一種檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，屬于雌激素檢測領(lǐng)域。所述方法包括：將樣品溶于乙腈中得到濃度為50%的混合液，將混合液采用超聲波萃取和離心萃取后過濾，得到濾液，取濾渣重復(fù)進(jìn)行超聲波萃取和離心萃取后過濾，將得到的多次濾液混合均勻；采用高效液相色譜儀對混合均勻的濾液進(jìn)行梯度洗脫并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度；將得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度與對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，從而確定樣品中的四種雌激素的濃度。所述檢測方法，通過乙腈將上述四種雌激素充分溶解，使得樣品的前處理過程簡單，對于檢測的四種雌激素?fù)p失小，且回收率高。
【專利說明】一種檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及雌激素檢測領(lǐng)域，特別涉及一種檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]雌激素包括內(nèi)源性雌激素和外源性雌激素，雌激素廣泛存在于各種食品、飼料中，若食品中所含的雌激素過高，則可能導(dǎo)致兒童性早熟，成年人發(fā)生乳腺或者婦科腫瘤以及前列腺癌。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中采用的對雌激素進(jìn)行檢測的方法，需要將目標(biāo)化合物經(jīng)過均質(zhì)、酶解、甲醇-水溶液提取，再經(jīng)固相萃取富集凈化，最后經(jīng)液相-質(zhì)譜聯(lián)用法測定其目標(biāo)化合物中是否含有一種或幾種雌激素。
[0004]在實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下問題:
[0005]現(xiàn)有技術(shù)中的檢測過程需要經(jīng)過多個(gè)步驟對目標(biāo)化合物進(jìn)行處理，使得該檢測過程較為繁瑣，降低了檢測雌激素的效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測雌激素的效率低的問題，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法。所述技術(shù)方案如下:
[0007]本發(fā)明實(shí)施例提供了一種檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，所述方法包括:
[0008]將樣品溶于乙腈中得到濃度為50%的混合液，將所述混合液采用超聲波萃取和離心萃取后過濾，得到濾液和濾渣，取所述濾渣重復(fù)進(jìn)行超聲波萃取和離心萃取后過濾，將得到的多次所述濾液混合均勻；對混合均勻的所述濾液進(jìn)行梯度洗脫并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度；將所述得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度與對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，從而確定所述樣品中的所述炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)品繪制的。
[0009]具體地，采用高效液相色譜儀對混合均勻的所述濾液進(jìn)行梯度洗脫。
[0010]進(jìn)一步地,所述樣品為食品。
[0011]具體地，所述食品為:奶粉、豆奶粉、牛奶、雞肉或魚肉。
[0012]具體地，所述超聲波萃取的時(shí)間為20min。
[0013]具體地,所述離心的轉(zhuǎn)速為4000r/min,所述離心的時(shí)間為lOmin。
[0014]具體地，將得到的多次所述濾液混合均勻后，于40°C用氮?dú)獯抵两?，得到殘余物，將所述殘余物用所述乙腈溶解并定容至lmL，經(jīng)過濾膜過濾后，再經(jīng)所述高效液相色譜儀進(jìn)行梯度洗脫。
[0015]進(jìn)一步地，所述濾膜的孔徑為0.45 μ m。[0016]具體地,所述高效液相色譜儀的參數(shù)為:色譜柱為Thermo C18柱；流速lmL/min ；柱溫30°C ;檢測波長224nm ;進(jìn)樣量20 μ L ;流動相為所述乙腈和pH值為5的0.043mol/L磷酸二氫鈉緩沖液。
[0017]進(jìn)一步地，所述梯度洗脫程序?yàn)?0-5min，所述流動相體積比從乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=11:9變至乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=17:3 ;5-15min,所述流動相配比從乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=17:3變至乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=11:9。
[0018]進(jìn)一步地,所述Thermo C18 柱的尺寸為:250mmX 0.46mmX 5 μ m。
[0019]本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是:本發(fā)明提供的檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，通過乙腈將上述四種雌激素充分溶解，使得樣品的前處理過程簡單，對于檢測的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇損失小，且回收率聞。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0021]圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖。
[0022]圖中:1-炔雌醇，2-己烯雌酚，3-壬基酚，4-苯甲酸雌二醇。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明實(shí)施方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。
[0024]實(shí)施例1
[0025]本發(fā)明實(shí)施例提供了一種檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，該方法包括:
[0026]稱取2g奶粉樣品(奶粉來源于多美滋優(yōu)階媽媽，批號2H3149)置于IOmL具塞刻度離心管中，再向該離心管中加入4ml乙腈中并混合均勻，得到濃度為50%的混合液，將該混合液采用超聲波萃取和離心萃取后過濾，得到濾液和濾渣，其中，超聲波萃取的時(shí)間為20min (超聲波由超聲波清洗器提供，該超聲波清洗器型號KQ-250，由昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn))，離心的轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心的時(shí)間為IOmin (離心所用離心機(jī)為800型中國深圳國華儀器生產(chǎn))，取濾渣重復(fù)3次超聲波萃取和離心萃取后過濾，將得到的3次濾液混合均勻，于40°C用氮?dú)獯抵两?，得到殘余物，將該殘余物用乙腈溶解并定容至lmL，經(jīng)過孔徑為0.45 μ m的濾膜過濾后，再采用高效液相色譜儀(D10NEX高效液相色譜儀，配有GP50型梯度泵，TCC-100柱溫箱，UVD170U型紫外檢測器)對混合均勻的濾液進(jìn)行梯度洗脫并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度；將得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度與對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，從而確定樣品中的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度，標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)品繪制的。
[0027]具體地，高效液相色譜儀的參數(shù)為:色譜柱為Thermo C18柱(Thermo C18柱的尺寸為:250_X0.46mmX5 μ m);流速lmL/min ;柱溫30°C;檢測波長224nm ;進(jìn)樣量20 μ L ;流動相為乙腈和pH值為5的0.043mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(其中磷酸二氫鈉為分析純,用磷酸調(diào)至pH為5)。且實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水。
[0028]進(jìn)一步地，梯度洗脫程序?yàn)?0-5min，流動相體積比從乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=11:9變至乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=17:3 ;5-15min,流動相體積比從乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=17:3變至乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=11:9。
[0029]繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法:
[0030]以乙腈為溶劑，將不同濃度的各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液在上述色譜條件下分別進(jìn)行分析。采用外標(biāo)法，用標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積Y為縱坐標(biāo)，與其對應(yīng)的濃度X為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，針對四種雌激素分別做標(biāo)準(zhǔn)曲線，四條標(biāo)準(zhǔn)曲線參見表1。
[0031]表1為四種雌激素的線性范圍、線性方程及相關(guān)系數(shù)
[0032]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，其特征在于，所述方法包括: 將樣品溶于乙腈中得到濃度為50%的混合液，將所述混合液采用超聲波萃取和離心萃取后過濾，得到濾液和濾渣，取所述濾渣重復(fù)進(jìn)行超聲波萃取和離心萃取后過濾，將得到的多次所述濾液混合均勻； 對混合均勻的所述濾液進(jìn)行梯度洗脫并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度； 將所述得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度與對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，從而確定所述樣品中的所述炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的濃度，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)品繪制的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用高效液相色譜儀對混合均勻的所述濾液進(jìn)行梯度洗脫。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品為食品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述超聲波萃取的時(shí)間為20min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述離心的轉(zhuǎn)速為4000r/min，所述離心的時(shí)間為IOmin。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，將得到的多次所述濾液混合均勻后，于40°C用氮?dú)獯抵两?，得到殘余物，將所述殘余物用所述乙腈溶解并定容至lmL，經(jīng)過濾膜過濾后，再經(jīng)所述高效液相色譜儀進(jìn)行梯度洗脫。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述濾膜的孔徑為0.45 μ m。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜儀的參數(shù)為:色譜柱為Thermo C18柱；流速lmL/min ;柱溫30°C ;檢測波長224nm ;進(jìn)樣量20 μ L ;流動相為所述乙腈和PH值為5的0.043mol/L磷酸二氫鈉緩沖液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫程序?yàn)?0-5min，所述流動相體積比從乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=11:9變至乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=17:3 ； 5-15min,所述流動相配比從乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=17:3變至乙腈:磷酸二氫鈉緩沖液=11:9。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述ThermoC18柱的尺寸為:250mm X 0.46mm X 5 μ m。
【文檔編號】G01N30/06GK103995068SQ201410116143
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年3月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月26日
【發(fā)明者】譚芳, 鄭琦, 陳荷蓮, 黃璐, 萬昆, 劉繼延 申請人:江漢大學(xué)