一種異型性組織細胞干化學分析試劑膜及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種異型性組織細胞干化學分析試劑膜及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 干化學分析技術是指將液體檢測樣品直接加到干燥試劑條上，W被測樣品的水分 作為溶劑引起特定的化學反應，從而進行化學分析的方法。它采用反射光度法或差示電極 法作為測量手段，主要具備W下特點：準確度高、速度快，一般在1~3min內即可做出檢驗 結果；操作簡便，不需要日常校正；無須貶備任何其它試劑或配制任何溶液；它不僅可用于 定性檢查，目前還發(fā)展成為了半定量和定量的分析方法，已成為臨床檢驗中一類重要的方 法。目前市場上已經存在多種檢測如尿蛋白、尿糖、隱血、膽紅素、尿膽素原、酬體、比重、亞 硝酸鹽，細菌尿等的試劑帶。但用于檢測異型性組織細胞的干化學分析試劑膜尚未發(fā)現。
[0003] 腫瘤組織無論在細胞形態(tài)和組織結構上，都與其發(fā)源的正常組織有不同程度的差 異，該種差異稱為異型性（atypia)。腫瘤組織異型性的大小反映了腫瘤組織的成熟程度 (即分化程度，在此指腫瘤的實質細胞與其來源的正常細胞和組織在形態(tài)和功能上的相似 程度)。異型性小者，說明它和正常組織相似，腫瘤組織成熟程度高(分化程度高）；異型性 大者，表示瘤組織成熟程度低(分化程度低)。區(qū)別該種異型性的大小是診斷腫瘤，確定其 良、惡性的主要組織學依據。惡性腫瘤常具有明顯的異型性。腫瘤組織細胞原血紅素（The protohemeoftumorcells,TCPH)是在組織細胞異型性變過程中產生一種因果性生物標 志因子，是分析檢測組織細胞異型性變的一種新方法。TCPH具有氧化損傷作用，它干擾細胞 的微環(huán)境，催生多種自由基，引起細胞膜脂質、脂蛋白、細胞骨架、DNA等的氧化損傷，使細胞 周期中的DNA損傷檢查點等失去阻滯作用，引起染色體端粒附近DNA序列丟失化及染色體 的重排和基因擴增，表現為組織細胞的異型性變化。TCPH析出量與細胞異型性改變程度呈 正相關。所W，分析TCPH的有無及其含量，就可W了解組織細胞異型性改變的有無及其程 度。由于腫瘤性炎癥的炎性滲出，TCPH與腫瘤性炎性滲液一道被排出，腫瘤組織的炎性滲 液可W作為直接生物學介質來檢測腫瘤組織細胞原血紅素的存在，進而分析組織細胞有否 異型性變。
[0004]目前，已經研發(fā)出用于檢測組織細胞異型性變化的液體試劑。但是，液體試劑一般 穩(wěn)定性較差，不易儲藏，且使用不方便，不適合于臨床快速分析檢測應用。本專利旨在提供 一種利用干化學法檢測組織滲液中可能含有的腫瘤組織細胞原血紅素，進而分析組織細胞 異型性變化的專用試劑膜。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種異型性組織細胞干化學分析試劑膜，該試劑膜可W置 入塑料試劑檢測卡內單獨使用，或與便攜式讀數儀配合使用，用于檢測腫瘤組織細胞原血 紅素，進而分析組織細胞有否異型性變化及其程度。其具有結構簡單、使用方便、快速、穩(wěn)定 性好的特點。
[0006] 本發(fā)明還提供了該種異型性組織細胞干化學分析試劑膜的制備方法。該制備方法 簡單，制備的產品穩(wěn)定性好，在低溫、干燥環(huán)境下可保存使用3年。
[0007] 本發(fā)明采用W下技術方案： 一種異型性組織細胞干化學分析試劑膜，其特征在于，它是將異型性組織細胞分析試 劑溶液預置在空白試劑膜上分兩次干燥制成；所述異型性組織細胞分析試劑溶液是由供氨 體、過氧化物、絡合劑、穩(wěn)定劑、增敏劑、調色劑、有機助溶劑和緩沖液組成； 所述供氨體為3-5g/L的3, 3'，5, 5' -四甲基聯苯胺； 所述過氧化物為4-8ml/L過氧化哲基異丙苯； 所述絡合劑為0. 92-1. 05g/L己二胺四己酸二鋼； 所述穩(wěn)定劑為50-75g/L聚己締化咯燒酬K30; 所述增敏劑為5-lOml/L6-甲氧基嗟咐； 所述調色劑為0. 4-0. 55g/L己基澄； 所述有機助溶劑為l-2g/L十二烷基硫酸鋼和無水己醇； 所述緩沖液為0. 5-2mol/LpH3. 2-6.8的磯酸鹽緩沖液； 所述空白試劑膜為31ET濾紙。
