本發(fā)明涉及食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種高效液相色譜低溫蒸發(fā)光散射法測定白酒中八種甜味劑的方法。

背景技術(shù)：

白酒釀造工藝是我國寶貴的非物質(zhì)文化遺產(chǎn)之一，優(yōu)質(zhì)的白酒具有酒體甘冽、醇厚、綿軟等特點，這與優(yōu)良白酒釀造工藝過程中自然發(fā)酵產(chǎn)生的高級醇、多元醇等物質(zhì)有著密切的關(guān)系。好酒出自好的傳統(tǒng)釀造工藝，然而在當今食品工業(yè)飛速發(fā)展的今天，一些釀酒作坊或商家，使用食用酒精或質(zhì)量較差的原酒勾調(diào)成品酒，為了掩蓋酒體苦、澀等不良口感的缺陷，增加甜感，擅自向這些酒體中添加人工合成甜味劑，以次充好。這不僅傷害了白酒消費者的切身利益，而且對中國傳統(tǒng)白酒釀造工藝的形象造成了不良的影響。

人工合成甜味劑針對白酒等發(fā)酵酒而言國家明文規(guī)定是不得添加的，目前對白酒中甜味劑的檢測方法主要有液相色譜質(zhì)譜法、液相色譜二極管陣列法、液相色譜視差法、離子色譜法、毛細管電泳法等。其中液相色譜質(zhì)譜法靈敏度最好，但檢測成本較高，其它方法由于使用檢測器的缺陷或化合物本身的性質(zhì)決定了其檢測靈敏度不樂觀及檢測種類上的不全面。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對上述技術(shù)存在的問題，提供一種高效液相色譜-低溫蒸發(fā)光散射法測定白酒中八種甜味劑的方法。該方法檢測條件溫和，具有簡單、快捷、分離效果好的特點，對提高實驗室檢測效率、降低檢測成本起到了積極的作用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種高效液相色譜低溫蒸發(fā)光散射法測定白酒中八種甜味劑的方法，包括如下步驟：

(1)標準溶液配制：分別稱取各標準品各25mg于25mL容量瓶中，用超純水稀釋并定容至刻度，配制成1000μg/mL的標準儲備液，準確吸取八種甜味劑標準儲備液各0.02mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL于10mL容量品中，分別配制成2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、50.00μg/mL、100.00μg/mL的混合標準工作液，備用；

(2)樣品前處理：準確稱取白酒樣品5g于10mL比色管中，將樣品放入恒溫45℃的水浴氮吹儀中揮干酒體，取出揮干的樣品并靜置至室溫，用乙酸水將殘余物定容至1mL，過0.45μm水相濾膜，待測；

(3)樣品檢測：色譜柱：C₁₈柱為4.6mm×250mm,5μm；低溫蒸發(fā)散射檢測器條件：蒸發(fā)管溫度40℃，霧化氣壓350kPa，Gain值7，輔助檢測器二極管陣列檢測條件：檢測波長208nm；柱溫30℃；流速1.0mL/min；進樣體積40μl；流動相為乙腈(A)/20mmol/L乙酸銨水溶液(B)；設(shè)定進樣體積為40μL進行洗脫；

(4)校正曲線的建立：采用響應(yīng)信號與標準物質(zhì)濃度同時取對數(shù)來建立校準曲線，模型Y＝X^ae^b，其中X為目標物質(zhì)濃度對數(shù)，Y為對應(yīng)目標物質(zhì)響應(yīng)峰面積的對數(shù)，a,b為對數(shù)相關(guān)系數(shù)；

(5)結(jié)果：采用建立好的校準曲線積分樣品色譜圖，計算結(jié)果：

$M=\frac{C\×V}{m\×1000}$

其中：C為被測組分積分濃度，μg/mL；V為濃縮定容體積，mL；m為樣品取樣量，g；M為樣品中被測組分含量，g/kg。

進一步的，步驟(2)中，乙酸水pH為4.5。

進一步的，步驟(3)中，流動相分離洗脫程序為：

進一步的，八種所述甜味劑為安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、紐甜和甜菊糖苷。

本發(fā)明的有益技術(shù)效果是：本發(fā)明技術(shù)方案采用低溫蒸發(fā)散射檢測法測定白酒中含有的八種甜味劑，該方法檢測條件溫和，具有簡單、快捷、分離效果好的特點，對提高實驗室檢測效率、降低檢測成本起到了積極的作用。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1八種甜味劑的蒸發(fā)光色譜圖(左起分別為安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、紐甜、甜菊糖苷，濃度50μg/mL)；

