測(cè)定鮮竹瀝中有效成分愈創(chuàng)木酚含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種藥物的檢測(cè)方法，具體設(shè)及測(cè)定鮮竹漸中有效成分愈創(chuàng)木酪含量 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鮮竹漸是《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥材第一冊(cè)收載的中藥制劑，具有清熱化疲功能， 用于肺熱咳嗽疲多，氣喘胸悶，中風(fēng)舌強(qiáng)，疲誕塞盛，小兒疲熱驚風(fēng)，由于鮮竹漸現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)（《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥材第一冊(cè)）僅規(guī)定了常規(guī)檢查，此標(biāo)準(zhǔn)無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)檢測(cè)，不 能有效地控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量，根據(jù)相關(guān)要求，需要對(duì)該制劑增訂含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，W更好的 控制產(chǎn)品質(zhì)量。
[0003] 鮮竹漸為禾木科植物竹的鮮桿經(jīng)加熱后自然漸出的液體，煮沸后，加適量防腐劑 制得，鮮竹漸的化學(xué)成分有多種氨基酸，酪類(lèi)（甲酪、苯酪、愈創(chuàng)木酪）、有機(jī)酸類(lèi)等，目前認(rèn) 為愈創(chuàng)木酪為其止咳化?；钚猿煞?，據(jù)此愈創(chuàng)木酪作為含量測(cè)定對(duì)象，適合作為含量測(cè)定 對(duì)象。
[0004] 因此，迫切需要研發(fā)一種測(cè)定鮮竹漸中有效成分愈創(chuàng)木酪含量的方法，來(lái)作為評(píng) 定鮮竹漸質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為克服上述現(xiàn)有【背景技術(shù)】的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種能更好地控制鮮竹 漸產(chǎn)品質(zhì)量的愈創(chuàng)木酪含量的測(cè)定方法。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)如下措施來(lái)達(dá)到的；一種測(cè)定鮮竹漸中有效成分愈創(chuàng)木酪含 量的方法，包括W下步驟：
[0007] (1)對(duì)照品溶液的制備；取愈創(chuàng)木酪對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每ImL 含5yg的溶液，即得對(duì)照品愈創(chuàng)木酪溶液；
[0008] (2)供試品溶液的制備；量取鮮竹漸25ml，用稀鹽酸調(diào)抑值至1~2,用己離萃 取3次，第一次使用己離20ml，第二次使用己離20ml，第=次使用己離10ml，合并萃取液， 自然揮干己離，殘留物用少量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，用 0. 45 y m濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；
[0009] (3)用高效液相色譜測(cè)定；W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，其中流動(dòng)相流速 為0. 7mL/min，柱溫為30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，理論板數(shù)按愈創(chuàng)木酪峰計(jì)不低于5000,分別 吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 y 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，得供試品溶液每ImL含愈 創(chuàng)木酪不少于0. 25 y g為合格；
[0010] 所述流動(dòng)相中各成分的體積比為；己膳；〇. 2%磯酸的水溶液=30 : 70。
[0011] 進(jìn)一步地，使用高效液相色譜測(cè)定時(shí)，所用色譜柱的柱高250mm，內(nèi)徑4. 6mm，填充 劑粒徑為5ym。
[0012] 本發(fā)明的有益效果在于；本發(fā)明使用高效液相色譜法對(duì)控制鮮竹漸產(chǎn)品質(zhì)量的愈 創(chuàng)木酪含量進(jìn)行測(cè)定，相比于現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)的檢測(cè)，本發(fā)明能直接通過(guò)檢測(cè)愈 創(chuàng)木酪的含量來(lái)控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量，而且本測(cè)定方法中，愈創(chuàng)木酪分離效果好，穩(wěn)定性和 準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，該樣能更好地控制鮮竹漸產(chǎn)品的質(zhì)量。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1為愈創(chuàng)木酪對(duì)照品色譜圖；
[0014] 圖2為供試品色譜圖；
[0015] 圖3為陰性對(duì)照色譜圖；
