本發(fā)明涉及根據(jù)拍攝有球狀體(Spheroid)的圖像評價該球狀體的損壞度的評價方法以及評價裝置。

相關(guān)申請的相互參照

以下所示的日本申請的說明書、附圖以及權(quán)利要求書中的公開內(nèi)容通過引用其所有內(nèi)容記載在本說明書中。

日本特愿2014-063860(2014年3月26日申請)；

日本特愿2014-167074(2014年8月20日申請)。

背景技術(shù)：

作為用于調(diào)查化合物對細胞的影響的一個試驗公知有菌落形成法。該方法利用只要培養(yǎng)環(huán)境適當細胞就反復繁殖形成菌落的特性。即，在添加有作為評價對象的化合物的環(huán)境下培養(yǎng)細胞，根據(jù)在該環(huán)境下形成的菌落數(shù)量的計算結(jié)果，評價化合物對細胞的生死具有怎樣的影響(例如，參照專利文獻1)。在該方法中，通常，將在瓊脂培養(yǎng)基等的表面二維繁殖的細胞菌落作為計算對象。

另一方面，作為更接近生物體的細胞的培養(yǎng)方法具有三維培養(yǎng)，此時，被培養(yǎng)出的細胞形成球狀的塊，因此稱為球狀體(細胞聚集塊)。球狀體不僅是由一個細胞繁殖而成的，而且是多個細胞相互靠近聚集而成的。因此，在對球狀體的觀察過程中，需要判斷多個細胞的球狀體形成能力或球狀體維持能力。

現(xiàn)有技術(shù)文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特表2005-502354號公報

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明所要解決的問題

由于球狀體具有立體結(jié)構(gòu)，所以僅從一個方向進行觀察很難正確判斷其狀態(tài)。因此，作為定量地評價球狀體狀態(tài)的方法，向培養(yǎng)基中添加試劑，測定細胞因生物化學反應(yīng)而產(chǎn)生的吸光或發(fā)光狀態(tài)。但是，這樣測定的測定結(jié)果的偏差大，另外，試劑等的成本高。而且，在測定時，存在因球狀體被破壞而不能夠繼續(xù)試驗的問題。

因此，希望確立一種以非侵入的方式觀察球狀體的狀態(tài)且簡單可靠地評價球狀體的狀態(tài)的技術(shù)。例如考慮拍攝球狀體的光學圖像并根據(jù)該圖像判斷球狀體狀態(tài)的方式。但是，至今沒有確立一種分析圖像來自動評價球狀體狀態(tài)的技術(shù)，當前的現(xiàn)狀為憑借熟練者主觀進行判斷。

解決問題的技術(shù)方案

本發(fā)明是鑒于上述問題而提出的，其目的在于提供能夠根據(jù)拍攝有球狀體的圖像客觀且穩(wěn)定地評價該球狀體的損壞度的技術(shù)。

本發(fā)明一種方式為根據(jù)拍攝有球狀體的圖像評價該球狀體的損壞度的球狀體評價方法，包括：確定包括所述球狀體及所述球狀體的周圍區(qū)域在內(nèi)的所述圖像中的所述球狀體所占的球狀體區(qū)域的工序；根據(jù)所述球狀體區(qū)域的圖像密度求出所述球狀體的光密度的平均值以及該光密度在所述球狀體內(nèi)的偏差的大小的工序；根據(jù)所述球狀體區(qū)域的輪廓求出所述球狀體的圓度的工序；根據(jù)所述球狀體及所述球狀體的周圍區(qū)域的圖像密度求出所述球狀體的清晰度的工序；以及將所述光密度的平均值、所述光密度的偏差的大小、所述球狀體的圓度以及所述球狀體的清晰度代入規(guī)定的運算公式來求出所述球狀體的損壞度的工序。

另外，本發(fā)明的其它方式為球狀體評價裝置，根據(jù)拍攝有球狀體的圖像判定該球狀體的損壞度，具有：圖像取得單元，其取得包含所述球狀體及所述球狀體的周圍區(qū)域在內(nèi)的圖像；圖像處理單元，其確定所述圖像中的所述球狀體所占的球狀體區(qū)域，根據(jù)所述球狀體區(qū)域的圖像密度求出所述球狀體的光密度的平均值以及該光密度在所述球狀體內(nèi)的偏差的大小，且根據(jù)所述球狀體區(qū)域的輪廓求出所述球狀體的圓度，根據(jù)所述球狀體及所述球狀體的周圍區(qū)域的圖像密度求出所述球狀體的清晰度；以及損壞度計算單元，其基于所述光密度的平均值、所述光密度的偏差的大小、所述球狀體的圓度以及所述球狀體的清晰度，求出所述球狀體的損壞度。

活性高的球狀體具有在培養(yǎng)基內(nèi)多個細胞結(jié)合而接近球形的形狀。相對于此，在衰變的細胞中，喪失球狀體形成能力，細胞間的結(jié)合變?nèi)?，球狀體損壞。即，不能夠維持球狀體的形狀。因此，若能夠定量地表示其損壞的程度則方便。以往，例如通過顯微鏡等直接觀察球狀體，或者，熟練者基于從某個方向拍攝有球狀體的圖像，主觀判斷因添加化合物而球狀體的狀態(tài)變化即損壞度。

另一方面，這些發(fā)明根據(jù)拍攝有球狀體的圖像將該球狀體的損壞度自動地定量化，由此能夠客觀且穩(wěn)定地評價球狀體的損壞度。具體地說，針對根據(jù)圖像確定的球狀體區(qū)域，求出其光密度的平均值、偏差的大小、圓度以及清晰度，基于這些信息求出球狀體的損壞度。

在由活性高的細胞形成的球狀體中，其輪廓接近圓形且清晰。相對于此，在損壞持續(xù)發(fā)展的球狀體中，形狀變形，輪廓也變得不清晰。另外，相對于活細胞具有比較淡且均勻的顏色，在死亡的細胞中顏色變深。因此，在包含死亡的細胞的球狀體中，光密度整體變?yōu)楦呙芏龋淦钜沧兇蟆?/p>

表示球狀體狀態(tài)的這些指標能夠根據(jù)圖像進行定量化地求出，通過基于這些值的運算，求出球狀體的損壞度，在本發(fā)明中，能夠?qū)η驙铙w的狀態(tài)進行客觀且穩(wěn)定地評價。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明，基于能夠根據(jù)球狀體的圖像機械性地導出的信息評價球狀體的損壞度。因此，能夠不依賴于利用者的主觀判斷，而客觀且穩(wěn)定地進行評價。

