裸花紫珠藥材中三種有效成分含量的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及裸花紫珠藥材中三種有效成分含量的測定方法，具體涉及裸花紫珠藥 材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5, 4'-二羥基-3, 7, 3'-三甲氧基黃酮三種有效成分含量的 測定方法，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 裸花紫珠（i7aJ7ica/77a Hook. Et A rn.)為馬鞭草科紫珠屬植物。黎 藥名補(bǔ)閥，主產(chǎn)于海南、廣東和廣西。其葉味微苦、澀，性平；有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消 腫的功能。用于化膿性炎癥、急性傳染性肝炎、呼吸道及消化道出血、血小板減少性紫癜；外 用治燒、燙傷及外傷出血，是海南黎族醫(yī)生常用藥材之一。
[0003] 國內(nèi)外對裸花紫珠化學(xué)成分的研究報(bào)道較少，從中分離的成分主要有黃酮類、萜 類、揮發(fā)油和酚類等。裸花紫珠中黃酮類化合物主要有木犀草素及其配糖體；從裸花紫珠葉 中分離得到酚類化合物主要有酚苷類如毛蕊花糖苷、samioside，連翹酯苷等。
[0004] 裸花紫珠質(zhì)量研究常用的方法有顯微鑒別法、薄層色譜（TLC)法、紫外分光光度計(jì) 法，高效液相色譜（HPLC)法等。對裸花紫珠藥材或其中藥制劑的有效成分含量測定方法報(bào) 道中主要有黃酮類、萜類及酚苷類。目前對于裸花紫珠藥材及其制劑中有效成分的含量測 定方法多采用高效液相色譜法對其中某一有效成分如木犀草素、毛蕊花糖苷、齊墩果酸等 進(jìn)行含量測定，文獻(xiàn)報(bào)道很多，專利如中國專利"裸花紫珠制劑中毛蕊花糖苷含量的測定方 法"（【申請?zhí)枴?01010289134. 1)。這種采用單一有效成分含量控制藥材及其制劑的質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)不能全面控制藥材質(zhì)量，而采用不同測定方法測定兩種以上有效成分的含量，事必使得 測定工作繁重，測定周期延長，不利于實(shí)際工作特別是企業(yè)大生產(chǎn)中推廣及操作。目前采用 一種測定條件同時(shí)測定兩種以上有效成分的測定方法鮮有報(bào)道。
[0005] 本發(fā)明提供了一種測定方法，采用高效液相色譜可以同時(shí)測定裸花紫珠藥材中毛 蕊花糖苷、木犀草素及5,4'-二羥基_3,7,3'-三甲氧基黃酮三種有效成分的含量。這 種同時(shí)測定裸花紫珠藥材中多個(gè)有效成分含量的分析方法，不僅完善了裸花紫珠藥材質(zhì)量 控制的方法，而且方法可靠，易操作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種同時(shí)測定裸花紫珠藥材中毛蕊花糖苷、木犀草素及 5, 4'-二羥基-3, 7, 3'-三甲氧基黃酮三種有效成分含量的測定方法。
[0007] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案如下： 采用高效液相色譜測定裸花紫珠藥材中毛蕊花糖苷、木犀草素及5,4'-二羥 基-3, 7, 3'-三甲氧基黃酮三種有效成分含量。色譜條件與系統(tǒng)適用性為：用十八烷基硅 烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為有機(jī)溶劑一酸性溶液，采用梯度洗脫，如下 ： O-IOmin有機(jī)溶劑比例為10%~50% ; 10-20min有機(jī)溶劑比例為20%~60% ; 20-30min有機(jī)溶劑比例為25%~70% ; 30-40min有機(jī)溶劑比例為30%~80% ; 40-50min有機(jī)溶劑比例為35%~80% ; 50-60min有機(jī)溶劑比例為40%~80%， 酸性溶液濃度為〇-〇. 3%，檢測波長320-360nm，柱溫25°C -40°C。
[0008] 所述流動相中的有機(jī)溶劑包括甲醇或乙腈中的一種，甲醇和乙腈均為色譜純；酸 性溶液的酸包括磷酸、乙酸或甲酸中的一種，磷酸、乙酸和甲酸均為分析純。
[0009] 所述色譜條件與系統(tǒng)適用性優(yōu)選為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相 為甲醇一0. 15%磷酸水溶液，采用梯度洗脫，如下： 0-5min甲醇一 0. 15%磷酸水溶液38:62 ; 5-14min甲醇一0. 15%磷酸水溶液45:55 ; 14-23min甲醇一0. 15%磷酸水溶液60:40 ; 23-30min甲醇一 0. 15%磷酸水溶液70:30 ; 30-35111丨11甲醇一0.15%磷酸水溶液75:25， 檢測波長350nm，柱溫40°C。
[0010] 對照品溶液制備：取毛蕊花糖苷，木犀草素和5, 4'-二羥基-3, 7, 3'-三甲氧基 黃酮對照品適量，精密稱定，加75%甲醇溶解分別約制成每I mL各含毛蕊花糖苷1. 48啤、 木犀草素0.05 mg和5,4'-二羥基-3, 7, 3'-三甲氧基黃酮0.13 mg的混合對照品溶液， 微孔濾膜（0.22 μ m)過濾即得。
