本發(fā)明涉及用于腫瘤診斷的分子標志，特別涉及用于膀胱癌非侵入式診斷的分子標志。

背景技術(shù)：
在全球范圍內(nèi)，每年有近90萬人被診斷為膀胱癌，每年約有25萬人死于膀胱癌[1]。在我國，膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，膀胱癌可分為非肌層浸潤性膀胱癌(Ta/T1期)和肌層浸潤性膀胱癌(T2-T4期)。早期膀胱癌患者可行經(jīng)尿道膀胱腫物電切術(shù)(TransurethralResectionofBladderTumorTURBT),而肌層浸潤性膀胱癌患者需行全膀胱切除、尿流改道，手術(shù)后嚴重影響患者生活質(zhì)量，而且手術(shù)之后5年生存率僅為23％-46％[2]。因此，膀胱癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高腫瘤治療效果和提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵。膀胱鏡檢查是膀胱癌早發(fā)現(xiàn)、早診斷的“金標準”，但膀胱鏡檢查為有創(chuàng)性檢查，并且可能導(dǎo)致泌尿系感染、出血、尿道損傷，并且臨床應(yīng)用受到外科醫(yī)生經(jīng)驗水平及場地設(shè)備等制約，再者，膀胱光鏡檢查的費用也頗為昂貴，諸多因素造成了膀胱鏡檢查不利于膀胱癌的早期篩查。因此，尋求無創(chuàng)、便捷、準確的膀胱癌早期診斷和術(shù)后檢測方法，是研究者不斷努力的方向。通過檢測尿液中的瘤標是目前早期膀胱癌無創(chuàng)性診斷的一種研究趨勢。目前已經(jīng)有數(shù)種獲得美國食品藥物管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)批準能在臨床上應(yīng)用的尿液膀胱腫瘤標記物，包括核基質(zhì)蛋白22(nuclearmatrixprotein22，NMP22)、膀胱腫瘤抗原(Bladdertumorantigen,BTA)、UroVysion、ImmunoCytTMCYFRA21-1、UBCtest[3,4]。其中NMP22及BTA檢測的平均敏感度分別為67％(41％-100％)及68％(51％-100％)、平均特異度分別為79％(43％-95％)及75％(54％-93％)，而其他幾種瘤標的敏感度和特異度有待多地區(qū)和多中心的進一步研究。這些檢測方法的臨床應(yīng)用，可以使得膀胱癌患者減少膀胱鏡檢查得頻率，減少患者的痛苦及醫(yī)療費用，但仍然不能完全取代膀胱鏡檢查。因此，在尿液當中尋找新的檢測瘤標是目前膀胱癌無創(chuàng)性診斷的研究熱點方向之一，期望能發(fā)現(xiàn)診斷準確率更高的瘤標，或者通過新瘤標與某種常用瘤標的聯(lián)合診斷來提高診斷準確度，從而逐步實現(xiàn)膀胱癌無創(chuàng)診斷的目標。AIB1(Amplifiedinbreastcancer1)首先在人類乳腺癌細胞株當中被發(fā)現(xiàn)的癌基因，并已經(jīng)證實了其在前列腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤細胞當中擴增與表達，AIB1是多種惡性腫瘤生長、增殖多必須的[5-7]。發(fā)明人的前期研究表明，AIB1在膀胱癌組織當中的基因及蛋白表達水平均較正常組織增高，AIB1高表達水平與患者生存時間呈負相關(guān)，同時發(fā)明人還闡明了AIB1通過AKT信號通路及充當E2F1協(xié)調(diào)激活因子的作用來促進膀胱腫瘤細胞的增殖，發(fā)明人通過利用納米技術(shù)特異抑制ABI1的表達之后，能后明顯抑制膀胱癌細胞株的體外生長與及其在免疫缺陷小鼠體內(nèi)成瘤[8-10]。EIF5A2(Eukaryoticinitiationfactor5A2)基因首先在卵巢癌HT29細胞株中發(fā)現(xiàn)[11]。之后研究者相繼在卵巢癌、胃癌、肝癌、肺癌及結(jié)腸癌等惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)EIF5A2基因的擴增及其編碼的蛋白異常表達，并且與腫瘤的發(fā)生及復(fù)發(fā)密切相關(guān)[12-17]。發(fā)明人的前期研究表明，EIF5A2基因在膀胱癌組織當中擴增，其編碼的蛋白異常表達，EIF5A2可以充當腫瘤復(fù)發(fā)及進展的預(yù)測因子。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)EIF5A2是患者預(yù)后的獨立預(yù)測因子。