一種gp73檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73GP73的檢測(cè)試劑盒及其制備方法和用途。本發(fā)明提供一種定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73GP73的檢測(cè)試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含高爾基體糖蛋白-73GP73抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的高爾基體糖蛋白-73GP73抗體采用熒光微球標(biāo)記。本發(fā)明所提供的檢測(cè)試劑盒首次將高爾基體糖蛋白-73GP73通過熒光微球免疫層析技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，兼具靈敏性和特異性，具有操作快速簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】-種GP73檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種高爾基體糖蛋白-73檢測(cè)試劑盒及其 制備方法和用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 高爾基體糖蛋白-73 (GolgiProtein 73, GP73)又稱II型高爾基體膜蛋白（Golgi phosphoprotein2, GOLPH 2)，其在慢性肝炎、肝硬化等病人血清中濃度升高，而在肝細(xì)胞肝 癌病人血清中升高更加明顯，和正常人或良性肝病病人之間呈顯著差異。有研究表明，血清 GP73用于肝癌的診斷，優(yōu)于血清GP73檢測(cè)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，GP73檢測(cè)肝癌的靈敏度為69%， 特異性為75%。對(duì)于早期肝癌的診斷，GP73的敏感性為62%，而GP73敏感性僅為25%。 6?73水平低于2〇11§/1的肝癌患者中，有57%的人群6?73水平顯著升高。這表明，6?73 的應(yīng)用能夠大大提高對(duì)GP73陰性的肝癌患者的檢出率。
[0003] 目前已知的高爾基體糖蛋白_73(GP73)檢測(cè)方法還存在較多缺陷，如操作較為繁 瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，不適宜臨床上使用。目前，我國(guó)市場(chǎng)上的高爾基體糖蛋白_73(GP73)檢測(cè)試 劑盒準(zhǔn)確度、靈敏度、重復(fù)性仍然較差。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種快速測(cè)定血清或血漿 中高爾基體糖蛋白-73GP73含量的試劑盒，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種快速測(cè)定血清或血漿中高爾基 體糖蛋白-73GP73含量的試劑盒，包括試紙卡，所述試紙卡包括底板、及位于底板表面的從 加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含高爾基 體糖蛋白-73GP73單克隆抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊 上的高爾基體糖蛋白-73GP73單克隆抗體采用熒光微球標(biāo)記。
[0006] 優(yōu)選的，所述金標(biāo)墊上的高爾基體糖蛋白-73GP73單克隆抗體采用180nm熒光微 球標(biāo)記，EX(nm) = 650/Em(nm) = 670,具有信號(hào)受背景干擾小，檢測(cè)靈敏度高，結(jié)果重復(fù)性 好的優(yōu)點(diǎn)。
[0007] 優(yōu)選的，所述底板為PVC底板。
[0008] 優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜上，檢測(cè)線位于離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣 端較遠(yuǎn)一側(cè)。
[0009] 優(yōu)選的，所述檢測(cè)線上包被有高爾基體糖蛋白-73GP73單克隆抗體。所述金標(biāo)墊 上的高爾基體糖蛋白-73GP73單克隆抗體與檢測(cè)線上的高爾基體糖蛋白-73GP73單克隆抗 體可以是相同的抗體，也可以是不同的抗體。
[0010] 優(yōu)選的，質(zhì)控線上包被羊抗鼠抗體。
[0011] 優(yōu)選的，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、TriS-HCl緩沖 液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液 的濃度為20-200mM。
[0012] 優(yōu)選的，本發(fā)明所述的金標(biāo)墊還經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液選 自甘氨酸緩沖液、TriS-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為 5_50mM〇
[0013] 優(yōu)選的，所述緩沖液還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10?50g/L。
[0014] 優(yōu)選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19TWEEN 20、 S-20TWEEN 80、S-13TRIT0N X-45、S-14TRIT0N X-100、S-15TRIT0N X305 中的任意一種或多 種的組合，所述表面活性劑的濃度為10?50g/L。
[0015] 優(yōu)選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發(fā)明所述的金標(biāo)墊在 預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉 和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L， 緩沖液的pH值為7. 2 - 7.6。
[0016] 優(yōu)選的，各組分在緩沖液中的濃度為：
[0017]

【權(quán)利要求】
1. 一種定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底 板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊， 所述金標(biāo)墊上包含高爾基體糖蛋白-73 GP73抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì) 控線，所述金標(biāo)墊上的高爾基體糖蛋白-73 GP73抗體采用熒光微球標(biāo)記。
2. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，其特征在 于，所述硝酸纖維素膜上，檢測(cè)線位于離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣端較遠(yuǎn)一側(cè)。
3. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，其特征在 于，所述檢測(cè)線上包被有高爾基體糖蛋白-73 GP73抗體。
4. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，其特征在 于，質(zhì)控線上包被羊抗鼠抗體。
5. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，其特征在 于，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸 緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為 20-200mM〇
6. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，其特征在 于，所述金標(biāo)墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽 緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為5-50mM。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，其特征在 于，所述緩沖液中還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000和 PEG20000中的任意一種，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10?50g/L。
8. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，其特征在 于，還包括卡殼，所述卡殼包括背卡和上蓋，所述背卡設(shè)有試紙卡卡槽，所述試紙卡嵌于所 述試紙卡卡槽內(nèi)，所述上蓋設(shè)有測(cè)試窗和加樣孔，所述測(cè)試窗的位置與所述檢測(cè)線和質(zhì)控 線的位置相配合，所述加樣孔的位置與所述樣品墊的位置相配合。
9. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)脂高爾基體糖蛋白-73 GP73的檢測(cè)試劑盒，其特征在 于，所述檢測(cè)試劑盒用于定量檢測(cè)血清或血漿中高爾基體糖蛋白-73 GP73的含量。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1?9任一權(quán)利要求所述的定量檢測(cè)脂高爾基體糖蛋白-73 GP73的 檢測(cè)試劑盒的制備方法，具體包括如下步驟： 1) 用熒光微球標(biāo)記的高爾基體糖蛋白-73 GP73抗體溶液噴涂經(jīng)預(yù)處理的金標(biāo)墊，制 得包含高爾基體糖蛋白-73 GP73抗體的金標(biāo)墊； 2) 在硝酸纖維素膜的檢測(cè)線和質(zhì)控線上分別噴涂高爾基體糖蛋白-73 GP73抗體及羊 抗鼠抗體，制得包被后的硝酸纖維素膜； 3) 將樣品墊、步驟1)制備金標(biāo)墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在底 板上，切裁制得檢測(cè)試紙卡；最后將檢測(cè)試紙卡裝入卡殼制得檢測(cè)試劑盒。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104360080SQ201410735827
【公開日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】吉權(quán) 申請(qǐng)人:重慶乾德生物技術(shù)有限公司