專利名稱：：含硫化合物的檢測的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種檢測特定有機(jī)硫化合物的方法，該方法能把選定化合物與更為常見的含硫化合物例如天然存在的化合物如含硫氨基酸區(qū)分開來。優(yōu)選痕跡量或以上濃度的這類化合物的測量，在環(huán)境、生物和醫(yī)用分析領(lǐng)域內(nèi)是特別重要的。已經(jīng)研究出許多主要利用魯米諾(Luminol)和過草酸鹽反應(yīng)測量無機(jī)和有機(jī)物質(zhì)的液相化學(xué)發(fā)光方法(RobardsK和WorsfoldPJ，AnalChim.Acta，1992226147)，然而，還發(fā)現(xiàn)了另外的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，如發(fā)現(xiàn)某些有機(jī)硫類也能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光(LancasterJS和WorsfoldPJAna.Proc.，19892619)。本發(fā)明則能提供區(qū)分一組特定有機(jī)硫化合物與其它的有機(jī)硫化合物如半胱氨酸和胱氨酸的方法。芥子氣，二-(2-氯乙基)硫，一種能用于化學(xué)毒氣中的毒劑的測定，在戰(zhàn)用毒氣情況和為了保證控制這種試劑的使用不違背國際法的情況下，是特別重要的。2，2＇-二羥基二乙硫是芥子氣制造的主要前體之一(LundinSJ”“VerificationofDual-UseChemicalsUndertheChemicalWeaponsConventionTheCaseofThiodiglycol”1991SIPRI)并且已被證明除了存在于芥子氣中毒人的生物樣品中以外(WilsERJ，HulstAG，deJongAL，VerweijA和BoterHL，J.Anal.Tox.，19859254)，還是芥子氣經(jīng)水解作用主要的環(huán)境分解產(chǎn)物(BlackRM，ClarkeRJ，ReadRW和ReidMTJ，J.Chromatogr.，1994662301)。因此，能按照暗中使用活性劑的指示，檢測芥子氣這種產(chǎn)物和其它水解產(chǎn)物如2-氯-羥基二乙基硫同樣是有價值的。對這些化合物可靠測定的需求已導(dǎo)致研究許多完善的儀器方法，主要涉及使用氣相色譜儀-質(zhì)譜儀(GC-MS)或GC-MS-MS。這些儀器使用供鑒定和定量用的各種電離方式，尤其是為了篩選在選擇性離子監(jiān)測方式中使用檢測器，然而為了分析2，2′-二羥基二乙硫需要衍生程序。芥子氣及其降解產(chǎn)物吸收性能很差而且在電磁譜的紫外或可見光區(qū)不發(fā)熒光，由此普通的液相檢測方法具有有限的用途，因?yàn)榻?jīng)常要求必須的衍生作用。能為直接測定含硫化合物如芥子氣和2，2′-二羥基二乙硫提供所需要的必要選擇性的靈敏液相系統(tǒng)至今尚未獲得。這類化合物的劇毒性意味著在其低濃度下進(jìn)行檢測是特別重要的。本發(fā)明方法能檢測樣品中存在濃度0.2μgml-1(2×10-6M)的2，2′-二羥基二乙硫，然而，該方法對檢測樣品中存在濃度1μgml-1的有機(jī)硫化合物也是有價值的。此外所述方法對比由Lancaster和Worsfold描述的研究化學(xué)發(fā)光的早期方法要靈敏得多，該方法引用2-乙基苯硫酚的理論檢測極限為4×10-4M，而且只給出能證明低于2×10-2M的光發(fā)射和低于5×10-3M非常低的光發(fā)射實(shí)施例。按照本發(fā)明，測定樣品中至少一種與二-(2-氯乙基)-硫有關(guān)的化合物的存在和/或數(shù)量的方法包括如下步驟i)往樣品中加氧化劑ii)測量所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光以及使所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光與樣品中與二-(2-氯乙基)-硫有關(guān)化合物的存在和/或數(shù)量相關(guān)聯(lián)。