本發(fā)明涉及獸藥相關技術領域，更具體地說，涉及復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準。
背景技術：
阿莫西林是一種口服半合成抗生素,其特點是抗菌譜廣,為一種白色粉末，在酸性條件下穩(wěn)定，胃腸道吸收率達90％；具有殺菌力強,毒性極低的特點,適用于輕中度感染,目前廣泛應用于畜禽細菌性感染。但阿莫西林微溶于水，所以市面上阿莫西林可溶性粉的規(guī)格濃度一般不高于10％，并且由于其半衰期短約為61.3分鐘，每天需要給藥4-5次。
阿莫西林的藥理作用：
阿莫西林為半合成廣譜青霉素類藥，抗菌譜及抗菌活性與氨芐西林基本相同，但其耐酸性較氨芐西林強，其殺菌作用較后者強而迅速，但不能用于腦膜炎的治療。半衰期約為61.3分鐘。阿莫西林在酸性條件下穩(wěn)定，胃腸道吸收率達90％，較氨芐西林吸收更迅速完全，除對志賀菌效果較氨芐西林差以外，其余效果相似。
阿莫西林殺菌作用強，穿透細胞壁的能力也強?？诜笏幬锓肿又械膬?nèi)酰胺基立即水解生成肽鍵，迅速和菌體內(nèi)的轉(zhuǎn)肽酶結合使之失活，切斷了菌體依靠轉(zhuǎn)肽酶合成糖肽用來建造細胞壁的唯一途徑，使細菌細胞迅速成為球形體而破裂溶解，菌體最終因細胞壁損失，水份不斷滲透而脹裂死亡。對大多數(shù)致病的G+菌和G-菌(包括球菌和桿菌)均有強大的抑菌和殺菌作用。其中對肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌等鏈球菌屬、不產(chǎn)青霉素酶葡萄球菌、糞腸球菌等需氧革蘭陽性球菌，大腸埃希菌、奇異變形菌、沙門菌屬、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌等需氧革蘭陰性菌的不產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶菌株及幽門螺桿菌具有良好的抗菌活性。血液透析能清除部分藥物，但腹膜透析無清除本品的作用。
敏感菌：鏈球菌A、B、C、F、G和非分組型、單核細胞增多性李斯特菌、白喉桿菌、奈瑟腦膜炎雙球菌、百日咳桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌屬、丙酸桿菌、消化鏈球菌、牛鏈球菌、沙門菌、真細菌屬、放線菌、鉤端螺旋體、梅毒螺旋體。
不穩(wěn)定性敏感菌：青霉素敏感性或耐藥性肺炎球菌、腸糞鏈球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、志賀菌、霍亂弧菌、流感嗜血菌、淋病奈瑟球菌、梭狀桿菌。
耐藥菌：葡萄球菌、卡他菌屬、產(chǎn)酸克雷白桿菌、肺炎克雷白桿菌、普通變形桿菌、假單孢菌屬、不動桿菌、彎曲桿菌、韋榮球菌、支原體、立克次體、軍團菌屬、分歧桿菌、脆弱桿菌。
適應癥：
阿莫西林用以治療傷寒、其他沙門菌感染和傷寒帶菌者可獲得滿意療效。治療敏感細菌不產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶的菌株所致的尿路感染也獲得良好療效，對下尿路感染的患者和不產(chǎn)酶淋病奈瑟菌尿道炎、宮頸炎，口服單次劑量3g即可獲得滿意療效。肺炎鏈球菌、不產(chǎn)青霉素酶金葡菌、溶血性鏈球菌和不產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶的流感嗜血桿菌所致的耳、鼻、喉感染、呼吸道感染和皮膚軟組織感染等皆為適應癥。鉤端螺旋體病也可用阿莫西林。本品亦可用于敏感大腸埃希菌、奇異變形桿菌和糞腸球菌所致泌尿生殖系統(tǒng)感染。本品與克拉霉素和蘭索拉唑聯(lián)合治療幽門螺桿菌感染有良好療效。
阿莫西林適用于敏感細菌(不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株)所致的下列感染：
(1)溶血鏈球菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌或流感嗜血桿菌所致中耳炎、鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染；