一邊參照附圖一邊閱讀如下詳細說明，能夠更加完全地明確本發(fā)明的所述以及其它的目的和新的特征。但是，附圖僅用于說明，不限定本發(fā)明的范圍。

附圖說明

圖1是表示本發(fā)明的球狀體評價裝置的一個實施方式的概略結(jié)構(gòu)的圖。

圖2A是示意性表示球狀體的外觀的第一圖。

圖2B是示意性表示球狀體的外觀的第二圖。

圖2C是示意性表示球狀體的外觀的第三圖。

圖3是表示該實施方式的球狀體的評價處理的流程圖。

圖4是表示損壞度的計算公式的概念的圖。

圖5是表示確定球狀體損壞度的計算公式的處理的流程圖。

圖6A是表示損壞度的正態(tài)化的原理的第一圖。

圖6B是表示損壞度的正態(tài)化的原理的第二圖。

具體實施方式

圖1是表示本發(fā)明的球狀體評價裝置(以下，簡稱為“評價裝置”)的一個實施方式的概略結(jié)構(gòu)的圖。該評價裝置1是如下裝置，即，拍攝在液體中培養(yǎng)的球狀體(細胞聚集塊)，評價其損壞度，該液體注入孔板(well plate)WP的上表面上所形成的稱為孔W的凹部中。以下，為了統(tǒng)一表示各圖中的方向，如圖1那樣設(shè)定XYZ正交坐標軸。在此，XY平面表示水平面，Z軸表示鉛垂軸。更詳細地說，+Z方向表示鉛垂朝上的方向。

孔板WP是在藥物研究和生物科學領(lǐng)域中通常使用的設(shè)備，在平板狀的板的上表面設(shè)置有多個截面為大致圓形筒狀且底面透明的平坦的孔W。一個孔板WP中的孔W的數(shù)量是任意的，但是例如能夠使用96個(12×8的矩陣排列)孔的孔板。具有代表性地，各孔W的直徑以及深度為幾mm左右。此外，以該評價裝置1為對象的孔板的尺寸和孔的數(shù)量不限于此，可以為任意值，例如能夠使用384個孔的孔板。

在孔板WP的各孔W中注入規(guī)定量的作為培養(yǎng)基的液體。在該液體中以規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)出的球狀體成為該拍攝裝置1的拍攝對象。培養(yǎng)基可以為添加有適當?shù)脑噭┒纬傻呐囵B(yǎng)基，或者可以為以液態(tài)投入孔W中后凝膠化而形成的培養(yǎng)基。常用的通常液量為50至200微升左右。如后所述，在該評價裝置1中，例如，能夠?qū)⒃诳譝的內(nèi)底面培養(yǎng)出的球狀體作為拍攝對象。

評價裝置1具有對孔板WP進行保持的保持架11、配置在保持架11的上方的照明部12、配置在保持架11的下方的拍攝部13以及具有對這些各部分的動作進行控制的CPU141的控制部14。保持架11與在各孔W中承載有液體和樣品的孔板WP的下表面周緣部當接，將孔板WP保持為大致水平姿態(tài)。

照明部12朝向被保持架11保持的孔板WP出射適宜的漫射光(例如白色光)。更具體地說，例如能夠?qū)⒆鳛楣庠吹陌咨獿ED(Light Emitting Diode)光源與漫反射板的組合用作照明部12。通過照明部12，從上方對設(shè)置于孔板WP上的孔W內(nèi)的球狀體進行照明。

在被保持架11保持的孔板WP的下方設(shè)置有拍攝部13。拍攝部13在孔板WP的正下方位置配置有省略了圖示的拍攝光學系統(tǒng)，拍攝光學系統(tǒng)的光軸朝向鉛垂方向(Z方向)。

通過拍攝部13拍攝孔W內(nèi)的球狀體。具體地說，從照明部12出射且從孔W的上方入射至液體的光對拍攝對象物進行照明，從孔W底面向下方透過的光經(jīng)由拍攝光學系統(tǒng)入射至未圖示的拍攝元件的受光面。拍攝對象物的通過拍攝光學系統(tǒng)在拍攝元件的受光面上成像的像，由拍攝元件拍攝。作為拍攝元件能夠使用例如CCD(Charge Coupled Device：電偶和器件)傳感器或CMOS(Complementary Metal Oxide Semiconductor：互補金屬氧化物半導體)傳感器，并且可以是二維圖像傳感器或一維圖像傳感器。

拍攝部13能夠借助設(shè)置在控制部14上的機械式控制部146在XYZ方向移動。具體地說，機械式控制部146基于來自CPU141的控制指令，使拍攝部13在X方向以及Y方向上移動，由此使拍攝部13相對于孔W在水平方向上移動。另外，通過在Z方向上移動，來進行調(diào)焦。在拍攝一個孔W內(nèi)的拍攝對象物時，機械式控制部146以使拍攝光學系統(tǒng)的光軸與該孔W的中心一致的方式在水平方向上定位拍攝部13。在拍攝部13的拍攝元件為一維圖像傳感器的情況下，通過使拍攝部13在與圖像傳感器的長度方向垂直的方向上掃描，能夠拍攝二維圖像。在這樣的拍攝方法中，能夠以非接觸、非破壞且非侵入的方式對作為拍攝對象的球狀體進行拍攝，能夠抑制拍攝對球狀體的損傷。

另外，在圖中如虛線箭頭所示，機械式控制部146在使拍攝部13在XY方向上移動時，使照明部12與拍攝部13一起在XY方向上移動。即，照明部12被配置為其光中心與拍攝光學系統(tǒng)的光軸大致一致，在拍攝部13在XY方向上移動時，照明部12與其聯(lián)動在XY方向上移動。由此，不論拍攝哪個孔W，該孔W的中心以及照明部12的光中心都始終位于拍攝光學系統(tǒng)的光軸上。結(jié)果，能夠使針對各孔W的照明條件恒定，良好地維持拍攝條件。

從拍攝部13的拍攝元件輸出的圖像信號被發(fā)送至控制部14。即，圖像信號輸入設(shè)置在控制部14中的AD轉(zhuǎn)換器(A/D)143，而轉(zhuǎn)換為數(shù)字圖像數(shù)據(jù)。CPU141基于所接收的圖像數(shù)據(jù)適當?shù)剡M行圖像處理?？刂撇?4還具有用于存儲圖像數(shù)據(jù)的圖像存儲器144和用于存儲CPU141應(yīng)該執(zhí)行的程序或由CPU141生成的數(shù)據(jù)的存儲器145，但是這些存儲器可以形成一體。CPU141通過執(zhí)行存儲在存儲器145中的控制程序，進行后述的各種運算處理。