檢測的化合物可能與二-(2-氯乙基)硫(例如反應(yīng)劑，副產(chǎn)物)的形成有關(guān)，或者可能是分解產(chǎn)物并且包括1，2-二(2-氯乙基硫代)乙烷、二-(氯乙基硫代乙基)醚和2，2＇-二羥基二乙硫。優(yōu)選實(shí)施方案包括在氧化劑加入前水解樣品的步驟，并允許檢測例如可被水解成2，2＇-二羥基二乙硫的化合物例如2-氯-2-羥基二乙硫和二-(2-氯乙基)硫。另外優(yōu)選的實(shí)施方案包括測量化學(xué)發(fā)光以后往樣品中加還原劑的步驟，所述還原劑能把2，2＇-二羥基二乙基亞砜還原成2，2＇-二羥基二乙硫，再次測量樣品的化學(xué)發(fā)光，以及使所述還原劑加入前后樣品化學(xué)發(fā)光差與處理前樣品中存在的2，2′-二羥基二乙基亞砜的數(shù)量相關(guān)聯(lián)的步驟。最佳還原劑是四氯化鈦。樣品水解后進(jìn)行的測量將反映所存在的2，2＇-二羥基二乙硫及其可水解前體的總量。前體量可根據(jù)水解前后所測量的信號差來確定。然而為了篩選芥子氣及其分解產(chǎn)物，有一個肯定的結(jié)果就足夠了，沒有必要進(jìn)行定量測量。敏化劑，即能增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光信號強(qiáng)度的熒光物質(zhì)，可在測量化學(xué)發(fā)光之前加到樣品中。已知往化學(xué)發(fā)光體系中加這種高熒光化合物后，按照下列一組方程式經(jīng)由能量轉(zhuǎn)換至熒光分子可以增強(qiáng)較弱的信號。A+B→P*P*+F→F*+PF*→F+hv式中F代表熒光分子A和B是引發(fā)反應(yīng)劑P*是電激發(fā)態(tài)產(chǎn)物。合適的敏化劑包括占噸及其衍生物和鹽，(例如若丹明B、熒光素、玫瑰紅和鈣黃綠素)。吖嗪，例如酚藏花紅和噻嗪衍生物(見DictionaryofAnalyticalReagents，TownsendA，BurnsDT，LobinskiR，GuilbaultGGNewmanEj，MarnzenkoZ，OnishiH；p774，(1993)，Chapman和Hall，London，NewYork)包括Phenazathiozoniums及其衍生物都是合適的敏化劑。亞甲蘭是特別有效的。本發(fā)明最佳實(shí)施方案利用若丹明B可提高化學(xué)發(fā)光信號到100倍以上。用于本發(fā)明方法的合適氧化劑是那些能把二價硫氧化而不干擾化學(xué)發(fā)光發(fā)射的氧化劑，實(shí)例包括次氯酸鹽，例如次氯酸鈉?；瘜W(xué)發(fā)光可用光檢測器，例如光電倍增管或固態(tài)光電二極管來進(jìn)行測量?；瘜W(xué)發(fā)光適合在550-650nm間測量。本發(fā)明的一個最佳實(shí)施方案提供的方法中化學(xué)發(fā)光是在590-600nm間測量的。本發(fā)明的優(yōu)選方法是能檢測樣品中1μgml-12，2′-二羥基二乙硫或前體。更佳實(shí)施方案可檢測樣品中0.2μgml-1或以上的2，2′-二羥基二乙硫或前體。本發(fā)明的優(yōu)選方法是那些其中敏化劑和氧化劑均是溶液態(tài)的方法。樣品和氧化劑能很方便地被引入兩股流的流動注入系統(tǒng)中以便經(jīng)濟(jì)和容易地使用篩選體系。氧化劑以氧化劑流的形式適宜地引入系統(tǒng)，而樣品則以載體流的形式適宜地引入，在優(yōu)選實(shí)施方案中進(jìn)一步含有敏化劑。載體流優(yōu)選的是非水的，例如使用醇類或酮類，特別是脂族的醇類和酮類。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中氧化劑流含有低級烷基醇類或酮類例如甲醇或丙酮。