(2)大腸埃希菌、奇異變形桿菌或糞腸球菌所致的泌尿生殖道感染；
(3)溶血鏈球菌、葡萄球菌或大腸埃希菌所致的皮膚軟組織感染；
(4)溶血鏈球菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌或流感嗜血桿菌所致急性支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染；
(5)急性單純性淋??；
(6)可用于治療傷寒、其他沙門菌感染、傷寒帶菌者及鉤端螺旋體??；阿莫西林亦可與克拉霉素、蘭索拉唑三聯(lián)用藥根除胃、十二指腸幽門螺桿菌，降低消化道潰瘍復發(fā)率。
阿莫西林殺菌作用強，穿透細胞膜的能力也強。是目前應用較為廣泛的口服半合成青霉素之一，其制劑有膠囊、片劑、顆粒劑、分散片等等，人藥方面現(xiàn)在常與克拉維酸合用制成分散片，但克拉維酸鉀有穩(wěn)定性差極易分解，強引濕性需要低溫保存等諸多缺點。
在獸用領域，阿莫西林可溶性粉尚有適用的復方增效成份少，提高藥物水溶性，延長藥效釋放時間等制劑難點。另外，現(xiàn)有阿莫西林可溶性粉作為治療用藥本身并沒有良好的解熱作用，對動物高燒、高熱癥狀沒有明顯的改善，必須配合其他解熱藥物使用。如果阿莫西林可溶性粉能具備較好的解熱作用，則即使動物出現(xiàn)一定的臨床癥狀，則因為避免了高燒、高熱，所以基本上能保持較好的精神狀態(tài)、食欲，能快速恢復健康，減少藥物濫用。
目前阿莫西林制劑的質(zhì)量標準收載于2015年版《中國藥典》二部，但沒有關于獸藥的復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準，而且2015年版《中國藥典》收載質(zhì)量標準簡單，難以有效控制成品的質(zhì)量。
技術實現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術問題在于克服現(xiàn)有技術的缺陷，提供了一種復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準，包括薄層鑒別實驗、含量測定實驗、加速穩(wěn)定性實驗、藥代動力學實驗和藥效學研究實驗。
進一步的，所述薄層鑒別實驗包括如下步驟：
供試品制備：取含有C16H19N3O5S計0.1g的本品，加5％碳酸氫鈉溶液溶解并稀釋制成每1mL中含C16H19N3O5S 15mg的溶液，作為供試品溶液；
對照品制備：取阿莫西林對照品0.1g，加入4.6％碳酸氫鈉溶液溶解并稀釋制成每1mL中含C16H19N3O5S 15mg的溶液，作為對照品溶液；
展開劑制備：展開劑及比例為乙酸乙酯：丙酮：冰醋酸：水＝5:2:2:1；
鑒別方法：取供試品溶液和對照品溶液各2～5μL，分別點于同一Gf254薄層板上，在展開劑中展開，晾干，置于紫外燈254nm下檢視。
評判標準：供試品溶液所顯示主斑點的位置和顏色應與對照品溶液主斑點的位置和顏色相同。
進一步的，所述含量測定實驗包括如下步驟：
供試品制備：取裝量差異項下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取含有按C16H19N3O5S 0.125g的本品，加流動相溶解并定量稀釋制成每1mL中含C16H19N3O5S 0.5mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
對照品制備：取阿莫西林對照品約25mg，置50ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；
流動相制備：磷酸二氫鉀溶液：用2mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0)；以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液：乙腈＝97.5：2.5為流動相；