發(fā)明人之后的研究當中揭示了EIF5A2是通過STAT而促進TGF-B1表達，進而誘導(dǎo)腫瘤細胞的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化化來促進腫瘤細胞的侵襲[18-20]。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種更為準確的用于膀胱癌診斷的非侵入式分子標志，以及基于該分子標志的診斷試劑盒?；谇捌诘难芯炕A(chǔ)，發(fā)明人通過檢測膀胱患者及非膀胱癌人群中尿液當中的AIB1及EIF5A2的蛋白表達水平，發(fā)現(xiàn)AIB1及EIF5A2能夠充當膀胱癌無創(chuàng)性診斷的新瘤標，聯(lián)合AIB1、EIF5A2及NMP22更能提高膀胱癌的診斷準確度。發(fā)明人檢測了不同組尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白含量。訓練組中，膀胱癌組尿液樣本中AIB1(1.40vs.0.35ng/ml)、EIF5A2(5.83vs.4.56ng/ml)和NMP22(7.74vs.6.31ng/ml，三種蛋白的含量明顯高于對照組(p值均小于0.0001)。其中，AIB1的受試者工作特征(receiveroperatingcharacteristicROC)曲線面積為0.846(95％可信區(qū)間[95％CI]0.775–0.917)，通過ROC曲線，得出AIB1的診斷界限值為0.58ng/ml，AIB1對膀胱癌的診斷具有81％(95％CI：71％–89％)的敏感性及88％(95％CI：76％–96％)的特異性，陽性及陰性報告率分別為92％(95％CI：84％–97％)及73％(95％CI：60％–84％)；EIF5A2的ROC曲線面積為0.761(95％CI0.675–0.846)，通過ROC曲線，得出EIF5A2的診斷界限值為5.06ng/ml，EIF5A2對膀胱癌的診斷具有74％(95％CI：64％–83％)的敏感性及78％(95％CI：64％–89％)的特異性，陽性及陰性報告率分別為85％(95％CI：75％–92％)及64％(95％CI：51％–76％)；NMP22的ROC曲線面積為0.794(95％CI0.712–0.876)，通過ROC曲線，得出NMP22的診斷界限值為6.89ng/ml，NMP22對膀胱癌的診斷具有79％(95％CI：69％–87％)的敏感性及80％(95％CI：66％–90％)的特異性，陽性及陰性報告率分別為87％(95％CI：77％–94％)及69％(95％CI：56％–81％)。在210例獨立驗證組尿液樣本中，發(fā)明人驗證了AIB1、EIF5A2及NMP22具有類似的膀胱癌診斷準確度(表3)。采用單因素邏輯回歸分析表明：尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22含量的增加都與膀胱癌風險增加相關(guān)(p值均小于0.0001)。獨立驗證組中，該結(jié)論同樣成立(p值均小于0.0001)。采用多因素邏輯回歸分析表明：尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22含量的增加都與膀胱癌風險增加相關(guān)(p值均小于0.0001)。獨立驗證組中，該結(jié)論同樣成立(p值均小于0.0001)。發(fā)明人利用AIB1、EIF5A2和NMP22三種瘤標構(gòu)建膀胱癌尿液診斷模型，在訓練組中，模型的ROC曲線面積為0.919(95％CI：0.864–0.974)，通過ROC曲線，診斷模型的界限概率分值是10.08，模型對膀胱癌的診斷具有92％(95％CI：84％–97％)的敏感性及92％(95％CI：81％–98％)的特異性，陽性及陰性報告率分別為95％(95％CI：88％–99％)及87％(95％CI：75％–95％)。獨立驗證組中，模型的ROC曲線面積為0.898(95％CI：0.849–0.947)，模型對膀胱癌的診斷具有89％(95％CI：82％–94％)的敏感性及91％(95％CI：82％–96％)的特異性，陽性及陰性報告率分別為94％(95％CI：89％–98％)及82％(95％CI：72％–90％)。概率分值的分布顯示模型具有更好的診斷準確性，優(yōu)于單個診斷瘤標(p值均小于0.05)。采用單因素邏輯回歸分析表明：模型中概率分值的增加與膀胱癌風險增加正相關(guān)(p值小于0.0001)。獨立驗證組中，該結(jié)論同樣成立(p值小于0.0001)。采用多因素邏輯回歸分析表明：模型中概率分值的增加與膀胱癌風險增加正相關(guān)(p值小于0.0001)。獨立驗證組中，該結(jié)論同樣成立(p值小于0.0001)。發(fā)明人基于AIB1、EIF5A2和NMP22建立了膀胱癌的非侵入式診斷模型，極大地方便了膀胱癌的診斷。