[0016] 圖4為愈創(chuàng)木酪標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但它們并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明 的限定，僅作舉例而已。同時(shí)通過(guò)說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)將變得更加清楚和容易理解。
[001引 實(shí)施例
[0019] 本發(fā)明提供一種測(cè)定鮮竹漸中有效成分愈創(chuàng)木酪含量的方法，包括W下步驟：
[0020] (1)對(duì)照品溶液的制備；取愈創(chuàng)木酪對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每ImL 含5 y g的溶液，即得對(duì)照品愈創(chuàng)木酪溶液；
[002U (2)供試品溶液的制備；量取鮮竹漸25ml，用稀鹽酸調(diào)抑值至1~2,用己離萃 取3次，第一次使用己離20ml，第二次使用己離20ml，第=次使用己離10ml，合并萃取液， 自然揮干己離，殘留物用少量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，用 0. 45 y m濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；
[0022] (3)用高效液相色譜測(cè)定；W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，其中流動(dòng)相流速 為0. 7mL/min，柱溫為30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，理論板數(shù)按愈創(chuàng)木酪峰計(jì)不低于5000,分別 吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 y 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，得供試品溶液每ImL含愈 創(chuàng)木酪不少于0. 25 y g為合格；
[0023] 所述流動(dòng)相中各成分的體積比為；己膳；0. 2%磯酸的水溶液=30 : 70。
[0024] 使用高效液相色譜測(cè)定時(shí)，所用色譜柱的柱高250mm，內(nèi)徑4. 6mm，填充劑粒徑為 Sum。
[0025] 相關(guān)試驗(yàn)報(bào)告如下：
[0026] 1、儀器與試藥
[0027] DIONEX高效液相色譜儀，MVD170 yLC紫外檢測(cè)器，電子天平（北京賽多利斯天平 有限公司），Aglilent Extend C18柱（250mmX4.6mm，5]im)。鮮竹漸口服液（湖北端正藥 業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)131001、131002、131003);愈創(chuàng)木酪對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究 院，批號(hào)111510-200202,供含量測(cè)定使用）；HPLC用水為雙蒸水（實(shí)驗(yàn)室自己制備），己膳 為色譜純，鹽酸（開(kāi)封東大化工有限公司試劑廠）、無(wú)水己離、甲醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限 公司，批號(hào)為20131115)等均為分析純。
[002引 1. 1對(duì)照品洛濃的制備
[0029] 取愈創(chuàng)木酪對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每ImL含5yg的溶液，即得對(duì)照 品愈創(chuàng)木酪溶液；
[0030] 1. 2對(duì)照品貶備液的制備
[0031] 精密稱取愈創(chuàng)木酪對(duì)照品8. 08mg，加入到25ml容量瓶，加甲醇定容，得濃度為 323. 2 y g/ml的愈創(chuàng)木酪對(duì)照品儲(chǔ)備液。
[0032] 1.3供試品溶液的制備
[003引量取鮮竹漸25ml，用稀鹽酸調(diào)抑值至1~2,用己離萃取3次，第一次使用己離 20ml，第二次使用己離20ml，第S次使用己離10ml，合并萃取液，自然揮干己離，殘留物用 少量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 ym濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾 液，即得供試品溶液。
[0034] 1. 4陰性對(duì)照溶液的制備
[0035] 按現(xiàn)行鮮竹漸制法（《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥材第一冊(cè)）制成不含鮮竹漸的陰性 對(duì)照品，按"供試品溶液的制備"項(xiàng)下的方法制成陰性對(duì)照溶液。
[0036] 2.方法與結(jié)果
[0037] 2. 1色譜系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
