[0031]一定濃度的O型紅細胞與抗D (IgG)抗體等體積混合，37°C孵育器，孵育30min，得到抗D (IgG)抗體致敏細胞，使用5倍體積生理鹽水洗滌數(shù)次，去除多余的IgG，用紅細胞保存液重懸至所需濃度，最后加入一定體積抗人球蛋白試劑混勻，得到抗IgG指示劑細胞。
[0032]3檢測試劑卡的組裝:
[0033]檢測試劑卡主要有處理過的濾膜，吸水材料和塑料支架組成。其中塑料支架有三部分組成，一是蓋子，二是加樣板，三是吸水盒。加樣板為一帶有4個孔(孔徑為0.5cm)的方形塑料板，可從試劑卡上拆除。帶有不同抗原檢測組和對照組細胞膜的濾膜貼在加樣板的背部，慮膜上的抗原中心與塑料版上的樣品孔相對映。在蓋子和吸水盒里面填充了4cmX4cm的方形吸水材料。濾膜和吸水材料都是使用防水膠黏貼在塑料版上，防止加樣和沖洗過程濾膜和吸水紙脫落或串位置。
[0034]組裝后的不規(guī)則抗體檢測試劑卡以如圖2所示，其中加樣孔1、I1、III為帶有三組已知抗原的濾膜，加樣孔IV為陽性對照孔，即濾膜上帶有制敏細胞膜。如圖2所示。
[0035]4血清或者血漿中不規(guī)則抗體試劑盒的樣品檢測
[0036]首先將檢測卡(圖2A)打卡，抽出加樣卡(圖2D)。然后將10-200 μ I血清或血漿樣品滴加在加樣卡的Ι、ΙΙ、ΙΙΙ膜上。滴加待檢測樣品后，置于37°c孵育箱，孵育l-40min，取出加樣卡，將加樣卡放置在蓋子上，然后向每個樣品膜緩慢加入50-500ul的沖洗液，沖洗除去未反應(yīng)或多余的抗體。然后將加樣卡插回吸水盒，再向加樣孔中滴加10-200 μ I指示劑細胞，等待30s至Imin,向每個樣品孔緩慢加入200_1000ul的沖洗液,待沖洗液被吸水紙吸收后，觀察加樣孔的顏色。
[0037]在加樣孔上有顯著的紅色物質(zhì)殘留為陽性反應(yīng)，說明血清含有與膜上抗原對應(yīng)的抗體；加樣墊上沒有紅色物質(zhì)殘留為陰性反應(yīng)，則說明血清中不含與之對應(yīng)的抗體。結(jié)合抗原與抗體特異性反應(yīng)，抗人球蛋白實驗原理，可以很容易得知待檢測樣品中的抗體?；蛘?，也可以利用光信號或者電信號采集系統(tǒng)采集加樣墊上殘留的紅色殘留物質(zhì)，然后可以對結(jié)果自動化判斷，從而實現(xiàn)對批量血清或血漿樣品的不規(guī)則抗體檢測。
[0038]實施案例3
[0039]血小板抗體篩查檢測試劑盒的制備以及檢測方法
[0040]I在濾膜上固定血小板抗原
[0041]使用化學方法處理活化濾膜后，然后使用保護劑稀釋后的血小板抗原(或血小板)滴加到1.5cmX 1.5cm濾膜的中心，然后37°C烘干處理并密封保存。
[0042]3檢測試劑卡的組裝:
[0043]檢測試劑卡包括處理過的濾膜、吸水材料以及塑料支架組成。塑料支架有三部分組成，一是蓋子，二是加樣板，三是吸水盒。加樣板為一帶有4個孔(孔徑為0.5cm)的方形塑料板，可從試劑卡上拆除。帶有血小板抗原的濾膜貼在加樣板的背部，慮膜上的抗原中心與塑料版上的樣品孔相對映。在蓋子和吸水盒里面填充了 4cmX4cm的方形吸水紙。濾膜和吸水紙都是使用防水膠黏貼在塑料版上，防止加樣和沖洗過程濾膜和吸水紙脫落或串位置。
[0044]組裝后的血小板抗體檢測試劑卡以如圖3所示，其中加樣孔1、II為檢測孔，加樣孔III為陽性對照孔，加樣孔IV為陰性對照孔。
[0045]3指示劑細胞的制備:
[0046]—定濃度的O型紅細胞與抗D (IgG)抗體等體積混合，37°C孵育器，孵育30min，得到抗D (IgG)抗體致敏細胞，使用5倍體積生理鹽水洗滌數(shù)次，去除多余的IgG，用紅細胞保存液重懸至所需濃度，最后加入一定體積抗人球蛋白試劑混勻，得到抗IgG指示劑細胞。
[0047]4樣品檢測:
[0048]取出檢測試劑盒的樣品板，標記檢測孔、陽性對照孔以及陰性對照孔，向檢測孔滴加10-200 μ L的待測血清或血漿，向陽性對照孔滴加10-200 μ L陽性對照(含有抗人血小板抗體)，陰性對照孔滴加10-200 μ L陰性對照(不含抗人血小板抗體)，將樣品板置于37°C的孵育器中孵育l_40min，再次滴加50-500 μ L的生理鹽水，沖洗去除多余的血清或血漿。最后向反應(yīng)孔中滴加10-200 μ I指示劑細胞，等待30s至lmin，向每個反應(yīng)孔緩慢加入200-1000ul的沖洗液，待沖洗液被吸水紙吸收后，觀察加樣孔的顏色。
[0049]添加陽性對照的反應(yīng)孔上應(yīng)該有顯著的紅色物質(zhì)殘留，其原理是陽性對照中含有抗人血小板抗原可以血小板抗體結(jié)合，進而與指示劑細胞結(jié)合，將細胞截留在濾膜表面；添加陰性對照的反應(yīng)孔，因為陰性對照中不合有抗人血小板抗體，因此不能截留指示劑細胞，沒有紅色物質(zhì)殘留。根據(jù)結(jié)合抗原與抗體特異性反應(yīng)，抗人球蛋白實驗原理，并且參考陽對照孔和陰對照孔結(jié)果，可以很容易得知待檢測樣品中是否含有抗人血小板抗體。