附圖說明圖1是訓練組和獨立驗證組尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白含量檢測結(jié)果繪制的散點圖；圖2是訓練組和獨立驗證組中AIB1、EIF5A2和NMP22在尿液樣本中蛋白表達的濃度；圖3是尿液AIB1、EIF5A2和NMP22用于膀胱癌診斷的特征表現(xiàn)情況；圖4是含有AIB1、EIF5A2和NMP22的尿液膀胱癌診斷模型的表現(xiàn)情況。具體實施方式方法和材料樣本和數(shù)據(jù)收集本研究是在獲得當?shù)貍惱韺彶槲瘑T會批準后進行。所有納入研究對象均簽署知情同意書。總共收集了345位納入研究對象的晨尿，尿液樣本均值收集后30min內(nèi)于-20℃保存直到分析。訓練組中，85膀胱癌患者尿液樣本為來自中山大學第一附屬醫(yī)院2013年11月25日至2014年10月28日期間所收集的樣本。50位對照組對象由6名腎結(jié)石患者、5名良性膀胱腫物患者、7名良性前列腺增生癥患者、7名血尿癥患者、6名尿路感染患者和19名健康志愿者組成。5名良性膀胱腫物患者進行過經(jīng)尿道膀胱腫物電切術(shù)，7名良性前列腺增生患者均進行過經(jīng)尿路前列腺電切手術(shù)。獨立驗證組中，134份膀胱癌患者液樣本均來自中山大學腫瘤中心2013年11月1日至2014年11月28日期間所收集的樣本，對照組中76位對象由7名腎結(jié)石患者、8名良性膀胱腫物患者、10名良性前列腺增生癥患者、9名血尿癥患者、8名尿路感染患者和34名健康志愿者組成。良性膀胱損傷患者進行過經(jīng)尿道膀胱腫物電切術(shù)，良性前列腺增生患者進行經(jīng)尿路前列腺電切手術(shù)。腫瘤分級參照2004世界衛(wèi)生組織(WHO)分級系統(tǒng)，腫瘤分期參照第六版腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移[tumor-nodes-metastasis(TNM)]分期系統(tǒng)。所有納入研究對象均確認無腎功能損害。對照組血尿患者均進行了膀胱鏡檢查確認無膀胱腫物。根據(jù)國際共識小組公開的膀胱組織標志，本研究為二期(驗證)研究。報告數(shù)據(jù)參照根據(jù)診斷準確性報告規(guī)范(Standardsforreportingofdiagnosticaccuracy)。尿液樣本的處理在治療介入前，對每個對象收集約50ml清晨第一次中段尿液，收集后立即在4℃，1000g離心力下離心10分鐘。吸取尿上清于-20℃凍存直至實驗分析。試劑人屬AIB1和NMP22(NUMA1:SEC332Hu)的ELISA試劑盒購自優(yōu)爾生生命科學(中國武漢)。用于檢測人尿液樣本EIF5A2的酶聯(lián)免疫吸附測定實驗(enzyme-linkedimmunosorbentassayELISA)配對抗體(H00056648-AP11)和重組蛋白(H00056648-P01)購自Abnova公司(中國臺灣臺北)。二次鏈霉親和素-過氧化物偶連抗鼠免疫球蛋白G抗體(ab6789)購自Abcam(Cambridge,MA,USA)。尿液樣本AIB1和NMP22的檢測使用ELISA試劑盒定量尿樣中的AIB1和NMP22蛋白濃度，按試劑盒的使用說明重復(fù)測定3次。AIB1的檢測敏感值為0.124ng/ml，NMP22的檢測敏感值為0.063ng/ml。尿液樣本EIF5A2的檢測采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定實驗定量尿樣中的EIF5A2。按配對抗體的使用說明重復(fù)測定3次。EIF5A2的檢查敏感值為3ng/ml。統(tǒng)計分析組內(nèi)分類變量差異使用卡方檢驗進行分析。使用非參數(shù)的Mann–WhitneyU檢驗比較組間的變量。重復(fù)測量數(shù)據(jù)的精度使用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(intra-classcorrelationcoefficients)確定。美國國家腫瘤研究院推薦使用受試者工作特征(ROC)曲線評價某種瘤標是否適合于腫瘤診斷[21]。因此，發(fā)明人使用ROC曲線分析來選定一個由Youden指數(shù)確定的診斷界值[22]。對象值大于或等于界值被定義為陽性(患有腫瘤)，對象值小于界值被定義為陰性(非腫瘤)。發(fā)明利用ROC曲線確定單個瘤標對膀胱癌診斷的敏感性、特異性、陽性報告率、陰性報告率。在訓練組當中，發(fā)明人使用多二次回歸分析以構(gòu)建包含AIB1、EIF5A2和NMP22的模型，根據(jù)模型得出個體預(yù)測分值公式＝(3.304×AIB1表達值)+(0.828×EIF5A2表達值)+(0.546×NMP22表達值)，運用預(yù)測公式根據(jù)對象個體AIB1、EIF5A2和NMP22的表達水平計算每個對象的預(yù)測分值。