本發(fā)明涉及一種食品中雙甲脒的檢測(cè)方法，特別涉及一種食品中雙甲脒的氣相-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：雙甲脒（N,N-雙(2,4-二甲苯亞氨基甲基)甲胺）是一種殺蟲劑。在棉花中，雙甲脒可用于控制螟蛉蟲、粉虱以及斜紋夜蛾；畜牧業(yè)中，則常用其來控制蜱、螨、虱及其它的動(dòng)物寄生蟲。普遍認(rèn)為雙甲脒具有毒性，因此許多國(guó)家都制定了雙甲脒在食品中的最大殘留限量。目前雙甲脒的檢測(cè)方法有液相色譜法、氣相色譜法、氣相質(zhì)譜聯(lián)用法等。液相色譜法的檢出限高、分離度比較差，而且有干擾峰的影響很難解決。氣相色譜法（GB29707-2013牛奶中雙甲脒殘留標(biāo)志物殘留量的測(cè)定氣相色譜法）用正己烷提取再用七氟丁酸酐衍生生成2,4二甲基苯七氟丁酰胺，ECD檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量；該方法的回收率、檢出限仍不理想，而且還有假陽性等干擾現(xiàn)象。因此這些方法不能滿足雙甲脒的檢測(cè)要求。在農(nóng)業(yè)部公告781-8-2006蜂蜜中雙甲脒殘留量的測(cè)定氣相色譜－質(zhì)譜法中，公開了一種氣相質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS法）用于檢測(cè)雙甲脒含量。GC-MS法是直接用正己烷提取目標(biāo)物上機(jī)，選擇離子掃描（SIM）模式檢測(cè)，方法中前處理簡(jiǎn)單，但是SIM模式響應(yīng)值小、同時(shí)檢出限仍比較高，滿足不了基質(zhì)復(fù)雜（例如牛奶）及檢出限要求高的樣品的檢測(cè)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種雙甲脒的檢測(cè)方法，適用于多種成分的基質(zhì)（如牛奶、蜂蜜、蔬菜、水果和稻谷），且檢出限高。本發(fā)明提供了一種食品中雙甲脒的檢測(cè)方法，包括：提取，得到提取液；水解，將提取液水解得到水解液；衍生，水解液和衍生劑反應(yīng)后得到衍生液；凈化，將衍生液凈化得到凈化液；以及儀器測(cè)定步驟，儀器測(cè)定為對(duì)凈化液進(jìn)行氣相-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。在食品中雙甲脒的檢測(cè)方法的一種示意性實(shí)施方式中，提取步驟為：稱取待測(cè)食品5±0.05g，于聚丙烯離心管中，加堿性水溶液10mL，漩渦混勻，5000r/分鐘離心10分鐘，取上清液于另一聚丙烯離心管中，殘?jiān)屑訅A性水溶液10mL，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，得到提取液。在食品中雙甲脒的檢測(cè)方法的一種示意性實(shí)施方式中，水解步驟為：將提取液放置在70℃恒溫干燥箱中靜置50分鐘，冷卻，加正己烷10mL，漩渦混勻，靜置5分鐘，5000r/分鐘離心10分鐘，取上層正己烷液于試管中，下層液加正己烷5mL重復(fù)萃取一次，合并兩次正己烷層液，于45℃氮吹至凈干，用正己烷2.0mL溶解殘余物，得到水解液。在食品中雙甲脒的檢測(cè)方法的一種示意性實(shí)施方式中，凈化步驟為：衍生液加飽和碳酸氫鈉溶液3mL，混勻，取有機(jī)相層，加無水硫酸鈉5g去水，得到凈化液。在食品中雙甲脒的檢測(cè)方法的一種示意性實(shí)施方式中，衍生劑采用?；瘎Ｔ谑称分须p甲脒的檢測(cè)方法的一種示意性實(shí)施方式中，?；瘎槠叻∷狒?；其中氣相-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，質(zhì)譜的目標(biāo)離子為：2，4-二甲基苯七氟丁酰胺目標(biāo)母離子m/z為317.1，碎片子離子m/z分別為119.8和147.9。在食品中雙甲脒的檢測(cè)方法的一種示意性實(shí)施方式中，衍生步驟為：取水解液于具塞離心管中，加七氟丁酸酐10μL，混勻，于60℃恒溫90分鐘，其間每隔30分鐘，取出超聲5分鐘，衍生后靜置5分鐘，得到衍生液。在食品中雙甲脒的檢測(cè)方法的一種示意性實(shí)施方式中，氣相-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定步驟包括：色譜柱：VF-5MS毛細(xì)管柱（長(zhǎng)度30m，內(nèi)徑0.25mm,膜厚0.25um）；載氣：氦氣，恒流模式；柱流速：1.0mL/分鐘;進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣,1分鐘后開閥分流比20:1;進(jìn)樣量1μL,進(jìn)樣口溫度:280℃;柱溫:初始溫度70℃保持2分鐘，以10℃/分鐘升至160℃，再以20℃/分鐘升到280℃并保持2分鐘；質(zhì)譜條件：電子轟擊源（EI）：70eV；碰撞氣：氬氣；離子源溫度：200℃；接口溫度：280℃；溶劑延遲7.0分鐘；掃描方式：碎片離子掃描（MS/MS），2，4-二甲基苯七氟丁酰胺目標(biāo)母離子m/z為317.1，碎片子離子m/z為119.8和147.9，對(duì)應(yīng)的碰撞能量分別為30V和20V。