對于氧化步驟來說最佳pH取決于許多因素如方法借以完成的介質(zhì)。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中優(yōu)選pH值介于8和12，更好的pH值介于8.5和11，而最佳的pH值介于8.5和10.5。當(dāng)如上所述采用流動控制系統(tǒng)完成方法時，氧化劑流優(yōu)選具有介于8和12的pH值，更好地介于8.5和11，最好介于8.5和10.5。當(dāng)使用流動系統(tǒng)時，由于兩股液流混合得不夠充分所以結(jié)果的再現(xiàn)性可能較差。往該系統(tǒng)加表面活性劑，優(yōu)選非離子表面活性劑，至少可部分克服這類難題。為此目的聚乙二醇是合適的表面活性劑，尤其是聚氧乙烯醚，例如TritonX-100和TritonCF10。表面活性劑優(yōu)選加入的濃度在其臨界膠束濃度以上。如果使用表面活性劑或敏化劑的話最方便的是含于載體流中。當(dāng)使用流動系統(tǒng)時液流的混合比可影響所得到的化學(xué)發(fā)光信號的強(qiáng)度。在本發(fā)明的最佳實(shí)施方案中載體∶氧化劑流比例優(yōu)選在1∶1以上，更好的是介于1∶1-2∶1，最好是介于1.3∶1-2∶1。當(dāng)使用流動系統(tǒng)時為了使液流在體系中循環(huán)到光檢測器裝置可任選包括抽吸裝置。本發(fā)明進(jìn)一步提供測定樣品中至少一種與二-(2-氯乙基)-硫有關(guān)化合物的存在和/或數(shù)量的設(shè)備，該設(shè)備包括往樣品中加氧化劑的裝置，加入所述試劑后測量所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光的裝置以及指示所測化學(xué)發(fā)光的裝置。在優(yōu)選實(shí)施方案中該設(shè)備還包括水解樣品的裝置。最便利的設(shè)備是輕便型的。測量所測化學(xué)發(fā)光的裝置適當(dāng)?shù)靥峁┮环N信號，該信號的數(shù)值與樣品中正在研究的一種或多種化合物的濃度相關(guān)。本發(fā)明的方法和設(shè)備將參照下列非限制性實(shí)施例和附圖予以說明。由此來看對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的一般技術(shù)人員來說進(jìn)一步的實(shí)施方案將也是可能的。附1表明實(shí)施例1所述設(shè)備的示意圖。圖2表示log(化學(xué)發(fā)光信號的峰高)對log〔2，2′-二羥基二乙硫〕的曲線。圖3表示log(化學(xué)發(fā)光信號的峰高)對log〔2，2′-二羥基二乙硫〕曲線的線性區(qū)域。圖4表示若丹明B的濃度對化學(xué)發(fā)光的影響。圖5表示TritonX-100濃度對化學(xué)發(fā)光信號的影響。圖6表示由若丹明B與次氯酸鹽反應(yīng)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號。圖7表示三個“空白”和一個加入2，2′-二羥基二乙硫(1×10-2M)的化學(xué)發(fā)光衰減分布圖。圖8表示敏化過或非敏化過的體系對pH相關(guān)性的對比。圖9表示泵調(diào)節(jié)對化學(xué)發(fā)光響應(yīng)的影響。實(shí)施例1含硫物類的檢測本例以及后面的實(shí)施例所用試劑除另有說明外皆為分析級的。所用水是蒸餾和去離子水。所有的溶劑都是HPLC級的并且在使用前通過氦氣吹掃進(jìn)行脫氣。制備在甲醇中含5×10-4M若丹明B(Fluka，指示劑級，按所得到的使用)和2.4×10-4MTritonX-100(Fluka)的載體混合物。制備在水中含有1.0M次氯酸鈉(BDH；GPR；通過滴定法對測定有效次氯酸鹽是標(biāo)定的)的pH10.0的氧化劑混合物。