專利名稱：豆基食品中葉黃素的含量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含豆基食品中葉黃素的含量檢測方法。
技術(shù)背景
葉黃素是視網(wǎng)膜的主要色素成分，有過濾藍(lán)光和抗氧化的作用，是匡助眼睛發(fā)育的重要營養(yǎng)素。由于光的照射，短光(藍(lán)光)對視網(wǎng)膜的傷害很大。嬰兒出身時的晶狀體相對比較清徹，零-二歲段，約70-80%的藍(lán)光可穿透晶狀體到達(dá)視網(wǎng)膜。葉黃素為嬰幼兒幼嫩的眼睛起到了屏障作用，于是有人把葉黃素比作“隱形的太陽鏡”。由于人體自身并不能合成葉黃素，因此每天必須給寶寶補(bǔ)充一定量的葉黃素。
目前公司新推出的豆基產(chǎn)品中便添加了葉黃素，對于豆基食品中葉黃素的含量測定，國標(biāo)中尚未有相應(yīng)的檢測方法。因此，開發(fā)豆基食品中葉黃素的含量檢測方法對調(diào)配出最適于嬰幼兒成長所需的含葉黃素豆基類食品有著重要意義。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種含豆基食品中葉黃素的含量檢測方法。旨在以方便、 快捷、準(zhǔn)確地檢測豆基食品中葉黃素的含量。
本發(fā)明，其原理是豆基食品中含淀粉，先經(jīng)淀粉酶酶解后，利用石油醚進(jìn)行提取， 濃縮后用丙酮重溶，經(jīng)紫外檢測器測定，外標(biāo)法定量。
本發(fā)明，包括如下工作步驟 (1)試劑準(zhǔn)備，所用試劑包括(a)甲醇色譜純；(b)甲基叔丁基醚色譜純；(c)丙酮色譜純；(d)2，6- 二叔丁基對甲酚(BHT)純度彡99% ；(e)二氯甲烷色譜純；(f)石油醚分析純；(g)淀粉酶酶活力彡1.5U/mg ；(h)葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品純度彡96.2% ；(i)0.P/oBHT的丙酮溶液稱取0. 500gBHT于500mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度； (j)標(biāo)準(zhǔn)儲備液lOOPg/mL:準(zhǔn)確稱取IOmg葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品，用二氯甲烷溶解并定容至lOOmL，于-80°C冰箱中避光保存，保存期為3個月；(k)標(biāo)準(zhǔn)中間液2(^g/mL 準(zhǔn)確移取2mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇定容至IOmL ；(1)標(biāo)準(zhǔn)系列工作液以含0.P/oBHT的丙酮溶液將標(biāo)準(zhǔn)中間液分別稀釋成0. 4Pg/mL、 0. 8Pg/mL、L 6Pg/mL、2. 0Pg/mL、2. 5Pg/mL ；(m)水超純水；(2)儀器設(shè)備，儀器設(shè)備包括4(a)高效液相色譜儀島津LC-20AT泵，SPD-20A紫外檢測器；(b)電子天平精確至0.0001g；(c)超聲波提取器；(d)渦旋混合器；(e)氮吹儀；(f)高速離心機(jī)；(3)樣品處理準(zhǔn)確稱取樣品1.0g，精確至0. 0001 g,置于50mL具塞聚丙烯離心管中，加入20mL45-50°C水，再加入0. Ig淀粉酶，渦旋混勻，置50_60°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min， 取出冰浴冷卻至30°C以下，在避光條件下加入20mL石油醚，冰浴超聲提取lOmin，超聲過程需更換冰塊，保證整個提取過程溫度不超過30°C，取出冷卻至10°C以下，于5000r/min離心 5min，準(zhǔn)確移取IOmL上清液于一 15mL離心管中，30°C以下氮吹至干，用含0. 1%BHT的丙酮溶液定溶至lmL，渦旋混勻，過0. 2Mm有機(jī)濾膜；供HPLC測定，外標(biāo)法定量；(4)色譜條件，色譜條件包括(a)色譜柱YMC Carotenoid(250 mmX4. 