恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒及使用方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒及使用方法，屬于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。該檢測試劑盒采用直接競爭法，試劑盒包括包被有恩諾沙星抗原的化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板，恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品，恩諾沙星酶標(biāo)抗體，化學(xué)發(fā)光液和洗滌液。該試劑盒的使用方法包括如下步驟：（1）待測樣品的前處理；（2）順序加入恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液或樣品、恩諾沙星酶標(biāo)抗體，競爭反應(yīng)后洗板，最后加入化學(xué)發(fā)光液通過化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)行恩諾沙星的定量檢測；（3）結(jié)果處理與分析。本發(fā)明提供的檢測試劑盒靈敏度高、穩(wěn)定性好，適合大量樣品的篩查，具有重要的實際應(yīng)用推廣意義。
【專利說明】恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒及使用方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒及使用方法。

【背景技術(shù)】
[0002]諾沙星(Enrofloxacin,簡稱EF)是第一個畜禽專用的氟喹諾酮類藥物，1987年由德國拜耳公司首先研制成功。恩諾沙星化學(xué)名為1-環(huán)丙基-6-氟-4-氧代-1，4-2氫-7-(4-乙基-哌嗪基)-3-喹啉羧基，易溶于堿性溶液，在水、甲醇中微溶，乙醇中不溶。其結(jié)構(gòu)式見式1.2。

【權(quán)利要求】
1.一種恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于:所述檢測試劑盒包括包被有恩諾沙星抗原的化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板、恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品、恩諾沙星酶標(biāo)抗體、化學(xué)發(fā)光液和洗滌液；所述恩諾沙星抗原為培氟沙星與卵清蛋白的偶聯(lián)物，所述的恩諾沙星抗原的包被濃度為0.5 mg/L O
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板為96孔可拆不透明白色發(fā)光板。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為lmg/mL，使用時用0.01 mol/L PBST將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成濃度為0,0.01,0.03,0.09,0.27,0.81,2.43,7.29 μ g/L 的一系列恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述的酶標(biāo)抗體為辣根過氧化酶標(biāo)記的恩諾沙星單克隆抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述的恩諾沙星酶標(biāo)抗體的原濃度為lmg/mL，使用時用0.01 mol/L PBST稀釋4000倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光液由A液和B液組成，A液為將20mg對碘苯酚、8mg魯米諾、1.21gTris溶于10mL去離子水，用鹽酸調(diào)pH至8.4得到；B液為將體積分?jǐn)?shù)0.40% H202、1.21gTris溶于10mL去離子水，用鹽酸調(diào)pH至7.0得到；使用時將底物液和底物緩沖液按體積比1:1的比例混合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述的洗滌液為20倍濃縮洗滌液，為含有體積濃度0.5% Tween20的pH7.4 0.4mol/L的磷酸鹽緩沖液，使用時用去離子水稀釋成I倍洗滌液。
8.權(quán)利要求1?7任一項所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的使用方法，其特征在于包含如下步驟: (1)將試劑盒置于15?35°C平衡30min以上； (2)取出化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板，往標(biāo)準(zhǔn)孔中加入不同濃度的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液，樣品孔中加入待測樣品，然后每孔加入恩諾沙星酶標(biāo)抗體，蓋上蓋板膜振搖混勻，孵育； (3)吸除板孔中的反應(yīng)液，加入洗滌液洗滌，將酶標(biāo)板拍干； (4)每孔加入化學(xué)發(fā)光反應(yīng)液，輕拍混勻，蓋上蓋板膜，I?2min后用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定各孔的發(fā)光值RLU ； (5)檢測結(jié)果計算與分析，從而確定樣品中恩諾沙星的含量。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，步驟(2)中所述的待測樣品為肌肉或蜂蜜。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的恩諾沙星的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，當(dāng)檢測樣品為肌肉時，肌肉要先經(jīng)過以下預(yù)處理:稱取均質(zhì)后肌肉組織3份，每份各Ig置于3個15mL尚心管中，分別加入4mL去尚子水,充分振蕩均勻,然后用尚心機(jī)以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心lOmin，分別吸取上層清液2mL于3個1mL離心管中，加入2mL正己燒,振蕩1min,以10000 r/min的轉(zhuǎn)速離心1min,除去上層正己燒層,取下層清液50 μ L待測； 當(dāng)檢測樣品為蜂蜜時，蜂蜜要先經(jīng)過以下預(yù)處理:稱取3份樣品每份Ig置于3個15mL離心管中，分別加入4mL蒸餾水，充分振蕩均勻，再加入4mL乙酸乙酯，振蕩20min，用離心機(jī)以10000 r/min的轉(zhuǎn)速離心1min,吸取上層乙酸乙酯層2mL置于雞心瓶中用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸至干，加入ImL正己烷溶解干燥物，再加入ImL去離子水復(fù)溶，去除上層正己烷層，取下層清液50 μ L待測。
【文檔編號】G01N33/577GK104165991SQ201410356799
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年7月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月24日
【發(fā)明者】路俊山, 曾道平, 陳蓮英, 盧秋鴻 申請人:廣州萬聯(lián)生物科技有限公司