本發(fā)明涉及食品加工及檢測(cè)，特別是涉及一種具有護(hù)肝作用的陳皮酵素的成分分析方法。

背景技術(shù)：

1、廣陳皮為我國(guó)傳統(tǒng)著名道地藥材，也是廣東首批立法保護(hù)的嶺南八個(gè)中藥材品種之一，其為新會(huì)柑(茶枝柑)的干燥成熟果皮，主產(chǎn)于廣東新會(huì)，具有理氣健脾、和胃止嘔、燥濕化痰等功效。值得注意的是，當(dāng)前新會(huì)柑的開(kāi)發(fā)利用多局限于其果皮，由于新會(huì)柑果肉味酸且多籽，其果肉多丟棄處理，造成了嚴(yán)重的資源浪費(fèi)。

2、經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，新會(huì)柑果肉亦含豐富的活性成分，如黃酮類(lèi)成分、多糖、維生素類(lèi)等，市面上也對(duì)新會(huì)柑果肉進(jìn)行了相關(guān)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)嘗試，如酵素、果醬、農(nóng)家肥等，尤其是新會(huì)柑酵素。酵素主要是以新鮮水果、蔬菜、藥食兩用食材、動(dòng)植物成分提取物等為原料，并添加一定量的碳源(如糖類(lèi))，再利用自然微生物發(fā)酵得到的一類(lèi)發(fā)酵產(chǎn)物，包括低聚糖、氨基酸、有機(jī)酸等營(yíng)養(yǎng)成分以及具有生物活性的酶(蛋白酶、超氧化物歧化酶、脂肪酶等)、生物堿等功能性成分。大量研究表明，植物酵素有潤(rùn)腸通便、解酒護(hù)肝、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、降解蔬菜殘留農(nóng)藥等作用。

3、目前，尚未見(jiàn)針對(duì)陳皮酵素中總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸等四類(lèi)活性成分的含量測(cè)定的研究，陳皮酵素的生物活性相關(guān)研究較少，而關(guān)于陳皮酵素護(hù)肝方面的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。柑橘中含有豐富的黃酮及多糖，研究表明，黃酮具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、改善肥胖及心血管保護(hù)作用，多糖具有抗氧化、抗癌、增強(qiáng)細(xì)胞免疫等活性，蛋白質(zhì)及氨基酸是人類(lèi)必要的營(yíng)養(yǎng)成分。經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，陳皮酵素中總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸4類(lèi)成分含量豐富，具有良好的保健與營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，值得推廣應(yīng)用與開(kāi)發(fā)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種具有護(hù)肝作用的陳皮酵素的成分分析方法，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題。本發(fā)明提供的成分分析方法可以高效、直觀地反應(yīng)陳皮酵素的品質(zhì)，預(yù)期陳皮酵素的護(hù)肝功能。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明提供了一種具有護(hù)肝作用的陳皮酵素的成分分析方法，包括從所述陳皮酵素中分別提取總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸，再對(duì)總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸分別進(jìn)行含量測(cè)定的步驟。

4、優(yōu)選的是，所述提取總黃酮的方法為超聲提取法，所述對(duì)總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定的方法為紫外分光光度法。

5、更優(yōu)選的是，所述超聲提取法的超聲時(shí)間為30min，超聲提取使用的溶劑為甲醇，所述陳皮酵素與所述甲醇的料液比為1g:100ml。

6、優(yōu)選的是，所述提取多糖的方法為水提醇沉法；所述對(duì)多糖進(jìn)行含量測(cè)定的方法為苯酚-硫酸法。

7、更優(yōu)選的是，所述水提醇沉法中，包括使用純化水超聲60min，離心，過(guò)濾，制備水提液，將所述水提液與無(wú)水乙醇混合沉淀的步驟；

8、所述陳皮酵素與所述純化水的料液比為4g:45ml；所述水提液與所述無(wú)水乙醇的體積比為1:4。

9、優(yōu)選的是，所述提取蛋白質(zhì)的方法為細(xì)胞裂解法，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)定的方法為二喹啉甲酸試劑盒定量法。

