一種馬西替坦中間體的檢測方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本專利涉及一種用于治療肺動脈高壓藥物的中間體N-丙胺基磺酰胺或其鹽的檢 測方法，以及在藥物馬西替坦及其制劑中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 馬西替坦（macitentan)是一個小分子、高度有效的組織祀向內(nèi)皮素受體詰抗劑， 同時具有高度親脂性，對內(nèi)皮素-1 (ET-1)及其2個受體（ETA、ETB受體）具有雙重抑制作 用，且具有組織靶向性。內(nèi)皮素與其受體結(jié)合后能夠促進(jìn)血管平滑肌的收縮，還可以通過組 織機制誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞的增殖和纖維化，引起血管炎癥，改變組織結(jié)構(gòu)，內(nèi)皮素在眾多 心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中均發(fā)揮重要作用。因此，馬西替坦作為內(nèi)皮素受體拮抗劑， 有重要的臨床意義。該藥由瑞士Actelion公司研制開發(fā)，已在美國和歐洲國家上市。
[0003] 在馬西替坦（式I)的合成工藝中用到了N-丙胺基磺酰胺（式II)或其鹽，該化合 物可能在馬西替坦后續(xù)的合成步驟中殘留，影響到終產(chǎn)品的質(zhì)量。因此，為了保證在馬西替 坦的整個合成工藝中下游產(chǎn)品的質(zhì)量，需要對N-丙胺基磺酰胺或其鹽的純度進(jìn)行控制；同 時，需要對馬西替坦及其制劑中N-丙胺基磺酰胺或其鹽的含量進(jìn)行控制，保證產(chǎn)品質(zhì)量。
[0004]
[0005] 目前，尚沒有任何文獻(xiàn)報道（II)或其鹽的檢測方法，因此，研宄開發(fā)一種專屬性 強、靈敏度高的N-丙胺基磺酰胺或其鹽的檢測方法顯得至關(guān)重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 根據(jù)N-丙胺基磺酰胺或其鹽的結(jié)構(gòu)特點，在近紫外區(qū)N-丙胺基磺酰胺或其鹽不 產(chǎn)生吸收，無法采用常用的紫外分光光度法進(jìn)行檢測。因此，本發(fā)明解決的問題在于提供一 種專屬性強、靈敏度高的檢測方法。
[0007] 本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0008] -種N-丙胺基磺酰胺或其鹽的檢測方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色 譜法進(jìn)行檢測，檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD)，流動相中含有一定比例的堿性添加劑。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明，所述堿性添加劑為二乙胺、三乙胺、乙醇胺中的至少一種。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明，所述流動相為正己烷-異丙醇-堿性添加劑，所述正己烷和異丙醇的 體積比為50~90 :10~50。堿性添加劑的量沒有特別限制。優(yōu)選地，正己烷：異丙醇：堿 性添加劑的量為50~90 :10~50 :0. 01~20。更優(yōu)選地，正己烷：異丙醇：堿性添加劑的 量為60~80 :20~40 :0. 05~10,還更優(yōu)選地，正己烷：異丙醇：堿性添加劑的量為65~ 75 :25 ~35 :0. 1 ~5。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明，所述檢測方法包括：
[0012] (1)采用正相條件進(jìn)行分離；
[0013] (2)采用蒸發(fā)光散射檢測器進(jìn)行高效液相色譜法檢測。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明，所述正相條件采用硅膠柱進(jìn)行。更優(yōu)選地，所述正相條件采用正己 烷-異丙醇作為流動相，二乙胺或三乙胺作為堿性添加劑。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明，所述N-丙胺基磺酰胺或其鹽的檢測方法，其具體操作步驟如下：
[0016] (1)溶液的制備：取N-丙胺基磺酰胺加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含 50.0yg的溶液，備用；
[0017] (2)色譜條件：
[0018] 檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD)
[0019] 流動相：正己烷-異丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0? 01~20)
[0020] 色譜柱：硅膠柱
[0021] 柱溫：25 ~40°C
[0022] 流速：0? 5 ~1.Oml/min
[0023] 漂移管溫度：35~60°C
[0024] 空氣流速：1. 0 ~5.OL/min
[0025] (3)檢測步驟：按照高效液相色譜法（例如中國藥典2010年版二部附錄VD)測 定，取供試溶液20y1注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
[0026] (4)按面積歸一化法計算N-丙胺基磺酰胺的含量。
[0027] 本發(fā)明還提供一種馬西替坦中雜質(zhì)N-丙胺基磺酰胺或其鹽的檢測方法，其特征 在于，所述方法采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD)，流動相 中含有一定比例的堿性添加劑。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明，所述檢測方法優(yōu)選包括如下步驟：
[0029] (1)對照品溶液的制備：取N-丙胺基磺酰胺對照品加流動相溶解并稀釋制成每 lml中約含50. 0yg的溶液作為對照品溶液；
[0030](2)供試品溶液的制備：取馬西替坦，加流動相溶解并稀釋成每1ml中約
[0031] 含50mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液；
