本發(fā)明涉及到脂質(zhì)體藥物測試，具體而言，涉及到一種脂質(zhì)體藥物的體外釋放測試方法和含量分析方法。

背景技術(shù)：

1、在藥物研發(fā)和制劑過程中，脂質(zhì)體具有優(yōu)良的生物相容性和靶向性，能夠改善藥物的溶解性、穩(wěn)定性和生物利用度。脂質(zhì)體藥物的體外釋放多采用透析的方法。若藥物為水溶性，則從脂質(zhì)體中釋放后可透過透析管（袋），脂質(zhì)體由于尺寸較大無法透過透析管（袋），從而達(dá)到分離游離藥物分子的目的，由此可分析特定時間所釋放的藥物量。若藥物在水溶液中溶解性很差，則需要在溶出介質(zhì)中添加增溶劑溶解從脂質(zhì)體中釋放的藥物分子，溶解后的藥物分子才可能從透析管（袋）中釋放出來。

2、然而，現(xiàn)有的脂質(zhì)體藥物的體外釋放方法釋放率較差，主要是通過改變?nèi)艹鲅b置來提高釋放率，例如公開文本cn201510600365.2，公開了一種脂質(zhì)體藥物體外釋放的測試方法，通過將脂質(zhì)體藥物溶液與空氣共同裝入容器，并利用容器的震蕩或旋轉(zhuǎn)等運(yùn)動模擬體內(nèi)血液循環(huán)對藥物的動力作用，使得體系中的空氣在運(yùn)動中分散形成氣泡，與脂質(zhì)體發(fā)生物理碰撞，從而破壞脂膜，達(dá)到藥物的有效釋放。由上述現(xiàn)有技術(shù)可以看出，雖然在一定程度上可以提高脂質(zhì)體藥物的釋放率，但是震蕩或旋轉(zhuǎn)的方式無法模擬體內(nèi)復(fù)雜的血液循環(huán)環(huán)境，且對脂質(zhì)體的破壞程度難以控制，可能導(dǎo)致藥物釋放過快或不均勻，從而影響藥物的釋放行為，導(dǎo)致在體外釋放測試中所獲得的數(shù)據(jù)難以反映實際臨床應(yīng)用中藥物的釋放情況。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的主要目的為提供一種脂質(zhì)體藥物的體外釋放測試方法，旨在克服現(xiàn)有的脂質(zhì)體藥物的體外釋放方法釋放率較差的技術(shù)問題。

2、為了實現(xiàn)上述發(fā)明問題，本發(fā)明提出一種脂質(zhì)體藥物的體外釋放測試方法，包括：

3、將緩沖劑和表面活性劑在溶出杯中進(jìn)行混合，得到混合溶液，加入調(diào)節(jié)劑至所述混合溶液中，得到溶出介質(zhì)；

4、將脂質(zhì)體粉末加入水溶解后，加入所述溶出介質(zhì)進(jìn)行稀釋，得到樣品溶液；

5、將所述溶出杯置入溶出儀中在預(yù)設(shè)溫度下進(jìn)行加熱，將透析管通過轉(zhuǎn)接頭連接至所述溶出儀；

6、將所述樣品溶液中加入所述透析管內(nèi)，使所述樣品溶液和所述溶出介質(zhì)進(jìn)行混合，并在特定時間點(diǎn)采取藥物樣品，測定所述脂質(zhì)體藥物中的未釋放藥物濃度或已釋放的藥物濃度，計算脂質(zhì)體藥物的釋放速率。

7、進(jìn)一步地，所述預(yù)設(shè)溫度為36℃~38℃，所述采取藥物樣品體積為0.5ml~1ml。

8、進(jìn)一步地，所述緩沖劑為9?mm~10?mm的羥乙基哌嗪乙磺酸，所述表面活性劑0.7%~0.8%脫氧膽酸鈉，所述調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉溶液，以調(diào)節(jié)所述溶出介質(zhì)的ph值至7.4~7.6。

9、進(jìn)一步地，所述將脂質(zhì)體粉末加入水溶解后，加入所述溶出介質(zhì)進(jìn)行稀釋，得到樣品溶液的步驟，包括：

10、將150g~160g的脂質(zhì)體粉末加入3ml~5ml的去離子水中，劇烈振搖直至完全溶解；

11、將溶出介質(zhì)加入過濾后的脂質(zhì)體溶液中，手動搖晃使混合，直至所述脂質(zhì)體溶液與所述溶出介質(zhì)的混合溶液達(dá)到20ml。