6mm, 5Mm)或相當(dāng)者；(b)進(jìn)樣量:20μ ；(c)流速1.OmL/min ；(d)紫外檢測器波長445nm;(e)柱溫25°C；(f)流動相85%甲醇-15%甲基叔丁基醚；(5)定量分析(a)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀，測定相應(yīng)的峰面積， 以峰面積為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；(b)試液測定將制備好的樣液注入高效液相色譜儀，測得相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品進(jìn)行定量，測得試液濃度；(c)計算，計算公式為X=Cxv1Xio(VOiiXv2)，式中 χ 試樣中葉黃素的含量，單位為Pg/100g ；C 由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試液濃度，單位為Pg/mL ； V1 加入石油醚的體積，單位為mL ； V2 移取上清液的體積，單位為mL ； m:試樣質(zhì)量，單位為g。
本發(fā)明，是在《奶粉中葉黃素測定》(GB/T 23209-2008)的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)。(1) 嬰幼兒食品中，豆基食品與奶粉的檢驗(yàn)有許多相似之處。但因豆基中含有淀粉，需要酶解而奶粉中葉黃素的提取劑為丙酮，丙酮與水互溶，萃取后無法與水分層(酶解過程需加水)，最后亦無法氮吹濃縮。本方法采用石油醚進(jìn)行萃取，萃取后分層明顯，利于上清液的移取與氮吹濃縮；(2)為將豆基中的葉黃素充分提取出來，本方法采用超聲提取代替振蕩萃取。且因葉黃素對熱極不穩(wěn)定，故整個超聲提取過程采用冰浴降溫，從而最大限度地減少提取過程中的損失；(3)GB/T 23209-2008中采用甲醇與甲基叔丁基醚進(jìn)行梯度洗脫，整個梯度走完需15分鐘。本發(fā)明采用等度洗脫，以85%甲醇與15%甲基叔丁基醚作為流動相，7. 3分鐘左右即可出峰，每針樣品走完僅需9分鐘。
本發(fā)明，在豆基食品中檢測葉黃素的含量，具有方便、快捷、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。對調(diào)配出最適于嬰幼兒成長所需的含葉黃素豆基類食品有著重要意義。


圖1為葉黃素含量標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖中，縱坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度，橫坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)工作液對應(yīng)的峰面積。
具體實(shí)施方式
一種含豆基食品中葉黃素的含量檢測方法，包括如下工作步驟 (1)試劑準(zhǔn)備，所用試劑包括(a)甲醇色譜純；(b)甲基叔丁基醚色譜純；(c)丙酮色譜純；(d)2，6- 二叔丁基對甲酚(BHT)純度彡99% ；(e)二氯甲烷色譜純；(f)石油醚分析純；(g)淀粉酶酶活力彡1.5U/mg ；(h)葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品純度彡96.2% ；(i)0.P/oBHT的丙酮溶液稱取0. 500gBHT于500mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度； (j)標(biāo)準(zhǔn)儲備液lOOPg/mL:準(zhǔn)確稱取IOmg葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品，用二氯甲烷溶解并定容至lOOmL，于-80°C冰箱中避光保存，保存期為3個月；(k)標(biāo)準(zhǔn)中間液2(^g/mL 準(zhǔn)確移取2mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇定容至IOmL ；(1)標(biāo)準(zhǔn)系列工作液以含0.P/oBHT的丙酮溶液將標(biāo)準(zhǔn)中間液分別稀釋成0. 4Pg/mL、 0. 8Pg/mL、L 6Pg/mL、2. 0Pg/mL、2. 5Pg/mL ；(m)水超純水；(2)儀器設(shè)備，儀器設(shè)備包括(a)高效液相色譜儀島津LC-20AT泵，SPD-20A紫外檢測器；(b)電子天平精確至0.0001g ；(c)超聲波提取器；(d)渦旋混合器；(e)氮吹儀；(f)高速離心機(jī)；(3)色譜條件，色譜條件包括(a)色譜柱YMC Carotenoid(250 mmX4. 