本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體是一種豬瘟病毒的快速檢測方法。
背景技術：
豬瘟病毒是ssRNA病毒，黃病毒科瘟病毒屬，其RNA為單股正鏈。病毒粒子呈圓形，大小為38～44nm，核衣殼是立體對稱二十面體，氯化銫中浮密度1.15～1.17g/ml，有包膜。豬瘟病毒在細胞質內復制,不能凝集紅血球，與牛腹瀉病毒有相關抗原。該病毒對乙醚敏感，對溫度、紫外線、化學消毒劑等抵抗力較強。利用RT-PCR檢測病毒是一種非常靈敏的方法。通常RT-PCR靈敏度比cRNA探針的斑點雜交靈敏度高10-100倍（Nakaharaetal,1999）。RT-PCR對模板的純度要求高，如果檢測樣品中存在擴增抑制物的話，將很難擴增出目的條帶，尤其是果樹類的材料，含有大量的多酚類和糖類等。糖類一般可以用乙二醇單甲醚來去除。PVP能有效束縛酚類化合物，在PCR混合物中加入PVP能有效地除去從組織中制備的RNA中的阻遏物（Koonjuletal,1999）。但是PCR產物的檢測常規(guī)方法是采用瓊脂糖凝膠電泳進行，電泳后需要進行溴化乙錠染色后在紫外光下觀察，溴化乙錠對人具有中等毒性和致癌性，易造成環(huán)境污染，這也嚴重限制了此方法的推廣。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種豬瘟病毒的快速檢測方法，以解決上述背景技術中提出的問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：
一種豬瘟病毒的快速檢測方法，包括如下步驟：配制檢測用分散液：取甘油、陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑，溶于注射用水中，調pH至6～8，去內毒素，得分散液，其中，甘油濃度為0.1～2%（v/v），陰離子表面活性劑濃度為0.05～0.5%（w/v），非離子表面活性劑濃度為0.1～1%（v/v）；（2）繪制標準曲線，擬合標準曲線方程：利用溶劑稀釋配制成濃度在0.1μg·m～2000μg·m之間不同梯度濃度的標準溶液，然后采用0.45μm針頭過濾器過濾，利用高效液相色譜法進行檢測，以色譜峰面積為縱坐標、以標準溶液濃度為橫坐標將高效液相色譜法檢測繪制成標準曲線，然后進行擬合，得到標準曲線方程：Y=kX+b，方程中Y表示色譜峰面積，X表示濃度，k和b為常數(shù)；所述的溶劑由乙腈和水按乙腈與水的體積比為1:1混合而成；使上述混合而成的樣品與第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物反應，所述第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物被包含在藥筒的免疫檢測組件中，其中所述第一免疫檢測反應物與血凝素分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第一免疫復合物，其中所述第二免疫檢測反應物與神經(jīng)氨酸酶分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第二免疫復合物，所述免疫復合物產生一種或多種可檢測的信號，指示所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶在所述豬瘟病毒顆粒上同時存在，其中所述第一免疫檢測反應物或所述第二免疫檢測反應物被固定在固體支持物上；檢測來自所述免疫復合物的所述一種或多種可檢測的信號，其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶的同時存在指示存在所述豬瘟病毒顆粒。
作為本發(fā)明進一步的方案：其中所述樣品小于400微升。
作為本發(fā)明進一步的方案：其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶與包含在所述免疫檢測組件中的所述免疫檢測反應物形成免疫復合物。
作為本發(fā)明再進一步的方案：所述藥筒包含至少一個樣品收集單元、包含所述免疫檢測反應物的免疫檢測組件和與所述樣品收集單元和/或所述檢測組件流體連通的多個通道。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明豬瘟病毒的快速檢測方法避免了傳統(tǒng)檢測中復雜的樣品前處理過程，使檢測過程簡單、快速且具有高的靈敏度，對保證我國食品中豬瘟病毒的有效檢測和監(jiān)控監(jiān)管，具有十分重要意義。
具體實施方式
下面對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。
