專利名稱：一種煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于煙草制品測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定評(píng)價(jià)方法。
背景技術(shù)：
感官代謝組(sensometabolome)是指所有全部的感官活性、低分子量化 合物的集合體，反映感官表現(xiàn)型，引發(fā)食品特征的嗅覺(jué)、味覺(jué)和化學(xué)感覺(jué)。為了尋找引發(fā)食品味覺(jué)的特征成分，研究人員最近將分離分析技術(shù)和感官評(píng)價(jià)技術(shù)相結(jié)合提出了感官組學(xué)(sensomics)的概念(Angew. Chem. Int. Ed. , 2011, 50, 2220-2242)。感官組學(xué)是以感官代謝組為研究對(duì)象，在分子水平上研究食品感官質(zhì)量的多學(xué)科交叉技術(shù)。目前，應(yīng)用感官組學(xué)的方法研究最多的是天然產(chǎn)物中引發(fā)或調(diào)節(jié)甜味、鮮味的味覺(jué)成分。例如，在紫蘇中發(fā)現(xiàn)了一種甜味化合物紫蘇葶[式A所示的化合物(Med. Res. Rev. , 1989，9，91-115)]，它的甜味強(qiáng)度比蔗糖高370倍，在水中相對(duì)不溶，有苦味和薄荷腦-甘草余味，已經(jīng)被日本用作煙草制品增甜劑。最近在牛肉湯中發(fā)現(xiàn)了一種增強(qiáng)鮮味的化合物，N-(l-羧乙基)-6_輕甲基-3-輕基-I-卩比唳內(nèi)鹽[式B所示的化合物(J. Agric. Food Chem. , 2011,59，12578; US8007851 2011, Aug 30)]。該化合物本身沒(méi)有味覺(jué)，但能增強(qiáng)蔗糖、L-丙氨酸和阿斯巴甜的甜味。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該化合物不僅有味覺(jué)增強(qiáng)特性，對(duì)味覺(jué)影響非常廣泛，能增強(qiáng)甜味(葡萄糖和蔗糖)、鮮味(MSG和GMP)和咸味(NaCl )，但并不影響苦味(咖啡因和L-苯丙氨酸)和酸味(檸檬酸)。當(dāng)食品中含有該化合物時(shí)，味覺(jué)感官閾值可降低2-32倍[香味化學(xué)與工藝學(xué)(第二版)，中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，2012]。對(duì)于煙葉而言，影響感官質(zhì)量最重要是煙葉中含有的香味成分。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)煙葉中香氣成分進(jìn)行了大量研究，形成了非常成熟的香氣成分分離評(píng)價(jià)方法，但煙葉中味覺(jué)成分的分離評(píng)價(jià)方法還沒(méi)有報(bào)道，相關(guān)的應(yīng)用研究也沒(méi)有開(kāi)展。
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的正是基于上述現(xiàn)有技術(shù)狀況而提供的一種煙葉提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定評(píng)價(jià)方法。
本發(fā)明依據(jù)的測(cè)試原理在于以人的舌頭部位作為生物傳感器，對(duì)煙葉中存在的味覺(jué)成分進(jìn)行分離、評(píng)價(jià)和測(cè)定，通過(guò)溶劑逐步稀釋得到味覺(jué)活性值，并根據(jù)對(duì)味覺(jué)的影響排序，找出對(duì)味覺(jué)影響最大的成分。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的
一種煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，具體步驟如下
(1)將加工后的煙葉或煙絲用溶劑提取得到煙草提取物；
(2)稱取一定量的煙草提取物，用超濾膜過(guò)濾后，通過(guò)柱層色譜分級(jí)分離，紫外檢測(cè)儀檢測(cè)不同波長(zhǎng)下流分的吸光度，用自動(dòng)流分收集器收集各個(gè)流分，分別標(biāo)記為PU P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、PlO......等；
(3)將各流分用凍干機(jī)凍干，用于味覺(jué)測(cè)定使用。 在本發(fā)明中，所述味覺(jué)測(cè)定具體方式如下取一份兒凍干流分，用蒸餾水稀釋，使測(cè)評(píng)人員按10分標(biāo)度法對(duì)流分的甜、酸、苦、咸進(jìn)行標(biāo)度檢驗(yàn)，強(qiáng)度和標(biāo)度值如下無(wú)(-)、微有(1-3)、較強(qiáng)(4-6)、強(qiáng)(7-9);將各流分用蒸餾水按體積比1:1逐步稀釋，然后按濃度增加的順序呈給經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的測(cè)評(píng)人員，每一個(gè)稀釋濃度用三點(diǎn)測(cè)試法評(píng)價(jià)；當(dāng)某一稀釋濃度與兩個(gè)空白之間的味覺(jué)差異剛好被辨別出來(lái)時(shí)，稱這個(gè)稀釋倍數(shù)為味覺(jué)活性值；確定每一流分的味覺(jué)活性值。所述測(cè)評(píng)人員在進(jìn)行味覺(jué)評(píng)價(jià)之前，參照ISO 3972:2011、IS0 3972:1991，對(duì)測(cè)評(píng)人員進(jìn)行味覺(jué)敏感度的校準(zhǔn)，測(cè)評(píng)人員數(shù)量要求6個(gè)以上，最好為12個(gè)，環(huán)境溫度為22-25 C。