10、更優(yōu)選的是，所述細(xì)胞裂解法包括將所述陳皮酵素離心，取上清液，與細(xì)胞裂解液混合，吹打，離心，洗滌的步驟；

11、所述上清液與所述細(xì)胞裂解液的體積比為10:1。

12、優(yōu)選的是，所述提取氨基酸的方法為超聲提取法，對(duì)氨基酸進(jìn)行含量測(cè)定的方法為茚三酮比色法。

13、更優(yōu)選的是，所述超聲提取法的超聲時(shí)間為60min，超聲提取使用的溶劑為純化水，所述陳皮酵素與所述純化水的料液比為1g:10ml。

14、本發(fā)明還提供了所述的具有護(hù)肝作用的陳皮酵素在制備預(yù)防和/或治療肝損傷的藥物中的應(yīng)用

15、本發(fā)明公開(kāi)了以下技術(shù)效果：

16、本發(fā)明建立了陳皮酵素的總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸4種成分的提取和含量測(cè)定方法，綜合形成陳皮酵素的成分分析方法，檢測(cè)結(jié)果可以高效、直觀地反應(yīng)陳皮酵素的品質(zhì)。結(jié)果表明，經(jīng)本發(fā)明提供的成分分析方法檢測(cè)的總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸4種成分含量豐富的陳皮酵素，具有良好的保健與營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，經(jīng)過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該陳皮酵素表現(xiàn)出明顯的肝保護(hù)作用，可用于制備預(yù)防或治療肝損傷的藥物。本發(fā)明的成分分析方法可用于陳皮酵素的質(zhì)量檢測(cè)和鑒定，以及預(yù)期陳皮酵素產(chǎn)品的藥用功能，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種具有護(hù)肝作用的陳皮酵素的成分分析方法，其特征在于，包括從所述陳皮酵素中分別提取總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸，再對(duì)總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸分別進(jìn)行含量測(cè)定的步驟。

2.如權(quán)利要求1所述的成分分析方法，其特征在于，所述提取總黃酮的方法為超聲提取法，所述對(duì)總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定的方法為紫外分光光度法。

3.如權(quán)利要求2所述的成分分析方法，其特征在于，所述超聲提取法的超聲時(shí)間為30min，采用的溶劑為甲醇；所述陳皮酵素與所述甲醇的料液比為1g:100ml。

4.如權(quán)利要求1所述的成分分析方法，其特征在于，所述提取多糖的方法為水提醇沉法；所述對(duì)多糖進(jìn)行含量測(cè)定的方法為苯酚-硫酸法。

5.如權(quán)利要求4所述的成分分析方法，其特征在于，所述水提醇沉法包括使用純化水超聲60min，離心，過(guò)濾，制備水提液，將所述水提液與無(wú)水乙醇混合沉淀的步驟；

6.如權(quán)利要求1所述的成分分析方法，其特征在于，所述提取蛋白質(zhì)的方法為細(xì)胞裂解法，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)定的方法為二喹啉甲酸試劑盒定量法。

7.如權(quán)利要求6所述的成分分析方法，其特征在于，所述細(xì)胞裂解法包括將所述陳皮酵素離心，取上清液，與細(xì)胞裂解液混合，吹打，離心，洗滌的步驟；

8.如權(quán)利要求1所述的成分分析方法，其特征在于，所述提取氨基酸的方法為超聲提取法，對(duì)氨基酸進(jìn)行含量測(cè)定的方法為茚三酮比色法。

9.如權(quán)利要求8所述的成分分析方法，其特征在于，所述超聲提取法的超聲時(shí)間為60min，采用的溶劑為純化水，所述陳皮酵素與所述純化水的料液比為1g:10ml。

10.如權(quán)利要求1中所述的具有護(hù)肝作用的陳皮酵素在制備預(yù)防和/或治療肝損傷的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種具有護(hù)肝作用的陳皮酵素的成分分析方法，屬于食品加工及檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的成分分析方法綜合了陳皮酵素中總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸4種成分的提取和含量測(cè)定方法，成分檢測(cè)結(jié)果可以高效、直觀地反應(yīng)陳皮酵素的品質(zhì)。結(jié)果表明，經(jīng)本發(fā)明提供的成分分析方法檢測(cè)的總黃酮、多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸4種成分含量豐富的陳皮酵素，具有良好的保健與營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，經(jīng)過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該陳皮酵素表現(xiàn)出明顯的肝保護(hù)作用，可用于制備預(yù)防或治療肝損傷的藥物。本發(fā)明的成分分析方法可用于陳皮酵素的質(zhì)量檢測(cè)和鑒定，以及預(yù)期陳皮酵素產(chǎn)品的藥用功能，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：徐杰培,鄧錦基,鄭國(guó)棟,陳柏忠,蔡軼,韋敏燕,彭夢(mèng)蝶
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣州醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2