[000引優(yōu)選的，所述異型性組織細胞分析試劑溶液由4g/L的3, 3'，5, 5'-四甲基聯苯胺、 5ml/L過氧化哲基異丙苯、0. 99g/L己二胺四己酸二鋼、55g/L聚己締化咯燒酬K30、6ml/L 6-甲氧基嗟咐、0. 49g/L己基澄、1. 5g/L十二烷基硫酸鋼、無水己醇和1. 75mol/LpH5. 5的 磯酸鹽緩沖液組成。
[0009] 所述異型性組織細胞干化學分析試劑膜厚度為0. 5mm，流速為180mm/30min。
[0010] 所述的異型性組織細胞干化學分析試劑膜的制備方法，其特征在于，它包括W下 步驟： 1) 配制磯酸鹽緩沖液； 2) 取配好的磯酸鹽緩沖液950ml，按量稱取己二胺四己酸二鋼加入其中，并在60°C水 浴中加熱使之溶解完全； 3) 將聚己締化咯燒酬K30加入上述溶液，攬拌至全溶； 4) 將十二烷基硫酸鋼溶入蒸饋水100ml中，配置成十二烷基硫酸鋼溶液，向步驟（3)制 得的混合溶液中加入50ml十二烷基硫酸鋼溶液混合均勻； 5) 將空白試劑膜在步驟4)制得的溶液中浸泡1秒鐘后取出，淋去多余試劑，烘干制成 試劑膜半成品； 6) 將3,3'，5,5' -四甲基聯苯胺、己基澄、聚己締化咯燒酬K30分別加入到無水己醇 900ml中，攬拌至完全溶解； 7) 將過氧化哲基異丙苯加入到步驟6)制得的溶液中，攬拌至混合均勻； 8) 將6-甲氧基嗟咐加入到步驟7)制得的混合溶液中，并加無水己醇至比，攬拌混合 均勻； 9) 將步驟5)制得的試劑膜半成品在步驟8)制得的溶液中浸泡1秒鐘后取出，淋去多 余試劑，均勻地烘干，制得最終產品異型性組織細胞干化學分析試劑膜。
[0011] 將所制備的試劑膜裁切成與檢測卡尺寸相適應的大小后置入檢測卡內，在低溫、 避光、干燥條件下保存。一般與便攜式讀數儀相配套使用的檢測卡大小為1X1. 2cm。
[0012] 本發(fā)明制備的異型性組織細胞干化學分析試劑膜的使用方法有兩種： (1)在檢測卡的檢測孔處滴入組織滲液樣本液50微升，1分鐘內在檢測孔處目測試劑 膜的顏色變化，并與比色板比對得出檢測結果。
[0013] (2)在檢測卡的檢測孔處滴入組織滲液樣本液50微升，放入便攜式讀數儀進行測 試。在反應44秒的時間點上，W反射光的光量值通過儀器設定的標準曲線讀取相對應的 腫瘤組織細胞原血紅素的量值，并轉化為組織細胞異型性變化的評價指標，W陰性、陽性表 /J、- 〇
[0014] 本發(fā)明的有益效果如下；本發(fā)明提供的在組織細胞異型性變篩查檢測過程中使用 的異型性組織細胞干化學分析試劑膜，其成本低廉，結構簡單，穩(wěn)定性好，在低溫干燥的環(huán) 境下可W穩(wěn)定保存3年；使用方便，可作為床旁診斷（P0CT)試劑使用，亦可與便攜式讀數儀 配套使用，從而實現快速半定量或定量測量組織滲液樣本中腫瘤細胞原血紅素的濃度，并 轉化為組織細胞異型性變化W陰性、陽性表示的評價指標，可直觀的分析出組織細胞異型 性大小。
【具體實施方式】
[0015] 下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明。
[001引實施例1 一種異型性組織細胞干化學分析試劑膜，它是將異型性組織細胞分析試劑溶液預置 在空白試劑膜上分兩次干燥制成；其中的異型性組織細胞分析試劑溶液由3g/L的3,3'， 5,5'-四甲基聯苯胺、4ml/L過氧化哲基異丙苯、0.92g/L己二胺四己酸二鋼、50g/L聚己 締化咯燒酬K30、5ml/L6-甲氧基嗟咐、0. 4g/L己基澄、Ig/L十二烷基硫酸鋼、無水己醇、 0. 5mol/LpH3. 2的磯酸鹽緩沖液組成；空白試劑膜為31ET濾紙。
[0017] 具體制備方法如下： 1) 配制0. 5mol/L抑6.8的磯酸鹽緩沖液； 2) 取配好的磯酸鹽緩沖液950ml，稱取0. 92g己二胺四己酸二鋼加入其中，并在60°C水 浴中加熱使之溶解完全； 3) 將50g聚己締化咯燒酬K30加入上述溶液，攬拌至全溶； 4) 將2g十二烷基硫酸鋼溶入蒸饋水100ml中，配置成十二烷基硫酸鋼溶液，向步驟（3) 制得的混合溶液中加入50ml十二烷基硫酸鋼溶液混合均勻； 5) 將空白試劑膜在步驟4)制得的溶液中浸泡1秒鐘后取出，淋去多余試劑，烘干制成 試劑膜半成品； 6) 將3g3, 3'，5, 5' -四甲基聯苯胺、0. 4g己基澄、50g聚己締化咯燒酬K30分別加入 到無水己醇900ml中，攬拌至完全溶解； 7) 將4ml過氧化哲基異丙苯加入到步驟6)制得的溶液中，攬拌至混合均勻； 8) 將5ml6-甲氧基嗟咐加入到步驟7)制得的混合溶液中，并加無水己醇至比，攬拌 混合均勻； 9將步驟5)制得的試劑膜半成品在步驟8)制得的溶液