所述煙葉可為烤煙、白肋煙、香料煙等單料煙煙葉；所述煙絲可為各種成品品牌卷煙煙葉切成的煙絲。所述提取溶劑可以為水、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙二醇中的任意一種或其混合溶劑。所述煙葉加工包括常壓蒸汽加熱法、高壓蒸汽加熱法、油浴烘焙法等，溫度25-100°C、加熱時(shí)間0-24小時(shí)。所述的柱層色譜包括硅膠、凝膠、大孔吸附樹(shù)脂等柱色譜，其中優(yōu)先使用凝膠柱色譜；凝膠柱色譜填料可以為 SephadexG-10、Sephadex G-15、Sepharose 6B、SepharoseConA> Sephadex G-25、Sephadex LH-20 等，其中優(yōu)先使用 SephadexG-10、Sephadex G-15、Sephadex LH-20。所述的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)可為220、254、280、340納米等。本發(fā)明涉及的煙葉提取物分離評(píng)價(jià)方法可用于發(fā)現(xiàn)煙葉中的味覺(jué)活性成分，為提高煙草制品的口感和舒適性提供技術(shù)支撐。本發(fā)明以味覺(jué)活性為向?qū)В弥鶎由V對(duì)主流煙氣粒相物進(jìn)行分級(jí)分離，用自動(dòng)流分收集器收集不同數(shù)量的流分，然后根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO3972:2011、ISO 3972:1991，篩選主要的味覺(jué)活性代謝物，最后通過(guò)溶劑逐步稀釋得到每一流分的味覺(jué)活性值。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)流程簡(jiǎn)單、操作方便、適用范圍廣，可用于提高煙草制品的口感和舒適性。


圖I為本發(fā)明的測(cè)定步驟流程圖。圖2為美國(guó)深色明火烤煙煙葉提取物的分離色譜圖。圖3云南烤煙煙葉提取物的分離色譜圖。圖4湖北白肋煙煙葉提取物的分離色譜圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明以下結(jié)合實(shí)施例子做進(jìn)一步描述，但并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I
美國(guó)深色明火烤煙煙葉提取物味覺(jué)成分的分離評(píng)價(jià)方法
稱取I. O克的美國(guó)深色明火烤煙煙葉提取物溶于2. O毫升蒸餾水中，用O. 45微米的超濾膜過(guò)濾。然后，上樣給凝膠色譜，色譜柱填料為Sephadex-15。以蒸餾水為流動(dòng)相，紫外檢測(cè)儀在220納米下檢測(cè)色譜柱流分的吸光度，分離效果見(jiàn)圖2。自動(dòng)流分收集器收集26個(gè)流分，分別標(biāo)記為P1、P2、P3、P4、P5、P6…P26。將上述各流分用凍干機(jī)凍干后，加入I毫升蒸餾水，使測(cè)評(píng)人員按10分標(biāo)度法對(duì)煙葉提取物每一流分的甜味、酸味、苦味、咸味進(jìn)行標(biāo)度檢驗(yàn)，評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表I。表I美國(guó)深色明火烤煙煙葉提取物的味覺(jué)評(píng)價(jià)結(jié)果
-序號(hào) |P1 |P2 |P3 |P4 |P5 |P6 |P7 |P8 |P9 |P10 |P11 |P12 |P13甜— — — — — — — — — — — —工 2
it - - - - 1 2 3 3 4 3 3 2 1
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序號(hào) P14 P15 P16 P17 P18 P19 P20 P21 P22 P23 P24 P25 P26
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由表I可以看出P1-P4無(wú)明顯味覺(jué)；P5-P13有酸味，酸味逐漸變強(qiáng)再變?nèi)?，P9酸味平均打分為4. 4，活性值為8 ；P12-P14有甜味，P13甜味平均打分為2. I，活性值為4 ;P13_P15有咸味，P14平均打分為I. 6 ；P17-P25有苦味，P21平均打分為2. I。實(shí)施例2
云南烤煙煙葉提取物味覺(jué)成分的分離評(píng)價(jià)方法
稱取I. O克的云南烤煙煙葉提取物溶于2. O毫升蒸餾水中，用O. 45微米的超濾膜過(guò)濾。然后，上樣給凝膠色譜，色譜柱填料為Sijphadex LH-20。以蒸餾水為流動(dòng)相，紫外檢測(cè)儀在220納米下測(cè)定色譜柱流分的吸光度，分離效果見(jiàn)圖3。自動(dòng)流分收集器收集28個(gè)流分，分別標(biāo)記為P1、P2、P3、P4、P5、P6…P28。將上述各流分用凍干機(jī)凍干后，加入I毫升蒸餾水，使測(cè)評(píng)人員按10分標(biāo)度法對(duì)煙葉提取物每一流分的甜味、酸味、苦味、咸味進(jìn)行標(biāo)度檢驗(yàn)，評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表2。表2云南烤煙煙葉提取物的味覺(jué)評(píng)價(jià)結(jié)果
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權(quán)利要求