發(fā)明人根據(jù)ROC曲線分析來選定一個由Youden指數(shù)確定的診斷界定預(yù)測分值，發(fā)明利用ROC曲線確定模型對膀胱癌診斷的敏感性、特異性、陽性報告率、陰性報告率。發(fā)明人采用同樣的方法將該模型應(yīng)用于獨立驗證組。發(fā)明人使用單因素和多因素二元邏輯回歸分析計算比值比和95％置信區(qū)間。本研究中統(tǒng)計學意義設(shè)定為p<0.05，所有p值都是雙邊值。發(fā)明人使用SPSS12.0和第八版醫(yī)學統(tǒng)計軟件(MedCalcversion8.0)對數(shù)據(jù)進行分析。研究對象的特性表1體現(xiàn)了訓練組和獨立驗證組的臨床和病理學特性。訓練組由85份膀胱癌患者的尿液樣本(實驗組)和50份對照尿液樣本組成。實驗組和對照之間的性別、年齡和吸煙習慣方面無統(tǒng)計學差異(p值均大于0.05)。實驗組中，64.7％為非肌層浸潤膀胱癌(non-muscleinvasiveBCa，NMIBC)，43.5％為低級別膀胱癌(low-gradedisease)。獨立驗證組中由134份膀胱癌患者的尿液樣本(實驗組)和76份對照尿液樣本組成，實驗組和對照之間的性別、年齡和吸煙習慣方面無統(tǒng)計學差異(p值均大于0.05)。實驗組中，64.7％的患者為非肌層浸潤膀胱癌，41.8％為低級別膀胱癌。訓練組和獨立驗證組的相對應(yīng)組之間的患者在性別、年齡、吸煙習慣、腫瘤病理分期和腫瘤級別均無統(tǒng)計學差異(p值均大于0.05)。ELISA數(shù)據(jù)重復(fù)性的評估發(fā)明人驗證ELISA蛋白測量結(jié)果的重復(fù)穩(wěn)定性，重復(fù)測量了訓練組和獨立驗證組尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22的蛋白含量。根據(jù)所有樣本的檢測結(jié)果繪制散點圖驗證3次連續(xù)測量的重復(fù)性。在本研究中，所有的組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(ICC)都大于0.98，表明所有組中的測量結(jié)果都具有很好重復(fù)穩(wěn)定性(圖1)?；诖?，發(fā)明人認為ELISA檢測流程非常適用于尿液中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白水平的檢測。實驗組及對照組尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白水平的表達圖2顯示了訓練組和獨立驗證組中AIB1、EIF5A2和NMP22在尿液樣本中蛋白表達的濃度。在訓練組中，實驗組和對照組中AIB1的中位濃度值分別為1.40ng/ml和0.35ng/ml；EIF5A2中位濃度值分別為5.83ng/ml和4.56ng/ml；NMP22的中位濃度值分別為7.74ng/ml和6.31ng/ml，實驗組中三種蛋白的濃度均高于對照組，所有p值均小于0.0001，差異均具有統(tǒng)計學意義。在獨立驗證組中，實驗組和對照組中AIB1的中位濃度值分別為1.31ng/ml和0.39ng/ml；EIF5A2的中位濃度值分別為5.74ng/ml和4.60ng/ml；NMP22的中位濃度值分別為7.78ng/ml和6.23ng/ml，實驗組中三種蛋白的濃度均高于對照組，所有p值均小于0.0001，差異均具有統(tǒng)計學意義。如表2所示，在訓練組中，肌層浸潤性膀胱癌患者尿液中AIB1、EIF5A2和NMP22的蛋白濃度均比非肌層浸潤性膀胱癌患者的濃度高，三組p值均小于0.05，差異均具有統(tǒng)計學意義。在獨立驗證組中得出同樣的結(jié)果(表2)。將膀胱癌患者按性別、年齡、吸煙習慣分組時，在訓練組或獨立驗證組中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白表達水平均無統(tǒng)計學差異(表2)。尿液AIB1、EIF5A2和NMP22用于膀胱癌診斷的特征表現(xiàn)通過訓練組可得出AIB1、EIF5A2和NMP22的診斷界值分別為0.58ng/ml,5.06ng/ml,和6.89ng/ml。圖3A為訓練組中AIB1、EIF5A2和NMP22的ROC曲線。表3顯示了尿液中三種生物標志的診斷準確水平。在訓練組中，AIB1具有81％的敏感性和88％的特異性，ROC曲線下面積為0.846(95％可信度[95％CI]0.775–0.917)；尿液EIF5A2具有74％的敏感度和78％的特異性，ROC曲線下面積為0.761(95％CI0.675–0.846)。尿液NMP22具有79％的敏感度和80％的特異性，ROC曲線下面積為0.794(95％CI0.712–0.876)。