12、進(jìn)一步地，所述將透析管通過轉(zhuǎn)軸連接至所述溶出儀的步驟之前，還包括：

13、將所述透析管放入15%~25%的乙醇水溶液進(jìn)行浸泡，所述乙醇水溶液的溫度為20℃~30℃，浸泡時間為50分鐘~60分鐘；

14、將浸泡后的所述透析管用水進(jìn)行清洗，將清洗后的所述透析管放入所述溶出介質(zhì)中進(jìn)行浸泡，浸泡時間為115分鐘~125分鐘。

15、進(jìn)一步地，所述將所述樣品溶液中加入至所述透析管內(nèi)，使所述樣品溶液和所述溶出介質(zhì)進(jìn)行混合的步驟，包括：

16、將所述透析管的底部和所述溶出杯的底部相隔預(yù)設(shè)距離設(shè)置，所述預(yù)設(shè)距離為2.5cm~3.5cm；

17、設(shè)置所述溶出儀中的轉(zhuǎn)軸速度為90rpm~110rpm，啟動所述溶出儀，使所述透析管在所述溶出杯中旋轉(zhuǎn)，使所述溶出杯中的所述溶出介質(zhì)通過所述透析管中的透析膜擴(kuò)散進(jìn)入透析管中與所述樣品溶液進(jìn)行混合。

18、進(jìn)一步地，所述在特定時間點(diǎn)藥物樣品的步驟，包括：

19、從所述溶出杯中取出一定體積的所述溶出介質(zhì)和樣品溶液的混合體作為藥物樣品，所述特定時間點(diǎn)包括但不限于：1小時、2小時、8小時、12小時、?16小時、20小時、24小時、28小時、32小時、36小時、40小時、44小時。

20、進(jìn)一步地，所述脂質(zhì)體藥物為脂質(zhì)體兩性霉素b。

21、本技術(shù)還公開了一種脂質(zhì)體藥物的含量分析方法，用于分析上述任一項所述的藥物樣品，包括：

22、將0.9ml~1.1ml的所述樣品溶液放入90ml~110ml的所述溶出介質(zhì)中進(jìn)行混合，得到測定溶液；

23、將所述藥物樣品注入高效液相色譜儀中進(jìn)行色譜分析，得到藥物樣品的色譜圖譜，其中，所述高效液相色譜儀的色譜條件包括但不限于：流動相由流動相a和流動相b組成，所述流動相的流速為1.2?ml/min~1.3ml/min，所述流動相a為檸檬酸緩沖液?(4.2g/l,用濃氨水調(diào)節(jié)至ph?4.7）與甲醇的混合液，體積比為?9:1，所述流動相?b為乙腈和甲醇的混合液，體積比為?9:1；色譜柱為c18柱，柱溫設(shè)定為30℃；檢測器為紫外檢測器，檢測波長為383?nm；進(jìn)樣體積為10μl~20μl，分析時間為10分鐘~20分鐘；

24、將所述色譜圖譜的面積與所述測定溶液的峰面積對比，得到所述藥物樣品中脂質(zhì)體藥物的濃度。

25、進(jìn)一步地，將所述色譜圖譜的面積與所述測定溶液的峰面積對比，得到所述藥物樣品中脂質(zhì)體藥物的濃度的步驟，包括：

26、將所述測定溶液注入高效液相色譜儀中進(jìn)行色譜分析，得到所述測定溶液的參照色譜圖譜；

27、將所述參照色譜圖譜的峰面積與所述藥物樣品的色譜圖譜的峰面積進(jìn)行計算，得到所述參照色譜圖譜與所述色譜圖譜之間的比例關(guān)系；

28、根據(jù)所述比例關(guān)系通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算，得到所述藥物樣品中脂質(zhì)體藥物的實際濃度。

29、有益效果：

30、本技術(shù)提出的脂質(zhì)體藥物的體外釋放測試方法，通過在溶出介質(zhì)中添加特定的表面活性劑，提高脂質(zhì)體藥物的釋放效率，表面活性劑能夠降低脂質(zhì)體膜的表面張力，從而促進(jìn)藥物分子從脂質(zhì)體中釋放出來，通過調(diào)節(jié)溶出介質(zhì)的ph值，使溶出介質(zhì)更接近實際的體內(nèi)情況。將脂質(zhì)體藥物粉末與水混合溶解，形成均勻的脂質(zhì)體溶液，將溶液加入含有緩沖劑和表面活性劑的溶出介質(zhì)中進(jìn)行稀釋，以模擬藥物在體內(nèi)環(huán)境下的釋放條件，以更準(zhǔn)確地反映脂質(zhì)體藥物在生物體內(nèi)的釋放行為。進(jìn)一步地，將透析管置于溶出儀中，并在設(shè)定的溫度下進(jìn)行加熱，以模擬人體的正常體溫，透析管內(nèi)裝有樣品溶液，而溶出介質(zhì)則填充在溶出儀的外部，通過透析管的半透膜，樣品溶液中的脂質(zhì)體藥物可以逐漸釋放到外部的溶出介質(zhì)中。在特定的時間點(diǎn)，通過透析管外的溶出介質(zhì)取樣進(jìn)行分析，評估脂質(zhì)體藥物的釋放特性。本技術(shù)能夠更準(zhǔn)確地模擬脂質(zhì)體藥物在生物體內(nèi)的釋放過程，大幅地提高了脂質(zhì)體藥物的體外釋放方法釋放率。