6mm, 5Mm)或相當(dāng)者；(b)進(jìn)樣量:20μ ；(c)流速1.OmL/min ；(d)紫外檢測器波長445nm;(e)柱溫25°C；(f)流動相85%甲醇-15%甲基叔丁基醚；6(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液 0. 4Pg/mL、0. 8Pg/mL、l. 6Pg/mL、2. OPg/mL 和 2. 5Pg/mL 分別注入高效液相色譜儀，測得相應(yīng)的峰面積分別為16618. 7,31541. 1,60045. 9,74646. 1,93660. 2，以峰面積為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。利用高效液相色譜儀進(jìn)行測定分析時，可直接讀出峰面積的數(shù)值；(5)樣品處理準(zhǔn)確稱取樣品1.0g，精確至0. 0001 g,置于50mL具塞聚丙烯離心管中，加入20mL45-50°C水，再加入0. Ig淀粉酶，渦旋混勻，置50_60°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min， 取出冰浴冷卻至30°C以下，在避光條件下加入20mL石油醚，冰浴超聲提取lOmin，超聲過程需更換冰塊，保證整個提取過程溫度不超過30°C，取出冷卻至10°C以下，于5000r/min離心 5min，準(zhǔn)確移取IOmL上清液于一 15mL離心管中(對于脂肪含量高的樣品，因脂肪上浮于醚層，影響上清液移取，可視具體情況適當(dāng)減少移液量)，30°C以下氮吹至干，用含0. 1%BHT的丙酮溶液定溶至lmL，渦旋混勻，過0. 2Mm有機(jī)濾膜；供HPLC測定，外標(biāo)法定量；(6)定量分析本實(shí)施例對某批次的嬰兒豆基食品中葉黃素含量的檢測，分別提取樣品 1和樣品2，分別測出樣品1和樣品2中葉黃素的含量，再算出其平均值，如果偏差彡10%為檢測合格，如果偏差> 10%時必須重新檢測；樣品1的樣重為1.0005g，依照(3)樣品處理方法得到樣品1的樣液，將樣液注入高效液相色譜儀，測得相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品進(jìn)行定量分析，得到樣液葉黃素的濃度為0. 402Pg/mL ；由于在樣品處理時加入石油醚的體積為20mL ；移取上清液的體積為IOmL ； 因此由計算公式X=Cxv1Xio(VOiiXv2)可計算出試樣中葉黃素的含量為ο. 402x20x100/ (1.0005X10) =80. 4 (“g/100g)；樣品2的樣重為1. 0016g，依照(3)樣品處理方法得到樣品1的樣液，將樣液注入高效液相色譜儀，測得相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品進(jìn)行定量分析，得到樣液葉黃素的濃度為0. 425Pg/mL ；由于在樣品處理時加入石油醚的體積為20mL ；移取上清液的體積為IOmL ； 因此由計算公式X=CXV1X 100/ (mXV2)可計算出試樣中葉黃素的含量為0. 425X 20X 100/ (1.0016X10) =84. 9 (Pg/100g)；平均值的計算(80. 4+84. 9) /2=82. 6 (gg/lOOg)；精密度的計算[(84. 9-80. 4) /82. 6] X 100%=5. 45%。
結(jié)論本實(shí)施例對本批次嬰兒豆基食品進(jìn)行檢測，樣品中葉黃素的含量為 82. 6Pg/100g，兩次檢測精密度為5. 45%。
權(quán)利要求
1. 一種含豆基食品中葉黃素的含量檢測方法，其特征在于包括如下工作步驟 (1)試劑準(zhǔn)備，所用試劑包括(a)甲醇色譜純；(b)甲基叔丁基醚色譜純；(c)丙酮色譜純；(d)2，6- 二叔丁基對甲酚(BHT)純度彡99% ；(e)二氯甲烷色譜純；(f)石油醚分析純；(g)淀粉酶酶活力彡1.5U/mg ；(h)葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品純度彡96.2% ；(i)0.P/oBHT的丙酮溶液稱取0. 