在食品中雙甲脒的檢測(cè)方法的一種示意性實(shí)施方式中，包括：1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：準(zhǔn)確量取2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用正己烷稀釋，配置成濃度為5、10、20、40、80、160ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取1.0mL，按“1.3衍生和1.4凈化”步驟處理，供氣相色譜測(cè)定。以測(cè)得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)；1.2提取：在堿性條件下提取待測(cè)物中的雙甲脒，步驟如下：稱取待測(cè)食品（5±0.05）g，于聚丙烯離心管中，加堿性水溶液10mL，漩渦混勻，5000r/分鐘離心10分鐘，取上清液于另一聚丙烯離心管中，殘?jiān)屑訅A性水溶液10mL，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，得到提取液；1.3水解：提取后的雙甲脒水解成2、4-二甲基苯胺，再用正己烷提取水解產(chǎn)物2、4-二甲基苯胺；步驟如下：將提取液放置在70℃恒溫干燥箱中靜置50分鐘，冷卻，加正己烷10mL，漩渦混勻，靜置5分鐘，5000r/分鐘離心10分鐘，取上層正己烷液于試管中，下層液加正己烷5mL重復(fù)萃取一次，合并兩次正己烷層液，于45℃氮吹至凈干，用正己烷2.0mL溶解殘余物，得到水解液備用；1.4衍生：水解產(chǎn)物2、4-二甲基苯胺和衍生劑七氟丁酸酐反應(yīng)生成2、4-二甲基苯七氟丁酰胺，步驟如下：取水解液于具塞離心管中，加七氟丁酸酐10μL，混勻，于60℃恒溫90分鐘，其間每隔30分鐘取出超聲5分鐘。衍生后靜置5分鐘，得到衍生液；1.5凈化：用飽和碳酸氫鈉溶液凈化衍生產(chǎn)物，取有機(jī)層上清液（含2、4-二甲基苯七氟丁酰胺的正己烷溶液）再用無水硫酸鈉除水；步驟如下：衍生液中加飽和碳酸氫鈉溶液3mL，混勻，取有機(jī)相層，加無水硫酸鈉5g去水，得到凈化液，供氣相色譜質(zhì)譜串聯(lián)儀測(cè)定；2.1色譜條件：色譜柱：VF-5MS毛細(xì)管柱（長(zhǎng)度30m，內(nèi)徑0.25mm,膜厚0.25um），或相當(dāng)者；載氣：氦氣，恒流模式；柱流速：1.0mL/分鐘;進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣,1分鐘后開閥分流比20:1;進(jìn)樣量1μL,進(jìn)樣口溫度:280℃;柱溫:初始溫度70℃保持2分鐘，以10℃/分鐘升至160℃，再以20℃/分鐘升到280℃并保持2分鐘；2.2質(zhì)譜條件：電子轟擊源（EI）：70eV；碰撞氣：氬氣；離子源溫度：200℃；接口溫度：280℃；溶劑延遲7.0分鐘；掃描方式：碎片離子掃描（MS/MS），2，4-二甲基苯七氟丁酰胺目標(biāo)母離子為m/z317.1，碎片子離子為m/z119.8和147.9并對(duì)應(yīng)的碰撞能量分別為30和20。本發(fā)明提供的一種食品中雙甲脒的檢測(cè)方法，使用氣相色譜質(zhì)譜串聯(lián)儀選擇一個(gè)母離子和兩個(gè)子離子進(jìn)行準(zhǔn)確定性、完全避免了樣品的基質(zhì)影響導(dǎo)致的假陽性。現(xiàn)有的衍生劑如：乙酸酐、乙酰氯、三氟乙酸酐、二氯亞砜和七氟丁酸酐等同樣有?；饔?，都可用于氣相色譜分析（GC）。優(yōu)選的衍生劑七氟丁酸酐作為?；噭?，可以跟目標(biāo)物（2、4、-二甲基苯胺）上的氨基進(jìn)行?；磻?yīng)。附圖說明圖1是本發(fā)明實(shí)施例1氣相-串聯(lián)質(zhì)譜方法（GC-MS/MS）空白樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)比色譜圖。圖2是氣相色譜法的假陽性樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)比色譜圖。圖3是氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）假陽性樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比色譜圖。具體實(shí)施方式為了對(duì)發(fā)明的技術(shù)特征、目的和效果有更加清楚的理解，現(xiàn)結(jié)合以下實(shí)施例說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式。實(shí)施例1：雙甲脒檢測(cè)方法。