[0050]上述技術(shù)方案僅體現(xiàn)了本發(fā)明技術(shù)方案的優(yōu)選技術(shù)方案，本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對其中某些部分所可能做出的一些變動均體現(xiàn)了本發(fā)明的原理，屬于本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法以及篩查檢測試劑盒的制備，其特征在于，該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料，檢測時，將待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，孵育一定時間后，微量沖洗液沖洗后，再將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。當膜上的抗原特異性結(jié)合血清(血漿)中抗體后，可以與特定的指示細胞發(fā)生紅細胞凝集反應(yīng)，進而形成肉眼可見的紅色團塊。當膜上的抗原不與血清(血漿)中抗體結(jié)合，指示劑細胞就不會發(fā)生凝集，紅細胞會被沖洗液分散，沒有肉眼可見紅色聚集塊。操作人員可依據(jù)紅細胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團塊來判斷結(jié)果，確定血清或者血漿中的抗體。指示劑紅細胞和膜結(jié)構(gòu)的結(jié)合，為反應(yīng)提供了結(jié)果顯示的方式。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法，其特征在于，所述血清(血漿)抗體包括血型抗體、HLA抗體、血小板抗體。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法，其特征在于，所述該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，而濾膜材質(zhì)可以是玻璃纖維膜或硝酸纖維膜或硅酸鹽顆粒等能夠形成特定連續(xù)液流通道的固體，且濾膜的內(nèi)徑在2-20微米之間。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法，其特征在于，所述濾膜的周邊包圍有吸水材料，吸水材料可以是吸水紙、棉花等，吸水材料包圍濾膜的方式為全部包圍或者部分包圍。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法，其特征在于，所述將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上，將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上的方法為物理吸附法或者化學交聯(lián)法。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法，其特征在于，所述的待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，其中的待檢血清或血漿為體積約10-200 μ L的新鮮的人血清或者血楽；。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法，其特征在于，所述的將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，其中指示劑細胞為保存在紅細胞保存液或其他等滲溶液中的抗人球蛋白包被的血紅細胞。指示劑紅細胞的制備可以依據(jù)紅細胞致敏的方法制作。根據(jù)實驗要求，指示劑細胞濃度在0.5% -20%之間。8.用于完成根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法的檢測試劑盒，其特征在于，該檢測試劑盒由檢測卡以及指示劑細胞組成。其中檢測卡內(nèi)設(shè)有能夠允許單個紅細胞通過的濾膜，將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜周邊墊有吸水墊，吸水墊的面積要大于濾膜，且濾膜和吸水墊都通過塑料固體結(jié)構(gòu)來做固定和支撐。而指示劑細胞則是抗人球蛋白包被的血紅細胞。 檢測時，將待檢血清或血漿滴加到檢測卡的濾膜表面，孵育一定時間后，微量沖洗液沖洗后，再將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。如果血清或者血漿中含有與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，血清或血漿中抗體將被結(jié)合到濾膜上，進而與指示劑細胞發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示紅細胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團塊；反之，如果血清或者血漿中不含與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，對應(yīng)的反定型指示劑細胞不會發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示劑紅細胞將會隨沖洗液液體滲出，則濾膜上不會形成肉眼可見的紅色團塊。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法以及篩查檢測試劑盒的制備，其特征在于，該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料，檢測時，將待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，孵育一定時間后，微量沖洗液沖洗后，再將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。本發(fā)明的有益效果是，檢測時間短，結(jié)果客觀。
【IPC分類】G01N33/96, G01N33/80
【公開號】CN104950114
【申請?zhí)枴緾N201410122813
【發(fā)明人】黃志剛
【申請人】天津德祥生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2014年3月31日