本技術涉及藥物分析的，尤其是涉及一種酚磺乙胺原料藥中有關物質的檢測方法。

背景技術：

1、酚磺乙胺，能降低毛細血管通透性，增強血小板的功能及粘合力，促進血小板釋放凝血活性物質，縮短凝血時間而止血，用于防治手術前后和各種血管因素出血，對腦、肺、肝、消化道、泌尿道出血有效。

2、酚磺乙胺，化學名為2,5-二羥基苯磺酸二乙胺鹽，分子式為c10h17no5s，分子量為336.36。

3、結構式為：

4、

5、酚磺乙胺在酸性及堿性降解條件下，會產生未知雜質，隨放置時間的延長，特定的未知雜質產生，并增加和累積，為了確保酚磺乙胺原料藥的安全有效，需確定未知雜質的含量及雜質的結構，推導安全毒理性。相關技術中未公開未知雜質，即酚磺乙胺原料藥的降解雜質2，5-二羥基-1，3-苯二磺酸以及2，4，5-三羥基苯磺酸，也沒有公開能夠有效測定酚磺乙胺原料藥中酸性、堿性降解條件下主要降解雜質的分析方法。

6、相關技術中對酚磺乙胺藥物中含有的雜質及其主藥含量進行檢測時，采用四丁基氫氧化銨水溶液試劑，由于四丁基氫氧化銨固體有引濕性，市面上采購的均為甲醇或水的溶液形式，對于試劑本身的品質存在差異性，導致基線檢測差異性，雜質檢測受干擾較大，不能準確檢測雜質含量。因此，現(xiàn)有技術的檢測方法均存在酚磺乙胺不保留或檢測器普及范圍不廣的情況。

7、因此，有必要開發(fā)一種專屬性強，靈敏度高，準確性好，精密度高的檢測方法，對酚磺乙胺的降解產物進行檢測和控制，進而提升酚磺乙胺質量安全，保障臨床用藥安全。

技術實現(xiàn)思路

1、酚磺乙胺在酸性及堿性降解條件下，會產生未知雜質，采用本技術的有關物質方法進行酸、堿破壞樣品的分析，收集主要降解雜質，除去緩沖鹽后進行質譜直接進樣分析，保留時間14min左右降解產物質譜圖譜見附圖1，保留時間26min左右降解產物質譜圖譜見附圖2，結合譜圖分析及雜質生產反應機理，酸性及堿性降解條件下的主要降解產物包括2，5-二羥基-1，3-苯二磺酸及2，4，5-三羥基苯磺酸，酸性及堿性降解實驗主要降解產物歸屬，見表1。

2、表1酸降解、堿降解實驗-主要降解產物

3、

4、相關技術中沒有公開能夠有效測定酚磺乙胺原料藥中酸性、堿性降解條件下主要降解雜質的分析方法，其降解產物包括雜質2，5-二羥基-1，3-苯二磺酸以及2，4，5-三羥基苯磺酸，也沒有相應的含量檢測方法。

5、酸性及堿性降解條件下產生雜質為2,5-二羥基-1，3-苯二磺酸、2,4,5-三羥基苯磺酸，結構式如下：

6、

7、為實現(xiàn)上述目的，本技術提供一種酚磺乙胺原料藥中有關物質的檢測方法，具體為，本技術提供了一種酚磺乙胺在酸降解、堿降解條件下的降解產物含量的hplc檢測方法，及該檢測方法在原料藥質量控制中的應用。

8、第一方面，本技術提供一種酚磺乙胺原料藥中有關物質的檢測方法，采用如下的技術方案：

9、一種酚磺乙胺原料藥中有關物質的檢測方法，步驟如下：采用高效液相色譜法對酚磺乙胺中有關物質進行檢測，其中，所述有關物質包括式1所示的雜質和/或式2所示的雜質；

10、

11、優(yōu)選的，高效液相色譜法的色譜條件如下：

12、流動相a為5-9mm/l的四丁基硫酸氫銨水溶液；流動相b為乙腈；采用梯度洗脫方式進行洗脫；

13、其中，梯度洗脫程序如下：0～25min，95％～70％?a；25～28min，70％a；28～36min，70％～40％?a；36～38min，40％～95％a。

14、優(yōu)選的，采用高效液相色譜法進行檢測時，色譜柱為c18色譜柱。

15、更優(yōu)選的，采用高效液相色譜法進行檢測時，所述色譜柱為xbridge?c18色譜柱，色譜柱的長度為4.6mm；直徑為150mm；填料粒徑為5μm。

16、優(yōu)選的，采用高效液相色譜法進行檢測時，所述流動相a為7.36mm/l的四丁基硫酸氫銨水溶液，用氨水調ph值至3.0。

17、優(yōu)選的，采用高效液相色譜法進行檢測時，檢測波長為215-225nm。

18、進一步優(yōu)選的，檢測波長選自215nm、216nm、217nm、218nm、219nm、220nm、221nm、222nm、223nm、224nm或225nm。