本發(fā)明實施例中，一種豬瘟病毒的快速檢測方法，包括如下步驟：配制檢測用分散液：取甘油、陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑，溶于注射用水中，調pH至6～8，去內毒素，得分散液，其中，甘油濃度為0.1～2%（v/v），陰離子表面活性劑濃度為0.05～0.5%（w/v），非離子表面活性劑濃度為0.1～1%（v/v）；（2）繪制標準曲線，擬合標準曲線方程：利用溶劑稀釋配制成濃度在0.1μg·m～2000μg·m之間不同梯度濃度的標準溶液，然后采用0.45μm針頭過濾器過濾，利用高效液相色譜法進行檢測，以色譜峰面積為縱坐標、以標準溶液濃度為橫坐標將高效液相色譜法檢測繪制成標準曲線，然后進行擬合，得到標準曲線方程：Y=kX+b，方程中Y表示色譜峰面積，X表示濃度，k和b為常數(shù)；所述的溶劑由乙腈和水按乙腈與水的體積比為1:1混合而成；使上述混合而成的樣品與第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物反應，所述第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物被包含在藥筒的免疫檢測組件中，其中所述第一免疫檢測反應物與血凝素分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第一免疫復合物，其中所述第二免疫檢測反應物與神經(jīng)氨酸酶分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第二免疫復合物，所述免疫復合物產生一種或多種可檢測的信號，指示所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶在所述豬瘟病毒顆粒上同時存在，其中所述第一免疫檢測反應物或所述第二免疫檢測反應物被固定在固體支持物上；檢測來自所述免疫復合物的所述一種或多種可檢測的信號，其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶的同時存在指示存在所述豬瘟病毒顆粒；其中所述樣品小于400微升；其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶與包含在所述免疫檢測組件中的所述免疫檢測反應物形成免疫復合物；所述藥筒包含至少一個樣品收集單元、包含所述免疫檢測反應物的免疫檢測組件和與所述樣品收集單元和/或所述檢測組件流體連通的多個通道。
實施例1：
本發(fā)明豬瘟病毒的快速檢測方法，包括如下步驟：配制檢測用分散液：取甘油、陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑，溶于注射用水中，調pH至6，去內毒素，得分散液，其中，甘油濃度為0.1%（v/v），陰離子表面活性劑濃度為0.05%（w/v），非離子表面活性劑濃度為0.1%（v/v）；（2）繪制標準曲線，擬合標準曲線方程：利用溶劑稀釋配制成濃度在0.1μg·m之間不同梯度濃度的標準溶液，然后采用0.45μm針頭過濾器過濾，利用高效液相色譜法進行檢測，以色譜峰面積為縱坐標、以標準溶液濃度為橫坐標將高效液相色譜法檢測繪制成標準曲線，然后進行擬合，得到標準曲線方程：Y=kX+b，方程中Y表示色譜峰面積，X表示濃度，k和b為常數(shù)；所述的溶劑由乙腈和水按乙腈與水的體積比為1:1混合而成；使上述混合而成的樣品與第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物反應，所述第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物被包含在藥筒的免疫檢測組件中，其中所述第一免疫檢測反應物與血凝素分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第一免疫復合物，其中所述第二免疫檢測反應物與神經(jīng)氨酸酶分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第二免疫復合物，所述免疫復合物產生一種或多種可檢測的信號，指示所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶在所述豬瘟病毒顆粒上同時存在，其中所述第一免疫檢測反應物或所述第二免疫檢測反應物被固定在固體支持物上；檢測來自所述免疫復合物的所述一種或多種可檢測的信號，其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶的同時存在指示存在所述豬瘟病毒顆粒；其中所述樣品小于400微升；其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶與包含在所述免疫檢測組件中的所述免疫檢測反應物形成免疫復合物；所述藥筒包含至少一個樣品收集單元、包含所述免疫檢測反應物的免疫檢測組件和與所述樣品收集單元和/或所述檢測組件流體連通的多個通道。
實施例2：
