一種色譜法測定樣品中揮發(fā)性麻醉藥濃度的方法
【專利摘要】本方法公開了一種自動頂空氣相色譜法測定揮發(fā)性麻醉藥濃度的方法。該方法適用于揮發(fā)性麻醉藥，例如甲氧氟烷、安氟烷、異氟烷、七氟烷和地氟烷在樣品中的濃度測定。樣品可以為含有待測物的溶液，也可以為含有待測物的離體生物學樣品，如血液、尿液、組織液中。該方法簡便、快速、準確，適用于實驗室樣品測定分析，也適用臨床監(jiān)測大量樣品結果測定。
【專利說明】一種色譜法測定樣品中揮發(fā)性麻醉藥濃度的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)學【技術領域】，具體涉及一種用自動頂空氣相色譜法測定樣品中揮發(fā)性麻醉藥濃度的方法。
【背景技術】
[0002]揮發(fā)性麻醉藥與一般靜脈麻醉藥最后目的完全一樣，但在吸入途徑給藥時，首先必須在麻醉環(huán)路系統(tǒng)內達到一定濃度以后，經過肺以濃度分壓差吸收入血中，再經循環(huán)系統(tǒng)分布至周圍組織，到達中樞神經系統(tǒng)發(fā)揮其麻醉作用，所以說測定血液中揮發(fā)性麻醉藥如甲氧氟烷、安氟烷、異氟烷、七氟烷和地氟烷等的血藥濃度是非常關鍵的指標。
[0003]劉進、劉明政等(二次平衡法測定吸入麻醉藥液/氣分配系數(shù).《中華麻醉藥學雜志》，1996，16 (12):604?607.)公開了一種用注射器頂空二次平衡法測定吸入麻醉藥濃度的方法。該方法首先需配制及校正麻醉藥標準氣如異氟烷標準氣，過程包括1、用注射器抽取血液5?7ml ;2、在37°C恒溫水浴條件下振搖水浴I小時使異氟烷在血、氣兩相中達到第一次平衡(共約2.5小時)；3、在37°C恒溫水浴條件下振搖水浴使異氟烷在血、氣兩相中達到第二次平衡(I?1.5小時)；4、通過氣相色譜儀測定兩次平衡的氣相中的異氟烷濃度，記錄兩次平衡前后注射器內氣相和液相的體積；5、計算血中異氟烷濃度。
[0004]該法測量準確，同時可計算出麻醉藥的液/氣分配系數(shù)，但樣品前處理過程耗時較長，兩次平衡時間累計3.5小時，完全測定一個樣品需時4小時，測定效率低，且在實際運用過程中，血制樣品無法在注射器內長久儲存，血液變性后會對測定的結果有影響，故該方法不適合進行大批量樣品的測定處理，所以無法滿足臨床監(jiān)測快速測定和批量處理的需要。
【發(fā)明內容】
[0005]本發(fā)明提供了一種用自動頂空氣相色譜法測定揮發(fā)性麻醉藥濃度的方法。該方法克服了現(xiàn)有技術中標準品制備及樣品處理繁瑣、測定時間長、存儲不便的缺點，提供了一種簡便，快速，高效，準確，且能廣泛處理大批樣品的揮發(fā)性麻醉藥濃度測定的方法及在臨床監(jiān)測中的應用。
[0006]本發(fā)明的目的是提供一種用自動頂空氣相色譜法測定樣品中揮發(fā)性麻醉藥濃度的方法。
[0007]具體地說，本發(fā)明提供了一種測定樣品中揮發(fā)性麻醉藥濃度的方法，其采用自動頂空氣相色譜法對包含揮發(fā)性麻醉藥的樣品進行檢測，這里，所述的樣品為包含揮發(fā)性麻醉藥的溶液，可選自含有揮發(fā)性麻醉藥的有機溶劑和/或無機溶劑的溶液，或者離體的生物學樣品，例如血液、尿液或組織液。
[0008]在本發(fā)明的實施方案中，所述的揮發(fā)性麻醉藥選自甲氧氟烷、安氟烷、異氟烷、七氟烷或地氟烷。
[0009]在本發(fā)明的實施方案中，所述的自動頂空氣相色譜法包括采用自動頂空進樣器進樣。
[0010]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供了一種測定樣品中揮發(fā)性麻醉藥濃度方法，其采用自動頂空氣相色譜法，包括如下步驟:
[0011](I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗
[0012]實驗儀器為Agilent6890N氣相色譜儀；色譜柱為極性毛細管柱，采用升序升溫；進樣口溫度為100?200°C，檢測器為氫火焰離子化檢測器(FID)，檢查溫度200?300°C ；載氣為氮氣、氫氣或氦氣；待測揮發(fā)性麻醉藥的色譜峰與雜質峰分離度大于2.5 ;自動頂空進樣，85°C保溫30min，定量環(huán)與傳輸線溫度90?150°C，進樣量0.5?Iml ；
[0013](2)標準曲線溶液的制備
[0014]取揮發(fā)性麻醉藥適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成儲備液，并用儲備液稀釋成6?10份不同濃度溶液作為標準曲線溶液，分別取0.5?Iml置頂空瓶，封瓶即得；
[0015](3)供試品溶液的制備取待測溶液0.5?Iml置頂空瓶，封瓶即得；
[0016](4)測定分別取標準曲線溶液與供試品溶液，用自動頂空進樣器注入氣相色譜儀測定、計算，即得。
[0017]在本發(fā)明的實施方案中，其中，步驟(I)中色譜柱為極性毛細管柱，優(yōu)選DB-WAX等以聚乙二醇為填充柱的毛細管柱。
[0018]在本發(fā)明的實施方案中，其中，步驟(I)中優(yōu)選進樣口溫度為100?200°C，檢測器為氫火焰離子化檢測器(FID)，檢測器溫度200?300°C ;采用升序升溫；優(yōu)選起始40?60°C維持2?lOmin，以5?10°C /min速度升至150?200°C，維持2?lOmin。