19、更優(yōu)選的，檢測波長為220nm。

20、優(yōu)選的，采用高效液相色譜法進行檢測時，流動相流速為0.6-1.0ml/min。

21、進一步優(yōu)選的，流動相流速選自0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min或1.0ml/min。

22、更優(yōu)選的，流動相流速為0.8ml/min。

23、優(yōu)選的，采用高效液相色譜法進行檢測時，進樣量為10-30μl。

24、進一步優(yōu)選的，進樣量選自10μl、11μl、12μl、13μl、14μl、15μl、16μl、17μl、18μl、19μl、20μl、21μl、22μl、23μl、24μl、25μl、26μl、27μl、28μl、29μl或30μl。

25、更優(yōu)選的，進樣量為20μl。

26、優(yōu)選的，采用高效液相色譜法進行檢測時，色譜柱柱溫為30-40℃。

27、進一步優(yōu)選的，色譜柱柱溫選自30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃或40℃。

28、更優(yōu)選的，色譜柱柱溫為35℃。

29、優(yōu)選的，采用高效液相色譜法進行檢測時，樣品盤溫度為20-30℃。

30、進一步優(yōu)選的，樣品盤溫度選自20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃。

31、更優(yōu)選的，樣品盤溫度為25℃。

32、優(yōu)選的，所述檢測方法步驟如下：

33、(1)配制供試品溶液和系統(tǒng)適用性溶液；

34、(2)設置高效液相檢測條件；

35、(3)分別吸取供試品溶液和系統(tǒng)適用性溶液，注入高效液相色譜儀，進行hplc分析。

36、優(yōu)選的，供試品溶液的制備方法如下：精密稱取酚磺乙胺原料藥，加入稀釋劑溶解，配制成質量濃度為3mg/ml的供試品溶液；

37、系統(tǒng)適用性溶液的制備方法如下：精密稱取對苯二酚對照品、酚磺乙胺對照品、2，5-二羥基-1，3-苯二磺酸對照品及2，4，5-三羥基苯磺酸對照品，加入稀釋劑溶解，制備得到每1ml系統(tǒng)適用性溶液中含3μg酚磺乙胺、3μg?2,5-二羥基-1，3-苯二磺酸、3μg?2,4,5-三羥基苯磺酸以及0.6μg對苯二酚，配制兩份。

38、優(yōu)選的，所述稀釋劑為流動相a、流動相b的混合物，其中流動相a、流動相b的體積比為9：1，用磷酸調節(jié)ph至2.0。

39、本技術提供了一種對酚磺乙胺原料藥酸性、堿性降解條件下產生主要產物含量的hplc檢測方法，該方法分離度好、簡單快速、專屬性強、準確度好，線性關系良好，能夠用于原料藥進行必要的質量控制，本技術的測定方法，檢測靈敏度高，基線穩(wěn)定。

40、在一個具體的可實施方案中，一種酚磺乙胺原料藥中有關物質的檢測方法，步驟如下：

41、(1)供試品溶液：

42、取酚磺乙胺原料藥約30mg，精密稱定，放置于10ml量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

43、其中，供試品溶液中酚磺乙胺濃度約為3mg/ml。

44、(2)系統(tǒng)適用性溶液：

45、精密稱定雜質a(對苯二酚)對照品、酚磺乙胺對照品、2，5-二羥基-1，3-苯二磺酸對照品及2，4，5-三羥基苯磺酸對照品適量，加稀釋劑溶解，并稀釋制成每1ml系統(tǒng)適用性溶液約含3μg酚磺乙胺、3μg2，5-二羥基-1，3-苯二磺酸、3μg?2，4，5-三羥基苯磺酸以及0.6μg雜質a(對苯二酚)的混合溶液，配制兩份。

46、(3)色譜條件：

47、色譜儀：waters?e2695/2489或等效；

48、色譜柱：xbridge?c18(4.6mm×150mm，5μm)或等效；

49、流動相：流動相a為四丁基硫酸氫銨水溶液(7.36mm/l)(用氨水調節(jié)ph至3.0)；

50、流動相b：乙腈；

51、采用梯度洗脫方式，運行至基線平衡，其中，梯度洗脫程序如下：0～25min，95％～70％?a；25～28min，70％?a；28～36min，70％～40％?a；36～38min，40％～95％?a。

52、檢測波長：220nm；流動相流速：0.8ml/min；進樣體積：20μl；色譜柱柱溫柱溫：35℃；樣品盤溫度：25℃。

53、分別吸取供試品溶液和系統(tǒng)適用性溶液，注入高效液相色譜儀，進行hplc分析。

54、綜上所述，本技術包括以下至少一種有益技術效果：

55、本技術提供了一種酚磺乙胺原料藥中有關物質的檢測方法，該方法分離度好、簡單快速、專屬性強、準確度好、精密度高、線性關系良好，能夠用于原料藥進行必要的質量控制，本技術的測定方法，檢測靈敏度高，基線穩(wěn)定。