色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為254nm；
檢測方法：精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算，即得。
進一步的，所述加速穩(wěn)定性實驗包括如下步驟：
取復方阿莫西林微囊干混懸劑，按市售包裝，放置于藥物穩(wěn)定性實驗箱中；
在實驗期間第1、2、3、6個月底分別取樣一次，對粉劑的性狀、均勻度、含量、水份、粒度、再分散性進行考察。
進一步的，所述加速穩(wěn)定性實驗條件為：
溫度：40℃±2；
相對濕度：75±5％；
照度：4500±500LX。
進一步的，所述藥代動力學實驗包括如下步驟：
實驗材料：A1復方方阿莫西林微囊干混懸劑、A2阿莫西林市售對比獸藥制劑；阿莫西林對照品、阿莫西林原料藥；
實驗分組：取24只實驗動物隨機分為兩組；
給藥方式：給藥前采一次空白血樣，采樣后分別對兩組進行給藥，第一組用A1給藥，第二組用A2給藥，按照20mg/kg劑量飲水內(nèi)服；
樣品制備：給藥后分別于第0.25、0.50、0.75、1.00、2.00、3.00、5.00、9.00、12.00、24.00、36.00、48.00、72.00、96.00、108.00、120.00小時自前腔靜脈采血5mL，置于肝素離心管中混勻，3500r/min離心8min，分離血漿，即得供試品；
樣品檢測：利用高效液相色譜法對供試品、對照品進行測定，流動相為磷酸二氫鉀：乙腈＝97.5：2.5；
數(shù)據(jù)處理：利用MCPKP藥代動力學軟件進行數(shù)據(jù)處理。
進一步的，所述實驗動物為豬，體重為30.25±4.15kg。
進一步的，所述藥效學研究實驗包括解熱實驗和臨床藥效觀察實驗。
進一步的，所述解熱實驗包括如下步驟：
試藥試劑準備：復方阿莫西林微囊干混懸劑B1、市售柴胡制劑B2、B3 0.9％生理鹽水B3和傷寒弱毒疫苗B4；
實驗動物準備：取體重1.5-2.0kg、連續(xù)3天體溫在39.0±5℃的健康家兔50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半；
給藥方法：
給藥組：第1～3組家兔分別按照15mg/kg內(nèi)服給藥B1；
空白組：第4組家兔注射B3，每只1mL；
對照組：第5組注射B2，每只1mL；
實驗方法：各組家兔給藥30分鐘后按劑量1mL/kg耳靜脈注射B4，然后在注射B4前后30、60、90、120、150、180、210、240分鐘時間內(nèi)測量肛溫，記錄數(shù)據(jù)。
進一步的，所述臨床藥效觀察實驗包括如下步驟：
藥品準備：復方阿莫西林微囊干混懸劑C1、市售阿莫西林制劑C2；
病例準備：多地采集臨床自然病發(fā)病例；
病例診斷：以自然病例根據(jù)流行病學、臨床癥狀、病理變化，以及實驗室確診進行綜合分析、確診病例；
實施過程：按實驗要求進行病例選擇和實施治療并記錄實驗結果；
判定標準：
治愈：用藥3-4次后患畜病癥完全消失，精神、體溫、食欲恢復正常，尿液糞便正常。
有效：用藥3-4次后患畜病癥基本消失，精神、體溫、食欲有所改善，尿液糞便正常。
無效：用藥4次后患畜病癥未消失，病情惡化或死亡，尿液糞便顏色、性狀不正常。
本發(fā)明提供的復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準相對于現(xiàn)有技術，采用了薄層鑒別實驗、含量測定實驗、加速穩(wěn)定性實驗、藥代動力學實驗和藥效學研究實驗多種實驗方法，從物質(zhì)的定性、定量、穩(wěn)定性、藥代、藥效多方面對復方阿莫西林微囊干混懸劑進行考察，本發(fā)明提高了復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準，具有較強的專屬性與良好的重現(xiàn)性，有利于復方阿莫西林微囊干混懸劑成品質(zhì)量的有效控制。
具體實施方式
下面結合具體實施例的方式對本發(fā)明的權利要求做進一步的詳細說明，在下面的描述中闡述了很多具體細節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。