500gBHT于500mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度； (j)標(biāo)準(zhǔn)儲備液lOOPg/mL:準(zhǔn)確稱取IOmg葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品，用二氯甲烷溶解并定容至lOOmL，于-80°C冰箱中避光保存，保存期為3個月；(k)標(biāo)準(zhǔn)中間液2(^g/mL 準(zhǔn)確移取2mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇定容至IOmL ；(1)標(biāo)準(zhǔn)系列工作液以含0.P/oBHT的丙酮溶液將標(biāo)準(zhǔn)中間液分別稀釋成0. 4Pg/mL、 0. 8Pg/mL、L 6Pg/mL、2. 0Pg/mL、2. 5Pg/mL ；(m)水超純水；(2)儀器設(shè)備，儀器設(shè)備包括(a)高效液相色譜儀島津LC-20AT泵，SPD-20A紫外檢測器；(b)電子天平精確至0.0001g；(c)超聲波提取器；(d)渦旋混合器；(e)氮吹儀；(f)高速離心機(jī)；(3)樣品處理準(zhǔn)確稱取樣品1.0g，精確至0. 0001 g,置于50mL具塞聚丙烯離心管中，加入20mL45-50°C水，再加入0. Ig淀粉酶，渦旋混勻，置50_60°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min， 取出冰浴冷卻至30°C以下，在避光條件下加入20mL石油醚，冰浴超聲提取lOmin，超聲過程需更換冰塊，保證整個提取過程溫度不超過30°C，取出冷卻至10°C以下，于5000r/min離心 5min，準(zhǔn)確移取IOmL上清液于一 15mL離心管中，30°C以下氮吹至干，用含0. 1%BHT的丙酮溶液定溶至lmL，渦旋混勻，過0. 2Mm有機(jī)濾膜；供HPLC測定，外標(biāo)法定量；(4)色譜條件，色譜條件包括(a)色譜柱YMC Carotenoid(250 mmX4. 6mm, 5Mm)或相當(dāng)者；(b)進(jìn)樣量:20μ ；(c)流速1.OmL/min ；(d)紫外檢測器波長445nm;(e)柱溫25°C；(f)流動相85%甲醇-15%甲基叔丁基醚；(5)定量分析(a)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀，測定相應(yīng)的峰面積，以峰面積為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；(b)試液測定將制備好的樣液注入高效液相色譜儀，測得相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品進(jìn)行定量，測得試液濃度；(C)計算，計算公式為X=CXV1X 100/(mXV2)，式中 X 試樣中葉黃素的含量，單位為Pg/100g ； C 由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試液濃度，單位為Pg/mL ； V1 加入石油醚的體積，單位為mL ； V2 移取上清液的體積，單位為mL ； m:試樣質(zhì)量，單位為g。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含豆基食品中葉黃素的含量檢測方法。包括如下工作步驟樣品處理準(zhǔn)確稱取樣品1.0g，精確至0.0001g,置于50mL具塞聚丙烯離心管中,加入20mL45-50℃水，再加入0.1g淀粉酶，渦旋混勻，置50-60℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min,取出冰浴冷卻至30℃以下，在避光條件下加入20mL石油醚，冰浴超聲提取10min，然后，于5000r/min離心5min，準(zhǔn)確移取10mL上清液于一15mL離心管中，30℃以下氮吹至干，用含0.1%BHT的丙酮溶液定溶至1mL，渦旋混勻，過0.2μm有機(jī)濾膜；供HPLC測定，外標(biāo)法定量；定量分析定量分析包括標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和試液測定，最后用公式計算。在豆基食品中檢測葉黃素的含量，具有方便、快捷、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號G01N30/02GK102507775SQ20111033711
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月31日
發(fā)明者袁鳳娟, 許曉麗, 黃樹杰 申請人:廣東東泰乳業(yè)有限公司