本發(fā)明涉及一種評(píng)價(jià)刺參體壁膠原蛋白含量的方法，具體涉及一種基于腸道膽堿對(duì)刺參體壁膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法。

背景技術(shù)：

1、膠原蛋白是生物高分子，動(dòng)物結(jié)締組織中的主要成分，也是哺乳動(dòng)物體內(nèi)含量最多、分布最廣的功能性蛋白。刺參作為一種海洋無脊椎動(dòng)物，由于其體壁富含主要成分為膠原蛋白的蛋白質(zhì)(40.7～63.3％)，因此，刺參膠原蛋白是代替哺乳動(dòng)物膠原蛋白的優(yōu)質(zhì)海洋膠原蛋白的主要來源之一，具有生物相容性、抵抗原性、高生物降解性和細(xì)胞生長(zhǎng)潛力等獨(dú)特性質(zhì)，因此用途十分廣泛。

2、目前，刺參體壁膠原蛋白測(cè)定方法是：獲得刺參體壁樣品，采用羥脯氨酸比色法測(cè)定膠原蛋白含量。

3、然而，上述方法存在以下缺點(diǎn)：

4、(1)由于該方法測(cè)定膠原蛋白含量對(duì)刺參體壁樣品量需求較大，往往需要?dú)⑺来虆慝@取其體壁，導(dǎo)致不能將高膠原蛋白含量的刺參留存育種；即使不殺死刺參，在取其部分體壁后會(huì)增加刺參患病風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致存活率下降，因此現(xiàn)有技術(shù)一般采取殺死刺參來獲取其體壁的方式；所以，目前針對(duì)高膠原蛋白含量性狀的育種，是在種參產(chǎn)卵后取其體壁測(cè)定膠原蛋白含量，從而選取高膠原蛋白含量的卵進(jìn)行育種，但這種方法不能持續(xù)保留高質(zhì)量種參。

5、(2)該方法需要大量使用危險(xiǎn)化學(xué)品硫酸。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的在于提供一種基于腸道膽堿對(duì)刺參體壁膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法，保證高膠原蛋白含量刺參的留存育種。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。

3、一種基于腸道膽堿對(duì)刺參體壁膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法，包括以下步驟：

4、(1)刺激刺參吐出內(nèi)臟，然后分離出腸道；

5、(2)測(cè)定刺參腸道內(nèi)膽堿的含量，根據(jù)膽堿含量與刺參體壁膠原蛋白含量的相關(guān)性模型，得到刺參體壁的膠原蛋白含量。

6、本發(fā)明所述膽堿含量與刺參體壁膠原蛋白含量的相關(guān)性模型如下：

7、y＝11.856-13.373/x

8、其中，y為刺參體壁的膠原蛋白含量，指每克刺參體壁(濕重)中膠原蛋白的質(zhì)量，單位為ug/g；x為刺參腸道中膽堿含量，指每克刺參腸道(濕重)中膽堿的質(zhì)量，單位為ug/g。

9、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)刺參腸道中膽堿含量與其體壁膠原蛋白含量呈現(xiàn)顯著性正相關(guān)，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，得到膽堿含量與刺參體壁膠原蛋白含量的相關(guān)性模型，使得能夠基于膽堿含量對(duì)刺參體壁的膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)。另外，刺參具有很強(qiáng)的再生能力，在吐出內(nèi)臟后，能夠通過分裂細(xì)胞的方式重新生長(zhǎng)失去的部分，并在很短的時(shí)間內(nèi)恢復(fù)健康。所以，本發(fā)明通過膽堿含量就能評(píng)價(jià)刺參體壁膠原蛋白含量，避免殺死刺參，能夠保留具有高營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)性狀的個(gè)體，有利于科研和育種。

10、在步驟(1)中，可以采用任何一種刺激刺參吐出內(nèi)臟的方法來實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的；具體可以采用以下方法中的一種刺激刺參吐出內(nèi)臟：

11、①在干露狀態(tài)下，連續(xù)振動(dòng)刺參10～30min；

12、②使刺參所處海水環(huán)境在5min內(nèi)發(fā)生溫度或鹽度變化，溫度變化幅度為5-10℃，鹽度變化幅度為5～10；

13、③將刺參浸沒于濃度為0.8mol/l的氯化鉀溶液中，溫度為18～22℃，等待10～15min。

14、在步驟(2)中，可以采用任何一種刺參腸道內(nèi)膽堿含量的測(cè)定方法。作為一種具體實(shí)施方式，在步驟(2)中，采用酶比色法測(cè)定刺參腸道內(nèi)膽堿的含量。

15、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

16、(1)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)刺參腸道內(nèi)膽堿含量與其體壁膠原蛋白含量呈現(xiàn)顯著性正相關(guān)，確定膽堿含量與刺參體壁膠原蛋白含量的相關(guān)性模型，首次提出了基于腸道膽堿對(duì)刺參體壁的膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法。本發(fā)明通過刺參腸道中膽堿含量就能預(yù)測(cè)評(píng)價(jià)其體壁膠原蛋白含量，無需殺死刺參即可獲知該刺參體壁膠原蛋白含量，從而篩選出不同膠原蛋白含量的刺參，保留具有高營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)性狀的刺參，解決高營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)刺參的育種問題，科學(xué)合理，有著廣闊的開發(fā)和應(yīng)用前景。

17、(2)本發(fā)明方法模型構(gòu)建過程中采用相關(guān)性分析方法確定膽堿含量與刺參體壁膠原蛋白含量的聯(lián)系，根據(jù)顯著性最終建立膽堿含量與刺參體壁膠原蛋白含量的評(píng)價(jià)模型；該方法具有科學(xué)性，且準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性高。而且，相較于現(xiàn)有方法，本發(fā)明避免使用危險(xiǎn)化學(xué)品硫酸，確保了操作安全性。

技術(shù)特征：

1.一種基于腸道膽堿對(duì)刺參體壁膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法，其特征是，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于腸道膽堿對(duì)刺參體壁膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法，其特征是，采用以下方法中的一種刺激刺參吐出內(nèi)臟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述基于腸道膽堿對(duì)刺參體壁膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法，其特征是，在步驟(2)中，采用酶比色法測(cè)定刺參腸道內(nèi)膽堿的含量。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于腸道膽堿對(duì)刺參體壁膠原蛋白含量進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法，包括以下步驟：(1)刺激刺參吐出內(nèi)臟，然后分離出腸道；(2)測(cè)定刺參腸道內(nèi)膽堿的含量，根據(jù)膽堿含量與刺參體壁膠原蛋白含量的相關(guān)性模型，得到刺參體壁的膠原蛋白含量。

技術(shù)研發(fā)人員：王犖,丁君,裴泓霖
受保護(hù)的技術(shù)使用者：大連海洋大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9