但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施的限制。
本申請?zhí)峁┮环N復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準，其特征在于：包括薄層鑒別實驗、含量測定實驗、加速穩(wěn)定性實驗、藥代動力學實驗和藥效學研究實驗。
阿莫西林是一種口服半合成抗生素,其特點是抗菌譜廣,為一種白色粉末，在酸性條件下穩(wěn)定，胃腸道吸收率達90％；具有殺菌力強,毒性極低的特點,適用于輕中度感染,目前廣泛應用于畜禽細菌性感染。但阿莫西林微溶于水，所以市面上阿莫西林可溶性粉的規(guī)格濃度一般不高于10％，并且由于其半衰期短約為61.3分鐘，每天需要給藥4-5次。
阿莫西林的藥理作用：
阿莫西林為半合成廣譜青霉素類藥，抗菌譜及抗菌活性與氨芐西林基本相同，但其耐酸性較氨芐西林強，其殺菌作用較后者強而迅速，但不能用于腦膜炎的治療。半衰期約為61.3分鐘。阿莫西林在酸性條件下穩(wěn)定，胃腸道吸收率達90％，較氨芐西林吸收更迅速完全，除對志賀菌效果較氨芐西林差以外，其余效果相似。
阿莫西林殺菌作用強，穿透細胞壁的能力也強?？诜笏幬锓肿又械膬?nèi)酰胺基立即水解生成肽鍵，迅速和菌體內(nèi)的轉(zhuǎn)肽酶結合使之失活，切斷了菌體依靠轉(zhuǎn)肽酶合成糖肽用來建造細胞壁的唯一途徑，使細菌細胞迅速成為球形體而破裂溶解，菌體最終因細胞壁損失，水份不斷滲透而脹裂死亡。對大多數(shù)致病的G+菌和G-菌(包括球菌和桿菌)均有強大的抑菌和殺菌作用。其中對肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌等鏈球菌屬、不產(chǎn)青霉素酶葡萄球菌、糞腸球菌等需氧革蘭陽性球菌，大腸埃希菌、奇異變形菌、沙門菌屬、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌等需氧革蘭陰性菌的不產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶菌株及幽門螺桿菌具有良好的抗菌活性。血液透析能清除部分藥物，但腹膜透析無清除本品的作用。
敏感菌：鏈球菌A、B、C、F、G和非分組型、單核細胞增多性李斯特菌、白喉桿菌、奈瑟腦膜炎雙球菌、百日咳桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌屬、丙酸桿菌、消化鏈球菌、牛鏈球菌、沙門菌、真細菌屬、放線菌、鉤端螺旋體、梅毒螺旋體。
不穩(wěn)定性敏感菌：青霉素敏感性或耐藥性肺炎球菌、腸糞鏈球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、志賀菌、霍亂弧菌、流感嗜血菌、淋病奈瑟球菌、梭狀桿菌。
耐藥菌：葡萄球菌、卡他菌屬、產(chǎn)酸克雷白桿菌、肺炎克雷白桿菌、普通變形桿菌、假單孢菌屬、不動桿菌、彎曲桿菌、韋榮球菌、支原體、立克次體、軍團菌屬、分歧桿菌、脆弱桿菌。
適應癥：
阿莫西林用以治療傷寒、其他沙門菌感染和傷寒帶菌者可獲得滿意療效。治療敏感細菌不產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶的菌株所致的尿路感染也獲得良好療效，對下尿路感染的患者和不產(chǎn)酶淋病奈瑟菌尿道炎、宮頸炎，口服單次劑量3g即可獲得滿意療效。肺炎鏈球菌、不產(chǎn)青霉素酶金葡菌、溶血性鏈球菌和不產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶的流感嗜血桿菌所致的耳、鼻、喉感染、呼吸道感染和皮膚軟組織感染等皆為適應癥。鉤端螺旋體病也可用阿莫西林。本品亦可用于敏感大腸埃希菌、奇異變形桿菌和糞腸球菌所致泌尿生殖系統(tǒng)感染。本品與克拉霉素和蘭索拉唑聯(lián)合治療幽門螺桿菌感染有良好療效。
阿莫西林適用于敏感細菌(不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株)所致的下列感染：