制備下列有機(jī)硫化合物的1×10-4M甲醇溶液2，2′-二羥基二乙硫(Aldrich99+％)；二乙基硫(Fluka)；3，3′-硫代二丙酸(Lancaster)；二乙基砜(Aldrich)；二乙烯基砜(Lancaster)；DL-半胱氨酸(Sigma)；DL-胱氨酸(Sigma)；DL-蛋氨酸(Sigma)和1，4-二噻烷(Lancaster)。設(shè)置按圖1的流動系統(tǒng)是采用蠕動泵(GilsonMiniplus3)4和特氟隆管(0.5mm內(nèi)徑)輸送載體流1和氧化劑流2到聚四氟乙烯的T型接頭3中的。使氧化劑流以0.60mlmin-1的流量直接流入T型接頭。使載體流以0.90mlmin-1的流量流入T型接頭中。把50μl的有機(jī)硫化合物樣品用回轉(zhuǎn)閥(Rheodyne5020)經(jīng)安置在離T型接頭170mm的注入閥6注入載體系統(tǒng)中。然后使混合的液流流入安置在離T型接頭20mm的繞線圈的玻璃流體槽(330μl，1.5mm內(nèi)徑(未畫出))。使用不透光范圍內(nèi)的(未畫出)光電倍增管5(ThornEMI9924B)來檢測化學(xué)發(fā)光發(fā)射。光電倍增管5是在由穩(wěn)定的高壓電源(WallisHivolt，PM2)供應(yīng)的-900V下操作的。響應(yīng)被記錄在圖紙記錄裝置上(Kipp和Zonen，BD111)而且所獲結(jié)果示于下面表1中，作為與2，2＇-二羥基二乙硫，分子內(nèi)每摩爾的硫有關(guān)的化學(xué)發(fā)光響應(yīng)。表1對于各種含硫物類所獲得的有關(guān)化學(xué)發(fā)光響應(yīng)表1列出的結(jié)果顯示對2，2＇-二羥基二乙硫在檢測方法中具有意外高的選擇性。乙基-2-羥乙基硫和2-氯乙基-2-羥乙基硫給出次于最高響應(yīng)所有試驗(yàn)的其它化合物都具有低于10的相對峰高(其中2，2′-二羥基二乙硫相對峰高為100)。DL-蛋氨酸、二乙烯基亞砜、2-巰基乙醚、2-乙基苯硫酚、2-巰基乙醇給出負(fù)響應(yīng)(相當(dāng)甲醇空白注入)，如硫化物陰離子所顯示的一樣，試驗(yàn)硫化物陰離子是為了檢驗(yàn)由于分析標(biāo)準(zhǔn)中硫化物雜質(zhì)含量低所以化學(xué)發(fā)光不出現(xiàn)。實(shí)施例2檢測不同濃度的2，2′-二羥基二乙硫制備2，2′-二羥基二乙硫在3×10-6M-1.1×10-1M范圍內(nèi)的樣品并按實(shí)施例1所述的方法測定其化學(xué)發(fā)光。依據(jù)2，2′-二羥基二乙硫的濃度(moll-1)標(biāo)繪化學(xué)發(fā)光發(fā)射平均峰高的log-log曲線圖并列于圖2中。按圖3所示，發(fā)現(xiàn)曲線圖在3×10-6M-5×10-4M間是線性的；根據(jù)曲線圖的這一部分可確定方法的下列特征。log(峰高)＝1.2log[TDG〕+7.4r＝0.9982(n＝10)檢測極限＝2×10-6M(50μl恒等100pmol)(3×最低響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差)％rsd(相對標(biāo)準(zhǔn)偏差)＝1.6％(n＝10；〔TDG〕＝4×10-5M)實(shí)施例3溶劑對2，2＇-二羥基二乙硫化學(xué)發(fā)光的影響準(zhǔn)備如實(shí)施例1所述的流動系統(tǒng)，省略若丹明B和TritonX-100。在載體流中使用不同的溶劑以便研究它們對由1×10-2M2，2′-二羥基二乙硫溶液產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號的影響；測量信號并將所得到的結(jié)果列于下面的表2中。所用的溶劑需要不同濃度的次氯酸鹽以便獲得最佳的化學(xué)發(fā)光發(fā)射，很可能是由于流動系統(tǒng)中存在其它的可氧化物質(zhì)，例如載體溶劑。