1、試劑及溶液雙甲脒標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥99％；2，4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥95％；1mol/L氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉40g,用水溶解并稀釋至1000ml；堿性水溶液：量取水1000ml,用1mol/l的氫氧化鈉溶液調(diào)PH至9.0；飽和碳酸氫鈉溶液：取碳酸氫鈉40g,用水溶解并稀釋至1000ml；1mg/ml雙甲脒和2.4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取雙甲脒和2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)品各10mg,分別于10ml容量瓶中，用正己烷溶解定容到刻度；氫氧化鈉：分析純，碳酸氫鈉：分析純，無水硫酸鈉：分析純，七氯丁酸酐：色譜純，正己烷：色譜純。2、儀器設(shè)備氣相色譜質(zhì)譜串聯(lián)儀（GC-MS/MS）,萬分之一分析天平，離心機(jī)，漩渦混合器，均質(zhì)機(jī)，恒溫干燥箱，聚丙烯離心管，具塞離心管。3、樣品前處理3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確量取2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用正己烷稀釋，配置成濃度為5、10、20、40、80、160ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取1.0mL，按衍生步驟處理，供氣相色譜質(zhì)譜串聯(lián)儀測(cè)定。以測(cè)得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。3.2提取和水解稱取試樣（5±0.05）g，于聚丙烯離心管中，加堿性水溶液10mL，漩渦混勻，5000rpm離心10分鐘，取上清液于另一聚丙烯離心管中，殘?jiān)屑訅A性水溶液10mL，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液。于70℃恒溫干燥箱中靜置50分鐘，冷卻，加正己烷10mL，漩渦混勻，靜置5分鐘，5000rpm離心10分鐘，取上層正己烷液于試管中，下層液加正己烷5mL重復(fù)萃取一次，合并兩次正己烷層液，于45℃氮吹至凈干，用正己烷2.0mL溶解殘余物，得到水解液備用。3.3衍生和凈化取水解液于具塞離心管中，加七氟丁酸酐10μL，混勻，于60℃恒溫90分鐘，其間每隔30分鐘取出超聲5分鐘。衍生后靜置5分鐘，加飽和碳酸氫鈉溶液3mL，混勻，取有機(jī)相層，加無水硫酸鈉5g去水，供氣相色譜質(zhì)譜串聯(lián)儀測(cè)定。4、色譜條件:色譜柱：VF-5MS毛細(xì)管柱（30m×0.25mm,0.25um），或相當(dāng)者；載氣：氦氣，恒流模式；柱流速：1.0mL/分鐘;進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣,1分鐘后開閥分流比20:1;進(jìn)樣量1μL,進(jìn)樣口溫度:280℃;柱溫:初始溫度70℃保持2分鐘，以10℃/分鐘升至160℃，再以20℃/分鐘升到280℃并保持2分鐘。5、質(zhì)譜條件：電子轟擊源（EI）：70eV；碰撞氣：氬氣；離子源溫度：200℃；接口溫度：280℃；溶劑延遲7.0分鐘；掃描方式：碎片離子掃描（MS/MS），2，4-二甲基苯七氟丁酰胺目標(biāo)母離子為m/z317.1，碎片子離子為m/z119.8和147.9，碰撞能量分別為30和20；（見圖1、2、3）。6、方法檢出限：檢出限試驗(yàn)：將20個(gè)空白樣品通過樣品前處理方法制備成待檢測(cè)液，用GC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算20個(gè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差和平均值得出方法檢出限為0.5ug/kg(s/n>3)。7、準(zhǔn)確度和精密度通過不同基質(zhì)樣品中加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)得出回收率范圍在83.2～110.7%之間，RSD(%)范圍在2.34%～6.56%之間；（見表1）。表1：不同基質(zhì)樣品中不同水平加標(biāo)回收率試驗(yàn)（N=6）樣品理論加標(biāo)量（ug/kg）平均檢測(cè)結(jié)果（ug/kg）回收率范圍（%）RSD(%)純牛奶0.5000.47983.2%～97.6%4.12%純牛奶1.001.0186.4%～109.1%6.56%純牛奶5.004.9689.7%～102.8%5.97%蜂蜜0.5000.49892,3%～104.2%2.83%蜂蜜1.000.99790,6%～104.3%3.19%蜂蜜5.005.0393.2%～103.9%2.34%蔬菜0.5000.50388.2%～104.9%3.48%蔬菜1.000.99286.7%～110.7%4.41%蔬菜5.004.9794.5%～106.8%2.68%水果0.5000.4989.4%～107.9%4.91%水果1.001.0791.8%～108.1%3.09%水果5.004.8287.6%～107.3%2.97%稻谷0.5000.48284.3%～96.8%5.62%稻谷1.001.0787.5%～109.1%6.03%稻谷5.005.0985.6%～106.2%4.89%對(duì)比實(shí)施例。