另外，在控制部14中設(shè)置有接口(IF)部142。接口部142接受來自用戶的操作輸入，向用戶提示處理結(jié)果等信息，還與經(jīng)由通信電路連接的外部裝置之間進行數(shù)據(jù)交換。此外，控制部14可以是具有上述硬件的專用裝置，也可以是在個人電腦或工作站等通用處理裝置中安裝用于實現(xiàn)后述的處理功能的控制程序后的裝置。在使用通用處理裝置作為控制部14時，只要在評價裝置1中具有能夠使拍攝部13等各部分動作的最小限度的控制功能即可。

上述那樣構(gòu)成的評價裝置1用于評價在孔W內(nèi)培養(yǎng)的球狀體的狀態(tài)，更具體地說評價球狀體的生存力(生存能力)。例如在藥物研究篩查領(lǐng)域中，將作為候選藥劑的化合物投入癌細胞等靶細胞中，觀察其變化。尤其，近年來需要利用接近生物體內(nèi)的細胞狀態(tài)的球狀體(細胞聚集塊)而進行的篩查(screening)。本實施方式的評價裝置1能夠優(yōu)選用于這樣的用途。

化合物對細胞顯示何種藥效，能夠由抑制細胞所需的化合物的深度即抑制深度(Inhibitory Concentration：IC)定量表示。通常，能夠通過對投入有化合物的細胞中的50％的細胞進行抑制的深度即半數(shù)抑制深度(IC50)表示該化合物的藥效。為了達到這樣的目的，需要求出投入化合物后的細胞的成活率的技術(shù)。

在被二維培養(yǎng)的細胞中，成活的細胞進行繁殖使細胞菌落成長，另一方面，死亡的細胞不形成菌落。因此，若使化合物進行作用的細胞形成菌落則表示該細胞成活。以往進行的篩查方法即“菌落形成法”為利用該原理，通過計算菌落的形成數(shù)量，來估計細胞成活率的技術(shù)。

相對于此，在多個細胞聚集而形成立體結(jié)構(gòu)的球狀體中，即使細胞因藥效而死亡，球狀體的數(shù)量也不一定減少。此時，因細胞的球狀體形成能力減弱而引起球狀體損壞。因此，為了求出細胞成活率，需要定量地評價球狀體損壞的程度。

圖2A至圖2C是示意性表示球狀體的外觀的圖。圖2A所示的球狀體Sp1是由生存力高的細胞構(gòu)成的例子。如圖所示，顏色比較淺的細胞C1形成接近球形的形狀。因此，在拍攝有球狀體Sp1的二維圖像中，球狀體Sp1的輪廓為大致圓形。這樣的球狀體Sp1的損壞度低。

另一方面，在構(gòu)成球狀體的一部分細胞死亡時，如圖2B所示的球狀體Sp2那樣，衰弱或死亡的細胞C2的顏色變深。另外，細胞間的結(jié)合力變?nèi)?，球狀體Sp2的輪廓變?yōu)椴欢ㄐ巍＿@樣的球狀體Sp2比球狀體Sp1的損壞度高。進而，若繼續(xù)損壞，則如圖2C所示的球狀體Sp3那樣，細胞逐漸從球狀體表面脫離，脫離后的細胞C3逐漸堆積在球狀體Sp3的周圍。因此，球狀體Sp3的輪廓自身變得不清晰。這樣狀態(tài)的球狀體Sp3的損壞度比球狀體Sp2高。

這樣，通過觀察球狀體的顏色以及形狀等外觀變化，能夠在某種程度上推定球狀體的損壞度。但是，損壞的表現(xiàn)方式因細胞種類和投入的物質(zhì)的種類等的樣品制作條件而不同，另外，即使在同一樣品制作條件下，也會產(chǎn)生偏差。因此，為了可靠地評價損壞度，需要綜合判斷這些外觀變化。這樣的判斷基準至今沒有確立，當前停留在通過熟練的判斷者以目視觀察來主觀判定損壞度的方式。因此，對判斷者的負荷大，另外，不能避免判定結(jié)果的偏差。

本評價裝置1的目的在于，基于根據(jù)球狀體的圖像定量地求出的球狀體的特征量來求出球狀體的損壞度，由此排除因判斷者的主觀因素而產(chǎn)生的偏差，定量且穩(wěn)定地評價球狀體的狀態(tài)。以下，說明利用本評價裝置1的球狀體的評價處理。

圖3是表示本實施方式的球狀體的評價處理的流程圖。在本處理中，拍攝在孔板WP的孔W內(nèi)培養(yǎng)的球狀體，基于根據(jù)其圖像求出的特征量，定量地求出球狀體的損壞度。設(shè)置在控制部14中的CPU141基于預先設(shè)定的控制程序使裝置的各部分進行動作，由此執(zhí)行本處理。

在本處理中，首先，在孔板WP的各孔中播種作為評價對象的細胞(步驟S101)。具體地說，向孔板WP的各孔W中注入適當?shù)呐囵B(yǎng)基，在培養(yǎng)基中播種細胞?？装錡P例如在未圖示的培養(yǎng)單元(incubator unit)內(nèi)被保持為規(guī)定的培養(yǎng)條件，在各孔W內(nèi)培養(yǎng)球狀體(步驟S102)。在將篩查作為候選藥劑的化合物作為目的情況下，在規(guī)定的時刻，將化合物添加至各孔W中。這樣作成包含成為評價對象的球狀體的樣品。

承載所作成的樣品的孔板WP在需要的時刻被載置在評價裝置1的保持架11上(步驟S103)。然后，通過拍攝部13拍攝被各孔W承載的球狀體(步驟S104)。在本實施方式中，從孔W的上方入射照明光，拍攝部13接受從孔W底面透過的光來進行拍攝。但是，拍攝方法不限于此，為任意方法。