表2溶劑對化學(xué)發(fā)光的影響以及對最佳化學(xué)發(fā)光響應(yīng)所需次氯酸鹽的濃度<p>實(shí)施例4在測量2，2′-二羥基二乙硫方法中表面活性劑的加入準(zhǔn)備如實(shí)施例1所述的流動系統(tǒng)，省略載體流中的若丹明B。往載體流中除加TritonX-100外還加表面活性劑以便確定它們的加入是否有助于更進(jìn)一步的混合，并且使方法的精確度得到改進(jìn)。制備在其臨界膠束濃度(cmc)以上的陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)、陽離子表面活性劑溴化十六烷基三甲胺(CTAB)和非離子表面活性劑TritonX-100(TX)的水溶液。把它們與其說加到甲醇載體流中不如加到氧化劑流中以消除表面活性劑受次氯酸鹽溶液的在先氧化的可能性。它們對1×10-2M2，2′-二羥基二乙硫溶液氧化作用產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號的作用，要進(jìn)行測量并將所得到的結(jié)果示于下表3中。表3不同表面活性劑加往載體系統(tǒng)對化學(xué)發(fā)光響應(yīng)的影響</tables>這些結(jié)果表明溴化十六烷基三甲基銨和TritonX-100抑制化學(xué)發(fā)光發(fā)射。十二烷基硫酸鈉往系統(tǒng)中的加入導(dǎo)致在T型接頭處沉淀的形成因此必須拆除檢測器以消除堵塞。實(shí)施例5各種敏化劑在測定2，2＇-二羥基二乙硫方法中加入采用沒有表面活性劑的載體流準(zhǔn)備如實(shí)施例1描述的流動系統(tǒng)。制備各種熒光團(tuán)(fluorophores)水溶液(1×10-4M，在pH11.0的碳酸鹽緩沖溶液中)并且加到載體系統(tǒng)中致使所獲載體流為甲醇∶水(50∶50)。測量它們對由1×10-2M2，2′-二羥基二乙硫溶液的氧化作用產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號的效果并將所獲結(jié)果列于下面的表4中。表4敏化劑對2，2′-二羥基二乙硫化學(xué)發(fā)光響應(yīng)的影響</tables>這些結(jié)果表明除核黃素外所有的敏化劑都可產(chǎn)生增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光信號，但是只有若丹明B和亞甲蘭增強(qiáng)了信噪比。實(shí)施例6若丹明B濃度對化學(xué)發(fā)光發(fā)射影響的研究重復(fù)僅采用若丹明B作敏化劑(在甲醇中)的實(shí)施例5所述方法但改變其濃度以便確定加入的最佳量。所獲結(jié)果列于圖4中；根據(jù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)若丹明B的最佳濃度，即能得到最高的峰值為5×10-4M。實(shí)施例7在表面活性劑存在下采用敏化劑檢測2，2′-二羥基二乙硫制備在載體流中具有若丹明B(5×10-4M)和各種濃度的TritonX-100如實(shí)施例1所述的流動系統(tǒng)。測量表面活性劑的存在對由2，2′-二羥基二乙硫1×10-5M溶液的氧化作用產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號的影響，并將所得結(jié)果顯示于圖5中。盡管甲醇TritonX-100的加入并不能增大化學(xué)發(fā)光的信號，但是當(dāng)加至其cmc或以上時發(fā)現(xiàn)能極大改進(jìn)注入之間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(rsd)至約3％(n＝15)。在2.4×10-4M的TritonX-100濃度時觀察到信號下降大約25％，而在2.4×10-3的TritonX-100濃度時信號下降大約70％。