1.一種煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，其特征在于該方法具體步驟如下 將加工后的煙葉或煙絲用溶劑提取得到煙草提取物； 稱取一定量的煙草提取物，用超濾膜過(guò)濾后，通過(guò)柱層色譜分級(jí)分離，紫外檢測(cè)儀檢測(cè)不同波長(zhǎng)下流分的吸光度，用自動(dòng)流分收集器收集各個(gè)流分，分別標(biāo)記為P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10......等； 將各流分用凍干機(jī)凍干，用于味覺(jué)測(cè)評(píng)使用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，其特征在于所述味覺(jué)測(cè)評(píng)具體方式如下取一份兒凍干流分，用蒸餾水稀釋，使測(cè)評(píng)人員按10分標(biāo)度法對(duì)流分的甜、酸、苦、咸進(jìn)行標(biāo)度檢驗(yàn)，強(qiáng)度和標(biāo)度值如下無(wú)(_)、微有(1-3)、較強(qiáng)(4-6)、強(qiáng)(7-9);將各流分用蒸餾水按體積比1:1逐步稀釋，然后按濃度增加的順序呈給經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的測(cè)評(píng)人員，每一個(gè)稀釋濃度用三點(diǎn)測(cè)試法評(píng)價(jià)；當(dāng)某一稀釋濃度與兩個(gè)空白之間的味覺(jué)差異剛好被辨別出來(lái)時(shí)，稱這個(gè)稀釋倍數(shù)為味覺(jué)活性值；確定每一流分的味覺(jué)活性值。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，其特征在于所述測(cè)評(píng)人員在進(jìn)行味覺(jué)評(píng)價(jià)之前，參照ISO 3972:2011、ISO 3972:1991，對(duì)測(cè)評(píng)人員進(jìn)行味覺(jué)敏感度的校準(zhǔn)，測(cè)評(píng)人員數(shù)量要求6個(gè)以上，最好為12個(gè)，環(huán)境溫度為22-25 °C。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，其特征在于所述煙葉可為烤煙、白肋煙、香料煙等單料煙煙葉；所述煙絲可為各種成品品牌卷煙煙葉切成的煙絲。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，其特征在于所述提取溶劑可以為水、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙二醇中的任意一種或其混合溶劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，其特征在于所述煙葉加工包括常壓蒸汽加熱法、高壓蒸汽加熱法、油浴烘焙法等，溫度25-100°C、加熱時(shí)間0-24小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，其特征在于所述的柱層色譜包括硅膠、凝膠、大孔吸附樹(shù)脂等柱色譜，其中優(yōu)先使用凝膠柱色譜；凝膠柱色譜填料可以為 SephadexG-10、Sephadex G-15、Sepharose 6B、Sepharose ConA> SephadexG-25、Sephadex LH-20 等，其中優(yōu)先使用 SephadexG-10、Sephadex G-15、Sephadex LH-20。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，其特征在于所述的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)可為220、254、280、340納米等。
全文摘要
一種煙草提取物味覺(jué)成分的分離測(cè)定方法，特征是具體步驟如下:1、將煙葉或煙絲用溶劑提取得到煙草提取物；2、稱取提取物，用超濾膜過(guò)濾后，通過(guò)柱層色譜分級(jí)分離，紫外檢測(cè)儀檢測(cè)不同波長(zhǎng)下流分的吸光度，收集各個(gè)流分，分別標(biāo)記為P1、P2、……等；3、將各流分用凍干機(jī)凍干，用于味覺(jué)測(cè)定使用。本發(fā)明以味覺(jué)活性為向?qū)?，用柱層色譜對(duì)主流煙氣粒相物進(jìn)行分級(jí)分離，用自動(dòng)流分收集器收集不同數(shù)量的流分，然后根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO3972:2011、ISO3972:1991，篩選主要的味覺(jué)活性代謝物，最后通過(guò)溶劑逐步稀釋得到每一流分的味覺(jué)活性值。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)流程簡(jiǎn)單、操作方便、適用范圍廣。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102692342SQ20121021007
公開(kāi)日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2012年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月25日
發(fā)明者劉俊輝, 盧斌斌, 孫世豪, 孟廣宇, 宗永立, 屈展, 張啟東, 張建勛, 張文娟, 李炎強(qiáng), 李鵬, 王宏偉 申請(qǐng)人:中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院, 山東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司, 河南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司