名稱為2,6_二氣_N_[ (3_氣_5_二氣甲基_2_ [!比 啶基）甲基]苯甲酰胺，由德國拜耳作物科學(xué)公司開發(fā)的苯甲酰胺類殺菌劑，具有保護(hù)和廣 譜治療作用。
[0003]
[0004] 氟吡菌胺分子式
[0005] 氟吡菌胺主要應(yīng)用在各類蔬菜和葡萄上，對(duì)霜霉病、疫病、晚疫病、猝倒病等常見 卵菌綱病害具有杰出防效，其主要作用于細(xì)胞膜和細(xì)胞間的特異性蛋白，因其具有優(yōu)良的 系統(tǒng)傳導(dǎo)性和較強(qiáng)的薄層穿透力，對(duì)病原菌各主要形態(tài)均有較好的抑制作用；對(duì)作物和環(huán) 境安全，特別適用于優(yōu)質(zhì)、綠色蔬菜生產(chǎn)；能夠?yàn)樾氯~、莖干、塊莖、幼果提供全面和持久保 護(hù)，由于藥劑能夠經(jīng)葉面快速吸收，所以耐雨水沖刷，為雨季蔬菜防病提供可靠保障。
[0006] 然農(nóng)作物中殘留過多的氟吡菌胺會(huì)危害人體的健康，故很多國家對(duì)農(nóng)作物中的 氟P比菌胺最大殘留限量均作出了相關(guān)規(guī)定，如英國MRLs :馬鈴薯0. 02ppm、葡萄2ppm ;歐盟 MRLs :黃瓜CL 5ppm、番前Ippm ;中國MRLs :番前CL lppm、黃瓜CL 5ppm、大白菜CL 5ppm、西瓜 0· lppm、馬鈴薯 0· 05ppm、辣椒 0· lppm。
[0007] 隨著食品安全標(biāo)準(zhǔn)的日益提高，對(duì)于能夠快速、靈敏、準(zhǔn)確地檢測果蔬中盡可能多 的氟吡菌胺殘留的檢測方法存在迫切需求，也是目前農(nóng)作物領(lǐng)域中深入研究的重點(diǎn)和難點(diǎn) 課題之一。然迄今為止，針對(duì)果蔬中殘留的氟吡菌胺進(jìn)行快速檢測尚無一套完整可靠的方 法，因而本發(fā)明應(yīng)運(yùn)而生。該方法能簡便快捷、靈敏、準(zhǔn)確地測定出果蔬中殘留的氟吡菌胺， 大大降低檢測成本和縮短檢測時(shí)間。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是要解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，提供一種簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、 重復(fù)性好的氟吡菌胺檢測方法。
[0009] 本發(fā)明的所述檢測方法，包括如下步驟：
[0010] ⑴樣品處理：將含氟吡菌胺的樣品使用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取后再進(jìn)行萃取凈化；
[0011] ⑵標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將不含氟吡菌胺的同種類基質(zhì)空白樣品按步驟⑴處理，得樣 品提取凈化后的殘?jiān)尤脒m量氟吡菌胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，得不同濃度的氟吡菌胺混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液；
[0012] (3)溶液檢測，將試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液按下述條件分別順次進(jìn)行液相色譜儀分離 和質(zhì)譜檢測：
[0013] (3. 1)液相色譜儀分離：Agilent Proshelll20 EC-C18 (3. OmmX 100mm，2. 7 μ m) 色譜柱；0. 1%甲酸水溶液為流動(dòng)相Α、甲醇為流動(dòng)相B進(jìn)行線性梯度洗脫；流速為0. 4mL/ min ;柱溫為30°C ;進(jìn)樣量為2 μ L，定量方法為外標(biāo)法（峰面積）；
[0014] (3. 2)質(zhì)譜檢測：ESI源正模式電離；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM);鞘氣溫度為350°C ;鞘氣 流量為12L/min ;霧化氣壓力為40psi ;毛細(xì)管電壓：3000V(ESI+)，3500V(ESI_);干燥氣溫 度為300°C ;干燥氣流量為7L/min-l ;
[0015] (4)按下式計(jì)算試樣液中氟吡菌胺含量：
[0016]
[0017] 式中：Ci-試樣中氟吡菌胺的濃度；
[0018] Ai-試樣色譜峰面積；
[0019] As-氟吡菌胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜峰面積；
[0020] Cs-氟吡菌胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度。
[0021] 在本發(fā)明所述檢測方法的上述步驟（1)中，作為一個(gè)實(shí)施方式的樣品提取方法 為：準(zhǔn)確稱取20g精確至0.1 g的樣品至250mL三角瓶中，加40mL乙腈，在高速勻漿機(jī)中勻 漿lmin，收集濾液至裝有5-7gNaCl的200mL具塞量筒中，蓋上蓋子后，劇烈振蕩lmin，室溫 下靜置lh，取上清液10mL，蒸發(fā)溶劑至近干，殘?jiān)?mL二氯甲烷-甲醇溶解。
[0022] 在本發(fā)明所述檢測方法的上述步驟（1)中，作為一個(gè)實(shí)施方式的樣品萃取方法 為：將樣品轉(zhuǎn)移至弗羅里硅土固相萃取柱中，再用二氯甲烷-甲醇洗滌樣品瓶，每次4mL， 洗滌2次，并將洗滌液全部轉(zhuǎn)入固相萃取柱中，收集全部流出液，蒸發(fā)溶劑至近干后，用5mL 甲醇復(fù)溶，并過〇. 22 μ m有機(jī)相濾膜，得待檢測試樣溶液。
