一種測定青蒿琥酯含量的高效液相色譜方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種青蒿琥酯含量檢測的高效液相色譜方法，流動相：乙腈-水（55-45，體積比）；流速：1.0ml/min；色譜柱：C18（4.6×250mm5μm）；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μl；紫外檢測器；檢測波長：216nm。青蒿琥酯在進(jìn)樣量1～200μg內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)r=1.0000。采用本發(fā)明的高效液相方法檢測青蒿琥酯含量，具有樣品分析時間短；檢測成本低；準(zhǔn)確性和精確性高；檢測有效范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種測定青蒿琥酯含量的高效液相色譜方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種測定青蒿琥酯含量的高效液相色譜方法。
【背景技術(shù)】
[0002]瘧疾是由瘧原蟲所引起的蟲媒傳染病。臨床以周期性寒戰(zhàn)、發(fā)熱、頭痛、出汗和貧血、脾腫大為特征。經(jīng)瘧蚊叮咬或輸入帶瘧原蟲者的血液而感染。不同的瘧原蟲分別引起間日瘧、三日瘧、惡性瘧及卵圓瘧。瘧疾于夏秋季發(fā)病較多。在熱帶及亞熱帶地區(qū)一年四季都可以發(fā)病，并且容易流行。
[0003]青蒿琥酯是一種特效抗瘧藥，對瘧原蟲無性體有很強(qiáng)的滅殺作用，能迅速控制瘧疾發(fā)作，可以單獨(dú)服用或注射，也可以與鹽酸阿莫地喹等藥物配伍制成復(fù)方口服制劑和針劑。且青蒿琥酯與弱堿能生成青蒿琥酯鹽而易溶于水，更容易做成針劑而易更快發(fā)揮作用，同時減少用量以免長期使用產(chǎn)生耐藥性。
[0004]青蒿琥酯是以雙氫青蒿素為原料合成的一種青蒿素衍生物,青蒿素是我國首先研制成功的一種抗瘧新藥，但由于不溶于水，在油中溶解性也不大，使其劑型為栓劑，生物利用率低，其藥效的發(fā)揮受到影響，青蒿琥酯為白色結(jié)晶性粉末；無臭、幾乎無味。在乙醇、丙酮或三氯甲烷中易溶，在水中極微溶解。但青蒿琥酯鹽可以制成水溶性制劑，生物利用率高，對藥效的發(fā)揮起到良好的效果，因此青蒿琥酯有良好的發(fā)展前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種簡便、分離效果好、精密度和準(zhǔn)確性高的青蒿琥酯含量的檢測方法。為達(dá)到上述目的，本方法采用了如下技術(shù)方案:
(1)色譜條件:
色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物，分別選用Thermo C18柱(4.6X250mm5 u m) >Thermo C18 柱(4.6X 150mm 5 u m)和 Thermo C18 柱(4.6X 100mm 5 u m)進(jìn)行試驗，優(yōu)選Thermo C18柱(4.6 X 250mm 5 y m),具有更好的分離效果。
[0006]流動相是乙腈-水，乙腈體積分?jǐn)?shù)為409^75%，乙腈優(yōu)選體積為55% ；流速
0.6~1.5ml/min ;柱溫20~40℃，優(yōu)選流速為lml/min，柱溫為25°C。
[0007]本發(fā)明使用Agilent-1260高效液相色譜儀，采用紫外檢測器，檢測波長216nm ;進(jìn)樣量20 ul。(2)樣品處理:
精確稱量標(biāo)準(zhǔn)品約50.0mg，放入IOml容量瓶中，加入色譜甲醇適量超聲溶解后定容至刻度線，搖勻后用0.2Mm有機(jī)濾頭過濾。
[0008]精確稱量相同質(zhì)量的供試品，放入IOml容量瓶中，加入色譜甲醇適量超聲溶解后定容至刻度線，搖勻后用0.2Mm有機(jī)濾頭過濾。
[0009](3)測定法:
按上述條件，分別對標(biāo)準(zhǔn)品與供試品進(jìn)行自動進(jìn)樣。用外標(biāo)法以峰面積計算青蒿琥酯的含量。[0010]本發(fā)明經(jīng)過精密度試驗、線性關(guān)系實驗和加樣回收實驗等試驗對方法進(jìn)行驗證，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠，方便快捷；成本低廉；檢測范圍大；靈敏度、精確性高。
[0011]【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1為青蒿琥酯的結(jié)構(gòu)式。
[0013]圖2為青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC檢測圖譜。
[0014]圖3為青蒿琥酯的線性關(guān)系圖與回歸方程。