這樣，拍攝孔W內(nèi)的球狀體。接著，從所拍攝的圖像提取與球狀體對應(yīng)的區(qū)域(步驟S105)。能夠基于圖像所包含的球狀體與其周邊的背景區(qū)域之間的圖像密度差確定球狀體區(qū)域。具體地說，求出整個圖像的平均圖像密度或者能夠推定為整個圖像中的背景部分的區(qū)域的平均圖像密度。將圖像內(nèi)的各像素中的圖像密度與平均圖像密度之間的差值為規(guī)定閾值以上的區(qū)域視為球狀體區(qū)域。相當于球狀體的背景的培養(yǎng)基通常無色或具有比構(gòu)成球狀體的細胞的顏色淺的顏色。因此，通過這樣提取顏色比較深的區(qū)域，能夠從背景部分分離確定球狀體區(qū)域。

此外，因為需要提取球狀體的輪廓部分，所以優(yōu)選球狀體的圖像完全處于拍攝有球狀體的圖像的視場內(nèi)。即，優(yōu)選拍攝圖像包括整個球狀體和包圍其周圍的背景區(qū)域。

在這樣確定的圖像內(nèi)的球狀體區(qū)域中，求出該區(qū)域的光密度和其偏差(具體地說是光密度的標準偏差)(步驟S106)。如上所述，衰弱的細胞變得比活細胞的顏色更深，因此，在球狀體區(qū)域內(nèi)存在光密度高的區(qū)域表示構(gòu)成球狀體的細胞衰弱。這樣的密度變化有時顯現(xiàn)在整個球狀體區(qū)域，有時顯現(xiàn)在局部。因此，作為表示球狀體區(qū)域的密度的特征量求出整個該區(qū)域的光密度的平均值和對該球狀體區(qū)域內(nèi)的偏差進行標示的標準偏差。

整個球狀體的光密度(Optical Density)的平均值OD例如根據(jù)球狀體內(nèi)部的各像素的亮度平均值I1和球狀體周圍的背景區(qū)域內(nèi)的各像素的亮度平均值I2按照下式求出。

OD＝log₁₀(I2/I1)

另外，對于光密度的標準偏差SD(Standard Deviation)，例如，能夠求出球狀體區(qū)域中的周緣部以外的區(qū)域(例如面積為球狀體區(qū)域的面積的50％的球狀體中央?yún)^(qū)域)內(nèi)的各像素的亮度值分布中的標準偏差的值。在球狀體的周緣部區(qū)域，在拍攝原理上，密度偏差不可避免地大，因此優(yōu)選在除去這樣區(qū)域的中央?yún)^(qū)域求出標準偏差。

另外，作為表示圖像中的球狀體的輪廓形狀的特征量，分別計算球狀體區(qū)域的輪廓的圓度以及清晰度(步驟S107、S108)。對于球狀體的圓度Cr，例如在將圖像中的球狀體區(qū)域的面積設(shè)定為S，將其輪廓的周長設(shè)定為L時，通過下式求出。

Cr＝4πS/L²

另外，若球狀體的輪廓清晰，則認為直到球狀體區(qū)域內(nèi)的周緣部為止都具有與中央部相同的密度。另一方面，若周緣部密度降低，則輪廓變得不清晰。因此，例如能夠通過球狀體整體的光密度與其周緣部的光密度之間的比值表示清晰度Sh。具體地說，能夠通過下式表示清晰度Sh。

Sh＝ODp/OD

在此，值ODp是球狀體周緣部的光密度，能夠根據(jù)球狀體的周緣區(qū)域具體地說例如從球狀體的輪廓起的規(guī)定范圍(例如與直徑的10％相當?shù)膶挾?內(nèi)的球狀體內(nèi)部區(qū)域的亮度平均值I3和背景區(qū)域的亮度平均值I2，通過下式表示。

ODp＝log₁₀(I2/I3)

另外，清晰度Sh可以如下那樣利用球狀體的輪廓的邊緣強度(edge intensity)進行定義。認為若球狀體具有清晰的輪廓，則在其圖像中球狀體的內(nèi)部與外部之間的邊界即輪廓的邊緣強度高。因此，能夠通過將輪廓的邊緣強度適當正態(tài)化的值表示清晰度。例如，如下所述，假設(shè)存在具有與輪廓的邊緣強度對應(yīng)的像素值的像素，能夠?qū)⒃撓袼氐南袼刂邓硎镜墓饷芏鹊闹涤米鞅硎厩逦鹊闹怠?/p>

首先，提取球狀體的輪廓。具體地說，通過適當?shù)膱D像處理，確定構(gòu)成圖像的像素中的位于球狀體的輪廓部分的像素(以下，稱為“輪廓像素”)。作為用于提取輪廓的圖像處理存在各種公知技術(shù)，因此在此省略詳細的說明。此外，輪廓像素是位于球狀體的內(nèi)部與外部之間的邊界的像素，且該像素本身屬于球狀體的內(nèi)側(cè)。換而言之，將圖像中的與球狀體的輪廓部分相接觸且處于球狀體內(nèi)部的像素確定為輪廓像素。

接著，針對這樣求出的輪廓像素計算邊緣強度。作為求出邊緣強度的處理能夠應(yīng)用各種邊緣檢測濾波處理。例如優(yōu)選應(yīng)用索貝爾(Sobel)濾波、差值濾波、普魯伊特(Prewitt)濾波、羅伯茨(Roberts)濾波、拉普拉斯濾波等的各種濾波處理。在此，作為邊緣檢測濾波器的例子，說明應(yīng)用索貝爾濾波運算的情況。

對于所確定的各輪廓像素的亮度值進行(3×3)的索貝爾濾波運算。圖像的水平方向(x方向)以及垂直方向(y方向)上的索貝爾濾波運算的系數(shù)矩陣能夠分別由下式表示。

x方向：，y方向：

另外，在將針對每個輪廓像素求出的x方向上的濾波運算結(jié)果由Sx表示，y方向上的運算結(jié)果由Sy表示時，對于該輪廓像素的邊緣強度Se能夠由下式表示。

$Se=\sqrt{{\mathrm{Sx}}^2+{\mathrm{Sy}}^2}$

這樣求出的值Se是相對地表示該輪廓像素相對于其他像素的邊緣強度的數(shù)值。對于計算原理，在值Se中亮度值的比例(scale)被增加4倍。因此，通過將邊緣強度Se的值除以4，能夠得到在與像素的亮度值同一比例的數(shù)值范圍內(nèi)被正態(tài)化的邊緣強度。若將屬于一個球狀體的各個輪廓像素的邊緣強度Se的平均值設(shè)定為Sa，則值(Sa/4)表示一個球狀體的輪廓具有的平均正態(tài)化邊緣強度，這是對該球狀體的輪廓的清晰度進行標示的值。

