基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法以及篩查檢測試劑盒的制備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種血型判定檢測技術(shù)，特別是一種基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法以及篩查檢測試劑盒的制備。
【背景技術(shù)】
[0002]血清或血漿中了除了常規(guī)的ABO血型抗體外，還含有大量的不規(guī)則抗體和血小板抗體。具有臨床意義的不規(guī)則抗體會導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病等。因此，在臨床檢測中，對獻血者的血清或血漿進行不規(guī)則抗體篩查，可以防止含有不規(guī)則抗體的血液注射給病人，引起病人的溶血性輸血反應(yīng)；將篩查到的不規(guī)則抗體的血液制備成抗體血清，有利于稀有血型的檢測；對需要輸血的患者經(jīng)行不規(guī)則抗體篩查，有助于血液選擇，可以防止與不規(guī)則抗體相對的抗原血細胞的輸入，保證輸血安全；對孕婦進行不規(guī)則抗體篩查，可以預(yù)防和治療新生兒溶血病，提高胎兒和新生兒的身體素質(zhì)。而血小板抗體會導(dǎo)致血小板輸入無效、輸血后紫癜等，在臨床上，對于反復(fù)輸注血小板的病人，定期測定血清中的血小板抗體可以預(yù)測血小板輸注效果；對于血小板輸注無效的病人的血清或者血漿中的血小板抗體進行篩查，能及時發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致病人血小板輸注無效的免疫性因素；對孕婦產(chǎn)前進行血小板抗體篩查，可為早期流產(chǎn)發(fā)生的風(fēng)險提供診斷和治療依據(jù)。因此，為了確保輸血安全，輸血前對血清(血漿)中的抗體篩查越來越引起重視。
[0003]由于不規(guī)則抗體、血小板抗體主要是由輸血或血小板或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，這些抗體在生理鹽水介質(zhì)中不能直接產(chǎn)生細胞凝集反應(yīng)，因此，必須通過抗人球蛋白法、凝聚胺法等特殊方法檢測。
[0004]目前臨床檢測血清或血漿中抗體的篩查方法以平板法和柱凝集技術(shù)居多。平板法和柱凝集法操作復(fù)雜；離心等條件對實驗結(jié)果有影響；對于樣本較多時容易造成錯誤判斷；需要輔助設(shè)備，耗時長，限制了在緊急狀況下的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是為了解決上述問題，設(shè)計了一種基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法以及篩查檢測試劑盒的制備。
[0006]實現(xiàn)上述目的本發(fā)明的技術(shù)方案為，一種基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法以及篩查檢測試劑盒的制備，該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料，檢測時，將待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，孵育一定時間后，微量沖洗液沖洗后，再將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。當膜上的抗原特異性結(jié)合血清(血漿)中抗體后，可以與特定的指示細胞發(fā)生紅細胞凝集反應(yīng)，進而形成肉眼可見的紅色團塊。當膜上的抗原不與血清(血漿)中抗體結(jié)合，指示劑細胞就不會發(fā)生凝集，紅細胞會被沖洗液分散，沒有肉眼可見紅色聚集塊。操作人員可依據(jù)紅細胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團塊來判斷結(jié)果，確定血清或者血漿中的抗體。指示劑紅細胞和膜結(jié)構(gòu)的結(jié)合，為反應(yīng)提供了結(jié)果顯示的方式。
[0007]所述血清(血漿)抗體包括血型抗體、HLA抗體、血小板抗體及其它抗體。
[0008]所述該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，而濾膜材質(zhì)可以是玻璃纖維膜或硝酸纖維膜或硅酸鹽顆粒等能夠形成特定連續(xù)液流通道的固體，且濾膜的內(nèi)徑在2-20微米之間。
[0009]所述濾膜的周邊包圍有吸水材料，吸水材料可以是吸水紙、棉花等，吸水材料包圍濾膜的方式為全部包圍或者部分包圍。
[0010]所述將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上,將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上的方法為物理吸附法或者化學(xué)交聯(lián)法。
[0011]所述的待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，其中的待檢血清或血漿為體積約10-200 μ L的新鮮的人血清或者血漿。
[0012]所述的將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，其中指示劑細胞為保存在紅細胞保存液或其他等滲溶液中的抗人球蛋白包被的血紅細胞。指示劑紅細胞的制備可以依據(jù)紅細胞致敏的方法制作。根據(jù)實驗要求，指示劑細胞濃度在0.5% -20%之間。
[0013]該檢測試劑盒由檢測卡以及指示劑細胞組成。其中檢測卡內(nèi)設(shè)有能夠允許單個紅細胞通過的濾膜，將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜周邊墊有吸水墊，吸水墊的面積要大于濾膜，且濾膜和吸水墊都通過塑料固體結(jié)構(gòu)來做固定和支撐。而指示劑細胞則是抗人球蛋白包被的血紅細胞。