對(duì)比實(shí)施例中氣相色譜法GB29707-2013樣品前處理完全按照國(guó)標(biāo)方法執(zhí)行；氣相色譜-質(zhì)譜方法的前處理步驟跟實(shí)施例1完全相同，質(zhì)譜條件：SIM模式，選擇離子為（m/z）：317.1、120、121（定量離子）、148.1。用現(xiàn)有的氣相色譜法GB29707-2013和現(xiàn)有的氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）進(jìn)行20個(gè)不同批次的牛奶做空白樣品進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果表明GB29707-2013氣相色譜法中有些批次空白樣品中雙甲脒含量比較高，而且有的結(jié)果高于檢出限（>2ug/kg），氣相色譜-質(zhì)譜法也能夠檢測(cè)出一些批次空白樣品中的雙甲脒；本發(fā)明實(shí)施例1的方法能夠準(zhǔn)確定性，然而其他兩個(gè)現(xiàn)有技術(shù)方法沒有準(zhǔn)確定性導(dǎo)致有假陽性現(xiàn)象；結(jié)果對(duì)比如表2所示。表2：現(xiàn)有方法和實(shí)施例1檢測(cè)（牛奶空白樣品）結(jié)果對(duì)比序號(hào)GB29707-2013檢測(cè)結(jié)果（ug/kg）氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）檢測(cè)結(jié)果（ug/kg）氣相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)（GC-MS/MS）檢測(cè)結(jié)果（ug/kg）10.000.000.0020.890.040.0030.000.000.0042.340.140.0051.090.090.0060.070.000.0070.000.000.0082.090.040.0092.110.130.00102.180.140.00110.000.000.00120.290.020.00130.980.090.00142.040.060.00152.270.100.00161.450.050.00172.190.180.00181.020.110.00190.000.000.00201.480.050.00表2數(shù)據(jù)和圖1顯示，氣相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)方法（GC-MS/MS）能夠準(zhǔn)確定性空白樣品中的雙甲脒，沒有假陽性現(xiàn)象。然而，通過圖2可以看出，氣相色譜法GB29707-2013中假陽性樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間比較接近現(xiàn)有的方法無法準(zhǔn)確定性導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象；通過圖3還可以看出，氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）中假陽性樣品含個(gè)別定性離子導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。在本文中，“示意性”表示“充當(dāng)實(shí)例、例子或說明”，不應(yīng)將在本文中被描述為“示意性”的任何實(shí)施方式解釋為一種更優(yōu)選的或更具優(yōu)點(diǎn)的技術(shù)方案。在本文中，“相等”、“相同”等并非嚴(yán)格的數(shù)學(xué)和/或幾何學(xué)意義上的限制，還包含本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的且生產(chǎn)或使用等允許的誤差。除非另有說明，本文中的數(shù)值范圍不僅包括其兩個(gè)端點(diǎn)內(nèi)的整個(gè)范圍，也包括含于其中的若干子范圍。應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書是按照各個(gè)實(shí)施例描述的，但并非每個(gè)實(shí)施例僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。上文所列出的一系列的詳細(xì)說明僅僅是針對(duì)本發(fā)明的可行性實(shí)施例的具體說明，它們并非用以限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實(shí)施方案或變更，如特征的組合、分割或重復(fù)，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3