實(shí)施例8靜態(tài)化學(xué)發(fā)光的測量把次氯酸鈉溶液注入用間歇式光度計(BertholdBiolumatLB9500T)的5×10-4M甲醇若丹明B溶液中并記錄所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光。所得到的衰減曲線示于圖6中。把1×10-2M2，2′-二羥基二乙硫溶液加到甲醇若丹明B溶液中，和注意到化學(xué)發(fā)光的顯著增強(qiáng)。該發(fā)射與三個空白信號7、8和9的比較示于圖7中。實(shí)施例9pH對2，2＇-二羥基二乙硫測定影響的研究由Lancaster和Worsfold完成的早期工作表明在使用碳酸氫鹽緩沖劑的非敏化流動系統(tǒng)中次氯酸鹽溶液的最佳pH是11.0。從非敏化到敏化系統(tǒng)的變換中經(jīng)?？吹絧H的變化(TeckentrupJ和KlockowD，Talanta，198128653)。由于發(fā)現(xiàn)碳酸鹽緩沖劑能引起沉淀物在T型接頭處的形成，所以使用鹽酸來調(diào)節(jié)pH進(jìn)行pH影響的研究。兩種系統(tǒng)(敏化10和非敏化11)的對比示于圖8中。發(fā)現(xiàn)使用若丹明B的敏化系統(tǒng)10的最佳pH值為9.0。然而，在10-13的pH值時信號幾乎保持恒定并且為最高值的75％左右。pH10.0被選作完成使用若丹明B作敏化劑和TritonX-100作表面活性劑測定2，2′-二羥基二乙硫方法的合適值。實(shí)施例10載體∶氧化劑比值和氧化劑流的流量對化學(xué)發(fā)光信號的影響研究變換載體對氧化劑的流量比(而總流量保持恒定)以便研究對所獲得化學(xué)發(fā)光信號所取得的作用，并將所得到的結(jié)果示于下面的表5中。為了研究這種液流流量變化對化學(xué)發(fā)光信號的影響使用最佳比1.4∶1(載體∶氧化劑)，所得到的結(jié)果示于圖9中。表5載體∶氫化劑流量比對化學(xué)發(fā)光響應(yīng)的影響發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光信號隨泵的轉(zhuǎn)速提高而提高，不過發(fā)現(xiàn)注入之間的精度變壞，這暗示在流動槽的單一部分光發(fā)射不會重復(fù)出現(xiàn)。這一點(diǎn)是在高流量下所遇到的泵脈動難題的結(jié)果。認(rèn)為泵轉(zhuǎn)速為5.5(任意單位)時對于研究2，2′-二羥基二乙硫的化學(xué)發(fā)光是最合適的，該泵轉(zhuǎn)速相當(dāng)于1.5mlmin-1的總流量，即0.6mlmin-1的氧化劑流量和0.9mlmin-1的載體流量。最佳流量取決于所用的檢測儀器。實(shí)施例11敏化劑的進(jìn)一步研究檢驗(yàn)一系列熒光化合物對流動注入系統(tǒng)的影響。把各化合物溶解于甲醇中(1×10-4M，沒有表面活性劑)并把所生成的溶液用作載體流。在使用各化合物之前，先使“空白”甲醇載體流通過系統(tǒng)以便記錄各化合物引入時的本底。一旦記錄下本底(超過5分鐘)便注入TDG(1×10-4M，在甲醇中)再記錄化學(xué)發(fā)光的發(fā)射。根據(jù)這些結(jié)果，可以得到各化合物的信號與本底的比值。這些數(shù)據(jù)被列于表6中，其中“信號”是由TDG(1×10-4M)在載體流的敏化劑濃度為1×10-4M下注入產(chǎn)生的信號；“本底”是5分鐘的平均本底信號而“S/B””是信號與本底比。表6各種敏化劑對TDG化學(xué)發(fā)光的影響最高的信號與本底比值是由吖嗪染料酚藏花紅得到的。噻嗪染料亞甲蘭也能顯示出很高的信號與本底比，但是在TDG濃度低于1×10-4M時在光電倍增管的暗電流噪聲中信號喪失。