(1)溶血鏈球菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌或流感嗜血桿菌所致中耳炎、鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染；
(2)大腸埃希菌、奇異變形桿菌或糞腸球菌所致的泌尿生殖道感染；
(3)溶血鏈球菌、葡萄球菌或大腸埃希菌所致的皮膚軟組織感染；
(4)溶血鏈球菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌或流感嗜血桿菌所致急性支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染；
(5)急性單純性淋??；
(6)可用于治療傷寒、其他沙門菌感染、傷寒帶菌者及鉤端螺旋體??；阿莫西林亦可與克拉霉素、蘭索拉唑三聯(lián)用藥根除胃、十二指腸幽門螺桿菌，降低消化道潰瘍復發(fā)率。
阿莫西林殺菌作用強，穿透細胞膜的能力也強。是目前應用較為廣泛的口服半合成青霉素之一，其制劑有膠囊、片劑、顆粒劑、分散片等等，人藥方面現(xiàn)在常與克拉維酸合用制成分散片，但克拉維酸鉀有穩(wěn)定性差極易分解，強引濕性需要低溫保存等諸多缺點。
在獸用領域，阿莫西林可溶性粉尚有適用的復方增效成份少，提高藥物水溶性，延長藥效釋放時間等制劑難點。另外，現(xiàn)有阿莫西林可溶性粉作為治療用藥本身并沒有良好的解熱作用，對動物高燒、高熱癥狀沒有明顯的改善，必須配合其他解熱藥物使用。如果阿莫西林可溶性粉能具備較好的解熱作用，則即使動物出現(xiàn)一定的臨床癥狀，則因為避免了高燒、高熱，所以基本上能保持較好的精神狀態(tài)、食欲，能快速恢復健康，減少藥物濫用。
目前阿莫西林制劑的質(zhì)量標準收載于2015年版《中國藥典》二部，但沒有關于復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準，而且2015年版《中國藥典》收載質(zhì)量標準簡單，難以有效控制成品的質(zhì)量。
本發(fā)明提供的復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準相對于現(xiàn)有技術，采用了薄層鑒別實驗、含量測定實驗、加速穩(wěn)定性實驗、藥代動力學實驗和藥效學研究實驗多種實驗方法，從物質(zhì)的定性、定量、穩(wěn)定性、藥代、藥效多方面對復方阿莫西林微囊干混懸劑進行考察，本發(fā)明提高了復方阿莫西林微囊干混懸劑的質(zhì)量標準，具有較強的專屬性與良好的重現(xiàn)性，有利于復方阿莫西林微囊干混懸劑成品質(zhì)量的有效控制。
進一步的，所述薄層鑒別實驗包括如下步驟：
供試品制備：取含有C16H19N3O5S計0.1g的本品，加5％碳酸氫鈉溶液溶解并稀釋制成每1mL中含C16H19N3O5S 15mg的溶液，作為供試品溶液；
對照品制備：取阿莫西林對照品0.1g，加入4.6％碳酸氫鈉溶液溶解并稀釋制成每1mL中含C16H19N3O5S 15mg的溶液，作為對照品溶液；
展開劑制備：展開劑及比例為乙酸乙酯：丙酮：冰醋酸：水＝5:2:2:1；
鑒別方法：取供試品溶液和對照品溶液各2～5μL，分別點于同一Gf254薄層板上，在展開劑中展開，晾干，置于紫外燈254nm下檢視。
評判標準：供試品溶液所顯示主斑點的位置和顏色應與對照品溶液主斑點的位置和顏色相同。
上述，薄層色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能的不同，或和其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進行反復的吸附或分配等作用，從而將各組份分開。薄層色譜是一種微量、快速和簡便的色譜方法。由于各種化合物的極性不同，吸附能力不相同，在展開劑上移動，進行不同程度的解析，根據(jù)原點至主斑點中心及展開劑前沿的距離，計算比移值(Rf)。
需要理解的是，化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強，因此Rf值較小。在給定的條件下(吸附劑、展開劑、板層厚度等)，化合物移動的距離和展開劑移動的距離之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常數(shù)，其大小只與化合物本身的結構有關，因此可以根據(jù)Rf值鑒別化合物。
需要理解的是，薄層色譜可適用小量樣品(幾到幾十微克甚至0.01μg)的分離：也可用于多達500mg樣品的分離，是近代有機化學中用于定性，定量的一種重要手段。特別適用于那些揮發(fā)性小的化合物，以及在高溫下易發(fā)生化學變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。
進一步的，所述含量測定實驗包括如下步驟：
供試品制備：取裝量差異項下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取含有按C16H19N3O5S 0.125g的本品，加流動相溶解并定量稀釋制成每1mL中含C16H19N3O5S 0.5mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
對照品制備：取阿莫西林對照品約25mg，置50ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；
流動相制備：磷酸二氫鉀溶液：用2mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0)；以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液：乙腈＝97.5：2.5為流動相；
色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為254nm；
檢測方法：精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算，即得。
高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography\HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。
進一步的，所述加速穩(wěn)定性實驗包括如下步驟：
取復方阿莫西林微囊干混懸劑，按市售包裝，放置于藥物穩(wěn)定性實驗箱中；
在實驗期間第1、2、3、6個月底分別取樣一次，對粉劑的性狀、均勻度、含量、水份、粒度、再分散性進行考察。
進一步的，所述加速穩(wěn)定性實驗條件為：
溫度：40℃±2；
相對濕度：75±5％；
照度：4500±500LX。
需要理解的是，藥物(原料藥或制劑)穩(wěn)定性是指其保持物理、化學、生物學和微生物學特性的能力。穩(wěn)定性研究是基于對原料藥或制劑及其生產(chǎn)工藝的系統(tǒng)研究和理解，通過設計試驗獲得原料藥或制劑的質(zhì)量特性在各種環(huán)境因素(如溫度、濕度、光線照射等)的影響下隨時間變化的規(guī)律，并據(jù)此為藥品的處方、工藝、包裝、貯藏條件和復驗期/有效期的確定提供支持性信息。
上述，通過抽檢不同批次復方阿莫西林微囊粉干混懸劑進行加速穩(wěn)定性實驗，結果如下：
表1 3批次復方阿莫西林微囊粉干混懸劑加速穩(wěn)定性考察結果
結果：見表1，由表1可知，本發(fā)明的3個批次的復方阿莫西林微囊粉干混懸劑在加速試驗6個月后，性狀、均勻度、水份、粒度、各成分含量均無明顯變化，穩(wěn)定性良好。
進一步的，所述藥代動力學實驗包括如下步驟：
實驗材料：A1復方方阿莫西林微囊干混懸劑、A2阿莫西林市售對比獸藥制劑；阿莫西林對照品、阿莫西林原料藥；
實驗分組：取24只實驗動物隨機分為兩組；
給藥方式：給藥前采一次空白血樣，采樣后分別對兩組進行給藥，第一組用A1給藥，第二組用A2給藥，按照20mg/kg劑量飲水內(nèi)服；
樣品制備：給藥后分別于第0.25、0.50、0.75、1.00、2.00、3.00、5.00、9.00、12.00、24.00、36.00、48.00、72.00、96.00、108.00、120.00小時自前腔靜脈采血5mL，置于肝素離心管中混勻，3500r/min離心8min，分離血漿，即得供試品；
樣品檢測：利用高效液相色譜法對供試品、對照品進行測定，流動相為磷酸二氫鉀：乙腈＝97.5：2.5；
數(shù)據(jù)處理：利用MCPKP藥代動力學軟件進行數(shù)據(jù)處理。
進一步的，所述實驗動物為豬，體重為30.25±4.15kg。
上述，藥物代謝動力學(Pharmacokinetic)是定量研究藥物在生物體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄規(guī)律，并運用數(shù)學原理和方法闡述血藥濃度隨時間變化的規(guī)律的一門學科。包括藥物消除動力學一級消除動力學：單位時間內(nèi)消除的藥量與血漿藥物濃度成正比，又叫恒比消除。零級消除動力學：單位時間內(nèi)體內(nèi)藥物按照恒定的量消除，又叫恒量消除。
需要理解的是，藥物的療效受多方面影響，其中就包括我們服藥時的細節(jié)，包括服藥時間、服藥時的飲水量等。大多數(shù)人認為平時多喝水對身體健康有利，患病服藥時當然是多喝點水好；但是，并不是所有藥服用時都需要多喝水。有些藥物因其特殊的起效方式，服用時不僅不能多喝水，甚至不能喝水，否則會降低藥效，失去治療作用。隨著藥物化學的發(fā)展及人類健康水平的不斷提高，對藥物的藥代動力學性質(zhì)的要求越來越高：判斷一個藥物的應用前景特別是市場前景，不單純是療效強，毒副作用??；更要具備良好的藥代動力學性質(zhì)。肽類藥物就是最典型的例子。一般來說，體內(nèi)的許多生物活性肽如內(nèi)啡肽等均具有高效低毒的特點，但是，體內(nèi)不穩(wěn)定，口服無效。
利用本發(fā)明中藥代動力學實驗方法，對不同批次復方方阿莫西林微囊干混懸劑進行研究。
實驗材料如下：
復方方阿莫西林微囊干混懸劑A1：采用本發(fā)明制備。
阿莫西林市售對比獸藥制劑A2：重慶某獸藥廠生產(chǎn)。
阿莫西林標準品：無水含量為85.2％，批號為1510027，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。
阿莫西林原料藥：無水含量為86.1％，批號為160307，內(nèi)蒙古聯(lián)邦藥業(yè)生產(chǎn)。
結果表明：A1及A2的消除半衰期(t1/2β)分別為10.32h±1.27h和1.2h±0.3h；峰時(tmax)分別為3.23h±0.19h和2.23h±0.32h；峰濃度(Cmax)分別為21.20μg/mL±2.11μg/mL和15.89μg/mL±2.40μg/mL；曲線下面積(AUC)分別為529.32μg/(mL·h)±28.22μg/(mL·h)和192.25μg/(mL·h)±10.89μg/(mL·h)；有效濃度維持時間tcp(ther)分別為23.11h±6.40h和11.99h±3.21h，血中最低有效藥物濃度為0.5μg/mL。
本試驗結果表明，采用本發(fā)明制備的復方阿莫西林微囊干混懸劑以20mg/kg內(nèi)服后，消除半衰期為10.32h±1.27h，顯著長于普通阿莫西林可溶性粉和1.2h±0.3h。
藥物代謝動力學分析結果表明，復方阿莫西林微囊干混懸劑和阿莫西林市售對比獸藥制劑在豬體內(nèi)的藥物代謝動力學符合二室模型。在消除半衰期、峰時、峰濃度、曲線下面積以及有效濃度維持時間等參數(shù)上有顯著差異(P＜0.05)。血藥濃度檢測結果表明，本發(fā)明的復方阿莫西林微囊干混懸劑的有效濃度維持時間達23.11h±6.40h之久，而阿莫西林市售對比獸藥制劑僅為11.99h±3.21h；前者的有效濃度維持時間是后者的2倍。這說明本發(fā)明的復方阿莫西林微囊干混懸劑比普通的阿莫西林市售對比獸藥制劑消除慢，在體內(nèi)維持血藥濃度的時間長，長效緩釋效果明顯優(yōu)于普通的阿莫西林市售對比獸藥制劑。
進一步的，所述藥效學研究實驗包括解熱實驗和臨床藥效觀察實驗。
進一步的，所述解熱實驗包括如下步驟：
試藥試劑準備：復方阿莫西林微囊干混懸劑B1、市售柴胡制劑B2、0.9％生理鹽水B3和傷寒弱毒疫苗B4；
實驗動物準備：取體重1.5-2.0kg、連續(xù)3天體溫在39.0±5℃的健康家兔50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半；
給藥方法：
給藥組：第1～3組家兔分別按照15mg/kg內(nèi)服給藥B1；
空白組：第4組家兔注射B3，每只1mL；
對照組：第5組注射B2，每只1mL；
實驗方法：各組家兔給藥30分鐘后按劑量1mL/kg耳靜脈注射B4，然后在注射B4前后30、60、90、120、150、180、210、240分鐘時間內(nèi)測量肛溫，記錄數(shù)據(jù)。
上述，為復方阿莫西林微囊干混懸劑中添加的主要成分柴胡油的解熱功效的藥效學驗證實驗。柴胡，中藥名。為《中國藥典》收錄的草藥，藥用部位為傘形科植物柴胡或狹葉柴胡的干燥根。春、秋二季采挖，除去莖葉及泥沙，干燥。柴胡是常用解表藥。別名地熏、山菜、菇草、柴草，性味苦、微寒，歸肝、膽經(jīng)。有和解表里，疏肝升陽之功效。用于感冒發(fā)熱、寒熱往來、瘧疾、肝郁氣滯、胸肋脹痛、脫肛、子宮脫垂、月經(jīng)不調(diào)。
本申請中利用解熱實驗方法對多批次復方阿莫西林微囊干混懸劑進行了研究，研究過程及結果如下：
實驗材料：
復方阿莫西林微囊干混懸劑B1：自制多批次；
市售柴胡制劑B2：市售重慶市某獸藥廠生產(chǎn)，經(jīng)檢驗的合格品的柴胡注射液；
0.9％生理鹽水B3：實驗室自制；
傷寒弱毒疫苗B4：購于中國生物技術集團公司；
實驗動物：取體重1.5-2.0kg、連續(xù)3天體溫在39.0±5℃的健康家兔50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。
實驗方法：采用本申請中解熱實驗方法；
實驗結果：
表2發(fā)熱家兔解熱實驗結果(℃、±S)
從表2可以看出：注射傷寒弱毒苗30min后、各組家兔體溫顯著上升、60min時刻達到峰值，復方阿莫西林微囊干混懸劑在150min時基本控制病兔體溫正常，而柴胡注射液在120min時基本控制病兔體溫正常，本發(fā)明的復方阿莫西林微囊干混懸劑在各時間段溫度波動差值也較小，解熱功能基本可以達到主要用于發(fā)熱癥狀的柴胡注射液的使用效果。
進一步的，所述臨床藥效觀察實驗包括如下步驟：
藥品準備：復方阿莫西林微囊干混懸劑C1、市售阿莫西林制劑C2；
病例準備：多地采集臨床自然病發(fā)病例；
病例診斷：以自然病例根據(jù)流行病學、臨床癥狀、病理變化，以及實驗室確診進行綜合分析、確診病例；
實施過程：按實驗要求進行病例選擇和實施治療并記錄實驗結果；
判定標準：
治愈：用藥3-4次后患畜病癥完全消失，精神、體溫、食欲恢復正常，尿液糞便正常。
有效：用藥3-4次后患畜病癥基本消失，精神、體溫、食欲有所改善，尿液糞便正常。
無效：用藥4次后患畜病癥未消失，病情惡化或死亡，尿液糞便顏色、性狀不正常。
上述，本申請中，對于復方阿莫西林微囊干混懸劑進行了臨床藥效觀察實驗，具體結果如下：
實驗藥品：
復方阿莫西林微囊干混懸劑C1：自制、
市售阿莫西林制劑C2：阿莫西林可溶性粉，市售的重慶市某獸藥廠生產(chǎn)，經(jīng)檢驗的合格品。
病例來源及治療方案：技術人員在合川、銅梁、潼南等地區(qū)采集臨床自然發(fā)病病例。分別使用A1藥品治療鴨傳染性支氣管炎337例、雞肺炎3250例、仔豬胸膜肺炎235例、仔豬副傷寒332例；使用A2藥品治療鴨傳染性支氣管炎284例，雞肺炎2780例，仔豬胸膜肺炎182例，仔豬副傷寒101例。
實驗方法：采用本申請中臨床藥效觀察實驗方法。
實驗結果：
表3復方阿莫西林微囊干混懸劑臨床治療效果統(tǒng)計表
結果見表3。從表3可以看出復方阿莫西林粉微囊干混懸劑有很好的治療效果，對鴨傳染性支氣管炎、雞肺炎、仔豬胸膜肺炎、仔豬副傷寒等有效率達到96.0％以上，治愈率均在92％以上，各項指標顯著高于市售阿莫西林可溶性粉，并對仔豬副傷寒、雞肺炎有特效。