為驗證這3個生物標志在不同的人群中具有相似的診斷表現(xiàn)，發(fā)明人在具有210例的獨立組中對3個生物標記物進行了驗證。將訓練組中得出的3個生物標記物診斷界值分別用于獨立驗證組，發(fā)現(xiàn)它們均具有類似的診斷準確度(圖3B，表3)。表3.訓練組和獨立驗證組AIB1、EIF5A2、NMP22及模型的膀胱癌診斷準確度：CI＝置信區(qū)間。將AIB1或EIF5A2的AUC與NMP22的進行對比，在訓練組中它們的診斷準確度均無顯著區(qū)別(p>0.05)。但是，在獨立驗證組中，AIB1的診斷準確度顯著大于NMP22的診斷準確度。尿液AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白水平用于膀胱癌診斷的邏輯回歸分析訓練組中，單因素邏輯回歸分析提示尿液中AIB1、EIF5A2和NMP22含量的增加都與患膀胱癌的風險呈正相關(guān)(p值均小于0.0001，表4)。在獨立驗證組中得出同樣的結(jié)論(p值均小于0.0001，表4)。多因素logistics回歸分析排除了年齡、性別和吸煙習慣三種因素影響AIB1、EIF5A2和NMP22對膀胱癌診斷的準確度(p值均小于0.0001表4)。構(gòu)建包含有AIB1、EIF5A2和NMP22的尿液膀胱癌診斷模型在訓練組中，根據(jù)3個瘤標的蛋白水平得出膀胱癌診斷模型的概率分值是10.08。概率分值的分布圖顯示模型具有更好的診斷準確度(圖4A)，其具有92％的敏感性和92％的特異性，AUC為0.919(95％CI0.864–0.974)，優(yōu)于單個診斷標志(p值均小于0.05圖3A)。在單因素logistic回歸中，模型的概率分值與患膀胱癌的風險呈正相關(guān)(p<0.0001，表4)。多因素logistics回歸分析排除了年齡、性別和吸煙習慣三種因素影響模型對膀胱癌診斷的準確度(p<0.0001，表4)。為驗證模型在不同的人群中是否具有相似的診斷準確度，發(fā)明人將其應(yīng)用于由來自其他醫(yī)療中心的134位患者和76對照對象。結(jié)果表明模型具有訓練組的類似的診斷準確度(圖4B)。圖3B顯示了模型的ROC曲線，其敏感性和特異性分別是89％和91％(表3)。模型的AUC為0.898(95％CI0.849–0.947)，再次證明了其診斷準確度優(yōu)于任何單個生物標志(p值均小于0.05，圖3B)。在單因素logistic回歸中，模型的概率分值與患膀胱癌的風險呈正相關(guān)(p<0.0001，表4)。多因素logistics回歸分析排除了年齡、性別和吸煙習慣三種因素影響模型對膀胱癌診斷的準確度(p<0.0001，表4)。表4.訓練組及獨立驗證組的邏輯回歸分析：CI＝置信區(qū)間。參考文獻1.KlotzLandBrausiMA.WorldUrologicOncologyFederationBladderCancerPreventionProgram:Aglobalinitiative.UrolOncol-SeminOri.2015；33(1):25-29.2.JemalA,SiegelR,XuJandWardE.Cancerstatistics,2010.CA:acancerjournalforclinicians.2010；60(5):277-300.3.TilkiD,BurgerM,DalbagniG,GrossmanHB,HakenbergOW,PalouJ,ReichO,RoupretM,ShariatSFandZlottaAR.Urinemarkersfordetectionandsurveillanceofnon-muscle-invasivebladdercancer.Europeanurology.2011；60(3):484-492.4.BabjukM,SoukupV,PeslM,KostirovaM,DrncovaE,SmolovaH,SzakacsovaM,GetzenbergR,PavlikIandDvoracekJ.UrinarycytologyandquantitativeBTAandUBCtestsinsurveillanceofpatientswithpTapT1bladderurothelialcarcinoma.Urology.2008；71(4):718-722.5.GnanapragasamVJ,LeungHY,PulimoodAS,NealDEandRobsonCN.ExpressionofRAC3,asteroidhormonereceptorco-activatorinprostatecancer.Britishjournalofcancer.2001；85(12):1928-1936.6.TannerMM,GrenmanS,KoulA,JohannssonO,MeltzerP,PejovicT,BorgAandIsolaJJ.Frequentamplificationofchromosomalregion20q12-q13inovariancancer.Clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch.2000；6(5):1833-1839.7.SakaguchiH,FujimotoJ,SunWSandTamayaT.Clinicalimplicationsofsteroidreceptorcoactivator(SRC)-3inuterineendometrialcancers.TheJournalofsteroidbiochemistryandmolecularbiology.2007；104(3-5):237-240.8.LuoJH,XieD,LiuMZ,ChenW,LiuYD,WuGQ,KungHF,ZengYXandGuanXY.ProteinexpressionandamplificationofAIB1inhumanurothelialcarcinomaofthebladderandoverexpressionofAIB1isanewindependentprognosticmarkerofpatientsurvival.InternationaljournalofcancerJournalinternationalducancer.2008；122(11):2554-2561.9.TongZT,WeiJH,ZhangJX,LiangCZ,LiaoB,LuJ,FanS,ChenZH,ZhangF,MaHH,QianWC,KongLL,FangY,ChenW,XieDandLuoJH.AIB1predictsbladdercanceroutcomeandpromotesbladdercancercellproliferationthroughAKTandE2F1.Britishjournalofcancer.2013；108(7):1470-1479.10.WeiJ,CheangT,TangB,XiaH,XingZ,ChenZ,FangY,ChenW,XuA,WangSandLuoJ.Theinhibitionofhumanbladdercancergrowthbycalciumcarbonate/CaIP6nanocompositeparticlesdeliveringAIB1siRNA.Biomaterials.2013；34(4):1246-1254.11.GuanXY,ShamJS,TangTC,FangY,HuoKKandYangJM.Isolationofanovelcandidateoncogenewithinafrequentlyamplifiedregionat3q26inovariancancer.Cancerresearch.2001；61(9):3806-3809.12.MarchetA,MocellinS,BellucoC,AmbrosiA,DeMarchiF,MammanoE,DigitoM,LeonA,D'ArrigoA,LiseMandNittiD.Geneexpressionprofileofprimarygastriccancer:towardsthepredictionoflymphnodestatus.Annalsofsurgicaloncology.2007；14(3):1058-1064.13.XieD,MaNF,PanZZ,WuHX,LiuYD,WuGQ,KungHFandGuanXY.OverexpressionofEIF-5A2isassociatedwithmetastasisofhumancolorectalcarcinoma.Humanpathology.2008；39(1):80-86.14.YangGF,XieD,LiuJH,LuoJH,LiLJ,HuaWF,WuHM,KungHF,ZengYXandGuanXY.ExpressionandamplificationofeIF-5A2inhumanepithelialovariantumorsandoverexpressionofEIF-5A2isanewindependentpredictorofoutcomeinpatientswithovariancarcinoma.Gynecologiconcology.2009；112(2):314-318.15.TangDJ,DongSS,MaNF,XieD,ChenL,FuL,LauSH,LiY,LiYandGuanXY.Overexpressionofeukaryoticinitiationfactor5A2enhancescellmotilityandpromotestumormetastasisinhepatocellularcarcinom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