實(shí)施例12表面活性劑的進(jìn)一步研究對八種從市場上買到的非離子表面活性劑，在流動注入-化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)中通過往含各種表面活性劑的若丹明B(5×10-4M的甲醇溶液)載體流中注入TDG(1×10-4M的甲醇溶液)并監(jiān)測所生成的CL發(fā)射來進(jìn)行篩選。表面活性劑是聚氧乙烯(Tweens)和聚乙二醇(Tritons和Brij)35型。使每一種表面活性劑的濃度多樣化以便評價出每一種的最佳濃度。進(jìn)行這一過程是因?yàn)閷γ恳环N單個的表面活性劑來說其臨界膠束濃度并不了解。將所得到的結(jié)果概括于表7中并表示成為相對CL強(qiáng)度(相對于僅含若丹明B(5×10-4M)的載體流)。表7各種表面活性劑對化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響結(jié)果表明表面活性劑TritonCF10可導(dǎo)致CL發(fā)射強(qiáng)度增加大約三倍。就這種表面活性劑而言最佳濃度被選擇為0.65mgml-1。參照圖10，證明2，2′-二羥基二乙硫已被氧化成2，2′-二羥基二乙基亞砜9和2，2′-二羥基二乙基砜10。在一實(shí)際樣品中，自土壤樣品污染上芥子氣已經(jīng)過了4年，大部分試劑已被水解。已經(jīng)證明由水解產(chǎn)生的2，2′-二羥基二乙硫一半以上被氧化成為2，2′-二羥基二乙基亞砜9。只有很少一部分的2，2′-二羥基二乙基亞砜被進(jìn)一步氧化成2，2′-二羥基二乙基砜10。由此通過往方法中引入還原步驟把2，2′-二羥基二乙基亞砜9轉(zhuǎn)化成2，2′-二羥基二乙硫8可使化學(xué)發(fā)光檢測方法進(jìn)一步得到強(qiáng)化。通過使用四氯化鈦可以比較容易地將2，2′-二羥基二乙基亞砜9還原成2，2′-二羥基二乙硫8。為了把2，2＇-二羥基二乙基砜10還原成2，2′-二羥基二乙硫8要求非?？量痰臈l件，例如氫化鋁鋰然而僅因生成量非常少所以不成問題。如果使推薦的水解和還原步驟都包括在方法中時，則多次測量可提供芥子氣、2，2′-二羥基二乙硫8和2，2＇-二羥基二乙基亞砜9的含量數(shù)據(jù)。首先不經(jīng)任何處理完成測量可得到2，2＇-二羥基二乙硫的數(shù)據(jù)。繼之以水解步驟和測量。這一步將得到樣品中的芥子氣含量。最后還原步驟和測量將會得到2，2＇-二羥基二乙基亞砜9的含量數(shù)據(jù)。權(quán)利要求1.測定樣品中至少一種與二-(2-氯乙基)硫有關(guān)的化合物的存在和/或數(shù)量的方法，該方法包括如下步驟。i)往樣品中加入氧化劑ii)測量所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光以及使所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光與樣品中二-(2-氯乙基)硫有關(guān)的化合物的存在和/或數(shù)量相關(guān)聯(lián)。2.權(quán)利要求1的方法，其中與二-(2-氯乙基)硫有關(guān)的化合物是-2，2′-二羥基二乙硫。3.權(quán)利要求1的方法，其中與二-(2-氯乙基)硫有關(guān)的化合物是1，2-二-(2-氯乙基硫代)乙烷。4.權(quán)利要求1的方法，其中與二-(2-氯乙基)硫有關(guān)的化合物是二-(2-氯乙基硫代乙基)醚。5.權(quán)利要求1的方法，在氧化劑加入之前還包括水解樣品的步驟。6.權(quán)利要求1的方法，其中還包括在測量化學(xué)發(fā)光以后往樣品中加還原劑的步驟，所述還原劑能把2，2′-二羥基二乙基亞砜還原成2，2′-二羥基二乙硫，再次測量樣品的化學(xué)發(fā)光并使樣品在所述還原劑加入前后的化學(xué)發(fā)光差與處理前樣品中存在的2，2′-二羥基二乙基亞砜的量相關(guān)聯(lián)。7.權(quán)利要求6的方法，其中還原劑是四氯化鈦。8.