[0011] 供試品溶液制備：取干燥裸花紫珠藥材粉末約I. 〇g，精密稱定，置于100 mL具塞 錐形瓶，精密加入75%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用 75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0. 45 μ m濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0012] 分別吸取對照品溶液、供試品溶液各5 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0013] 該方法能夠準(zhǔn)確有效的測定裸花紫珠藥材中毛蕊花糖苷、木犀草素及5, 4'-二 羥基-3, 7, 3'-三甲氧基黃酮三種有效成分的含量，可進(jìn)一步提高裸花紫珠藥材的質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)，確保裸花紫珠藥材的質(zhì)量和臨床療效。 1.線性關(guān)系考察 分別精密量取毛蕊花糖苷，木犀草素和5,4'-二羥基_3,7,3'-三甲氧基黃酮對照 品混合溶液為0. 2mL、0. 5mL、l. 0mL、2. 0mL、5. OmLUO. OmL置于10 mL容量瓶，加75%甲醇稀 釋至刻度，搖勻即得系列對照品混合液①，②，③，④，⑤，⑥。在上述色譜條件下測定，精密 吸取5PL進(jìn)樣，測定峰面積，以濃度（X，Pg. mL-Ι)為橫坐標(biāo)，峰面積（Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性 回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在該濃度范圍內(nèi)，3成分濃度與峰面積呈良好的線性關(guān) 系。
[0014] 表1線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 裸花紫珠藥材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5,4'-二羥基-3, 7,3'-三甲氧基黃酮 三種有效成分含量的測定方法，采用高效液相色譜法，其特征在于：色譜條件與系統(tǒng)適用性 為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為有機(jī)溶劑一酸性溶液，采用梯度洗脫，如 下： O-IOmin有機(jī)溶劑比例為10%~50% ; 10-20min有機(jī)溶劑比例為20%~60% ; 20-30min有機(jī)溶劑比例為25%~70% ; 30-40min有機(jī)溶劑比例為30%~80% ; 40-50min有機(jī)溶劑比例為35%~80% ; 50-60min有機(jī)溶劑比例為40%~80%， 酸性溶液濃度為〇-〇. 3%，檢測波長320-360nm，柱溫25°C -40°C。
2. 如權(quán)利要求1所述測定方法，其中流動相中有機(jī)溶劑為甲醇或乙腈，酸性溶液為磷 酸或乙酸或甲酸。
3. 如權(quán)利要求1所述測定方法，其中酸性溶液濃度為0. 15%。
4. 如權(quán)利要求1所述測定方法，其色譜條件與系統(tǒng)適用性優(yōu)選為以下條件：用十八烷 基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇一0. 15%磷酸水溶液，采用梯度洗脫，如下： 0-5min甲醇一0. 15%磷酸水溶液38:62 ; 5-14min甲醇一0. 15%磷酸水溶液45:55 ; 14-23min甲醇一0. 15%磷酸水溶液60:40 ; 23-30min甲醇一0. 15%磷酸水溶液70:30 ; 30-35min甲醇一0. 15%磷酸水溶液75:25， 檢測波長350nm，柱溫40°C。
【專利摘要】本發(fā)明涉及裸花紫珠藥材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5,4′-二羥基-3,7,3′-三甲氧基黃酮三種有效成分含量的測定方法，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。采用高效液相色譜法，其色譜條件與系統(tǒng)適用性為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為有機(jī)溶劑—酸性溶液，采用梯度洗脫，酸性溶液濃度為0-0.3%，檢測波長320-360nm，柱溫25℃-40℃。本發(fā)明建立采用HPLC法同時(shí)測定裸花紫珠藥材中多個(gè)有效成分含量的分析方法，方法可靠易操作，進(jìn)一步提高裸花紫珠藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保裸花紫珠藥材的質(zhì)量和臨床療效。
【IPC分類】G01N30-36
【公開號】CN104634903
【申請?zhí)枴緾N201310555020
【發(fā)明人】劉明生, 盛琳, 關(guān)薇薇, 董琳, 蔡金平
【申請人】海南醫(yī)學(xué)院
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2013年11月11日