[0014]檢測時，將待檢血清或血漿滴加到檢測卡的濾膜表面，孵育一定時間后,微量沖洗液沖洗后，再將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。如果血清或者血漿中含有與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，血清或血漿中抗體將被結(jié)合到濾膜上，進而與指示劑細胞發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示紅細胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團塊；反之，如果血清或者血漿中不含與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，對應(yīng)的反定型指示劑細胞不會發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示劑紅細胞將會隨沖洗液液體滲出，則濾膜上不會形成肉眼可見的紅色團塊。
[0015]所述沖洗液為生理鹽水或者其他等滲的緩沖液。
[0016]利用本發(fā)明的技術(shù)方案制作的基于膜結(jié)構(gòu)的血清(血漿)抗體篩查方法以及篩查檢測試劑盒的制備，具有無需特殊設(shè)備，檢測時間短，結(jié)果客觀等優(yōu)勢，具有較好的臨床推廣價值。
【附圖說明】
[0017]圖1，是本發(fā)明所述基于膜結(jié)構(gòu)的血清或血漿中抗體篩查方法的實施例1的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0018]圖中，1、試劑盒底板；2、帶有血型抗原、血小板抗原或者其他抗原的濾膜區(qū)域；3、吸水墊。
[0019]圖2為血清或血漿中不規(guī)則抗體檢測試劑卡的示意圖，其中A為不規(guī)則抗體檢測試劑卡的整體圖；Β為不規(guī)則抗體檢測試劑卡的蓋子圖；C為不規(guī)則抗體檢測試劑卡的吸水盒；D為不規(guī)則抗體檢測試劑卡的加樣板,而I為塑料底板,2為濾膜，帶有血型抗原；3為吸水紙。
[0020]圖3為血清或血漿中血小板抗體檢測試劑卡的示意圖，其中A為血小板抗體檢測試劑卡的整體圖為血小板抗體檢測試劑卡的蓋子圖；C為血小板抗體檢測試劑卡的吸水盒；D為血小板抗體檢測試劑卡的加樣板，而I為塑料底板；2為濾膜，帶有血小板抗原；3為吸水紙。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的進行具體描述，本發(fā)明提供一種基于濾膜結(jié)構(gòu)的血清或血漿中抗體篩查的方法以及其檢測試劑盒制備。本試劑盒包括帶有修飾后的濾膜的檢測卡和對應(yīng)的指示劑細胞。下面結(jié)合實施案例進一步舉例描述本發(fā)明。
[0022]實施案例I
[0023]一種基于濾膜結(jié)構(gòu)的血清或者血漿中的抗體篩查檢測方法
[0024]該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，將細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料，檢測時，將待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，孵育一定時間后，微量沖洗液沖洗后，再將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。當膜上的抗原特異性結(jié)合血清(血漿)中抗體后，可以與特定的指示劑細胞發(fā)生細胞凝集反應(yīng)，進而形成肉眼可見的紅色團塊。當膜上的抗原不與血清(血漿)中抗體結(jié)合，指示劑細胞就不會發(fā)生凝集，紅細胞會被沖洗液分散，沒有肉眼可見紅色聚集塊。操作人員可依據(jù)紅細胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團塊來判斷結(jié)果，確定血清或血漿中的抗體。
[0025]實現(xiàn)所述的檢測方法的試劑盒包括兩部分，一部分為由帶有細胞、細胞碎片或者純化抗原的濾膜、吸水紙、塑料固體支架組成的檢測卡(如圖1所示)；一部分是用于檢測的抗人球指示劑細胞。其中，上述方法中所述的選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，濾膜材質(zhì)可以是玻璃纖維膜、硝酸纖維膜、硅酸鹽顆粒等能夠形成特定連續(xù)液流通道的固體，且濾膜的孔徑在2-20微米之間；所述的濾膜的周邊包圍有吸水材料，吸水材料可以是吸水紙、棉花等，吸水材料包圍濾膜的方式為全部包圍或者部分包圍；所述細胞、細胞碎片或者純化抗原結(jié)合到濾膜上，細胞、細胞碎片或者純化抗原到濾膜上的方法為物理吸附法或者化學(xué)交聯(lián)法；所述的待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，其中的待檢血清或血漿為體積約10-200 μ I新鮮的人血清或者血漿；所述的將特定的指示劑細胞滴加到濾膜表面，其中指示劑細胞為保存在紅細胞保存液或其他等滲溶液中的抗人球蛋白包被的血紅細胞。根據(jù)實驗要求，指示劑細胞濃度在0.5% -20%之間；所述沖洗液為生理鹽水或其他等滲的緩沖液。
[0026]實施案例2
[0027]血清或血漿中不規(guī)則抗體篩查檢測試劑盒的制備以及檢測步驟
[0028]I在濾膜上固定血型抗原
[0029]血型抗原的制備:選擇三組已知抗原圖譜的O型紅細胞和一組被IgG致敏的O型紅細胞分別作為檢測抗原組和陽性對照組，使用低滲透壓溶液破碎細胞，離心去上清，再使用相同的低滲透壓溶液洗滌沉淀，直至上清無色透明，收集紅細胞膜沉淀，作為血型抗原提取物。加入抗原保護劑稀釋抗原提取物?？乖Ｗo劑可以是含5%牛血清白蛋白、5%蔗糖、5% PVP、5%的小牛血清的5mM磷酸鹽緩沖液(pH7.4)?？乖Ｗo液即可以保護抗原原性，增強抗原的有效期；也可以輔助抗原固定在慮膜上。將稀釋后的抗原提取物滴加到活化處理過的1.5cmX 1.5cm濾膜的中心，然后37°C烘干處理并密封保存。
[0030]2指示劑細胞的制備: