鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)。
【背景技術(shù)】
[0002] 鱗狀細胞癌抗原（SCCa)，是一種分子量范圍為45~55kDa的異構(gòu)體的糖蛋白，在 1997年由Kato和Torigoe首次提出作為一個腫瘤相關(guān)抗原。SCCa正常表達于皮膚和其他 鱗狀上皮細胞，現(xiàn)已被證明有助于肺癌，特別是鱗狀細胞癌的診斷。
[0003] 現(xiàn)已報道，在人的頭部和頸部，肝臟和其他上皮癌的組織中可檢測到高濃度的 SCCa。也有文獻報道，在各種宮頸癌患者的血清、口腔、肺、皮膚、頭部、頸部、食道、肛管和外 陰中SCCa也出現(xiàn)過量表達。例如，SCCA水平在宮頸癌患者血清中增高72%，在肺鱗狀細胞 癌患者血清中增高94%。檢測宮頸鱗狀細胞癌患者SCCa檢測可作為鱗狀細胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn) 移的評估指標(biāo)。宮頸鱗狀細胞癌和肺癌患者術(shù)前血清SCCa越高，提示病情越嚴重，預(yù)后更 差。在未經(jīng)治療的宮頸癌患者中，升高的SCCa和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能作為獨立預(yù)測因子。腫瘤患 者放療后血清中SCCa濃度的高低可影響宮頸鱗狀細胞癌是否復(fù)發(fā)。在頭頸部腫瘤的治療 中，高水平的SCCa表示手術(shù)切除不干凈或治療效果不佳，此外，腫瘤復(fù)發(fā)出現(xiàn)臨床癥狀的3 個月之前，血清中SCCa水平已經(jīng)出現(xiàn)普遍升高。
[0004] 因此，檢測血清中SCCa水平對癌癥的診斷和治療非常重要。目前，常用于檢測血 清中SCCa的方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)，放射免疫法（RIA)和化學(xué)發(fā)光酶免疫法 (CLEIA)等。然而，ELISA法有其局限性，例如特異性差、靈敏度低、準(zhǔn)確性不高等。放射免 疫方法雖然被認為是準(zhǔn)確和可靠的方法，但是放射性同位素的輻射影響，廢物處理需要專 門的實驗室，成本高和半衰期短的弊端已經(jīng)使該方法逐漸遭到淘汰。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 基于此，有必要提供一種不含有放射性物質(zhì)、靈敏度較高、特異性較好，且準(zhǔn)確性 較高的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)。
[0006] -種鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，包括包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁珠、異硫 氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體、N-(氨基丁基）-N_(異魯米諾）標(biāo)記的鱗狀細胞 癌抗原抗體、化學(xué)發(fā)光底物及熒光檢測裝置；
[0007] 其中，所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體、所述N_(氨基丁 基）-N-(異魯米諾）標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體及待測物形成雙抗體夾心復(fù)合物，所述包 被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁珠用于與所述雙抗體夾心復(fù)合物結(jié)合以形成抗原抗體復(fù) 合物沉淀，所述抗原抗體復(fù)合物沉淀與所述化學(xué)發(fā)光底物發(fā)生熒光反應(yīng)，所述熒光檢測裝 置用于檢測所述熒光反應(yīng)的熒光強度。
[0008] 在其中一個實施例中，所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體按如下方 法制備：
[0009] 配制異硫氰酸熒光素的溶液，并將鱗狀細胞癌抗原抗體與所述異硫氰酸熒光素的 溶液進行混合得到混合液；
[0010] 將所述混合液進行透析，得到含有異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體溶 液，離心，收集上清液，稀釋，得到所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體。
[0011] 在其中一個實施例中，所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體的濃度為 0.7 X 10 4~0.84X 10 3mg/mL〇
[0012] 在其中一個實施例中，所述N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗 原抗體按如下方法制備：
[0013] 將N-(氨基丁基）-N_(異魯米諾）溶液、N-羥基琥珀酰亞胺溶液、1-乙 基-3- (3-二甲基氨丙基）-碳化二亞胺溶液和鱗狀細胞癌抗原抗體的溶液進行混合得到混 合物，將所述混合物于37 °C下溫育Ih，透析、洗脫、稀釋，得到所述N-(氨基丁基）-N-(異魯 米諾）標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體。
[0014] 在其中一個實施例中，所述N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗 原抗體的濃度為〇. 58 X 10 4~0. 92 X 10 3mg/mL。
[0015] 在其中一個實施例中，所述化學(xué)發(fā)光底物包括氫氧化鈉的水溶液和雙氧水。
[0016] 在其中一個實施例中，所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體、所述 N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體及待測物按如下方法形成雙抗 體夾心復(fù)合物：