權(quán)利要求5的方法，其中至少一種與二(2-氯乙基)硫有關(guān)的化合物是2，2′-二羥基二乙硫的前體，該前體能水解成為2，2′-二羥基二乙硫。9.權(quán)利要求8所述的方法，其中前體是2-氯-2-羥基二乙基硫或二-(2-氯乙基)硫。10.前述任一權(quán)利要求所述的方法，其中敏化劑是在氧化和測量步驟之前加到樣品中的。11.權(quán)利要求10的方法，其中敏化劑是吖嗪染料酚藏花紅。12.權(quán)利要求10的方法，其中所加敏化劑包括呫噸或衍生物。13.權(quán)利要求10的方法，其中所加敏化劑選自若丹明B、熒光素、玫瑰紅、鈣黃綠素及其鹽類。14.權(quán)利要求10的方法，其中所加敏化劑包括Phenazathiozonium。15.權(quán)利要求14的方法，其中所加敏化劑包括亞甲基蘭。16.前述任一權(quán)利要求的方法，其中氧化劑包括次鹵酸鹽(hypohalite)。17.權(quán)利要求16的方法，其中氧化劑是次氯酸鈉。18.任一前述權(quán)利要求的方法，其中在550-650nm范圍內(nèi)測量化學(xué)發(fā)光。19.權(quán)利要求18的方法，其中在590-600nm范圍內(nèi)測量化學(xué)發(fā)光。20.前述任一權(quán)利要求的方法，其中樣品和氧化劑被引入流動注入系統(tǒng)氧化劑是以氧化劑流的形式引入系統(tǒng)而樣品是以載體流的形式引入系統(tǒng)。21.權(quán)利要求20的方法，其中載體流還包含敏化劑。22.權(quán)利要求20或21的方法，其中載體流是非水的。23.權(quán)利要求22的方法，其中載體流含有醇或酮。24.權(quán)利要求23的方法，其中載體流含甲醇或丙酮。25.權(quán)利要求20-24中任一方法，其中氧化劑流具有介于8和12的pH值。26.權(quán)利要求25的方法，其中氧化劑流具有介于8.5和10.5的pH值。27.權(quán)利要求20-26中任一方法，其中載體流還含有表面活性劑。28.權(quán)利要求27的方法，其中表面活性劑包括聚乙二醇。29.權(quán)利要求28的方法，其中所加表面活性劑是TritonX-100。30.權(quán)利要求28的方法，其中所加表面活性劑是TritonCF10。31.權(quán)利要求20-30中任一方法，其中載體氧化劑流量比為1∶1或以上。32.權(quán)利要求31的方法，其中載體氧化劑流量比介于1.3∶1和2∶1。33.前述任一權(quán)利要求的方法，如實(shí)施例中所述。34.測定樣品中至少一種與二-(2-氯乙基)硫有關(guān)的化合物存在和/或數(shù)量的設(shè)備，該設(shè)備包括往樣品中加氧化劑的裝置，測量所述試劑加入后所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光的裝置和指示所測化學(xué)發(fā)光的裝置。35.權(quán)利要求34的設(shè)備，該設(shè)備還包括水解樣品的裝置。36.按權(quán)利要求34或權(quán)利要求35所述的設(shè)備，其中設(shè)備是輕便型的。37.權(quán)利要求34-36中任一設(shè)備，其中測量所測化學(xué)發(fā)光的裝置能提供信號，該信號的大小是與樣品中二-(2-氯乙基)硫有關(guān)的化合物濃度相關(guān)聯(lián)的。全文摘要提供一種檢測特定有機(jī)硫化合物的方法，該方法能把選定化合物與更為常見的含硫化合物例如天然存在的化合物如含硫氨基酸區(qū)分開來。優(yōu)選痕跡量或以上濃度的這類化合物的測量，在環(huán)境、生物和醫(yī)用分析領(lǐng)域內(nèi)是特別重要的。文檔編號G01N21/76GK1159855SQ95195379公開日1997年9月17日申請日期1995年9月27日優(yōu)先權(quán)日1994年9月28日發(fā)明者T·J·克里斯蒂,A·湯森德,A·N·特賴施威申請人:英國國防部