圖2樣品加標(5μg/mL)及陽性樣品對比。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例

(1)標準溶液配制：分別稱取各標準品各25mg于25mL容量瓶中，用超純水稀釋并定容至刻度，配制成1000μg/mL的標準儲備液，準確吸取八種甜味劑標準儲備液各0.02mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL于10mL容量品中，分別配制成2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、50.00μg/mL、100.00μg/mL的混合標準工作液，備用；

(2)樣品前處理：準確稱取白酒樣品5g于10mL比色管中，將樣品放入恒溫45℃的水浴氮吹儀中揮干酒體，取出揮干的樣品并靜置至室溫，用乙酸水將殘余物定容至1mL，過0.45μm水相濾膜，待測；

(3)流動相的準備：

流動相A的準備：流動相A為乙腈，作為流動相前超聲波排氣5min，靜置備用；

流動相B的準備：流動相B為酸化20mmol/L乙酸銨(乙酸酸化，pH4.5)，經(jīng)4.5μm水相濾膜過濾，備用。

(4)檢測儀器的開啟與調(diào)試

①分別打開液相色譜儀脫氣機、泵、柱溫箱、低溫蒸發(fā)光散射檢測器和主控器并連接分離柱；

②液相色譜系統(tǒng)排氣；

③同時啟動A泵(連接流動相A)和B泵(連接流動相B)，逐漸將系統(tǒng)流動相流速由0mL/min提升至1.2mL/min(禁止突然將流速升至最高，防止瞬時壓力過大，破壞柱子)；

④將柱溫箱中柱溫在整個檢驗流程中恒定在30℃，保持不變；

⑤待蒸發(fā)光散射檢測器中U形管中液體近滿時，開啟氮氣瓶，慢慢將霧化壓力調(diào)節(jié)至350kPa(2.8L/min)；

⑥調(diào)節(jié)檢測器響應(yīng)值(Gain值)為7；

⑦調(diào)節(jié)蒸發(fā)管溫度為40℃；

⑧在以上狀態(tài)下平衡系統(tǒng)約15min。

(5)樣品的檢測

進樣體積40μl，流動相分離洗脫程序按一下步驟進行：

八種甜味劑的蒸發(fā)光色譜圖如圖1所示。

(6)校正曲線的建立：采用響應(yīng)信號與標準物質(zhì)濃度同時取對數(shù)來建立校準曲線，模型Y＝X^ae^b，其中X為目標物質(zhì)濃度對數(shù)，Y為對應(yīng)目標物質(zhì)響應(yīng)峰面積的對數(shù)，a,b為對數(shù)相關(guān)系數(shù)；

(7)結(jié)果：采用建立好的校準曲線積分樣品色譜圖，計算結(jié)果，結(jié)果如表1所示，

$M=\frac{C\×V}{m\×1000}$

其中：C為被測組分積分濃度，μg/mL；V為濃縮定容體積，mL；m為樣品取樣量，g；M為樣品中被測組分含量，g/kg。

表1檢測結(jié)果

*基于稱樣量5g，定容體積1mL，進樣體積40μL。

本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，除非另外定義，這里使用的所有術(shù)語(包括技術(shù)術(shù)語和科學術(shù)語)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員的一般理解相同的意義。還應(yīng)該理解的是，諸如通用字典中定義的那些術(shù)語應(yīng)該被理解為具有與現(xiàn)有技術(shù)的上下文中的意義一致的意義，并且除非像這里一樣定義，不會用理想化或過于正式的含義來解釋。

最后所應(yīng)說明的是：以上實施例僅用以說明而非限制本發(fā)明的技術(shù)方案，盡管參照上述實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該理解：依然可以對本發(fā)明進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明的精神和范圍的任何修改或局部替換，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當中。