但是，有時需要排除包圍球狀體輪廓的背景區(qū)域的濃度和照明條件的偏差(陰影：shading)帶來的影響。因此，在考慮假想的圖像時，該假想的圖像為將輪廓像素置換為上述那樣求出的正態(tài)化邊緣強度(Sa/4)作為亮度值的像素的圖像，將該圖像的輪廓像素的光密度定義為該球狀體的清晰度Sh。即，通過下式定義清晰度Sh。

Sh＝log₁₀[Is/(Is-Sa/4)]

在此，值Is為球狀體的背景區(qū)域的亮度平均值，與之前的亮度平均值I2相同。通過以加入背景區(qū)域的亮度后的光密度的維度進行表示，能夠排除球狀體的背景區(qū)域和照明偏差的影響，能夠客觀地表示各球狀體的清晰度Sh。由此，能夠?qū)⑶逦萐h的值表現(xiàn)為在不同的球狀體間能夠比較的數(shù)值。

根據(jù)本發(fā)明人的見解確認出，在這樣定義了球狀體輪廓的清晰度Sh時，對于在圖像中能夠清楚地依靠視覺識別輪廓的球狀體，清晰度Sh為大的值，另一方面，外表輪廓的不清晰程度越大，清晰度Sh越接近0的值。即，通過上述定義，能夠定量地且以與熟練判斷者的判定結(jié)果具有高相關(guān)性的高精度表現(xiàn)球狀體輪廓的清晰度。

如上所述，作為表示所拍攝的圖像中的球狀體區(qū)域的外形特征的特征量，分別求出球狀體區(qū)域的光密度的標準偏差SD、光密度的平均值OD、球狀體輪廓的圓度Cr以及球狀體輪廓的清晰度Sh。根據(jù)這樣求出的各個數(shù)值算出球狀體的損壞度(步驟S109)。后面描述其計算方法。

針對已經(jīng)拍攝以及已經(jīng)算出損壞度的樣品，判斷是否繼續(xù)培養(yǎng)(步驟S110)。若需要培養(yǎng)，則將樣品(具體地說，承載樣品的孔板WP)返回培養(yǎng)單元，在規(guī)定的培養(yǎng)環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)(步驟S102)。若不需要繼續(xù)進行培養(yǎng)，則處理結(jié)束。

在本評價裝置1中，通過拍攝部13檢測對樣品照射的照明光的透過光，來拍攝樣品(球狀體)的光學圖像。在這樣的拍攝方法中，能夠非侵入地拍攝樣品，對樣品造成的損傷小。因此，能夠進一步培養(yǎng)供拍攝的樣品，觀察球狀體的形狀隨時間的變化。因此，能夠每隔規(guī)定時間對球狀體的變化進行拍攝，即能夠進行所謂的定時拍攝，并且能夠基于結(jié)果對球狀體進行評價。

接著，說明根據(jù)上述特征量求出球狀體的損壞度的方法。如上所述，對于如何將球狀體損壞度定量化，還沒有明確的定義，依賴于熟練者的主觀判定。因此，在本實施方式中，將上述那樣求出的各特征量(光密度的標準偏差SD、光密度的平均值OD、圓度Cr以及清晰度Sh)作為獨立變量，定義能夠示出與熟練者的判定結(jié)果高度相關(guān)的計算公式(函數(shù))。另外，能夠利用該計算公式，針對任意的球狀體計算其損壞度。

圖4是表示損壞度的計算公式的概念的圖。利用將上述各特征量(光密度的標準偏差SD、平均值OD、圓度Cr以及清晰度Sh)作為獨立變量的函數(shù)F0，以下式表示球狀體的損壞度H。

H＝F0(SD，OD，Cr，Sh)……(公式1)

其中，在本實施方式中，在將各特征量的值比例縮放至規(guī)定的數(shù)值范圍內(nèi)后用于計算公式。這是為了避免因各特征量的數(shù)值范圍各不相同而引起計算變得復雜，誤差增大。

具體地說，如圖4所示，引入用于比例縮放的函數(shù)F1、F2、F3、F4和將比例縮放后的特征量作為獨立變量的函數(shù)F5，通過下式表示損壞度。

H1＝F5(F1(SD)，F(xiàn)2(OD)，F(xiàn)3(Cr)，F(xiàn)4(Sh))……(公式2)

此外，詳細內(nèi)容后面描述，但在公式2的右邊賦予的值為對球狀體的損壞度進行標示的值，但是在本實施方式中與最終想要求得的損壞度H不同。在此意義上，在此用附圖標記H1表示損壞度。就各特征量的縮放比例而言，能夠以各細胞的活性高且沒有損壞的球狀體，其數(shù)值為1，隨著損壞程度發(fā)展，數(shù)值變大的方式適當定義。

對于與光密度的標準偏差SD對應(yīng)的縮放比例函數(shù)F1，例如能夠如下進行確定。首先，假設(shè)存在沒有損壞的理想球狀體，考慮該假設(shè)球狀體的光密度的標準偏差。由于細胞的光密度不均勻，所以該標準偏差為比0大的有限的值，但是在理想的球狀體中，細胞間的光密度的偏差極其小。因此，其標準偏差也為小的值。另一方面，在實際的球狀體中，考慮到標準偏差的值變得更大。在此意義上，認為光密度的標準偏差SD在上述的假設(shè)球狀體中最小。因此，用附圖標記SDmin表示該假設(shè)球狀體的光密度的標準偏差。

對于應(yīng)用于實際的球狀體的縮放比例函數(shù)F1，只要是如下那樣的計算公式即可，即，球狀體越接近理想狀態(tài)而光密度的偏差越小，值越接近1，偏差越大，值越大。例如，能夠利用參數(shù)i、p通過下式表示。

F1(SD)＝[i×(SD-SDmin)+1]^p……(公式3)

由此，將根據(jù)光密度的偏差的觀點的球狀體的損壞度數(shù)值化。

接著，與光密度的平均值OD對應(yīng)的縮放比例函數(shù)F2，例如，在用附圖標記ODmax表示沒有損壞且光密度最高的球狀體的光密度的情況下，能夠利用參數(shù)j、q通過下式表示。

F2(OD)＝[j×(OD/ODmax-1)+1]^q……(公式4)