本發(fā)明豬瘟病毒的快速檢測方法，包括如下步驟：配制檢測用分散液：取甘油、陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑，溶于注射用水中，調pH至8，去內毒素，得分散液，其中，甘油濃度為2%（v/v），陰離子表面活性劑濃度為0.5%（w/v），非離子表面活性劑濃度為1%（v/v）；（2）繪制標準曲線，擬合標準曲線方程：利用溶劑稀釋配制成濃度在2000μg·m之間不同梯度濃度的標準溶液，然后采用0.45μm針頭過濾器過濾，利用高效液相色譜法進行檢測，以色譜峰面積為縱坐標、以標準溶液濃度為橫坐標將高效液相色譜法檢測繪制成標準曲線，然后進行擬合，得到標準曲線方程：Y=kX+b，方程中Y表示色譜峰面積，X表示濃度，k和b為常數(shù)；所述的溶劑由乙腈和水按乙腈與水的體積比為1:1混合而成；使上述混合而成的樣品與第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物反應，所述第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物被包含在藥筒的免疫檢測組件中，其中所述第一免疫檢測反應物與血凝素分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第一免疫復合物，其中所述第二免疫檢測反應物與神經(jīng)氨酸酶分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第二免疫復合物，所述免疫復合物產生一種或多種可檢測的信號，指示所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶在所述豬瘟病毒顆粒上同時存在，其中所述第一免疫檢測反應物或所述第二免疫檢測反應物被固定在固體支持物上；檢測來自所述免疫復合物的所述一種或多種可檢測的信號，其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶的同時存在指示存在所述豬瘟病毒顆粒；其中所述樣品小于400微升；其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶與包含在所述免疫檢測組件中的所述免疫檢測反應物形成免疫復合物；所述藥筒包含至少一個樣品收集單元、包含所述免疫檢測反應物的免疫檢測組件和與所述樣品收集單元和/或所述檢測組件流體連通的多個通道。
實施例3：
本發(fā)明豬瘟病毒的快速檢測方法，包括如下步驟：配制檢測用分散液：取甘油、陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑，溶于注射用水中，調pH至7，去內毒素，得分散液，其中，甘油濃度為1%（v/v），陰離子表面活性劑濃度為0.3%（w/v），非離子表面活性劑濃度為0.5%（v/v）；（2）繪制標準曲線，擬合標準曲線方程：利用溶劑稀釋配制成濃度在1000μg·m之間不同梯度濃度的標準溶液，然后采用0.45μm針頭過濾器過濾，利用高效液相色譜法進行檢測，以色譜峰面積為縱坐標、以標準溶液濃度為橫坐標將高效液相色譜法檢測繪制成標準曲線，然后進行擬合，得到標準曲線方程：Y=kX+b，方程中Y表示色譜峰面積，X表示濃度，k和b為常數(shù)；所述的溶劑由乙腈和水按乙腈與水的體積比為1:1混合而成；使上述混合而成的樣品與第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物反應，所述第一免疫檢測反應物和第二免疫檢測反應物被包含在藥筒的免疫檢測組件中，其中所述第一免疫檢測反應物與血凝素分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第一免疫復合物，其中所述第二免疫檢測反應物與神經(jīng)氨酸酶分子結合在所述豬瘟病毒顆粒上形成第二免疫復合物，所述免疫復合物產生一種或多種可檢測的信號，指示所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶在所述豬瘟病毒顆粒上同時存在，其中所述第一免疫檢測反應物或所述第二免疫檢測反應物被固定在固體支持物上；檢測來自所述免疫復合物的所述一種或多種可檢測的信號，其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶的同時存在指示存在所述豬瘟病毒顆粒；其中所述樣品小于400微升；其中所述血凝素和神經(jīng)氨酸酶與包含在所述免疫檢測組件中的所述免疫檢測反應物形成免疫復合物；所述藥筒包含至少一個樣品收集單元、包含所述免疫檢測反應物的免疫檢測組件和與所述樣品收集單元和/或所述檢測組件流體連通的多個通道。
對于本領域技術人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發(fā)明內。此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經(jīng)適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。