專利名稱：一種測定三聚氰胺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測定三聚氰胺的方法，特別是能量轉(zhuǎn)移熒光光譜法測定三聚氰胺的方法。
背景技術(shù)：
三聚氰胺是一種重要的三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，常用作化工原料，不可用于食品加工或食品添加物。中國自2008年三鹿奶粉事件發(fā)生后，國家規(guī)定:液態(tài)奶(包括原料乳)、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的產(chǎn)品一律不得銷售。因此研究建立一種快速、準(zhǔn)確、成本低廉的測定牛奶中三聚氰胺含量的新方法具有重要的意義。目前，三聚氰胺的測定方法主要是高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。但 是這些方法所用儀器昂貴，不易推廣。熒光光譜法具有分析速度快、操作簡便、分析精度高等優(yōu)點，在實際分析中應(yīng)用廣泛。曙紅Y-中性紅作為能量轉(zhuǎn)移體系，已應(yīng)用于蛋白質(zhì)的測定，但利用該能量轉(zhuǎn)移體系采用熒光光譜法測定三聚氰胺，尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種基于曙紅Y-中性紅能量轉(zhuǎn)移的測定三聚氰胺的熒光光譜法。具體步驟為:
(I)于 6 支 IOmL 比色管中依次加入 0.0,0.07、1.0,2.0,3.0,5.0 mL 0.1 0.5g/L 的三聚氰胺溶液，再在每支比色管中分別加入1.0 2.5 mL 4.0X 10_6mol/L的曙紅Y (EY)溶液、0.5 1.0mL 2.0X 10_4mol/L的中性紅(NR)溶液和0.3 1.0mL ρΗ3.5的伯瑞坦-羅比森(Britton-Robinson，B-R)緩沖溶液，以不加三聚氰胺的溶液為試劑空白，然后用超純水將6支比色管定容至刻度，搖勻，在30°C的恒溫水浴中反應(yīng)30 min后，于熒光光度計上，用Icm石英比色皿，以520nm為激發(fā)波長，在538nm處分別測定含三聚氰胺溶液的熒光值F538nm和試劑空白的熒光值Ftl,計算熒光值差值Λ F538nm = F538nm - Ftl值，其熒光值差值A(chǔ)F538nm與三聚氰胺質(zhì)量濃度P在1.4 100mg/L范圍內(nèi)成線性關(guān)系，線性回歸方程為:AF538nm=0.7736 P + 17.相關(guān)系數(shù) r=0.9992，檢出限為 1.lmg/L。(2)取牛奶30 mL，加入20.0 mL質(zhì)量百分比濃度為1%的三氯乙酸溶液和8.0 mL質(zhì)量百分比濃度為2%的乙酸鉛溶液，超聲20 min。然后取部分溶液于離心管中，離心10min，取上清液作為待測液。(3)取步驟(2)處理后的牛奶待測液lmL，依步驟(I)的方法測定熒光值，計算出牛奶中三聚氰胺的含量。本發(fā)明方法簡便、快捷。


圖1為本發(fā)明實施例空白與20 mg/L三聚氰胺(MEL)的熒光光譜圖。圖中標(biāo)記a:試劑空白；b:4.0X 1(T6 mol/L EY - 2.0XlO-4 mol/L NR - ρΗ3.5 B-R-20 mg/L MEL0
具體實施例方式實施例:
(I)于 6 支 IOmL 比色管中依次加入 0.0、0.07、1.0、2.0、3.0、5.0 mL 0.2g/L 的三聚氰胺溶液，再在每支比色管中分別加入2.0 mL 4.0X10_6mol/L的曙紅Y(EY)溶液、0.5mL