但是，對于光密度的平均值OD為ODmax以下的球狀體一律為F2(OD)＝1。

這樣定義的意義如下。對于光密度的平均值OD為ODmax以下即光密度比規(guī)定值低的球狀體，從光密度的觀點出發(fā)，能夠視為細胞的活性高且沒有損壞的細胞。因此，將比例縮放后的數(shù)值設(shè)定為1。光密度比上述規(guī)定值高的球狀體很可能包含死亡的細胞，光密度越高(公式4)，表現(xiàn)的值越大。由此，將根據(jù)光密度(平均值)的觀點而得到的球狀體的損壞度數(shù)值化。

針對與球狀體的圓度Cr對應(yīng)的縮放比例函數(shù)F3，對于圓度為某個閾值m以上的球狀體，返回值1，另一方面，對于圓度比閾值m小的球狀體，能夠利用參數(shù)k、r定義以下式表示的函數(shù)。

F3(Cr)＝[k×(m-Cr)+1)^r……(公式5)

對于與球狀體的清晰度Sh對應(yīng)的縮放比例函數(shù)F4也相同，對于清晰度為某個閾值n以上的球狀體，返回值1，另一方面，對于清晰度小于閾值n的球狀體，能夠利用參數(shù)l、s定義以下式表示的函數(shù)。

F4(Sh)＝[l×(n-Sh)+1)^s……(公式6)

作為根據(jù)如上述那樣被比例縮放的特征量求出損壞度的函數(shù)F5，例如，考慮使比例縮放后的各特征量相乘，或者適當?shù)丶訖?quán)然后相加。即，能夠利用如下的任意公式。

F5＝[F1(SD)×F2(OD)×F3(Cr)×F4(Sh)]^t……(公式7)

F5＝[a×F1(SD)+b×F2(OD)+c×F3(Cr)+d×F4(Sh)]^t……(公式8)

此外，指數(shù)t是為了調(diào)整數(shù)值的上升斜度而引入的參數(shù)。在此，雖然使用公式8，但是可以按照細胞種類和培養(yǎng)基的狀態(tài)靈活使用公式7以及公式8。

在用函數(shù)F0表示損壞度H時，需要決定上述的參數(shù)a、b、c、d、i、j、k、l、m、n、p、q、r、s、t。至今尚未確定理論上和唯一決定這些參數(shù)的方法。因此，在本實施方式中，以使通過上述原理根據(jù)球狀體的圖像求出的損壞度H和由熟練者判定的該球狀體的損壞度的判定結(jié)果之間的相關(guān)性盡量高的方式，決定各參數(shù)。具體地說，如下進行決定。

圖5是表示確定球狀體損壞度的計算公式的處理的流程圖。首先，收集損壞度各不相同的多個球狀體圖像(步驟S201)。為了提高計算公式的精度，優(yōu)選收集盡量多的圖像。為了達到該目的，例如，向具有多個孔W的孔板WP的各孔W中注入同種培養(yǎng)基，播種同種細胞，預先培養(yǎng)球狀體，利用拍攝有所培養(yǎng)的球狀體的圖像?？梢栽谝粋€孔W中各培養(yǎng)一個球狀體，對各個球狀體進行拍攝，或者也可以在一個孔W中培養(yǎng)多個球狀體，分別單獨對它們進行拍攝。另外，可以收集過去對同一細胞種類、同一培養(yǎng)基拍攝的球狀體的圖像。

另外，針對所收集的圖像的球狀體，通過熟練者的判定賦予損壞度(步驟S202)。對于損壞度，例如能夠形成0、1、2、3這樣的4個等級，對于判斷為沒有發(fā)生損壞的球狀體損壞度賦予0，另一方面，損壞的程度越發(fā)大，賦予越大的數(shù)值。此外，損壞度不限于分為4個等級可以為任意值。

根據(jù)所收集的圖像，求出各球狀體的特征量，即光密度的標準偏差SD、光密度的平均值OD、圓度Cr和清晰度Sh(步驟S203)。并且，以使將所算出的各特征量SD、OD、Cr、Sh代入公式8而求出的函數(shù)F5的值即損壞度H與在步驟S202中被賦予的值盡量一致的方式，求出上式的各參數(shù)。例如，通過進行如下的回歸分析(步驟S204)能夠決定上式中的各參數(shù)，在該回歸分析(步驟S204)中，將針對多個圖像中的各個圖像分別求出的特征量SD、OD、Cr、Sh作為因變量，將所賦予的損壞度作為自變量。對于回歸分析公知各種方法，由于在本實施方式中也能夠使用這些公知技術(shù)，所以省略說明。另外，可以基于各種機械學習技術(shù)確定計算公式。

這樣，決定表示損壞度H的計算公式的參數(shù)a、b、c，d、i、j、k、l、m、n、p、q、r、s、t。這樣，對于沒有判定損壞度的球狀體，在原理上能夠基于該球狀體的特征量和計算公式算出損壞度。但是，在本實施方式中還如下調(diào)整計算公式(步驟S205)。

為了使通過計算求出的損壞度H的數(shù)值與熟練者的判定結(jié)果一致，需要以0至3的數(shù)值范圍表示損壞度H。但是，作為評價對象物的球狀體具有比較大的個體偏差，在步驟S202中，在判斷者對球狀體賦予損壞度時，判定結(jié)果也可能產(chǎn)生偏差。因此，在包含這些偏差的狀態(tài)下求出的計算公式的結(jié)果的數(shù)值范圍有時未必在0至3以內(nèi)。從而需要用于對其修正的正態(tài)化步驟。

圖6A以及圖6B是表示損壞度的正態(tài)化的原理的圖。將判斷者對多個球狀體圖像賦予的球狀體的損壞度設(shè)定為H0，將根據(jù)回歸分析所確定的計算公式(函數(shù)F5)求出的該球狀體的損壞度設(shè)定為H1，在H0-H1的空間中進行制圖。這樣，如圖6A所示，使用同一計算公式針對外形特征不同的球狀體求出的損壞度H1具有某種程度的偏差。在使該損壞度H1正態(tài)化來求出最終的損壞度H時，在原理上，將通過計算而得到的損壞度的最大值H1max與損壞度H＝3對應(yīng)，將最小值H1min與損壞度H＝0對應(yīng)，來進行正態(tài)化即可。

但是，在這樣針對各球狀體計算出的H1的值中包含因圖像噪音或判斷者的誤判而變?yōu)楫惓５闹?。因此，在本實施方式中，如圖6B所示，將針對多個球狀體算出的損壞度H1中的從大的值起依次進入規(guī)定的范圍(例如排在前面的10％)的值都置換為排在次位的值H2max。對于損壞度H1中的小的值也相同，例如將排在后面的10％的值置換為排在后面的值H2min。即，若用附圖標記H2表示置換后的損壞度，則如下那樣分情況進行表示。