[0023] 其中，所述二氯甲烷-甲醇體積比為95 : 5。
[0024] 其中，所述蒸發(fā)溶劑至近干所采用的實(shí)施方式并無特別限定，如可自然揮發(fā)、加 熱揮發(fā)、水浴下用高純氮吹儀溫和吹至近干等，為快速得到樣品，優(yōu)選采用水浴溫度可為 40-55 cC 〇
[0025] 其中，過濾所使用的有機(jī)膜并無特別限定，如可為聚四氟乙烯，其孔徑可為 0. 22_0. 45 μ m，其目的是過濾去除雜質(zhì)，以免影響后續(xù)檢測。
[0026] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述檢測方法的優(yōu)點(diǎn)在于：簡便、快捷、準(zhǔn)確、靈敏度高、 檢測時(shí)間短，縮短檢測周期，降低檢測成本。
【附圖說明】
[0027] 圖1是氟吡菌胺0. 01mg/kg圖譜
[0028] 圖2是甘藍(lán)-空白圖譜
[0029] 圖3是甘藍(lán)添加0. 01mg/kg圖譜
[0030] 圖4是葡萄空白圖譜
[0031] 圖5是葡萄添加0. 01mg/kg圖譜
【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。以下實(shí)施例僅為示意性實(shí)施例，并不構(gòu) 成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定，本發(fā)明可以由
【發(fā)明內(nèi)容】
限定和覆蓋的多種不同方式實(shí)施。除非特 別說明，本發(fā)明采用的試劑、化合物和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、化合物和設(shè)備。
[0033] L儀器條件
[0034] (1)質(zhì)譜條件：ESI源正模式電離；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM);鞘氣溫度：350°C ;鞘氣流 量：12L/min ;霧化氣壓力：40psi ;毛細(xì)管電壓：3000V(ESI+)，3500V(ESI_);干燥氣溫度： 300°C ;干燥氣流量：7L/min ;質(zhì)譜采集參數(shù)如表1所示：
[0035] 表1 MRM監(jiān)測模式下6種農(nóng)藥質(zhì)譜采集參數(shù)
[0037] ⑵液相條件：Agilent Proshelll20 EC-C18 (3. OmmX 100mm，2. 7 μ m)色譜柱；流 動(dòng)相A :0. 1 %甲酸水溶液；流動(dòng)相B :甲醇；流速：0. 4mL/min ;柱溫：30°C ;進(jìn)樣量：2 μ L，定 量方法：外標(biāo)法（峰面積）；梯度洗脫條件如表2所示：
[0038] 表2梯度洗脫條件
[0040] 2.樣品處理
[0041] 準(zhǔn)確稱取20g精確至0.1 g的樣品至250mL三角瓶中，加40mL乙腈，在高速勻漿機(jī) 中勻漿lmin，收集濾液至裝有5-7gNaCl的200mL具塞量筒中，蓋上蓋子后，劇烈振蕩lmin， 室溫下靜置lh，取上清液10mL，蒸發(fā)溶劑至近干，殘?jiān)?mL二氯甲烷-甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至 固相萃取柱中，再用二氯甲烷-甲醇洗滌樣品瓶，每次4mL，洗滌2次，并將洗滌液全部轉(zhuǎn)入 固相萃取柱中，收集全部流出液，蒸發(fā)溶劑至近干后，用5mL甲醇復(fù)溶，并過0. 22 μ m有機(jī)相 濾膜，得待檢測試樣溶液。
[0042] 3.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
[0043] 將不含氟吡菌胺的同種類基質(zhì)空白樣品按"2.樣品處理"步驟處理，得樣品提取凈 化后的殘?jiān)?，加入適量氟吡菌胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，配制成不同濃度的氟吡菌胺混合標(biāo)準(zhǔn) 工作液。
[0044] 4.測定
[0045] 在上述色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相 對(duì)響應(yīng)值，直至相鄰2針氟吡菌胺的響應(yīng)值相對(duì)變化小于1. 2%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶 液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。
[0046] 5.將測得的結(jié)果代入下式進(jìn)行計(jì)算，得出氟吡菌胺的含量：
[0047]
[0048] 式中：Ci-試樣中氟吡菌胺的濃度；
[0049] Ai-試樣色譜峰面積；
[0050] As-氟吡菌胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜峰面積；
[0051] Cs-氟吡菌胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度。