[003引 Aglilent Extend C18 柱（250mmX4. 6mm，5 y m) ; W 己膳-0. 2 % 磯酸的水溶液 (30 : 70)為流動(dòng)相；流速為0. 7ml/min ;柱溫30°C;檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm ;分別取制備好的對(duì) 照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣，進(jìn)樣量都為20 y以結(jié)果如圖1至3,圖1愈創(chuàng)木 酪保留時(shí)間在21. 521min ;與圖1愈創(chuàng)木酪對(duì)照品保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，圖2中的愈創(chuàng)木酪色譜 峰與其他雜質(zhì)峰完全分離，分離效果好，因此說(shuō)明實(shí)驗(yàn)所采用的色譜柱、流動(dòng)相及配比、保 留時(shí)間的選擇恰當(dāng)，色譜條件良好；圖3中所呈現(xiàn)的色譜峰為防腐劑，及供試品色譜圖中位 于愈創(chuàng)木酪色譜峰之后的巨型峰，陰性對(duì)照溶液在與對(duì)照品溶液和供試品溶液相同保留時(shí) 間處未顯愈創(chuàng)木酪色譜峰，故認(rèn)為對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。
[0039] 2. 2標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0040] 取愈創(chuàng)木酪對(duì)照品儲(chǔ)備液，稀釋制成系列濃度（1. 616 y g/ml、3. 232 y g/ml、 6. 464 y g/ml、16. 16 y g/ml、32. 32 y g/ml)，精密吸取上述不同濃度的對(duì)照品溶液各20 y L， 注入高效液相色譜儀，照2. 1條件測(cè)定色譜峰面積，相關(guān)濃度與峰面積見(jiàn)表1，W對(duì)照品溶 液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為；Y = 1. 3004X-0. 4386, r =0. 9996,見(jiàn)圖4,結(jié)果表明愈創(chuàng)木酪在1. 616~32. 32 y g/ml線性關(guān)系良好。
[0041] 表1線性關(guān)系
[0042]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 測(cè)定鮮竹瀝中有效成分愈創(chuàng)木酚含量的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟一：對(duì)照品溶液的制備：取愈創(chuàng)木酷對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每ImL 含5 y g的溶液，即得對(duì)照品愈創(chuàng)木酚溶液； 步驟二：供試品溶液的制備：量取鮮竹瀝25ml，用稀鹽酸調(diào)pH值至1~2,用乙醚萃 取3次，第一次使用乙醚20ml，第二次使用乙醚20ml，第三次使用乙醚10ml，合并萃取液， 自然揮干乙醚，殘留物用少量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，用 0. 45 y m濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液； 步驟三：用高效液相色譜測(cè)定：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，其中流動(dòng)相流速 為0. 7mL/min，柱溫為30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，理論板數(shù)按愈創(chuàng)木酚峰計(jì)不低于5000,分別 吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 y 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，得供試品溶液每ImL含愈 創(chuàng)木酷不少于〇. 25 y g為合格； 所述流動(dòng)相中各成分的體積比為：乙腈：〇. 2%磷酸的水溶液=30 :70。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定鮮竹瀝中有效成分愈創(chuàng)木酚含量的方法，其特征在于所述 步驟三中，使用高效液相色譜測(cè)定時(shí)，所用色譜柱的柱高250mm，內(nèi)徑4. 6mm，填充劑粒徑為 5 u m〇
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種測(cè)定鮮竹瀝中有效成分愈創(chuàng)木酚含量的方法，它包括對(duì)照品溶液的制備步驟、供試品溶液的制備步驟和高效液相色譜測(cè)定步驟，確定產(chǎn)品每1ml含愈創(chuàng)木酚不得少于0.25μg，本發(fā)明使用高效液相色譜法對(duì)控制鮮竹瀝產(chǎn)品質(zhì)量的愈創(chuàng)木酚含量進(jìn)行測(cè)定，相比于現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)的檢測(cè)，能直接通過(guò)檢測(cè)愈創(chuàng)木酚的含量來(lái)控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量，而且本測(cè)定方法中，愈創(chuàng)木酚分離效果好，穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，這樣能更好地控制鮮竹瀝產(chǎn)品的質(zhì)量。
【IPC分類(lèi)】G01N30-02, G01N30-06
【公開(kāi)號(hào)】CN104749282
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510160121
【發(fā)明人】余國(guó)斌
【申請(qǐng)人】湖北端正藥業(yè)股份有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月1日
【申請(qǐng)日】2015年4月7日