在H1＞H2max時，H2＝H2max

在H1＜H2min時，H2＝H2min

在H2min≤H1≤H2max時，H2＝H1

并且，將置換后的損壞度的最大值H2max與損壞度H＝3對應(yīng)，將最小值H2min與損壞度H＝0對應(yīng)。通過這樣正態(tài)化，能夠在0至3的數(shù)值范圍內(nèi)表示所有球狀體的損壞度H，而且，能夠避免因值突出的數(shù)據(jù)而使計算精度降低的情況。

在針對任意的球狀體計算損壞度H時，針對該球狀體求出特征量SD、OD、Cr、Sh，基于這些值和決定了參數(shù)的函數(shù)F1～F5，計算值H1。另外，在計算值H1超過H2max時以及小于H2min時，分別使值變?yōu)镠2max以及H2min，來求出值H2。

通過將該值H2代入根據(jù)圖6B的關(guān)系得到的下式來最終求出損壞度H。

H＝3×(H2-H2min)/(H2max-H2min)……(公式9)

在此，右邊的常數(shù)3是為了通過0至3的值表示損壞度H的正態(tài)化系數(shù)。在本實施方式中，與判斷者以0至3這樣的4個等級判定損壞度相對應(yīng)，正態(tài)化系數(shù)為3。

在更加通常的情況下，在以過z個等級表示損壞度時，能夠通過下式求出0至(z-1)的值的損壞度H。

H＝(z-1)×(H2-H2min)/(H2max-H2min)……(公式10)

在此，值H2是通過將球狀體的特征量SD、OD、Cr、Sh的值代入所述公式1至公式8而求得的值，公式10的右邊只能是將特征量SD、OD、Cr、Sh作為獨立變量的函數(shù)F0。

根據(jù)上述的理論可知，根據(jù)公式10，球狀體的光密度的偏差越大，損壞度的值越大，另外，球狀體的光密度的平均值越高，損壞度的值越大。另外，球狀體輪廓的圓度越低，損壞度的值越大，球狀體輪廓的清晰度越低，損壞度的值越大。

此外，因細胞種類和培養(yǎng)基的狀態(tài)的不同，球狀體的外觀特征也不同。因此，需要按照各個細胞種類和各個培養(yǎng)基的狀態(tài)確定基于上述的球狀體的特征量的計算公式。這樣按照各個細胞種類和培養(yǎng)基的狀態(tài)確定的計算公式能夠用于在同一條件(細胞種類以及培養(yǎng)基)下培養(yǎng)的球狀體。因此，能夠不受判斷者的主觀影響而客觀且穩(wěn)定地根據(jù)球狀體的特征量求出其損壞度。此外，在定義不同的計算公式時，能夠考慮在形式上相同的計算公式中改變參數(shù)的方法，和使計算公式的形式本身不同的方法。

如以上說明，在上述實施方式的球狀體評價裝置1中，保持架11作為本發(fā)明的“保持部”發(fā)揮功能，另外，拍攝部13作為本發(fā)明的“拍攝部”發(fā)揮功能，這些一體作為本發(fā)明的“圖像取得單元”發(fā)揮功能。另外，CPU141具有本發(fā)明的“圖像處理單元”以及“損壞度計算單元”的功能。

如上所述，針對在本發(fā)明中用于求出損壞度的運算公式，能夠通過執(zhí)行如下的回歸分析求出參數(shù)，在該回歸分析中，例如，收集多個賦予了對損壞度進行標示的數(shù)值后的球狀體的圖像，將針對所收集的圖像分別求出的球狀體的光密度的平均值、光密度的偏差的大小、球狀體的圓度以及球狀體的清晰度作為因變量，將該圖像的損壞度的數(shù)值作為自變量。

對于球狀體的損壞度需要從各種觀點進行綜合判斷，當前難于僅根據(jù)客觀數(shù)值唯一地確定損壞度本身。另一方面，熟練者能夠通過對球狀體圖像的目視觀察，以比較高的再現(xiàn)性判定損壞度。因此，只要導出如下的運算公式即可，在該運算公式中，針對多個球狀體圖像，使各圖像與例如由熟練者預先判定的損壞度對應(yīng)關(guān)聯(lián)，以高幾率使通過如下的運算求出的損壞度的值和與該圖像對應(yīng)關(guān)聯(lián)的損壞度的值一致，在上述運算中基于根據(jù)各圖像求出的球狀體的光密度的平均值、光密度的偏差的大小、球狀體的圓度以及球狀體的清晰度的數(shù)值來進行。

作為確定這樣的運算公式的方法公知有回歸分析法。具體地說，通過進行將球狀體的光密度的平均值、光密度的偏差、球狀體的圓度、球狀體的清晰度作為因變量且將與圖像對應(yīng)關(guān)聯(lián)的損壞度的值作為自變量的回歸分析，能夠確定將因變量和自變量對應(yīng)關(guān)聯(lián)的運算公式。以往就研究回歸分析的方法，通過使用該方法決定運算公式，能夠不依賴于主觀判斷地得到與熟練者的判斷相關(guān)性高的評價結(jié)果。

基于上述的球狀體的光學特征，優(yōu)選在運算公式中，球狀體的光密度的平均值越高，損壞度越高，并且優(yōu)選球狀體的光密度的偏差越大，損壞度越高，并且優(yōu)選球狀體的圓度越低，損壞度越高，而且還優(yōu)選球狀體的清晰度越低，損壞度越高。這些是用于將與球狀體的損壞相關(guān)的科學見解反應(yīng)至運算結(jié)果的條件。此外，對于在將損壞度的高低以數(shù)值表現(xiàn)時賦予怎樣的值，沒有特別限定。例如，可以對越是不斷損壞的球狀體，賦予損壞度越大的數(shù)值，也可以相反。另外，可以通過離散的數(shù)值等階梯性地表現(xiàn)損壞度。

另外，對于球狀體的清晰度，例如能夠定義為球狀體的周緣部的光密度與球狀體整體的光密度的比值。在輪廓清晰的球狀體中，直到球狀體的周緣部都維持與其中央部同程度的光密度，但是在輪廓不清晰的即球狀體與周圍區(qū)域之間的邊界不清晰的球狀體中，周緣部的光密度變得比中央部低。因此，球狀體的周緣部的光密度與球狀體整體的光密度的比值越接近1輪廓越清晰，值越小越不清晰。