[0019]在本發(fā)明的實施方案中，其中，步驟(I)中優(yōu)選的載氣為氮氣，流速為1.0?3.0ml/min，分流比為 1:1 ?1: 100。
[0020]在本發(fā)明的實施方案中，其中，步驟(2)中溶劑優(yōu)選為水或含有體積比為10?100 %的N，N- 二甲基甲酰胺或二甲基亞砜的水溶液。
[0021]在本發(fā)明的實施方案中，其中，步驟⑷中優(yōu)選的頂空預熱條件為70?90°C保溫20 ?30mino
[0022]本發(fā)明提供的檢測方法，用自動頂空氣相色譜法測定含有揮發(fā)性麻醉藥樣品的標準值和測量值(即標準曲線和樣品曲線)，計算出樣品中揮發(fā)性麻醉藥濃度，及該方法在臨床監(jiān)測和實驗室分析中的應用
[0023]本發(fā)明的有益技術效果:
[0024]本發(fā)明為揮發(fā)性麻醉藥的濃度測定提供了簡便、快速，準確的通用方法。
[0025]1、極大簡化了樣品處理過程，僅需在試驗中抽取0.5?Iml血液或其他液體樣品至頂空瓶中壓蓋密封即可。
[0026]2、標準曲線由配制揮發(fā)性麻醉藥標準氣該成較易稀釋配制的標準液，結果同樣精確。
[0027]3、極大縮短了樣品檢測時間，如用注射器二次平衡做一個樣品最低需耗時3小時，且一天同時測定樣品受水浴箱限制不可能批量進行，而用自動頂空進樣一天可測定30?40個樣品，且完全自動測定無需手動進樣。
[0028]4、使用頂空自動進樣，可以避免生物樣品帶入的雜質對分析造成干擾，減少對色譜柱及進樣口的污染從而確保分析結果的準確無誤。
[0029]5、經穩(wěn)定性考察，揮發(fā)性麻醉藥如異氟烷能在頂空瓶中可保存7天之久，儲存方便，結果見表1。
[0030]表1異氟烷樣品常溫25°C條件下15天留樣穩(wěn)定性考察
[0031]
【權利要求】
1.一種樣品中揮發(fā)性麻醉藥濃度的測定方法，其特征在于:采用自動頂空氣相色譜法對包含揮發(fā)性麻醉藥的離體的生物學樣品進行檢測，所述的樣品為包含揮發(fā)性麻醉藥的溶液，選自含有揮發(fā)性麻醉藥的有機溶劑和/或無機溶劑的溶液，或者離體的生物學樣品；揮發(fā)性麻醉藥選自甲氧氟烷、安氟烷、異氟烷、七氟烷或地氟烷； 包括如下步驟: (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 檢測儀為Agilent6890N氣相色譜儀；色譜柱為DB-WAX聚乙二醇毛細管柱，采用程序升溫；進樣口溫度為100?200°C，載氣為氮氣、氫氣或氦氣；待測揮發(fā)性麻醉藥的色譜峰與雜質峰分離度應大于2.5;自動頂空進樣；流速為1.0?3.0ml/min，分流比為1:1?I: 100;檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度200?300°C ;采用升序升溫；起始40?60°C維持2?lOmin，以5?10°C /min速度升至150?200°C，維持2?1min (2)標準曲線溶液的制備 取揮發(fā)性麻醉藥適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成儲備液，并用儲備液稀釋成6?10份不同濃度溶液作為標準曲線溶液，分別取0.5?Iml置頂空瓶，封瓶即得；溶劑選自水或含有體積比為10?100% N, N-二甲基甲酰胺或者二甲基亞砜的水溶液； (3)供試品溶液的制備 取待測溶液0.5?Iml置頂空瓶，封瓶即得； (4)測定 分別取標準曲線溶液與供試品溶液，用自動頂空進樣器注入氣相色譜儀測定、計算，即得；頂空預熱方式為70?90°C，保溫20?30min。
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于:所述離體的生物學樣品為血液、尿液或組織液。
3.一種血液樣品中七氟烷濃度的測定方法，其特征在于: (1)色譜條件:Agilent6890N氣相色譜儀，DB-WAX毛細管色譜柱，進樣口溫度160°C，載氣為高純氮，柱流量為2ml/min ;程序升溫,起始60°C維持2min,以10°C /min速度升至200°C，維持2min，共運行ISmin ;檢測器為火焰離子化檢測器，檢測器溫度為300°C，自動頂空進樣，85°C保溫30min，定量環(huán)溫度90°C，傳輸線溫度120°C，進樣量Iml ； (2)標準儲備液配制 取七氟烷對照品適量，用N，N- 二甲基甲酰胺溶解并稀釋，制成每Iml含14mg的溶液，作為標準儲備液； (3)樣品處理與測定 用七氟烷標準儲備液倍比稀釋9次，各取100 μ I分別加至已加入Iml水的頂空瓶中壓蓋密封，即為七氟烷標準曲線溶液；以七氟烷峰面積對濃度線性回歸，得出回歸方程；精密量取待測血樣Iml至頂空瓶中壓蓋密封，平行6份，測得的樣品七氟烷峰面積通過回歸方程計算出樣品中七氟烷的濃度。
【文檔編號】G01N30/06GK104198607SQ201410456542
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2010年12月16日 優(yōu)先權日:2010年12月16日
【發(fā)明者】易斌, 羅楠, 劉進, 張文勝, 袁瑛 申請人:宜昌人福藥業(yè)有限責任公司