[0015]
【具體實施方式】
[0016]下面具體實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的詳細(xì)分析方法，但本發(fā)明并不局限于權(quán)利要求所保護(hù)的范圍的限定。
[0017]實施例1
精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品適量，置于IOml容量瓶中，加色譜甲醇超聲使樣品溶解后稀釋定容至刻度線，用Iml注射器取溶液經(jīng)0.2 ii m，13mm的一次性有機(jī)濾頭過濾，得標(biāo)準(zhǔn)品溶液；精密稱取相同重量的供試品，置于IOml容量瓶中，加色譜甲醇超聲使樣品溶解后稀釋定容至刻度線，用Iml注射器取溶液經(jīng)0.2的一次性有機(jī)濾頭過濾，即得供試品溶液。標(biāo)準(zhǔn)
品和供試品各配直5個
色譜條件:用Agilent-1260高效液相色譜儀，用C18反相色譜柱(Thermo C18
4.6x250mm 5 u m);流動相:乙腈-水(55-45 V/V);流速:lml/min ;檢測波長:216nm ;檢測器:紫外檢測器；采集時間:25min ;柱溫:25°C。
[0018]按上述色譜條件，對所有標(biāo)準(zhǔn)品和供試品分別進(jìn)樣，標(biāo)準(zhǔn)品溶液5個樣品分別進(jìn)樣所得峰面積平均值為4421.9050，RSD值為0.30% ;供試品溶液5個樣品分別進(jìn)樣所得峰面積平均值為4397.2709，RSD值為0.54%。
[0019]根據(jù)公式:
青蒿琥酯含量(％)=(待測品峰面積/標(biāo)準(zhǔn)品峰面積)* (標(biāo)準(zhǔn)品濃度/待測樣品濃度)*100%
采用外標(biāo)法將標(biāo)準(zhǔn)品與供試品平均值代入即可青蒿琥酯的含量為99.44%。
[0020]通過上述實例表明本發(fā)明穩(wěn)定性好，精確度高，適用于青蒿琥酯的含量測定。
[0021]本發(fā)明的方法學(xué)考察
(I)線性關(guān)系實驗
根據(jù)發(fā)明所述方法，用50ml的容量瓶配置濃度為10mg/ml的儲備液，加乙腈分別稀釋成 0.lmg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、lmg/ml、5mg/ml、10mg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本發(fā)明分析方法，對進(jìn)樣量(X)和峰面積(Y)進(jìn)行數(shù)據(jù)回歸分析(線性關(guān)系圖見圖3)，回歸方程為:Y=44.116X+2.1059，r=l.0000。結(jié)果表明，青蒿琥酯在2 y g?200 y g濃度范圍內(nèi)，峰面積和進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。
[0022](2)精密度考察
稱取同一青蒿琥酯樣品，進(jìn)行6次重復(fù)試驗，峰面積如表1:表1青蒿琥酯6次重復(fù)試驗的峰面積___
【權(quán)利要求】
1.一種高效液相色譜法測定青蒿琥酯含量的方法，其特征在于色譜柱為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱；流動相為乙腈-水；檢測器為紫外檢測器。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于流動相為乙腈-水，其中乙腈的體積分?jǐn)?shù)為40%~75%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物，流動相流速為0.6^1.5ml/min,柱溫2(T40°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于使用紫外檢測器，檢測波長為216nm;進(jìn)樣量為20 u 10
5.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的方法，其特征在于本高效液相色譜法采用外標(biāo)法對青蒿琥酯的含量進(jìn)行計算；進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系中濃度范圍為glOOy g。
【文檔編號】G01N30/02GK103808827SQ201410071145
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年3月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月1日
【發(fā)明者】彭學(xué)東, 張梅, 趙金召, 閆勇義 申請人:張家港威勝生物醫(yī)藥有限公司