另外，對于球狀體的清晰度，例如可以定義為，球狀體區(qū)域的輪廓中的具有與邊緣強度對應(yīng)的像素值的像素的光密度。更具體地說，將針對與球狀體區(qū)域的輪廓對應(yīng)的各像素基于像素的亮度值通過邊緣檢測濾波運算分別求出的邊緣強度的平均值設(shè)定為Sa，將球狀體的周圍區(qū)域的像素的亮度平均值設(shè)定為Is時，可以將清晰度定義為下式的左邊Sh。

Sh＝log₁₀[Is/(Is-Sa/4)]

如上所述，通過導入基于這樣的定義而得出的清晰度，能夠更加高精度地評價球狀體的損壞度。

另外，例如，運算公式可以根據(jù)形成球狀體的細胞種類的不同而不同。由于根據(jù)細胞種類的不同，其顏色、球狀體的形狀以及伴隨損壞而產(chǎn)生的變化的特征等不同，所以難于針對各個細胞種類定義一個運算公式。如果能夠定義對應(yīng)于細胞種類的不同而不同的運算公式，則能夠應(yīng)對多個細胞種類。另外，可以針對每個細胞的培養(yǎng)方法而定義不同的運算公式。

另外，在本發(fā)明的球狀體評價裝置中，例如，圖像取得單元可以具有：保持部，其保持對包含球狀體的培養(yǎng)基進行承載的容器；以及拍攝部，其對被保持部保持的容器內(nèi)的球狀體進行拍攝來取得圖像。根據(jù)這樣的結(jié)構(gòu)，能夠通過一個裝置拍攝球狀體和評價其損壞度。

此時，優(yōu)選拍攝部以非侵入的方式拍攝球狀體。根據(jù)這樣的結(jié)構(gòu)，能夠?qū)ε臄z后的樣品(球狀體)繼續(xù)進行培養(yǎng)，例如，能夠?qū)ν磺驙铙w隨時間如何變化進行評價。

另外，例如，圖像取得單元可以是取得由外部的拍攝裝置拍攝的或者存儲在外部的存儲裝置中的球狀體的圖像數(shù)據(jù)的結(jié)構(gòu)。即，本發(fā)明的球狀體評價裝置不限于自身具有拍攝功能，可以僅基于從外部給予的圖像數(shù)據(jù)進行評價。根據(jù)這樣的結(jié)構(gòu)，例如，通過與現(xiàn)有的拍攝裝置組合，能夠賦予上述的評價功能。

此外，本發(fā)明不限于上述的實施方式，只要不脫離其宗旨，除了上述的技術(shù)方案還能夠進行各種變更。例如，上述的計算公式示出能夠應(yīng)用于本發(fā)明的技術(shù)思想的計算方法的一個例子，所應(yīng)用的計算公式不限于上述公式，可以為任意公式。

另外，在上述實施方式中，損壞度的高低由數(shù)值的大小表示，以球狀體越損壞，損壞度的數(shù)值越大的方式，定義損壞度。但是，可以相反，通過隨著損壞越嚴重數(shù)值越來越小的指標，表示損壞度。

另外，在上述實施方式中，損壞度不限于離散的數(shù)值，能夠以對應(yīng)于球狀體的狀態(tài)取連續(xù)值的方式定義損壞度。這樣，例如，即使是離散的損壞度相同的球狀體，也能夠定量地區(qū)分損壞度更高的球狀體和損壞度更低的球狀體。但是，可以與判斷者的判定相同，以通過計算而求出的損壞度取離散的多級的數(shù)值的方式，定義計算公式。為了能夠?qū)崿F(xiàn)這樣的計算公式，例如，可以以將通過計算求出的損壞度的數(shù)值四舍五入，或僅將整數(shù)部分作為結(jié)果的方式，調(diào)整計算公式。

另外，在上述實施方式中，從保持為水平姿態(tài)的孔板WP的上方向孔W入射照明光，通過拍攝部13接受從孔W底面透過的光，來進行拍攝。但是，本發(fā)明的所拍攝的球狀體的圖像的處理上具有特征，圖像的拍攝原理不限于上述內(nèi)容，可以是任意的。但是，優(yōu)選明視場拍攝。

另外，例如，在上述實施方式中，作為本發(fā)明的“圖像取得單元”使用拍攝部13。但是，本發(fā)明的球狀體評價裝置自身不必具有拍攝功能。即，可以是接受外部的拍攝裝置所拍攝的圖像數(shù)據(jù)或存儲在外部的存儲裝置中的圖像數(shù)據(jù)，而僅進行圖像處理的方式。此時，從外部接受圖像數(shù)據(jù)的接口部142發(fā)揮本發(fā)明的“圖像取得單元”的功能。

此時，作為拍攝裝置能夠利用已經(jīng)商品化的設(shè)備。因此，例如能夠?qū)⑾蛲ㄓ玫膫€人電腦中安裝用于執(zhí)行本發(fā)明的處理的控制程序的設(shè)備與拍攝裝置組合，來構(gòu)成本發(fā)明的球狀體評價裝置。因此，本發(fā)明除了能夠以上述實施方式那樣的完整的裝置的方式實施，還能夠提供向與拍攝裝置組合的個人電腦安裝的控制程序。

另外，在上述實施方式中，其目的在于確定與熟練者的主觀判定結(jié)果一致的損壞度的計算公式。但是，其他評價方法，例如可以求出與ATP試驗、MTT試驗等的評價結(jié)果之間具有高相關(guān)性的計算公式。

以上，按照確定的實施例說明發(fā)明，但是不是解釋為該說明具有限定的意義。參照發(fā)明內(nèi)容不符，與本發(fā)明的其他實施方式相同，公開的實施方式的各種變形例對于精通該技術(shù)的人來說是顯而易見的。因此，附上的權(quán)利要求書，在不脫離發(fā)明的真正范圍的范圍內(nèi)，包含該變形例或?qū)嵤┓绞健?/p>

工業(yè)實用性

本發(fā)明能夠適用于對所培養(yǎng)的球狀體的損壞度進行定量評價。例如，能夠在對以藥物研究篩查為目而作用于球狀體的化合物的藥效進行定量地評價時使用。

附圖標記說明

1 球狀體評價裝置

11 保持架(保持部)

13 拍攝部(拍攝部、圖像取得單元)

141 CPU(圖像處理單元、損壞度計算單元)

142 接口部

Sp1、Sp2、Sp3 球狀體

W 孔

WP 孔板(容器)