[0032] (3)色譜條件：
[0033] 檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD)
[0034] 流動相：正己烷-異丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0? 01~20)
[0035] 色譜柱：硅膠柱
[0036] 柱溫：25 ~40°C
[0037] 流速：0? 5 ~1.Oml/min
[0038] 漂移管溫度：35~60°C
[0039] 空氣流速：1. 0 ~5.OL/min
[0040] (4)檢測步驟：按照高效液相色譜法（例如中國藥典2010年版二部附錄VD)測 定，取供試品溶液和對照品溶液各20y1注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
[0041] (5)按外標(biāo)法計算供試品中N-丙胺基磺酰胺的含量。
[0042]本發(fā)明還提供一種含有馬西替坦及其制劑中雜質(zhì)N-丙胺基磺酰胺或其鹽的檢測 方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器 (ELSD)，流動相中含有一定比例的堿性添加劑。
[0043] 所述檢測方法及其各具體特征如前述任一項所述。
[0044] 本發(fā)明還提供上述檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，所述方法用于N-丙胺基磺酰胺 或其鹽的純度或含量測定。
[0045] 本發(fā)明還提供上述檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，所述方法用于在馬西替坦中檢 測雜質(zhì)N-丙胺基磺酰胺或其鹽。
[0046] 本發(fā)明還提供上述檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，所述方法用于含有馬西替坦及 其可藥用鹽形式的藥物制劑中檢測雜質(zhì)N-丙胺基磺酰胺或其鹽。
[0047] 優(yōu)選地，所述馬西替坦及其制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑、控釋制劑或緩釋 制劑的形式。
[0048] 本發(fā)明通過改變流動相，檢測器參數(shù)等多次試驗確定了本發(fā)明的檢測條件。本發(fā) 明的檢測方法，可以很好地將主成分與其他物質(zhì)完全分離，可以準(zhǔn)確地測定其雜質(zhì)的含量。 該方法具有如下優(yōu)點：樣品溶解速度快，1分鐘內(nèi)可完全溶解，分析時間一般在30分鐘以 內(nèi)；流動相的配制操作簡單；該方法的N-丙胺基磺酰胺檢測限為15. 75ng，靈敏度高；在該 方法下N-丙胺基磺酰胺的回收率在90%以上，平均回收率可以達(dá)到98. 16%，能滿足N-丙 胺基磺酰胺定量測定的要求。另外，配制的溶液在36h內(nèi)測定均較穩(wěn)定。綜上，確定的分析 方法穩(wěn)定可靠，靈敏度高。
【附圖說明】
[0049] 圖1為實施例3中N-丙胺基磺酰胺線性關(guān)系圖；
[0050] 圖2為實施例3中馬西替坦線性關(guān)系圖；
[0051] 圖3為實施例4中N-丙胺基磺酰胺定位HPLC圖；
[0052] 圖4為實施例4中N-丙胺基磺酰胺與馬西替坦混合溶液HPLC圖；
[0053] 圖5為實施例8中檢測馬西替坦供試品中N-丙胺基磺酰胺含量的HPLC圖。
【具體實施方式】
[0054] 以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。但本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，下述實施例不 是對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，任何在本發(fā)明基礎(chǔ)上做出的改進(jìn)和變化都在本發(fā)明的保護(hù)范 圍之內(nèi)。
[0055] 實施例1色譜備件的詵擇
[0056] 儀器與條件：Alltech液相色譜系統(tǒng)，蒸發(fā)光散射檢測器（2000ES)，色譜柱： InnovalSilica柱（250X4.6mm，100A，5ym);柱溫 30°C。
[0057] 試驗步驟：
[0058] 供試液配制：取N-丙胺基磺酰胺和馬西替坦，配制為含N-丙胺基磺酰胺約 50yg/ml，馬西替坦約50.Omg/ml的溶液；
[0059] 色譜條件1 :Alltech液相色譜系統(tǒng)，蒸發(fā)光散射檢測器（2000ES)，色譜柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己燒-異丙醇為流動相（90:10);漂移 管溫度：35°C。
[0060] 色譜條件2:Alltech液相色譜系統(tǒng)，蒸發(fā)光散射檢測器（2000ES)，色譜柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己燒-異丙醇-二乙胺為流動相 (80:20:0.2);漂移管溫度：40°C。
[0061] 色譜條件3 :Alltech液相色譜系統(tǒng)，蒸發(fā)光散射檢測器（2000ES)，色譜柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己燒-異丙醇-三乙胺為流動相 (50:50:0.5);漂移管溫度：60°C。
[0062] 色譜條件4 :Alltech液相色譜系統(tǒng)，蒸發(fā)光散射檢測器（2000ES)，色譜柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己燒-異丙醇-乙醇胺為流動相 (65:35:0. 1);漂移管溫度：45°C。
[0063] 取供試液20ul，注入色譜儀，分別照上述條件進(jìn)行檢測。試驗結(jié)果見下表。
[0064] 表1 :流動相選擇試驗結(jié)果
[0066] 實施例2定量限和檢測限
[0067] 檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD)
[0068] 流動相：正己燒_異丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0069] 色譜柱：硅膠
[0070] 流速：0? 5ml/min
[0071] 漂移管溫度：40