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利用亞甲基藍與G?四鏈體的結(jié)合進行電化學檢測端粒酶活性的方法與流程

文檔序號:11131605閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種利用亞甲基藍與G-四鏈體的結(jié)合進行電化學檢測端粒酶活性的方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)細胞的培養(yǎng)以及端粒酶的提取得到裂解后的細胞溶液;

2)在含有端粒酶引物的緩沖溶液中加入裂解后的細胞溶液進行擴增得到重復的富G序列,在鉀離子的存在下得到含有G-四鏈體的擴增溶液;

3)在含有G-四鏈體的擴增溶液中加入亞甲基藍使其與G-四鏈體結(jié)合得到溶液;

4)利用差分脈沖伏安法對溶液中的亞甲基藍進行檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用亞甲基藍與G-四鏈體的結(jié)合進行電化學檢測端粒酶活性的方法,其特征在于,所述步驟1)的細胞為HeLa細胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用亞甲基藍與G-四鏈體的結(jié)合進行電化學檢測端粒酶活性的方法,其特征在于,所述步驟2)的具體步驟如下:在45μL含有0.1~2μM端粒酶引物的端粒酶緩沖溶液中加入5μL細胞中提取的端粒酶,在30~37℃下進行擴增反應(yīng)1~4小時,并在鉀離子的存在下形成G-四鏈體的擴增溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用亞甲基藍與G-四鏈體的結(jié)合進行電化學檢測端粒酶活性的方法,其特征在于,所述步驟2)的緩沖溶液為含有MgCl2、KCl、Tween 20、EGTA和dNTPs的pH=8.3的20mM Tris-HCl溶液,所述MgCl2初始濃度為1.5mM,KCl初始濃度為63mM,Tween 20初始濃度為0.005%(v/v),EGTA初始濃度為1mM,dNTPs初始濃度為1~2mM。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用亞甲基藍與G-四鏈體的結(jié)合進行電化學檢測端粒酶活性的方法,其特征在于,所述步驟3)的亞甲基藍的加入量為50μL,濃度為1~10mM。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用亞甲基藍與G-四鏈體的結(jié)合進行電化學檢測端粒酶活性的方法,其特征在于,所述步驟4)的差分脈沖伏安法的步驟是通過三電極體系進行檢測,具體步驟如下:首先,將ITO電極依次浸泡在丙酮,乙醇和超純水中,并分別超聲15~20分鐘進行清洗;之后,將清洗后的ITO電極浸泡在1mM NaOH中進行修飾;4~6小時后,將完成修飾的ITO電極放入超純水中超聲清洗15~20分鐘,得到了表面帶有負電荷的ITO工作電極;然后將表面帶有負電荷的ITO工作電極放入電解池下半部分的凹槽內(nèi),之后,將帶有直徑為6mm孔的電解池上半部分固定在工作電極上方,在他們之間放入O型密封圈防止漏液,在直徑為6mm的孔中加入步驟3)得到的溶液,將一根鉑絲作為對電極,銀/氯化銀電極作為參比電極插入溶液中,與工作電極形成三電極體系并通過DPV法進行電化學檢測。

7.權(quán)利要求2所述的利用亞甲基藍與G-四鏈體的結(jié)合進行電化學檢測端粒酶活性的方法,其特征在于,所述HeLa細胞在端粒酶緩沖溶液中的數(shù)量為10~10000個細胞。

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