2.0X lCT4mol/L 的中性紅(NR)溶液和 0.5mL pH3.5 的伯瑞坦-羅比森(Britton-Robinson，B-R)緩沖溶液，以不加三聚氰胺的溶液為試劑空白，然后用超純水將6支比色管定容至刻度，搖勻，在30°C的恒溫水浴中反應(yīng)30 min后，于熒光光度計上，用Icm石英比色皿，以520nm為激發(fā)波長，在波長538nm處分別測定含三聚氰胺溶液的熒光值F538nm和試劑空白的熒光值Ftl，計算熒光值差值A(chǔ)F538nm = F538nm - Ftl值，其熒光值差值Λ F538nm與三聚氰胺質(zhì)量濃度P在1.4 100mg/L范圍內(nèi)成線性關(guān)系，線性回歸方程為:AF538nm = 0.7736 9 +17.33,相關(guān)系數(shù)r=0.9992，檢出限為1.lmg/L。(2)分別量取蒙牛和伊利純牛奶各30 mL，分別加入20.0 mL質(zhì)量百分比濃度為1%的三氯乙酸溶液和8.0 mL質(zhì)量百分比濃度為2%的乙酸鉛溶液，超聲20 min;然后取部分溶液于離心管中，離心10 min,取上清液作為待測液。(3)取步驟(2)處理后的蒙牛和伊利純牛奶待測液各lmL，依步驟(I)方法測定熒光值，計算出蒙牛、伊利純牛奶中三聚氰胺的含量；同時做了加標(biāo)回收實驗，結(jié)果見表1:
權(quán)利要求
1.一種測定三聚氰胺的方法，其特征在于具體步驟為:(I)于 6 支 IOmL 比色管中依次加入 0.0、0.07、1.0、2.0、3.0、5.0 mL 0.1 0.5g/L 的三聚氰胺溶液，再在每支比色管中分別加入1.0 2.5 mL 4.0X10-6mOl/L的曙紅Y即EY溶液、0.5 1.0mL 2.0X 10_4mol/L的中性紅即NR溶液和0.3 1.0mL ρΗ3.5的伯瑞坦-羅比森即B-R緩沖溶液，以不加三聚氰胺的溶液為試劑空白，然后用超純水將6支比色管定容至刻度，搖勻，在30°C的恒溫水浴中反應(yīng)30 min后，于熒光光度計上，用Icm石英比色皿，以520nm為激發(fā)波長，在538nm處分別測定含三聚氰胺溶液的熒光值F538nm和試劑空白的熒光值Ftl，計算熒光值差值A(chǔ)F538nm = F538nm-Ftl值，其熒光值差值Λ F538nm與三聚氰胺質(zhì)量濃度P在1.4 100mg/L范圍內(nèi)成線性關(guān)系，線性回歸方程為..AF538nm=0.7736 9+ 17.幻，相關(guān)系數(shù)r=0.9992，檢出限為1.lmg/L ； (2)取牛奶30mL,iJPA20.0 mL質(zhì)量百分比濃度為1%的三氯乙酸溶液，和8.0 mL質(zhì)量百分比濃度為2%的乙酸鉛溶液，超聲20 min ;然后取部分溶液于離心管中，離心10 min,取上清液作為待測液； (3)取步驟(2)處理后的牛奶待測液lmL，依步驟(I)的方法測定熒光值，計算出牛奶中三聚氰 胺的含量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測定三聚氰胺的方法。于10mL比色管中依次加入0.05～5.0mL0.1～0.5g/L的三聚氰胺溶液、1.0～2.5mL4.0×10-6mol/L的曙紅Y溶液、0.5～1.0mL2.0×10-4mol/L的中性紅溶液和0.3～1.0mLpH3.5的伯瑞坦-羅比森緩沖溶液,以不加三聚氰胺的溶液為試劑空白,用超純水定容至刻度,在30℃水浴反應(yīng)30min后,于熒光光度計上,用1cm石英比色皿,以520nm為激發(fā)波長,在538nm處分別測定含三聚氰胺溶液的熒光值F538nm和試劑空白的熒光值F0,計算差值ΔF538nm=F538nm–F0值。取牛奶30mL,加入20.0mL1%的三氯乙酸溶液和8.0mL2%的乙酸鉛溶液,超聲20min;取部分溶液離心10min,取上清液1mL,依上述方法測定熒光值,計算牛奶中三聚氰胺的含量。本發(fā)明方法簡便、快捷。
文檔編號G01N21/64GK103175818SQ201310087869
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月19日
發(fā)明者唐寧莉, 李欣, 蒙華毅 申請人:桂林理工大學(xué)