[0052] 以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能 因此理解為本發(fā)明專利范圍的限制，在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，還可以 在不脫離本發(fā)明宗旨的前提下作出各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入本發(fā)明要求的 保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蔬菜水果中氟吡菌胺的檢測方法，包括如下步驟： (1) 樣品處理：將含氟吡菌胺的樣品使用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取后再進(jìn)行萃取凈化； (2) 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將不含氟吡菌胺的同種類基質(zhì)空白樣品按步驟（1)處理，得樣品提 取凈化后的殘?jiān)尤脒m量氟吡菌胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，得不同濃度的氟吡菌胺混合標(biāo)準(zhǔn) 工作液； (3) 溶液檢測，將試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液按下述條件分別順次進(jìn)行液相色譜儀分離和質(zhì) 譜檢測： (3.1)液相色譜儀分離：Agilent Proshelll20EC-C18(3.0mmX100mm，2.7ym)色譜 柱；0. 1 %甲酸水溶液為流動(dòng)相A、甲醇為流動(dòng)相B進(jìn)行線性梯度洗脫；流速為0. 4mL/min ; 柱溫為30°C ;進(jìn)樣量為2 μ L，定量方法為外標(biāo)法（峰面積）； (3. 2)質(zhì)譜檢測：ESI源正模式電離；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM);鞘氣溫度為350°C ;鞘氣流量 為12L/min ;霧化氣壓力為40psi ;毛細(xì)管電壓：3000V(ESI+)，3500V(ESI_);干燥氣溫度為 300°C ;干燥氣流量為7L/min-l ; (4) 按下式計(jì)算試樣液中氟吡菌胺含量：式中：Ci-試樣中氟吡菌胺的濃度； Ai-試樣色譜峰面積； As-氟吡菌胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜峰面積； Cs-氟吡菌胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度。2. 如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述提取，其具體步驟為：準(zhǔn)確稱取 2〇g精確至0.1 g的樣品至250mL三角瓶中，加40mL乙腈，在高速勻漿機(jī)中勻漿lmin，收集 濾液至裝有5-7gNaCl的200mL具塞量筒中，蓋上蓋子后，劇烈振蕩lmin，室溫下靜置lh，取 上清液10mL，蒸發(fā)溶劑至近干，殘?jiān)?mL二氯甲烷-甲醇溶解。3. 如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述萃取是采用弗羅里硅土固相萃取 柱，具體步驟為：將樣品轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中，再用二氯甲烷-甲醇洗滌樣品瓶，每次4mL， 洗滌2次，并將洗滌液全部轉(zhuǎn)入固相萃取柱中，收集全部流出液，蒸發(fā)溶劑至近干后，用5mL 甲醇復(fù)溶，并過〇. 22 μ m有機(jī)相濾膜，得待檢測試樣溶液。4. 如權(quán)利要求2-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：所述二氯甲烷-甲醇體積比為 95 : 5〇5. 如權(quán)利要求2-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：所述蒸發(fā)溶劑至近干，可為自然揮 發(fā)、加熱揮發(fā)、水浴下用高純氮吹儀溫和吹至近干中任一種。6. 如權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于：所述水浴，溫度為40-55Γ。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種氟吡菌胺的檢測方法，包括樣品的提取及凈化、試樣溶液及標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制，然后順次進(jìn)行液相色譜儀分離和質(zhì)譜檢測。通過這些處理手段和合適工藝參數(shù)的使用，所述方法能夠簡便、快速、準(zhǔn)確地測定蔬菜、水果中氟吡菌胺的含量，具有檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，為蔬菜、水果中氟吡菌胺殘留的定性、定量和食品安全監(jiān)管提供了一種可靠、快捷的檢測方法。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號(hào)】CN105158382
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510299660
【發(fā)明人】馬琳, 趙莉, 趙全立, 陳建波, 占繡萍, 黃蘭淇, 陳秀
【申請(qǐng)人】上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年6月4日