[0017] 將所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體、所述N-(氨基丁基）-N-(異 魯米諾）標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體及待測物進行混合，于37°C下溫育5~40min，得到所 述雙抗體夾心復(fù)合物。
[0018] 在其中一個實施例中，所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體及所述 N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體的體積比為1:1。
[0019] 在其中一個實施例中，所述包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁珠與所述異硫氰酸 熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體的體積比為10~80:30。
[0020] 在其中一個實施例中，所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體與所述化 學(xué)發(fā)光底物的體積比為30:50~350。
[0021] 上述鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，使用N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）作為化學(xué)發(fā) 光物質(zhì)，采用抗體夾心法結(jié)合磁珠分離技術(shù)檢測鱗狀細胞癌抗原。該鱗狀細胞癌抗原測定 系統(tǒng)不含有放射性物質(zhì)，并且，經(jīng)實驗表明，該鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)的靈敏度較高、特 異性較好、準(zhǔn)確性較高，能夠應(yīng)用于臨床測定人血清中的鱗狀細胞癌抗原。
【附圖說明】
[0022] 圖1為實施例的臨床樣品的測定值及與雅培SCCa試劑盒測定值的相關(guān)性曲線 圖；
[0023] 圖2為實施例的臨床樣品的預(yù)測濃度與實測濃度的相關(guān)性曲線圖。
【具體實施方式】
[0024] 為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖對本發(fā)明 的【具體實施方式】做詳細的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細節(jié)以便于充分理解本發(fā) 明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不 違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施的限制。
[0025] -實施方式的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，包括包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁 珠、異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體、N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標(biāo)記的鱗 狀細胞癌抗原抗體、化學(xué)發(fā)光底物及熒光檢測裝置。
[0026] 包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁珠作為固相和分離載體。磁珠是指超順磁性納 米微球，可以與抗體、蛋白等生物大分子結(jié)合而用于分離純化。
[0027] 異硫氰酸熒光素（FITC)標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體簡稱為FITC標(biāo)記的SCCa抗 體。
[0028] N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）（ABEI)標(biāo)記的鱗狀細胞癌抗原抗體簡稱為ABEI標(biāo) 記的SCCa抗體。其中，ABEI作為化學(xué)發(fā)光物質(zhì)。
[0029] FITC標(biāo)記的SCCa抗體和ABEI標(biāo)記的SCCa抗體可以與SCCa特異性結(jié)合。FITC 標(biāo)記的SCCa抗體和ABEI標(biāo)記的SCCa抗體同時與待測物中的SCCa特異性結(jié)合形成雙抗體 夾心復(fù)合物，或同時與標(biāo)準(zhǔn)品SCCa形成雙抗體夾心復(fù)合物。
[0030] 包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁珠用于與雙抗體夾心復(fù)合物結(jié)合形成抗原抗 體復(fù)合物沉淀，以除去游離的抗體和待測物中的雜質(zhì)成分。包被有抗異硫氰酸熒光素抗體 的磁珠與FITC標(biāo)記的SCCa抗體的體積比為10~80:30,優(yōu)選為40:30。
[0031] 抗原抗體復(fù)合物沉淀與化學(xué)發(fā)光底物發(fā)生熒光反應(yīng)，熒光檢測裝置測定熒光反應(yīng) 的熒光強度。
[0032] 化學(xué)發(fā)光底物包括氫氧化鈉（NaOH)的水溶液和雙氧水（H2O2)，氫氧化鈉的水溶液 的濃度為〇. 〇5mol/L。氫氧化鈉和雙氧水的體積比優(yōu)選為1: 1。FITC標(biāo)記的SCCa抗體與化 學(xué)發(fā)光底物的體積比為3:5~35,優(yōu)選為30:100。
[0033] 使用標(biāo)準(zhǔn)品鱗狀細胞癌抗原進行測定，得到鱗狀細胞癌抗原的濃度與熒光強度的 關(guān)系。根據(jù)鱗狀細胞癌抗原的濃度與熒光強度的關(guān)系及所測得的待測物的熒光強度計算出 待測物中的鱗狀細胞癌抗原的含量。
[0034] FITC標(biāo)記的SCCa抗體按如下方法制備